Cistanche Tubulosan anti-hyperglykeemiset ja hypolipideemiset vaikutukset

Yhteystiedot: Audrey Hu Whatsapp/hp: 0086 13880143964 Sähköposti:audrey.hu@wecistanche.com

Cistanche tubulosaiinin tyypin 2 diabeettisten db/db-hiirten antihyperglykeemiset ja hypolipideemiset vaikutukset

Wen-Ting Xiong et ai

Abstrakti

Etnofarmakologinen merkitys:Kuivattu mehevä varsiCistanchetubulosa (Schenk) R. Wight on yksi osa perinteisen kiinalaisen lääketieteen diabeteksen reseptejä. Tähän asti ei kuitenkaan ole ollut nykyaikaisia ​​tieteellisiä raportteja, jotka vahvistaisivat tämän perinteisen väitteen Cistanche-lajeista. Niinpä olemme tutkineet vaikutuksiaCistanchetubulosaglukoosin homeostaasista ja seerumin lipideistä urospuolisissa BKS.Cg-Dock7m þ/þ Leprdb/J (db/db) -hiirissä, tyypin 2 diabeteksen malli.

Materiaalit ja menetelmät:Verbascoside ja echinacoside sisältöCistanchetubulosajauhe arvioitiin käyttäen HPLC:tä. Kokonaisfenolipitoisuus, polysakkaridipitoisuus ja antioksidanttiaktiivisuusCistanchetubulosajauhe arvioitiin myös. Sitten eri annoksiaCistanche tubulosa(vastaa 120,9, 72,6 tai 24,2 mg verbaskosidia/kg) annettiin suun kautta kerran päivässä 45 päivän ajan urospuolisille db/db-hiirille. Ikäsopivia db/þ-hiiriä käytettiin normaaleina kontrolleina. Kokeen aikana mitattiin ruumiinpaino, paastoverensokeri, aterian jälkeinen verensokeri ja insuliinitoleranssitestit. Uhramishetkellä verta kerättiin insuliinitason mittaamista, insuliiniresistenssin homeostaattista mallia (HOMA-IR) ja kokonaiskolesteroli-, triglyseridi-, HDL-c-, LDL-c- ja VLDL-c-tasoja varten; maksa- ja lihakset kerättiin glykogeenitasojen mittaamista varten.

Tulokset: Cistanchetubulosatukahdutti merkittävästi kohonneita paastoveren glukoosipitoisuuksia ja aterian jälkeisiä veren glukoositasoja, paransi insuliiniresistenssiä ja dyslipidemiaa ja tukahdutti ruumiinpainon laskua indb/db-hiirillä. Kuitenkin,Cistanchetubulosaei vaikuttanut merkittävästi seerumin insuliinitasoihin tai maksan ja lihasten glykogeenitasoihin.

Johtopäätös:Tämä tutkimus tarjoaa tieteellistä näyttöä perinteisestä käytöstäCistanchetubulosadiabeteksen hoitoon, mikä viittaa siihenCistanchetubulosasillä on potentiaalia kehittyä toiminnalliseksi elintarvikeainekseksi tai lääkkeeksi hyperglykemian ehkäisemiseksi ja hyperlipidemian hoitoon.

Avainsanat:Cistanchetubulosa, Tyypin 2 diabetes,Hyperglykeeminen vaikutus, Hypolipideminen vaikutus

1. Esittely

Diabetes mellitus (DM) on etenevä ja monimutkainen aineenvaihduntahäiriö, jolle on pääasiassa ominaista epänormaalin korkea verensokeri (hyperglykemia) (Tiwari ja Rao, 2002; Stumvollet al., 2005; Nathan et al., 2009). Noin 90 prosentilla maailmanlaajuisesti 347 miljoonasta diabetespotilasta on tyypin 2 (insuliinista riippumaton) DM (Danaei et al., 2011). Kolme suurta aineenvaihduntahäiriötä myötävaikuttavat johdonmukaisesti hyperglykemiaan tyypin 2 DM-potilailla: vajaa insuliinin eritys, korkea maksan glukoosituotanto ja insuliiniresistenssi (Bavenholm et al., 2001). Tyypin 2 DM voi lyhentää elinikää ja on merkittävä lääketieteellinen ja taloudellinen taakka (Gakidou et al., 2011)

Tyypin 2 DM:n patogeneesi on monitekijäinen ja se on yhdistetty sekä geneettisiin että elämäntapatekijöihin (Stumvoll et al., 2005).anti-hyperglykeeminenlääkkeet ovat tyypillinen menetelmä tyypin 2 DM:n hallintaan. Suun kautta otettavat lääkkeet ananti-hyperglykeeminenvaikutus joko parantamalla kolmea suurta aineenvaihduntahäiriötä, jotka aiheuttavat hyperglykemiaa, tai vähentämällä aterian jälkeistä glykeemisten tasojen nousua estämällä hiilihydraattien sulamista ja imeytymistä suolistossa.

Vaikka useista tehokkaista lääkkeistä on tullut tunnustettuja lääkehoitovaihtoehtoja useimmilla tyypin 2 DM-potilailla, useilla näistä synteettisistä lääkkeistä on vakavia sivuvaikutuksia. Esimerkiksi rosiglitatsoni ja pioglitatsoni lisäävät sydäninfarktin, kongestiivisen sydämen vajaatoiminnan ja perifeerisen turvotuksen ilmaantuvuutta. liittyy lisääntyneeseen karsinogeneesin ja jopa kuoleman riskiin pitkäaikaisen käytön jälkeen (Nissen ja Wolski, 2007; Zhang et al., 2007; Home et al., 2009). Siksi on olemassa kriittinen tarve löytää vaihtoehtoisia aineita, joilla olisi antihyperglykeemistä vaikutusta, mutta joilla olisi vähemmän sivuvaikutuksia. Verrattuna synteettisiin kemikaaleihin, luonnollisesti johdettujaantihyperglykeeminenlääkkeillä, kuten yrteillä ja perinteisillä lääkkeillä, on pitkä käyttöhistoria ja ne voivat edustaa yleisesti turvallisia mahdollisia uusien aineiden lähteitäantihyperglykeeminenhuumeet (Yeh et al., 2003).

Cistanchea, Orobanchaceae-perheeseen kuuluvaa loiskasvien sukua, käytetään yleisesti perinteisenä lääkkeenä hoitoongelmiin ja hedelmättömyyteen Kiinan farmakopean mukaan (Chinese Pharmacopoeia Commission, 2010). Kuten kiinalaisissa lääketieteen kirjoissa, kuten BenCao TuJing ja Nature ofDrug, Cistanche-sukua on keitetty myös lampaanlihan, perunan tai riisin kanssa tuottamaan tonisoivaa ruokaa ylikuormituksen aiheuttaman heikentymisen hoitoon satojen vuosien ajan, mikä viittaa siihen, että Cistanche-suvu on vaarallinen ottaa suun kautta.

Perinteisessä kiinalaisessa lääketieteessä DM:ää kutsutaan oireeksi "Xiao Ke", ja sitä on hoidettu vuosisatojen ajan kiinalaisilla yrteillä. Cistanche-lajin kuivattua mehevää vartta on perinteisesti käytetty osana yhdeksää diabeteslääkettä ("Xiao Ke Fang") perinteisessä kiinalaisen lääketieteen kirjassa Sengji Zonglu. Toistaiseksi ei kuitenkaan ole ollut nykyaikaisia ​​tieteellisiä raportteja, jotka vahvistaisivat tätä perinteistä väitettä Cistanches-lajeista.

Cistanchetubulosa(Schenk) R. Wight, Cistanche-laji, joka loistaa Tamarix-kasvin juurissa – jota viljellään pääasiassa Taklamakanin autiomaassa –, on äskettäin käytetty tuottamaan pikateetä käytettäväksi funktionaalisena ruokana (DaZhongWeiShengBao, 2010; Baidu Pedia, 2011) .

