Diabeteksen aiheuttaman munuaissairauden hoito: Oleanolihappo

Lisätietoja:Ali.ma@wecistanche.com

Diabeteksen aiheuttaman kroonisen munuaissairauden puhkeamisen estäminen esidiabeteksen aikana: oleanolihapon vaikutukset valittuihin kroonisen munuaissairauden markkereihin ruokavalion aiheuttamassa prediabeettisessa rottamallissa

Mlindeli Gamede, Lindokuhle Mabuza, Phikelelani Ngubane, Andile Khathi

1. Esittely

Noin 30-40 prosenttia tyypistä 2diabetesmellitus (T2DM) -potilaille kehittyy munuaiskomplikaatioita huolimatta siitä, että heitä hoidetaan erilaisilla tavanomaisilla lääkkeillädiabetes[1]. Tämä voidaan osittain selittää näiden lääkkeiden negatiivisilla vaikutuksilla munuaisten toimintaan [2.Diabeteson yksi johtavista syistäkrooniset munuaissairaudet(CKD), mukaan lukien diabeettinen nefropatia [3]. Munuaiskomplikaatiot, joita esiintyy pääasiassadiabetesNäitä ovat glomerulusten hyperfiltraatio, munuaisten tubulushäiriöt ja nefromegalia [4]. Nämä komplikaatiot liittyvät perinteisesti avoimeen T2DM:ään, mutta viimeaikaiset tutkimukset ovat osoittaneet sendiabetes-liittynytmunuainenkomplikaatiot alkavat prediabeettisen tilan aikana [5. Aiemmat tutkimukset laboratoriossamme ovat raportoineet, että runsasrasvaiselle ja hiilihydraattipitoiselle ruokavaliolle indusoidulle prediabeettiselle rottamallille on tunnusomaista systeeminen insuliiniresistenssi, heikentynyt glukoositoleranssi (IGT) ja oksidatiivinen stressi [6. Nämä komplikaatiot liittyvät suoraan kudosten toiminnallisiin ja rakenteellisiin poikkeamiinmunuainen7I. IGT voi johtaa jatkuvaan hyperglykemiaan, joka johtaa glukoosin ei-entsymaattiseen reaktioon paikallisten munuaisproteiinien kanssa, jotka muodostavat edistyneitä glykaation lopputuotteita (AGE) ja reaktiivisia happilajeja (ROS)[8]. Oksidatiivinen stressi liittyymunuaistenvaurio ja glomerulaarisen tyvikalvon eheyden menetys. Tälle on tavallisesti ominaista arvon noususäätelymunuainenvauriomolekyyli-1 (KM-1) ja podosyyttirakenteen menetys [7I. Nämä rakenteelliset poikkeavuudet vaikuttavat myös laitteen toimivuuteenmunuainenlisäämällä glomerulusten tyvikalvon läpäisevyyttä (GBMP), mikä johtaa hyperfiltraatioon [9. Lisäksi IGT voi muuttuamunuainentoimintolisäämällä glukoosin glomerulaarista suodatusta ja sen jälkeistä uudelleenabsorptiota proksimaalisessa tubuluksessa, mikä lisää natriumin takaisinabsorptiota [101. Plasman natriumin lisääntyminen ja lisääntynyt GBMP voivat johtaa eGFR:n lisääntymiseen ja makromolekyylien, kuten albumiinin, poistumiseen virtsaan [11]. Glomerulaarinen hyperfiltraatio liittyy podosyyttien häviämiseen ja siten podosiinin esiintymiseen virtsassa [71.Diabeteson osallisena munuaisten elektrolyytin ja veden käsittelyn muuttamiseen, mikä liittyy reniini-angiotensiini-aldosteronijärjestelmän (RAAS) aktivoitumiseen natriumin ja veden häviämisen estämiseksi [2]. Diabetekseen liittyviä munuaiskomplikaatioita hoidetaan perinteisesti farmakologisilla aineilla, mukaan lukien insuliiniherkistimet ja angiotensiinia konvertoivan entsyymin (ACE) salpaajat [13]. Lisäksi ruokavaliotoimenpiteitä suositellaan myös tapauksissa, joissa nämä komplikaatiot johtuvat T2DM:stä [14]. Ruokavaliotoimenpiteiden toteuttaminen on kuitenkin usein monimutkaista, ja se liittyy yleensä potilaan huonoon hoitomyöntyvyyteen [15]. Viimeaikaiset tutkimukset laboratoriossamme osoittavat, että kasvien bioaktiiviset yhdisteet, kutenoleanolihappo(OA) osoittavat insuliinille herkistäviä ja sydäntä suojaavia vaikutuksia ruokavalion indusoimissaprediabetes[16]. Kuitenkin vaikutukset OA (oleanolihappo)munuaisten toiminnasta sisäänprediabetesjää tuntemattomaksi. Tästä syystä tämä tutkimus on suunniteltu arvioimaan OA:n vaikutuksia (oleanolihappo) valituissa CKD:n merkkiaineissa (krooniset munuaissairaudet), oksidatiivista stressiä ja tulehdustamunuaisetruokavalion aiheuttamista prediabeettisista rotista.