Cistanchetubulosasisältää huomattavia määriä fenyylietanoidiglykosideja (PhG:itä), iridoideja, lignaaneja, alditoleja, oligosakkarideja, polysakkarideja ja haihtuvia yhdisteitä, kuten palmitiinihappoa ja linolihappoa (Song et al., 2000; Jiang ja Tu, 2009). Cistanche-lajin tärkeimpien aktiivisten komponenttien uskotaan olevan PhG:t (Xie et al., 2006; Jiang ja Tu, 2009).Cistanchetubulosaja sen komponenteilla, kuten PhG:illä, polysakkarideilla ja polyfenoleilla, on raportoitu olevan hyvä antioksidantti (Denget al., 2004; Pellati et ai., 2004; Frum et al., 2007; Sui et ai., 2011; Wang et al., 2011), verenpaineen vastainen (Ahmad et al., 1995) ja hypokolesteroli (Shimoda et al., 2009) vaikutuksia. Lukuisat raportit ovat osoittaneet, että PhG:t, polysakkaridit ja polyfenolit vaikuttavatantihyperglykeeminenvaikuttavat tai niillä on suotuisa vaikutus tyypin 2 DM:ään vapaiden radikaalien poistamisen ja glukoosin aiheuttaman oksidatiivisen stressin moduloinnin kautta (Pinto et al., 2010; Saltiel, 2001; Gulati et al., 2012). Nämä komponentit ja bioaktiivisuudetCistanchetubulosaehdottaa, että sitä voidaan mahdollisesti käyttää tyypin 2 DM:n hoitoon. Vaikutuksia kuvaavien raporttien puuttumisen vuoksiCistanchetubulosaDM:n hoidossa piti kannattavana tutkia diabeteksen hoitoon liittyvää aktiivisuutta.Cistanchetubulosa. Siksi tutkimme vaikutuksiaCistanchetubulosahyperglykemiasta ja dyslipidemiasta BKSdb/db-hiirillä (BKS.Cg-Dock7m þ/þ Leprdb/J, Jackson Laboratoryn varastonumero 00642), tyypin 2 DM:n malli, jolla on monia ihmisen DM:n ominaisuuksia, mukaan lukien progressiivinen hyperglykemia, insuliiniresistenssi ja liikalihavuus (Hummel). et ai., 1966; Nishina et ai., 1994; Uchida et ai., 2005; Srinivasan ja Ramarao, 2007).

2. Materiaalit ja metodit

2.1. Kemikaalit

Verbaskosidi (puhtausaste 493 prosenttia) ja ekinakosidi (puhtausaste 493 prosenttia) ostettiin National Institutes for Food and Drug Controlilta (Peking, Kiina). HPLC-laatuista metanolia ostettiin Sigma-Aldrichilta (St. Louis, MO, USA). Acarbose ostettiin Bayeriltä (West Haven, CT, USA). Puhdistettu vesi tuotettiin käyttämällä Millipore Milli-Q Integral 3 System -järjestelmää ja Q-POD Milli-Q System -järjestelmää (Bedford, MA, USA).

2.2. Cistanche tubulosa -jauhevalmiste

Kuivatut mehevät varretCistanchetubulosa(Näytekoodi 109092, viljelty Hetianissa, Xinjiangissa, Kiinassa) ostettiin Xinjiang Guru Biology Co. Ltd.:ltä (Hetian, Xinjiang, Kiina). Kuivatut juuret murskattiin jauheeksi, seulottiin verkkoseulan läpi, sekoitettiin huolellisesti, suljettuna pieniin pakkauksiin, jotta jauhe eristetään valolta ja kosteudelta, ja säilytetään 4 1C.

2.3. Cistanche tubulosan tunnistus

Näytteen 109092 kuivatun mehevän varren tunnistivat niiden morfologisista ominaisuuksista prof. DeXiang Gu ja prof. Xin Liu, jotka ovat Cistanche-lajien asiantuntijoita. Näytteet tunnistettiin edelleen DNA-sekvensoinnilla. Koko genominen DNA eristettiin näytteestä 109 092 käyttämällä AxyPrep™ MultisourceGenomic DNA Kit -sarjaa (Axygen, CA, USA). 5.8S-rDNA-fragmentin sisältävä ITS-alue monistettiin käyttämällä alukesekvenssejä ITS1/ITS2 5′ CGT AAC AAG GTT TCC GTA GAA 3' ja 5' TTA TTG ATA TGCTTA AAC TCA GCG GG 3' (BGI Genomics, Shenzhen, Kiina), menetelmällä, jonka ovat kuvanneet Schneeweiss et ai. (Schneeweiss et ai., 2004). Monistettu DNA sekvensoitiin BGI:llä (BGI Genomics, Shenzhen, Kiina), ja tulosta verrattiinCistanchetubulosa5,8 s rDNA-sekvenssi GenBankissa.

2.4. HPLC-analyysi

Kahta PhG:tä, ekinakosidia ja verbaskosidia, käytettiin laatustandardeinaCistanchetubulosaKiinan farmakopean (Chinese Pharmacopoeia Commission, 2010) mukaan. HPLC on yleisimmin käytetty PhG:iden kvalitatiiviseen ja kvantifiointiin. Siten verbaskosidi- ja echinacoside-sisältöCistanchetubulosamääritettiin aiemmin julkaistulla HPLC-menetelmällämme (Zhao et ai., 2011). Lyhyesti sanottuna 0,1 gCistanchetubulosajauhe lisättiin 1{{10}} ml:aan puhdistettua vettä ja sekoitettiin voimakkaasti vortex-sekoittimella orbitaaliravistelijassa (Vortex-Genie 2, Scientific Industries, Bohemia, New York, USA) 10 min huoneenlämmössä. Kiinteä aine uutettiin uudelleen kahdesti samoissa olosuhteissa. Uutteet yhdistettiin, säädettiin 50 ml:ksi ja sentrifugoitiin 12, 000 g 5 minuuttia. Supernatantti suodatettiin 0,45 μm:n huokosten polytetrafluorieteeni (PTFE) -ruiskusuodattimen läpi (Pall, Ann Arbor, MI, USA). Sitten 20 ul supernatanttia injektoitiin HPLC-järjestelmään (Binary HPLC Pump 1525, RefractiveIndex Detector 2414, Photodiode Array Detector 2996; Waters, Milford, MA, USA), joka sisälsi Symmetry C18 -kolonni (4,6 mm, 250 mm; Waters) ja Guard-kolonni (3,9 mm 20 mm, 5 mm; Waters); järjestelmää ohjattiin EmpowerPros-ohjelmistolla (Waters, Milford, MA, USA) virtausnopeudella 1 ml/min lämpötilassa 30 1C. Liikkuva faasi valmistettiin sekoittamalla liuotin A (0,5 % (V/V) etikkahapon vesiliuos) ja liuotin B (metanoli), jolloin muodostui lineaarinen gradientti 25–40 % B 0–10 minuutissa. Ekinakosidin ja verbaskosidin retentioajat olivat 10,4 minuuttia ja 13,6 minuuttia maksimi UV-absorbanssilla 330 nm.