Klikkaa Cistanchesiin ja Cistanche-tuotteisiin munuaissairauksiin

2. Menetelmät ja materiaalit

21. Lääkkeet ja kemikaalit

Kaikki kemikaalit ja reagenssit hankittiin luotettavilta lääketoimittajilta, ja ne olivat analyyttistä laatua.

2.2. Eristysmenetelmä

OA (oleanolihappo)eristettiin Syzygium aromaattisesta [(Linnaeus)Merill & Perry] [Myrcene](neilikka) käyttäen vakiintunutta protokollaa Khathi et ai. [17].

2.3. Eläinten hoito

KwaZulu-Natalin yliopiston Animal Research Ethics Committee (etiikkanumero: AREC/035/016M) hyväksyi kaikki eläintoimenpiteet ja kasvatusolosuhteet. Urospuoliset Sprague-Dawley-rotat (130-160 g) kasvatettiin ja pidettiin KwaZulu-Natalin yliopiston biolääketieteellisessä tutkimusyksikössä. Eläimiä pidettiin normaaleissa laboratorio-olosuhteissa, joissa lämpötila oli vakio (22 ± 2 astetta), CO2-pitoisuus (<5000 ppm.),="" relative="" humidity="" (55±5%),="" and="" illumination(12="" h="" light/dark="" cycle,="" lights="" on="" at="" 07h00="" a.m.).the="" noise="" level="" was="" maintained="" at="" less="" than="" 65="" decibels.="" the="" animals="" were="" allowed="" access="" to="" food="" and="" fluids="" ad="" libitum.="" the="" animals="" acclimatized="" to="" their="" new="" environment="" for="" one="" week="" while="" consuming="" standard="" rat="" chow="" and="" tap="" water="" before="" exposure="" to="" a="" well-established="" experimental="" high-fat,="" high="" carbohydrate="">

2.4. Prediabeteksen induktio ja ruokintaohjelma

36 urospuolista Sprague-Dawley-rottaa, jotka painoivat välillä 150–180, jaettiin satunnaisesti kahteen ryhmään, normaaliruokavalioryhmään (n=6) ja runsasrasvaiseen, runsashiilihydraattiseen ruokavalioon saaneeseen ryhmään (n {{9). }}). Eläimet sopeutuivat uuteen ympäristöönsä viikon ajan nauttien tavanomaista rotanruokaa ja vesijohtovettä ennen altistamista kokeelliselle korkearasvaiselle ja hiilihydraattipitoiselle (HFHC) ruokavaliolle. Eläimet, joille aiheutettiin esidiabetes, saivat HFHC-ruokavalion, joka oli aiemmin kehitetty laboratoriossamme AVI Foodsilla Etelä-Afrikassa, kun taas normaali kontrolli ruokittiin normaalilla rottien ruokavaliolla UKZN-eläinyksiköstä. Ruokintaohjelma ja esidiabeteksen induktiot kestivät 20 viikkoa. Tänä aikana parametreja, mukaan lukien paastoverensokeri, glukoosin sietokyky ja veren triglyseridi, tarkkailtiin joka neljäs viikko. Tässä tutkimuksessa prediabetes määriteltiin kokonaispainon, paastoveren glukoosin, 2-tuntiglukoosin sietokyvyn (suun kautta otetun glukoosinsietotestin aikana) ja veren triglyseridien kasvuksi, jotka havaittiin HFHC-ruokavaliolla ruokitetuilla eläimillä. .

2.5. Eläimet ja ryhmät

Tutkimuksen yleistavoitteena oli selvittää, onko OA (oleanolihappo)voi parantaa esidiabeteksen aiheuttamia riskitekijöitäkrooniset munuaissairaudetsekä ruokavalion kanssa että ilman sitä. Näiden tavoitteiden tutkimiseksi normaali ruokavaliolla ruokittua ryhmää pidettiin ei-prediabetes-kontrollina (NPC) (n=6). Eläimet, jotka saivat HFHC-ruokavaliota ja joilla kehittyi esidiabetes, jaettiin satunnaisesti viiteen ryhmään niiden vastaavien hoitojen mukaan: hoitamaton prediabeettinen kontrolliryhmä (PC), metformiinilla hoidettu ryhmä (MET), metformiinilla hoidettu ruokavaliointerventioryhmä (MET plus DI, oleanolihappokäsitelty ryhmä (OA (oleanolihappo)) ja oleanolihapolla käsitelty ruokavaliolla (OA (oleanolihappo)plus DI). Kaikki ryhmät olivat n= 6.

3. Prediabeettisten eläinten hoito

Hoitojakso kesti 12 viikkoa, mikä tekee riittävästi aikaa hemoglobiinin glykaatioon. Eläimiä hoidettiin joka kolmas päivä, jolloin MET- ja MET plus DI -ryhmät saivat metformiinia (500 mg/kg p. o) OA:n aikana (oleanolihappo)ja OA plus DI-ryhmille annettiin oleanolihappoa (80 mg/kg po). Tätä annosta ei pidetä myrkyttömänä, ja sen tehokkuus on aiempien laboratoriossamme tehtyjen tutkimusten mukaan parempi [15. Parametrit, mukaan lukien nesteen saanti ja virtsan eritys, mitattiin joka neljäs viikko kaikissa ryhmissä hoitojakson ajan. Koodi po tarkoittaa suun kautta annettavaa annosta, jossa käytetään suuletkua.

3.1. Verenotto ja kudosten kerääminen

12-viikon hoitojakson lopussa eläimet lopetettiin nukuttamalla Isoformilla (100 mg/kg) (Safeline Pharmaceuticals(Pty)Ltd, Roodeport, Etelä-Afrikka) kaasuanestesiakammion kautta. (Biomedical Resource Unit, UKZN, Durban, Etelä-Afrikka) 3 minuutin ajan, mitä seurasi päänleikkaus, ja veri kerättiin kaikista eläimistä sydänlävistysmenetelmällä esijäähdytettyihin heparinisoituihin astioihin. Sen jälkeen veri sentrifugoitiin (Eppendorf centrifuge 5403, Saksa) 4 °C:ssa 503 g:ssä 15 minuutin ajan, ja plasma kerättiin ja säilytettiin - 80 asteen asteessa Bio Ultra -pakastimessa (Snijders Scientific, Hollanti), kunnes valmis biokemialliseen analyysiin. Themunuaisetpoistettiin, huuhdeltiin kylmällä normaalilla suolaliuoksella ja pikapakastettiin nestetypessä ennen säilytystä Bio Ultra -pakastimessa (Snijders Scientific, Tilburg, Alankomaat) -80 asteessa, kunnes biokemiallinen lisäanalyysi suoritettiin.

3.2. Virtsan keräys

Virtsanäytteet kerättiin kaikista koeryhmistä käyttämällä biolääketieteen resurssiyksikön toimittamaa metabolista häkkijärjestelmää. Virtsanäytteet kerättiin hoitojakson eri kohdissa eli viikoilla 0, 4, 8 ja 12. Kerätyt virtsanäytteet säilytettiin -80 C-asteessa.