2.5. Cistanche tubulosan fenolin kokonaispitoisuuden, polysakkaridipitoisuuden ja antioksidanttiaktiivisuuden analyysi

2.5.1. näytteen valmistus

Cistanchetubulosauute valmistettiin puhdistetulla vedellä käyttämällä aiemmin julkaistua menetelmäämme (Zhao et al., 2011) pienin muutoksin kokonaisfenolipitoisuuden, polysakkaridipitoisuuden ja antioksidanttiaktiivisuuden määrittämiseksi (kuva 1). Lyhyesti, 1 gCistanchetubulosajauhe lisättiin 15 ml:aan puhdistettua vettä huoneenlämpötilassa, sekoitettiin intensiivisesti vortex-sekoittimella käyttäen orbitaaliravistelijaa 5 minuutin ajan, ja supernatantti otettiin talteen sentrifugoimalla nopeudella 3{7}}00 g 15 minuutin ajan. Sakka uutettiin uudelleen kahdesti samoissa olosuhteissa. Yhdistetty supernatantti säädettiin 50 ml:ksi puhdistetulla vedellä ja vietiin 0,45 μm huokosten PTFE-ruiskusuodattimen (Pall) läpi ennen analysointia.

2.5.2. Fenolin kokonaispitoisuuden analyysi

Kokonaisfenolipitoisuus määritettiin käyttämällä Folin-Ciocalteureagent ja gallushappoa vertailuyhdisteenä, kuten Singleton ja Rossi (Dubois et al., 1956; Singleton ja Rossi, 1965) ovat kuvanneet pienin muutoksin. Lyhyesti, 0,1 mlCistanchetubulosauutteeseen sekoitettiin {{0}},9 ml puhdistettua vettä ja 5 ml Folin-Ciocalteu-reagenssia (aiemmin 10-kertaisesti laimennettu tislatulla vedellä), ja sen annettiin seistä 25 1C:ssa 3,5 minuuttia, sitten seokseen lisättiin 4 ml natriumbikarbonaattiliuosta (7,5 % w/v) ja inkuboitiin {{10}}C:ssa 60 minuuttia. Absorbanssi mitattiin 765 nm:ssä käyttämällä spektrofotometriä (Perkin Elmer λ 25 UV-visible, Waltham, MA, USA). Kokonaisfenolipitoisuus määritettiin käyttämällä standardikäyrää, joka luotiin käyttämällä gallushappoa (0–0,6 mg/ml) standardina. Tulokset laskettiin milligrammoina gallushappoekvivalentteina (GAE)/1 gCistanchetubulosaraakajauhe. Kaikki testit toistettiin neljä kertaa.

2.5.3. Polysakkaridipitoisuuden analyysi

PolysakkaridipitoisuusCistanchetubulosamitattiin fenoli-rikkihappomenetelmällä (Dubois et al., 1951; Duboiset al., 1956). Lyhyesti sanottuna 1 ml asianmukaisesti laimennettua Cistanchetubulosa-uutetta ja 0,5 ml fenoliliuosta laitettiin kierrekorkisiin putkiin, jotka suljettiin ja sekoitettiin vortex-sekoituksella. Sitten 2,5 ml väkevää rikkihappoa lisättiin suoraan nestepinnalle 5 sekunnissa. Sitten putket suljettiin, sekoitettiin vortex-sekoituksella 5 s, inkuboitiin 2 minuuttia 100 1C:ssa ja annettiin jäähtyä huoneenlämpötilaan ennen analysointia. Absorbanssi mitattiin aallonpituudella 490 nm käyttäen spektrofotometriä (Perkin Elmer λ25 UV-näkyvä) 70-prosenttista metanolia sisältävää nollakoetta vastaan. Polysakkaridipitoisuus määritettiin käyttämällä standardikäyrää, joka luotiin käyttämällä glukoosia (0-100 mg/ml) standardina. Tulokset laskettiin prosentteina polysakkaridi/Cistanchetubulosaraakajauhe. Kaikki testit toistettiin kolme kertaa.

2.5.4. Kokonaisantioksidanttiaktiivisuuden analyysi

AntioksidanttiaktiivisuusCistanchetubulosauute, akarboosi ja rosiglitatsoni määritettiin 2,2'-amino-di(2-etyylibentsotiatsoliinisulfonihappo-6)ammoniumsuola (ABTS) -määrityksellä ja rauta-ioni (Fe3þ) vähentävä antioksidanttitehomääritys ( FRAP) käyttämällä kaupallisia sarjoja (Beyotime, Haimen, Kiina). Sopivilla hapettimilla ABTS voidaan hapettaa vihreäksi ABTS þ; antioksidantit voivat estää tätä prosessia. Antioksidanttien kokonaisantioksidanttiaktiivisuus voidaan heijastaa ABTS þ:n absorbanssina aallonpituudella 734 nm. Absorbanssi mitattiin aallonpituudella 734 nm (ABTS) käyttämällä mikrolevynlukijaa (Epoch, Bio-Tek, Richmond, VT, USA) Troloxilla (ABTS) antioksidanttistandardina. ABTS-määrityksen tulokset laskettiin mM Trolox Equivalent Antioxidant Capacity (TEAC)/1 g jauhetta kohti.

Happamissa olosuhteissa antioksidantit voivat palauttaa ferripyridyylitriatsiinin (Fe3þ-TPTZ) siniseksi Fe2þ-TPTZ:ksi. Antioksidanttien kokonaisantioksidanttiaktiivisuus voidaan heijastaa Fe2þ-TPTZ:n absorbanssina 593 nm:ssä. Absorbanssi mitattiin aallonpituudella 593 nm (FRAP) käyttämällä mikrolevylukijaa (Epoch), jossa antioksidanttistandardina FeS04 (FRAP). FRAP-määrityksen tulokset laskettiin mM FeS04-ekvivalenttia antioksidanttikapasiteettia (FEAC)/1 g jauhetta. Kaikki testit toistettiin neljä kertaa.

2.6. Cistanche tubulosan vaikutukset hyperglykemiaan db / db-hiirillä

2.6.1. Eläimet ja hoitoryhmät

National ResourceCenter for Mutant Mice Model tarjosi urospuolisia BKS.Cg-Dock7m þ/þ Leprdb/J (db/db) hiiriä ja niiden ikäisiä ei-diabeettisia heterotsygootteja (db/þ) 5–6 viikon ikäisinä. Nanjingin yliopiston eläintutkimuskeskus (Nanjing, Kiina). Eläinten hoidon ja koemenettelyt hyväksyi Sun Yat-senin yliopiston biotieteiden korkeakoulun laboratorioeläinetiikkakomitea (hyväksyntäkoodi 0046500), ja ne suoritettiin Kiinan eläinkokeita koskevien määräysten mukaisesti. Eläimet sijoitettiin 2272 1C-spesifiseen patogeenivapaaseen (SPF) luokkaan huoneeseen 6075 prosentin kosteudessa 12 tunnin valo-pimeä-syklissä, ja niille annettiin puhdistettua AIN-93G-ruokavaliota (Trophic Animal Feed High- tech Co., Ltd., Nantong, Kiina) ja toimitti puhdistettua vettä ad libitum.

Seitsemän päivää saapumisen jälkeen ei-diabeettisille db/þ-hiirille annettiin puhdistettua vettä (vehikkeliä) normaaliksi kontrolliryhmäksi diabeettisille ryhmille (n¼7), kun taas diabeettiset db/db-hiiret punnittiin ja jaettiin satunnaisesti 6 ryhmään (n¼8) tutkimiseksi. vaikutuksistaCistanchetubulosatyypin 2 diabeettisissa db/db-hiirissä (taulukko 1). Db/þ-hiirille annettiin oraalisesti vehikkeliä ja db/db-hiirille annettiin oraalisesti vehikkeliä, rosiglitatsonia (0,52 mg/kg/vrk), akarboosia (19,5 mg/kg/vrk) tai kolme annostaCistanchetubulosa(vastaa 120,9, 72,6 tai 24,2 mg verbaskosidia/kg/vrk ja nimitystä CT120.9, CT72.6 tai CT24.2, vastaavasti) 45 päivän keston ajan. AnnoksetCistanchetubulosamääritettiin Kiinan kansantasavallan farmakopean (PPRC) suositteleman raakajauheannoksen mukaisesti;Cistanchetubulosaannokset 120,9, 72,6 ja 24,2 mg verbaskosidia/kg/vrk, mikä vastaa 5--, 3-- ja 1--kertaisia ​​laimennoksia PPRC:n suosittelemasta raakajauheannoksesta. Kaikki suun kautta annettavaksi tarkoitetut testinäytteet liuotettiin puhdistettuun veteen sopivina pitoisuuksina, jotta saman ruumiinpainon omaaville hiirille annettaisiin samanlaiset testinäytteiden tilavuudet. Annetut kokonaistilavuudet olivat 01 ml, ja testinäytteet annettiin suun kautta kullekin hiiriryhmälle joka päivä klo 16.30-17.30 45 päivän ajan. Kehonpainoa ja verensokeritasoja seurattiin koko koeajan. Kokeen lopussa (päivä 50) hiiret paastosivat 14 tuntia, ja silmälaskimosta otettiin verinäytteitä, inkuboitiin huoneenlämmössä 30 minuuttia, sentrifugoitiin ja seeruminäytteet säilytettiin 70 1C:ssa lisämääritys. Sen jälkeen hiiret lopetettiin. Maksa ja luurankolihakset otettiin talteen, pestiin jääkylmässä suolaliuoksessa veren poistamiseksi, pakastettiin nestemäisessä typessä ja säilytettiin 70 1C:ssa lisämäärityksiä varten.

2.6.2. Paastoveren glukoositason (FBG), vatsakalvon välisen insuliinin sietotestin (ITT) ja seerumin paastoinsuliinitason (FINS) määritys

Paastoveren glukoositasot mitattiin 14 tunnin paaston jälkeen ennen eläinkokeen alkua (0 päivää), päivänä 1{{10}} ja joka 5. päivä kokeen päivinä 20–45 käyttämällä verensokerin seurantajärjestelmää (ACCU-CHEK Active, Roche DiagnosticsGmbH, Mannheim, Saksa). FBG-arvojen prosentuaaliset lisäykset (FBG-prosentin lisäysarvot: FBG-lisäysprosentti ) päivänä x (päivä 20–45) laskettiin käyttämällä (BGday x BGday 0)/BG0 päivää 100, joka edustaa kunkin FBG-arvojen nousua. ryhmään verrattuna niiden alkuperäisiin FBG-arvoihinsa. Aterian jälkeiset verensokeritasot määritettiin 120 minuuttia glukoosin (2 g/kg) oraalisen annon jälkeen päivänä 40.

ITT suoritettiin kokeen päivänä 45 yön yli paaston (14 tuntia) jälkeen. Häntälaskimoveren glukoosiarvot mitattiin ennen insuliiniinjektiota (0 min) ja 30 min, 60 minuuttia vatsaontelon välisen insuliinin injektion jälkeen (0,1 IU/kg BW). Glukoosivasteet ITT ilmaistiin integroituina alueina insuliinin (AUCinsulin) käyrien alla, laskettuna käyttämällä puolisuunnikasta (Vishwakarma et al., 2003). Kokeen lopussa seerumin paastoinsuliinitasot analysoitiin käyttämällä rotta/hiiri-insuliini ELISA-pakkausta Milliporelta (Bedford, MA, USA); seeruminäytteet valmistettiin sarjan ohjeita noudattaen. Insuliiniresistenssin homeostaattisen mallin arviointi (HOMA-IR) -indeksi laskettiin käyttämällä seuraavaa kaavaa: HOMA-IR¼ paastoinsuliini (ng/ml) paastoveren glukoosi (mmol/L)/22,5 (Matthews et ai., 1985).

2.6.3. Seerumin lipiditasojen määritys

Seerumin kokonaiskolesteroli (TC), korkean tiheyden lipoproteiinikolesteroli (HDL-c) ja triglyseridi (TG) pitoisuudet määritettiin käyttämällä kaupallisia entsymaattisia sarjoja (Biosino Biotechnology & Science Inc., Peking, Kiina). Matalatiheyksisen lipoproteiinikolesterolin (LDL-c) tasot laskettiin muodossa TC-TG/5 – HDL-c, kun taas erittäin matalatiheyksisen lipoproteiinikolesterolin (VLDL-c) tasot laskettiin TG/5:ksi Friedewaldin yhtälön (Friedewald) mukaan. et ai., 1972). Aterogeeninen indeksi laskettiin muodossa (TC HDL-c)/HDL-c.

2.6.4. Maksan ja luustolihasten glykogeenitasojen määritys

Jäädytetyt maksa- ja luustolihakset käsiteltiin glykogeenianalyysiä varten välittömästi 70 1C-pakastimista poistamisen jälkeen. Maksan ja luustolihasten glykogeenipitoisuudet mitattiin kaupallisella glykogeenisarjalla (Jiancheng, Nanjing, Kiina), joka perustui Kepplerin ja Deckerin menetelmään (Keppler ja Decker, 1974). Näytteiden absorbanssi aallonpituudella 505 nm mitattiin putkien huoneenlämpötilaan jäähdyttämisen jälkeen. Glykogeenin määrä kussakin kudosnäytteessä ilmaistiin milligrammoina glukoosia grammaa kudosta kohti.

2.7. Tilastollinen analyysi

Kaikki tulokset ilmaistaan ​​keskiarvona7SEM ja analysoitiin tilastollisten pakettien Social Science Software (SPSS 16.0, Chicago, IL, USA) tai GraphPad Prism 5 (La Jolla, CA, USA) ANOVA:lla. HOMA-IR-indeksit arvioitiin myös käyttämällä kahden näytteen riippumatonta t-testiä logaritmisen muunnoksen jälkeen. AUC-arvot laskettiin käyttämällä GraphPad Prism 5:tä. Alle 0,05 P-arvojen katsottiin osoittavan tilastollisesti merkittäviä eroja.

3. Tulokset

3.1. Cistanche-näytteen tunnistetiedot

Sekvenssikohdistustulokset osoittavat, että monistettu sekvenssi on sama kuinCistanche tubulosageenit 5.8S rDNA:n osittaiselle ja täydelliselle sekvenssille (614 nukleotidia; Gen-Bank talletusnumero AB217871). Sen morfologisten ominaisuuksien ja 5.8S rDNA -geenisekvenssin perusteella näyte 109 092 tunnistetaan nimelläCistanchetubulosa.

3.2. Cistanche tubulosan verbaskosidipitoisuuden ja ekinakosidipitoisuuden kvantitatiivinen määritys

Verbaskosidin ja ekinakosidin sisältöCistanchetubulosamääritettiin käyttämällä asianmukaisia ​​standardeja. Verbaskosidin ja ekinakosidin sisältöCistanchetubulosaolivat 2,66 prosenttia ja 11,59 prosenttia. HPLC-kromatogrammi:Cistanchetubulosaote on esitetty kuvassa 2.

3.3. Cistanche tubulosan fenolin kokonaispitoisuus, polysakkaridipitoisuus ja antioksidanttiaktiivisuus

KokonaisfenolipitoisuusCistanchetubulosaoli 66,2970,44 mg GA/g. PolysakkaridipitoisuusCistanche tubulukset oli10,1570,26 prosenttia. ABTS- ja FRAP-määritykset osoittivat, että antioksidanttiaktiivisuus oli 1,3970,06 mM TEAC/g ja 1,6170,04 mM FEAC/g.Cistanchetubulosa, {{0}},1570.01 mM TEAC/gand 0,1270,01 mM FEAC/g akarboosille ja 0,1670,01 mMTEAC/g ja 0,1370,01 mM FEAC/g rosiglitatsonille, vastaavasti.