3.3. Biokemiallinen analyysi

Plasma ja virtsa lähetettiin Global Clinical and Viral Laboratoriesille (Amanzimtoti Etelä-Afrikka) biokemiallista analyysiä varten. Virtsan analyysi sisälsi elektrolyyttien, kuten natriumin, kaliumin, albumiinin ja kreatiniinin, kvantifioinnin.Munuainenkudosanalyysi:munuainenkudos homogenisoitiin fosfaattipuskurisuolaliuoksella (PBS) suhteessa 1 g (kudos):9 ml (PBS) ja homogenaattia käytettiin malondialdehydi (MDA) -määritykseen lipidien peroksidoitumisen ja oksidatiivisen stressin määrittämiseksi käyttäen vakiintunutta protokollaa. . MDA-esseeseen liittyi antioksidanttientsyymien kvantifiointi, mukaan lukien superoksididismutaasin (SOD) ja glutationiperoksidaasin (GPx) pitoisuudet, jotka tehtiin käyttämällä Elabscience ELISA -sarjoja [10.11]. Plasma-analyysit: Plasman aldosteroni- ja KIM{5}}-pitoisuudet olivat analysoitiin myös käyttämällä vastaavia rotan ELISA-pakkauksia (Elabscience Biotechnology Co., Ltd) valmistajan ohjeiden mukaisesti.

3.4. Kvantitatiivinen reaaliaikainen PCR

Ribonukleiinihappo (RNA) uutettiin hoitojakson viikolla 12 saaduista virtsanäytteistä.RNA-uutto tehtiin Inqaba biotechin (Etelä-Afrikka) ZR Urine RNA -eristyssarjalla (zymo research, Yhdysvallat). määritettiin nanopisaralla, ja RNA-pitoisuuden standardointi suoritettiin. Muuntunut deoksiribonukleiinihappo (cDNA) syntetisoitiin sitten käyttämällä cDNA-synteesipakkausta (ThermoFisher).

Vahvistukseen käytettiin ThermoFisher light cycler SYBR Green I master mixiä Thermo fisher light cycler -järjestelmän valmistajan ohjeiden mukaisesti. Kiertoolosuhteet olivat: Esi-inkubointi suoritettiin 95 asteessa 60 sekunnin ajan. Sitä seuraa 3-vaihevahvistus 45 sykliä 95 astetta C 15 s, 60 astetta 30 s ja 72 astetta 30 s. Sulatus suoritettiin 95 asteessa 10 sekuntia, 65 asteessa 60 sekuntia ja 97 asteessa 1 sekuntia. Lisäksi jäähdytys saavutettiin 37 asteessa 30 sekunnin ajan. Glyseraldehydifosfaattidehydrogenaasia (GAPDH) käytettiin sisäisenä kontrollina tulosten normalisoimiseksi kiinnostuksen kohteena olevan geenin suhteellisen ilmentymisen määrittämiseksi. Geeniekspressioarvot esitetään 248c-menetelmällä. Käytettiin alla olevia alukkeita.

3.5. Laskenta ja yhtälöt

Virtsan albumiini/kreatiniinisuhde (Alb/Cr-R) laskettiin käyttämällä albumiinia [UAlb] ja kreatiniinia [UCr], jotka saatiin 24 tunnin virtsanäytteistä 12. hoitoviikon jälkeen. Alb/Cr-R:n yksiköt ovat (mg/mgCr). ALB/Cr-R=albumiinin suhde kreatiniiniin,[UALB]=virtsan albumiinipitoisuus ja [UCr] =virtsan kreatiniinipitoisuus

RT-PCR:n kvantifiointi laskettiin käyttämällä vertailevaa menetelmää

Taitteen muutos hoidon vuoksi=2-△XR

ACT=CT (kohdegeeni) ja CT (vertailugeenit)

ACT= ACT(kohdenäyte)-ACT(viitenäyte)

3.6. Elektrolyyttien erittyminen vetovoimalla

Natriumin fraktioeritys (FENa）= WNex× 100 Kaliumin fraktioeritys (FEK)= Wes× 100

UNaurnary-natrium, PCR-plasman kreatiniini, UCR-virtsan kreatiniini, PNa-plasman natrium, UK-virtsan kalium ja PK-plasman kalium.

3.7. Tilastollinen analyysi

Kaikki tiedot ilmaistiin keskiarvoina ± SD Tilastolliset vertailut suoritettiin Graph Pad In-Stat -ohjelmistolla (versio 7.00, Graph Pad Software, Inc., San Diego, Kalifornia, USA) käyttämällä yksisuuntaista analyysiä varianssi (ANOVA), jota seurasivat Bonferronin useat vertailutestit kahden itsenäisen ryhmän keskiarvojen tilastollisten erojen määrittämiseksi samanaikaisesti.