3.4. Cistanche tubulosan antihyperglykeemiset vaikutukset db/db-hiirissä

Tuloksemme osoittivat senCistanche tubulosavoi tukahduttaa kohonneita paastoveren glukoositasoja ja kohonneita aterian jälkeisiä veren glukoositasoja, lisätä insuliiniherkkyyttä ja heikentää diabeettisten db/db-hiirten ruumiinpainon (BW) laskua. Yleisesti,Cistanchetubulosaoli tehokkaampi alentamaan hyperglykemiaa kuin akarboosia kokeen aikana, ja lisäksi Cistanche tubulosa oli parempi kuin akarboosi parantamaan insuliiniresistenssiä (p-arvot on osoitettu alla).

3.4.1. Cistanche tubulosan vaikutukset kehon ja maksan painoon

Diabeettisen verrokkiryhmän BW nousi jatkuvasti ensimmäisten 25 päivän aikana. Kuitenkin diabeteksen etenemisen myötä diabeettisten kontrollihiirten BW laski hieman päivään 30 mennessä (lisätaulukko 1). VuonnaCistanchetubulosaryhmät, kaikki kolme annostaCistanchetubulosavähensi painonpudotuksen nopeutta verrattuna diabeettisiin kontrollihiiriin (ilman merkitystä, täydentävä taulukko 1). Positiivisessa kontrolliryhmässä rosiglitatsoni johti merkittävään ruumiinpainon nousuun päivästä 20 verrattuna diabeettiseen kontrolliryhmään (po0.05). Sitä vastoin akarboosi hidasti painonpudotusta verrattuna diabeettiseen kontrolliryhmään. Normaalissa kontrolliryhmässä ruumiinpaino nousi jatkuvasti kokeen aikana ja oli merkittävästi pienempi kuin diabeettisessa kontrolliryhmässä (po0,001).

Kokeen lopussa maksan paino ja maksa/kehon paino-suhde lisääntyivät vain merkitsevästi rosiglitatsoniryhmässä (po{0}}.001) diabeettiseen kontrolliryhmään verrattuna.

3.4.2. Cistanche tubulosan vaikutus verensokeritasoihin

Cistanchetubulosanäytetäänantihyperglykeeminenvaikuttaa indb/db-hiiriin 20 päivän oraalisen annon jälkeen ja pystyi kontrolloimaan FBG-tasoa ja FBG-prosentin prosentuaalista arvoa pitkän ajan db/db-hiirillä annoksesta riippuvaisella tavalla, mikä osoittaa merkittävästi vähentyneenä paastona ja aterian jälkeen verensokeritasot (kuva 3, taulukko 2). Diabeettisessa kontrolliryhmässä FBG-taso nousi jatkuvasti kokeen aikana ja oli noin 6 kertaa korkeampi kuin normaalilla kontrolliryhmällä päivänä 45 (28,3071,027 mmol/L vs. 4,6670,350 mmol/L; po0,001). Kaikki kolme annostaCistanchetubulosaesti merkittävästi FBG:n taipumusta lisääntyä db/db hiirillä koko kokeen ajan, ja CT120.9 osoitti vahvimman hypoglykeemisen vaikutuksen (päivät 20, 35 ja 45: po{{1{{ 16}}}}.001; päivä 40: po0.05 vs. diabeettinen kontrolli). Positiivisissa kontrolliryhmissä rosiglitatsoni (0.52 mg/kg) ja akarboosi (19,5 mg/kg) estivät myös merkittävästi FBG:n taipumusta lisääntyä db/db-hiirissä koko kokeen ajan (päivä 2{{41} } - 45: po0.001, päivä 10: po0,05, rosiglitatsonevit. diabeteksen hallinta; päivä 35: po0,001, päivä 40: po0,01, päivä 20 ja 45: po0. 05, akarboosi vs. diabeettinen kontrolli). Akarboosi (19,5 mg/kg) oli kuitenkin vähemmän tehokas kuin rosiglitatsoni (päivä 20: po0,05; päivä 30: po0,01; päivä 35–45: po0,001) ja CT120,9 (päivä 45: po0,001) . Normaalissa kontrolliryhmässä FBG-taso pysyi vakiona koko kokeen ajan ja oli merkittävästi alhaisempi kuin diabeettisen kontrolliryhmän (po0,001).

20 päivän annon jälkeenCistanche tubulosaesti merkittävästi veren glukoositasojen nousua db/db-hiirillä (kuvio 3). Diabeettisen kontrolliryhmän ja akarboosiryhmän (19,5 mg/kg painokilo) FBG-lisäysprosenttiarvot nousivat kokeen aikana. Kolmen FBG-lisäysprosenttiarvotCistanchetubulosaryhmät kasvoivat vain hieman 30. päivänä. CT120.9-ryhmän FBG-lisäysprosenttiarvot pysyivät vakiona päivän 30 ja 45 välillä, kun taas CT72.6 ja CT24.2 lisääntyivät merkityksettömästi (p40.05) 45. päivään mennessä. koe, kolme annostaCistanchetubulosa(CT120.9, CT72.6 ja CT24.2) hillitsi merkittävästi FBG-lisäysprosenttiarvojen nousua 181,5 prosentilla, 151,72 prosentilla ja 123,58 prosentilla diabeettiseen kontrolliryhmään (PO{{) verrattuna. 24}}.001). Päivästä 20 päivään 40 FBG-lisäysprosentti kolmessa Cistanche tubulosa -ryhmässä oli pienempi tai samanlainen kuin akarboosiryhmä (p40,05). Päivänä 45 FBG-lisäysprosentti CT120.9-ryhmässä oli merkittävästi pienempi kuin akarboosiryhmässä (po0,01).

Cistanchetubulosaosoitti annoksesta riippuvia hypoglykeemisiä vaikutuksia (taulukko 2). Kokeen lopussa CT120.9-ryhmän FBG-tasot olivat merkittävästi alhaisemmat kuin diabeettisen kontrollin, akarboosin ja kahden muunCistanchetubulosaryhmät (CT120.9 vs.acarbose, CT72.6 ja CT24.2, po0.01; CT120.9 vs. diabeettinen kontrolli, po0,001; taulukko 2). Kokeen loppuun mennessä näiden kolmen FBG-tasotCistanchetubulosaryhmät (CT120.9, CT72.6 ja CT24.2) olivat nousseet 53,41 prosenttia, 83,19 prosenttia ja 111,33 prosenttia verrattuna niiden alkuperäisiin FBG-tasoihin, kun taas diabeettisen kontrolliryhmän ja akarboosiryhmän FBG-tasot nousivat 234:lla. prosenttia ja 150,76 prosenttia. Kolmesta testatusta Cistanche tubulosa-annoksesta vain CT120.9 johti jatkuvasti alhaisempiin FBG-tasoihin koko kokeen ajan. CT72.6 ja CT24.2 olivat vähemmän tehokkaita alentamaan FBG-tasoa kuin CT120.9 (taulukko 2, täydentävä kuva 1). CT120.9-ryhmän FBG-tasot nousivat vain päivästä 30, kun taas kahden muun FBG-tasotCistanchetubulosaryhmät ja akarboosiryhmä kasvoivat nopeammin. Päivästä 10-40 FBG-tasot kolmestaCistanchetubulosaryhmät olivat pienempiä tai samanlaisia ​​kuin theakarboosiryhmä (19,5 mg/kg BW); nämä erot eivät olleet tilastollisesti merkitseviä (p40,05).

Päivänä 40 CT120.9 hillitsi merkitsevästi aterian jälkeisen verensokeritason nousua (po0,05, taulukko 2) 2 tuntia yhden oraalisen glukoosiannoksen (2 g/kg) jälkeen. CT120.9:n vaikutus aterianjälkeiseen verensokeritasoon db/db-hiirillä oli verrattavissa annokseen 19,5 mg/kg akarboosia (p40,05). CT72.9:n ja CT24.2:n vaikutus oli vähemmän tehokas kuin rosiglitatsonin (po0,001).

3.4.3. Cistanche tubulosan vaikutus seerumin insuliinitasoon ja vatsaontelon väliseen insuliinitoleranssiin

FINS-tulokset osoittivat, että 45 päivän oraalisen annon jälkeen CT120.9 nosti seerumin insuliinitasoa (p40.05) merkityksettömästi db/db-hiirillä 40,73 prosenttia, kun taas rosiglitatsoni nosti seerumin insuliinitasoa merkitsevästi 58,90 prosentilla. prosenttia (po0,05 vs. diabeettinen kontrolli; taulukko 3).

HOMA-IR-indeksi laskettiin kvantitatiivisesti arvioimaan insuliiniresistenssin ja solujen puutteellisen toiminnan osuutta paastohyperglykemiaan. Verrattuna diabeettiseen kontrolliryhmään CT120.9 paransi HOMA-IR:n systeemisinisuliiniherkkyysindeksiä 15,30 prosenttia (p40,05), kun taas rosiglitatsoni paransi HOMA-IR-indeksiä merkittävästi 35,30 prosenttia (PO0,001 vs. diabeteksen kontrolli; taulukko 3). ITT:tä käytettiin arvioimaan vaikutustaCistanchetubulosainsuliiniherkkyydestä eksogeenisen insuliinin injektion jälkeen. Tulokset osoittivat, että CT120.9 paransi insuliinivastetta diabeettisilla db/db-hiirillä. CT120.9:n vaikutus oli verrattavissa rosiglitatsoniin ja oli parempi kuin akarboosi.CT12{{10}.9 ja rosiglitatsoni alensivat merkittävästi veren glukoosipitoisuutta 0 minuutin kohdalla (ennen insuliinia). injektio,po0.001 vs. diabeticcontrol) ja 30 min (po0.01 CT120.9:lle,po0.001 rosiglitatsoni) insuliinin injektion jälkeen (kuva 4). CT120.9 ja rosiglitatsoni alensivat AUC-insuliinia 27,92 prosenttia ja 43,89 prosenttia verrattuna diabeettiseen kontrolliin. Veren glukoositasojen välillä ei ollut merkittävää eroa CT120.9- ja rosiglitatsoniryhmissä missään vaiheessa ITT:n aikana. CT120.9-ryhmän verensokeritasot olivat merkittävästi alhaisemmat kuin akarboosi 0 minuutin kohdalla (ennen insuliinin injektiota, po0,01: CT120.9 vs. akarboosi), 30 minuutin kohdalla (po0,01:CT120.9 vs. akarboosi) ja 60 min (po0,05: CT120,9 vs. akarboosi) insuliinin injektion jälkeen (kuvio 4). CT120.9 alensi AUCinsuliinia 28,79 prosenttia akarboosiin verrattuna. Akarboosilla, CT72.6:lla ja CT24.2:lla ei ollut merkittäviä vaikutuksia AUCinsuliini- tai verenglukoositasoihin missään ITT:n ajankohtana. Sekä normaalin kontrolliryhmän FIN- että ITT-tulokset olivat merkittävästi alhaisemmat kuin diabeettisen kontrolliryhmän (po0,05: FIN;po0,001: ITT).

3.4.4. Cistanche tubulosan vaikutus maksan ja luuston lihasglykogeenitasoihin

Glykogeenitasot eri kudoksissa ovat suora heijastus insuliiniherkkyydestä, koska insuliini edistää solunsisäistä glykogeenin kertymistä. Rosiglitatsoni alensi maksan glykogeenitasoa merkittävästi 59,61 prosenttia (po0.001) ja nosti lihasten glykogeenitasoa 33,93 prosenttia (po0,05 vs. diabeettinen kontrolli). CT24.2 alensi maksan glykogeenitasoa 30,41 prosenttia (po0,05 vs. diabeettinen kontrolli). Pienemmillä Cistanche tubulosan annoksilla ei ollut merkittävää vaikutusta maksan tai luustolihasten glykogeenitasoihin.

3.5. Cistanche tubulosan hypolipideemiset vaikutukset db/db-hiirissä

Arvioimaan vaikutuksiaCistanchetubulosadyslipidemiassa määritimme kokonaiskolesterolin, TG:n, HDL-c:n, LDL-c:n ja VLDL-c:n tasot db/db-hiirissä. Tuloksemme osoittavat senCistanchetubulosavoi parantaa dyslipidemiaa lisäämällä HDL-c-tasoja, alentamalla TG-, LDL-c- ja VLDL-c-tasoja sen lisäksi, että se alentaa kolesterolitasoja db/db-hiirissä. CT120.9 (po0.05) ja CT24.2 (po0.001) laskivat merkitsevästi TC-tasoa diabeettisissa db/db-hiirissä (taulukko 3). ) verrattuna diabeteksen hallintaan. Kaikista koeryhmistä vain CT24.2 alensi merkitsevästi TG:n (po0,05) ja VLDL-c:n (po0,05) tasoja diabeettiseen kontrolliin verrattuna. Kaikki kolme annostaCistanchetubulosaalensi merkittävästi LDL-tasoa (po0.01 CT120.9, po0.05 CT72.6:lle, po0.001 CT24.2:lle, vs. diabeettinen kontrolli) . Kaikki kolme annostaCistanchetubulosa(CT120.9, CT72.6 ja CT24.2) nostivat HDL-tasoa merkityksettömästi 9,78 prosenttia, 7,32 prosenttia ja 7,78 prosenttia (p40,05 vs. diabeettinen kontrolli).

Näistä lipidiparametreista alhainen HDL-c/TC-taso on sepelvaltimotaudin merkittävin riippumaton riskitekijä.CT120.9 (po0.05) ja CT24.2 (po0.001) vs. diabeettinen kontrolli) nosti HDL-c/TC-tasoa merkittävästi. Aterogeeninen indeksi, joka on sepelvaltimotaudin riskitekijä, aleni kaikilla kolmella annoksella.Cistanchetubulosa(po{{0}}.001 CT120.9:lle ja CT24.2:lle, po0.01 CT72.6:lle vs. diabeettinen kontrolli).

Positiivisessa kontrolliryhmässä rosiglitatsoni nosti merkitsevästi TC:n (po{{0}}.001) ja LDL-c:n (po0,01) tasoja diabeettiseen kontrolliin verrattuna. Rosiglitatsoni nosti myös HDL-c-tasoa merkittävästi 57,32 prosenttia (po0,001), mutta sillä ei ollut myönteistä vaikutusta HDL-c/TC-tasoon tai aterogeeniseen indeksiin. Akarboosilla ei ollut merkittävää vaikutusta seerumin lipidiindekseihin db/db-hiirillä.

4. Keskustelu

Tämä tutkimus suunniteltiin tutkimaan mahdollista antihyperglykeemistä ja hypolipidemistä aktiivisuuttaCistanchetubulosa.