4. Tulokset

4.1. Vaikutukset nesteen saantiin ja virtsan eritykseen

Kaikkien koeryhmien nesteen saantia ja virtsan eritystä seurattiin neljän viikon välein hoitojakson aikana. Tulokset osoittivat, että hoitojakson alusta (viikko O) PC-ryhmällä oli merkittävästi korkeampi nesteen saanti ja virtsaneritys verrattuna NPC:hen (PC vs NPC) (p<0.05). however,="" the="" administration="" of=""> (oleanolihappo)ruokavalion kanssa ja ilman sitä johti sekä nesteen saannin että virtsanerityksen merkittävään progressiiviseen laskuun 12 viikon aikana verrattuna PC:hen. MET-hoidolla ei ollut merkittävää eroa PC:hen verrattuna nesteen saannissa neljän viikon aikana. Kun taas hoito MET:llä plus DI:llä vähensi nesteen saantia NPC-alueelle. Virtsan erityksessä MET:llä oli lisääntynyt virtsaneritys verrattuna sekä NPC:hen että PC:hen, erityisesti viikoilla 8 ja 12 (katso kuva 1).

Kuva 1. Pylväsdiagrammi näyttää OA:n vaikutukset ruokavalion kanssa ja ilman sekä Metin vaikutukset ruokavalion kanssa ja ilman (n {0}}, ryhmää kohti) nesteen saantiin ja virtsaneritykseen kaikissa koeryhmissä viikosta 0 viikkoon 12.

Arvot esitetään keskiarvon ± SD standardipoikkeamana. ★ {{0}}p < 0.05="" tarkoittaa="" vertailua="" npc:hen;="p">< 0,05="" tarkoittaa="" vertailua="">

4.2. Vaikutukset natriumin (FENa) ja kaliumin (FEK) fraktioon

Plasman ja virtsan elektrolyyttipitoisuudet mitattiin hoitojakson lopussa (viikko 12), samalla kun laskettiin natriumin ja kaliumin fraktionaalinen erittyminen. PC:llä oli merkittävästi alhaisempi FENa verrattuna NPC:hen (p < 0.05).="" oa:n=""> (oleanolihappo)ruokavaliolla ja ilman sitä (OA plus DI ja OA) paransi merkittävästi natriumin erittymistä PC:hen verrattuna (p< 0.05).="" the="" met-formin="" treated="" group="" (met)showed="" overt="" sodium="" retention,="" however,="" when="" metformin="" was="" combined="" with="" dietary="" intervention="" (met+dd,="" there="" was="" a="" significant="" improvement="" in="" sodium="" excretion="" by="" comparison="" with="" pc="" (p=""><>

Mielenkiintoista on, että PC:n FEK oli huomattavasti pienempi kuin NPC. Kuitenkin hallinto OA (oleanolihappo)ruokavalion kanssa ja ilman (OA ja OA plus DI) paransi merkittävästi kaliumin erittymistä. MET:llä ilman ruokavalion interventiota oli selvä kaliumretentio, joka oli verrattavissa PC:hen. Kuitenkin MET yhdistettynä ruokavalioon (MET plus DI) paransi merkittävästi kaliumin erittymistä PC:hen verrattuna.

4.3. Vaikutukset kreatiniinipuhdistumaan (CRC)

CRC laskettiin seerumin kreatiniinista, viikon 12 virtsan kreatiniinista ja tilavuudesta kaikille koeryhmille. Tulokset osoittivat, että PC-ryhmällä oli merkittävästi korkeampi CRC verrattuna NPC:hen. OA:n hallinto (oleanolihappo)ruokavalion kanssa ja ilman (OA ja OA plus DD johtivat merkittävään laskuun CRC:ssä verrattuna PC:hen. MET:llä oli merkittävä kasvu CRC:ssä verrattuna. MET plus DI laski CRC:n NPC-alueelle (p<0.05)(see>

Kuva 2.Pylväsdiagrammi näyttää OA:n vaikutukset ruokavalion kanssa ja ilman ja Metin vaikutukset ruokavalion kanssa ja ilman (n=6, ryhmää kohti) natriumin ja kaliumin prosentuaaliseen erittymiseen kaikissa koeryhmissä.