In vitro -testin tulokset osoittivat senCistanchetubulosasisältää arvostetun määrän fenolia ja polysakkarideja, ja sillä on hyvä antioksidanttiaktiivisuus. KokonaisfenolipitoisuusCistanche tubulosaon pienempi kuin teen (Ankolekar et al., 2011) ja kahvin (Chu et al., 2011) fenolipitoisuus ja korkeampi kuin monien muidenhyperglykeeminenyrtit, kuten karpalo (Pinto et al., 2010), merilevä (Nwosu et al., 2011), kikherne (Sreerama et al., 2012) ja jotkut perinteiset lääkekasvit, joita käytetään tyypin 2 DM:n hoidossa (Gulatiet al., 2012). Cistanche tubulosan polysakkaridipitoisuus on pienempi kuin Panax ginsengin (Wanget al., 2011) ja teen (Chu et al., 2011) polysakkaridipitoisuus ja korkeampi kuin monissa muissaantihyperglykeeminenyrtit, kuten Aloe vera L. (Hu et al., 2003), jujuba (Sun et al., 2011), Polyporus umbellatus (Tian et al., 2007), Rheum palmatum (Ni et al., 2007) ja jotkut tyypin 2 DM:n hoidossa käytetyt perinteiset lääkekasvit (Gulatiet al., 2012). Kasveilla, joissa on runsaasti antioksidantteja, kuten polyfenoleja ja fenyylietanoidiglykosideja (PhG), tunnistetaan usein olevan diabeteksen vastaisia, mikä johtuu ainakin osittain niiden kyvystä vähentää oksidatiivista stressiä (Pinto et al., 2010; Saltiel, 2001; Gulati et ai., 2012). Antioksidanttitestituloksemme on yhdenmukainen aiempien raporttien kanssa (Arthur et al., 2011;anti-Baoet ai., 2010; Funes et al., 2009), joka ilmoitti senCistanchetubulosasillä on merkittäviä antioksidanttisia ominaisuuksia. Cistanche tubulosan TEAC-arvo ja FRAP-arvo olivat korkeammat kuin viherkaalilla, porkkanalla, kurkulla, vihreällä salaatilla, sellerilla (Pellegrini et al., 2003) ja joillakin muilla kasveilla, joilla on hyvät antioksidanttiset vaikutukset, joita käytettiin diabeteksen hoidossa (Rahimi et al. , 2005), ja se oli paljon korkeampi kuin akarboosi ja rosiglitatsoni. Aiemmat kliiniset tutkimukset ovat osoittaneet, että -lipoiinihappo (Konrad et ai., 1999) tai muut antioksidantit (Paolisso et ai., 1992) voisivat parantaa insuliiniherkkyyttä insuliiniresistenteillä ja/tai diabeetikoilla. Siten Cistanchetubulosa on antioksidanttien lähde, jolla voi olla suojaavia vaikutuksia diabetesta ja pitkäaikaisia ​​diabeteksen komplikaatioita vastaan.

Cistanche-lajeja on käytetty tonisoivana ravintona tai lääkkeenä satoja vuosia, mikä viittaa siihen, että niitä on turvallista ottaa suun kautta. Edellinen raportti 14 päivän akuutin myrkyllisyyden testistä osoittiCistanchetubulosauute kuuluu todelliseen myrkyttömään: MTD:henCistanchetubulosauutteen todettiin olevan 410 g/kg hiirillä. Kuolleisuutta ei kirjattu 14 päivän seurannan aikana, ja kunkin ryhmän testatuilla hiirillä ei havaittu mitään ylimääräisiä toksisuuden merkkejä 24 tunnin ja 14 päivän havainnoinnin aikana (Zhang et al., 2012). Kokeemme suurin annos, 5,084 g CTAE/kg BW/vrk, joka vastaa 9,10 g raakajauhetta/kg hiirillä, on paljon pienempi kuin MTD. Näin ollen annos on turvallinen kokeessamme.

Tyypin 2 DM on yksi yleisimmistä ja vakavimmista aineenvaihduntataudeista maailmassa, ja sille on pääasiassa ominaista hyperglykemia. Tässä tutkimuksessa otimme käyttöön BKS.Cg-Dock7m þ/þ Leprdb/J(db/db) -hiiret tyypin 2 DM:n malliksi tutkiaksemmeCistanchetubulosaglukoosin ja lipidiaineenvaihduntaan in vivo. db/dbhiiret ovat hyvin hyväksytty geneettinen jyrsijämalli elämäntapaan liittyvistä aineenvaihduntasairauksista, mikä on erityisen hyödyllinen diabeteksen ja liikalihavuuden vastaisten aineiden arvioinnissa. Tämä hiirkanta kantaa mutaatiota leptiinireseptorigeenissä, osoittaa hyperglykemiaa, hyperlipidemiaa, insuliiniresistenssiä ja liikalihavuutta 6–7 viikon ikään mennessä (Hummel et ai., 1966; Nishina et ai., 1994; Uchida et al., 2005; Srinivasan ja Ramarao, 2007).

Diabeteksen edetessä diabeettisen kontrolliryhmän ruumiinpainon lievä lasku (lisätaulukko 1) saattaa johtua alentuneesta plasman insuliinitasosta, jota esiintyy 10–12 viikon ikäisillä diabeettisilla db/db-hiirillä (Hummel et al., 1966) ja lisäsi aineenvaihdunnan tehokkuutta diabeettisilla db/db-hiirillä (Trayhurn, 1979). Vähensi painonpudotusta kaikissa kolmessa annoksessaCistanche-tubuluksetvoi johtua siitä, ettäCistanchetubulosamyös kohonneet insuliinitasot (taulukko 3), mikä on hyödyllistä DM:lle. Rosiglitatsoni johti merkittävään ruumiinpainon nousuun, mikä on rosiglitatsonin tunnettu sivuvaikutus. Merkittävästi lisääntynyt maksan paino ja maksan/kehon painon suhde rosiglitatsoniryhmässä (po{1}}.001) osoittivat, että rosiglitatsoni saattaa aiheuttaa lipidien kertymistä ja toiminnallisia muutoksia maksassa.

In vivo -testin tulokset osoittivat senCistanche-tubulukset voisivattukahduttavat kohonneet paastoveren glukoositasot ja kohonneet aterian jälkeiset verensokeritasot ja lisäävät db/db-hiirten insuliiniherkkyyttä. Yleisesti,Cistanchetubulosaoli tehokkaampi hyperglykemian ja dyslipidemian vähentämisessä ja insuliiniresistenssin parantamisessa kuin akarboosi kokeen aikana.

20 päivän oraalisen annon jälkeenCistanchetubulosaesti merkittävästi FBG-tason ja FBG-prosentin kasvuprosentin lisääntymistä db/db-hiirillä jatkuvasti. Kokeilun lopussa,Cistanchetubulosanäytti senantihyperglykeeminenannoksesta riippuvaisella tavalla. Nämä tulokset osoittavat senCistanchetubulosavoi mahdollisesti toimia mahdollisena verensokeria alentavana aineena, kun sitä annetaan sopivalla annoksella. Suurin osa glukoosin hävittämisestä tapahtuu luurankolihaksissa aterian jälkeen, kun taas FBG-tasot määräytyvät ensisijaisesti maksan glukoosituotannon mukaan. FBG:n tulokset osoittivat senCistanchetubulosaparansi merkittävästi db/db-hiirten maksan glukoosituotantoa; huono maksan glukoosituotanto on yksi kolmesta suurimmasta tyypin 2 DM:n metabolisesta puutteesta, jotka vaikuttavat hyperglykemiaan (Bavenholm et al.,2001). Päivänä 30 diabeettisen kontrolliryhmän FBG-lisäysprosenttiarvot olivat odotettua alhaisemmat, mikä saattaa selittää sen tosiasian, että vain CT72,6 (po0,01), akarboosi (po0,05) ja androsiglitatsoni ( po0,001) vähensi merkittävästi FBG:n nousua diabeettiseen kontrolliryhmään verrattuna.

Yhteenvetona taulukon 2 tulokset osoittavat senCistanchetubulosakontrolloi tehokkaasti kohonnutta aterian jälkeistä verensokeritasoa glukoosilatauksen jälkeen, mikä viittaa siihen, että Cistanche tubulosa on kandidaattiaine aterian jälkeisen hyperglykemian lievittämiseen. Korkea aterian jälkeinen verensokeritaso on itsenäinen riskitekijä tyypin 2 DM:iin liittyville kardiovaskulaarisille komplikaatioille (Ceriello, 2005; Blaak et al., 2012). CT120.9 hillitsi merkittävästi aterian jälkeisen verensokeritason nousua, mikä viittaa siihen, että CT120.9 paransi diabeettisten db/db-hiirten heikentynyttä glukoosinsietokykyä, ja vaikutus oli verrattavissa 19,5 mg/kg akarboosiin. Kuitenkin, CT120:n anti-hyperglykeeminen vaikutus. 9 oli vähemmän intensiivinen kuin rosiglitatsoni.

Puutteellinen insuliinin eritys ja insuliiniresistenssi ovat kaksi kolmesta tärkeimmistä tyypin 2 DM:n aineenvaihduntahäiriöistä, jotka edistävät hyperglykemiaa (Bavenholm et al., 2001). Analyysituloksemme FINS osoitti, että suuri annosCistanchetubulosaPalautti puutteellisen insuliinin erityksen db/db-hiirissä jossain määrin. Siksi Cistanchetubulosa tukahdutti tehokkaasti kohonneita paasto- ja aterianjälkeisiä veren glukoositasoja (taulukko 2) osittain stimuloimalla insuliinin eritystä. Hyperglykemia ja hyperlipidemia aiheuttavat ylimääräistä oksidatiivista stressiä beeta-soluille ja mitokondrioille ensisijaisen diabeteksen patogeneesin lisäksi. On olemassa in vitro ja in vivo todisteita siitä, että krooninen altistuminen korkeille veren glukoosi- ja lipidien tasoille ovat haitallisia tobeta-soluja, jotka aiheuttavat vajavaa insuliinin eritystä, heikentävät insuliinin geeniekspressiota ja aiheuttavat solukuoleman apoptoosin kautta (Pitocco et al., 2010). Koska antioksidantit voisivat suojata beetasolulinjoja ja eristettyjä saaria korkeille glukoosipitoisuuksille altistumisen haitallisilta vaikutuksilta (Kaneto et ai., 1996, Tajiri et ai., 1997), Cistanche tubulosa voi parantaa insuliinin eritystä antioksidanttivaikutuksensa kautta.

Diabeettisen kontrolliryhmän vakavasti heikentynyt insuliinitoleranssi vahvisti db/db-hiirten insuliiniresistentin tilan. ITT-tulokset osoittivat, että suuri annosCistanchetubulosaparantunut insuliiniresistenssi db/db-hiirillä, mikä oli verrattavissa rosiglitatsoniin ja parempi kuin akarboosi, mikä viittaa siihen, ettäCistanchetubulosasillä on voimakkaita insuliinia herkistäviä ominaisuuksia.

Glukoosin homeostaasia säätelevät pääasiassa maksa ja luustolihakset. Suurin osa glukoosin hävittämisestä tapahtuu maksassa ja luustolihaksessa, ja glykogeeni on varastoitavan glukoosin ensisijainen solunsisäinen muoto (Saltiel, 2001). Glykogeenitasot eri kudoksissa heijastavat suoraan insuliiniherkkyyttä, sillä insuliini edistää solunsisäistä glykogeenin kertymistä. Insuliinin stimuloima glykogeenipitoisuus pienenee huomattavasti insuliiniresistenssin omaavilla eläimillä suhteessa insuliinin puutteen asteeseen (Chandramohan et al., 2008).Cistanchetubulosaei vaikuttanut suotuisasti glykogeenin varastointiin maksassa tai luustolihaksessa.

Tyypin 2 DM:n metaboliselle profiilille on ominaista heikentynyt glukoosiaineenvaihdunta ja insuliiniresistenssi, usein yhdistettynä dyslipidemiaan (Cha et al., 2005). Dyslipidemia on yksi tärkeimmistä sydän- ja verisuonisairauksien riskitekijöistä DM:ssä. Diabeettisen dyslipidemian tyypillisiä piirteitä ovat korkea plasman triglyseridipitoisuus (TG), alhainen HDL-lipoproteiinikolesterolin (HDL-c) pitoisuus, kohonnut matalatiheyksisen lipoproteiinikolesterolin (LDL-c) pitoisuus ja kohonnut erittäin matalatiheyksinen lipoproteiini kolesteroli (VLDL-c) -pitoisuus (Mooradian, 2009). Hoidon jälkeenCistanchetubulosa45 päivän ajan kokonaiskolesterolin, TG:n, LDL-c:n ja VLDL-c:n tasot db/db-hiirillä laskivat, kun taas HDL-c-tasot nousivat, mikä osoittaa, ettäCistanchetubulosaSillä oli suotuisa vaikutus dyslipidemiaan ja se voi vähentää tehokkaasti ateroskleroosin, sepelvaltimotaudin ja diabeettisten komplikaatioiden riskiä (taulukko 3). Cistanche tubulosa alensi merkittävästi TC-tasoa, mikä on yhdenmukaista aiemman raportin kanssa (Shimoda et al., 2009). Mekanismi, jolla Cistanche tubulosa parantaa dyslipidemiaa, voi liittyä maksan mRNA:n ilmentymisen välittämiseen liittyen kolesterolin kuljetukseen ja aineenvaihduntaan (Shimoda et al. ., 2009).Vaikka hyperkolesterolemian esiintyvyys ei lisääntynyt DM:ssä, kolesterolitasojen alentaminen voi vähentää suhteellista sydän- ja verisuonisairauksien riskiä DM-potilailla (Mooradian, 2009). Cistanche tubulosa nosti merkittävästi HDL-c/TC-tasoa ja vähensi aterogeenisuutta indeksi, jotka ovat sepelvaltimotaudin riskitekijöitä, mikä osoittaa, että Cistanche tubulosa on hyödyllinen sekä diabeteksen että sydän- ja verisuonitautien hoidossa. Positiivinen kontrollilääke rosiglitatsoni nosti merkittävästi TC-tasoa, mikä on olennaista diabeteksen ja sydän- ja verisuonitautien lisääntyneen etenemisriskin kannalta.

5. Päätelmät

Lopuksi tarjoamme ensimmäisen esittelyn antihyperglykeemisestä jahypolipidemiatehosteita/Cistanchetubulosatyypin 2 diabeettiset db/db hiiret.Cistanchetubulosanormalisoitunut hyperglykemia palautti insuliiniherkkyyden ja vähensi dyslipidemiaa.Cistanchetubulosaparansivat kaikkia kolmea suurta aineenvaihduntahäiriötä, jotka vaikuttavat hyperglykemiaan tyypin 2 DM:ssä.Cistanchetubulosaosoitti suuren potentiaalin ehkäistä tyypin 2 DM:n etenemistä ja vähentää ateroskleroosin, sepelvaltimotaudin ja diabeteksen komplikaatioiden riskiä. Perinteisenä kiinalaisena lääketieteenä ja tonic-ruokana Cistanchetubulosaa voitaisiin kehittää edelleen lääkkeiksi, farmaseuttiseksi ruoaksi tai ravintolisäksi tulevaisuutta. Lisätutkimuksia tarvitaan kuitenkin bioaktiivisen komponentin tunnistamiseksi ja antihyperglykeemisestä aineesta vastaavien mekanismien selvittämiseksi.hypolipidemiatehosteita/Cistanchetubulosa.

Kiitokset

Tätä työtä tukivat Kiinan 11. viisivuotissuunnitelman (2007BAI32B06) kansallisen avainteknologian T&K-ohjelman apurahat ja valtioneuvoston köyhyyden lieventämis- ja kehitystoimisto (2008-3A).

Liite A. Täydentävä materiaali

Tähän artikkeliin liittyvät lisätiedot löytyvät verkkoversiosta osoitteesta http://dx.doi.org/10.1016/j.jep.2013.09.027.

Lähde: "Cistanche tubulosan anti-hyperglykeemiset ja hypolipideemiset vaikutukset" byWen-Ting Xiong et ai

---W.-T. Xiong et ai. / Journal of Ethnopharmacology 150 (2013) 935–945