Arvot esitetään keskiarvon ± SD standardipoikkeamana. ★{{0}}p < 0.05="" tarkoittaa="" vertailua="" npc:hen;="p">< 0,05="" tarkoittaa="" vertailua="">

4.4. Vaikutukset proteinuriaan (albumiini/kreatiniini-suhde)

Proteinuria tutkittiin käyttämällä Alb/Cr-R:ää, joka laskettiin viikon 12 virtsasta saaduilla virtsan albumiinilla ja kreatiniinilla. Tulokset osoittivat, että PC-ryhmällä oli merkittävästi lisääntynyt Alb/Cr-R verrattuna NPC:hen. Kuitenkin OA:n antaminen ruokavalion kanssa ja ilman (OA (oleanolihappo)ja OA plus DD osoittivat merkittävän laskun Alb/Cr-R:ssä verrattuna PC:hen. MET ja MET plus DI vähensivät myös Alb/Cr-R:ää verrattuna PC:hen (p < 0,05)="" (katso="" kuvat="" 3="" ja="">

Kuva 3.Pylväsdiagrammi näyttää OA:n vaikutukset ruokavalion kanssa ja ilman ja Met:n vaikutukset ruokavalion kanssa ja ilman (n {0}}, ryhmää kohti) kaikkien koeryhmien kreatiniinipuhdistumaan (CRC). Arvot esitetään keskiarvon ± SD standardipoikkeamana. ★=p < 0.05="" tarkoittaa="" vertailua="" npc:hen;="p">< 0,05="" tarkoittaa="" vertailua="">

Kuva 4.Pylväsdiagrammi näyttää OA:n vaikutukset ruokavalion kanssa ja ilman ja Metin vaikutukset ruokavalion kanssa ja ilman (n {0}}, ryhmää kohti) albumiinin ja kreatiniinin suhteeseen kaikissa koeryhmissä. Arvot esitetään keskiarvon ± SD standardipoikkeamana. ★=p < 0.05="" tarkoittaa="" vertailua="" npc:hen;="p">< 0,05="" tarkoittaa="" vertailua="">

Kuva 5.Pylväsdiagrammi näyttää OA:n vaikutukset (oleanolihappo)ruokavaliointerventiolla ja ilman ja Met ruokavalion kanssa ja ilman (n=6, ryhmää kohti) plasman aldosteronitasoilla kaikissa koeryhmissä. Arvot esitetään keskiarvon keskihajonnana ± SD.★=s<0.05 denotes="" comparison="" with="" npc;α=""><0.05 denotes="" comparison="" with="">

4.5. Vaikutukset plasman aldosteronitasoon

Plasman aldosteronipitoisuudet mitattiin käyttämällä ELISA-kittiä. Tulokset osoittivat, että PC:llä oli merkittävästi korkeampi plasman aldosteroni verrattuna NPC:hen. Kuitenkin hallinto OA (oleanolihappo)ruokavaliointerventiolla (OA ja OA plus DI) ja ilman sitä johti plasman aldosteronin merkittävään laskuun verrattuna PC:hen. MET:llä oli merkittävä nousu aldosteronipitoisuudessa verrattuna NPC:hen. Kun taas MET plus DI laski aldosteronipitoisuutta NPC-alueelle. (s<0.05) (see="">

4.6. Vaikutukset munuaisten oksidatiiviseen stressiin

Munuaisten oksidatiivinen stressi arvioitiin mittaamalla MDA SOD ja GPxmunuainenkudosta. Tulokset osoittivat, että PC:llä oli merkittävästi korkeampi MDA-pitoisuus verrattuna NPC:hen (s<0.05). furthermore,="" pc="" had="" significantly="" lower="" sod="" and="" gpx="" concentrations="" when="" compared="" to="" npc.="" however,="" the="" administration="" of=""> (oleanolihappo)ruokavaliolla ja ilman sitä johti merkittävästi alentuneisiin MDA-pitoisuuksiin verrattuna PC:hen (s<0,05), while="" the="" levels="" of="" sod="" and="" gpx="" were="" within="" the="" npc="" range="" met="" had="" a="" significant="" increase="" on="" mda="" and="" reduced="" sod="" and="" gpx="" concentrations="" in="" comparison="" to="" npc.="" however,="" met+di="" increased="" the="" sod="" and="" gpx="" to="" the="" npc="" range.="" (p="" <="" 0.05)(see="" table="">

4.7. Vaikutukset virtsan podosiinin ilmentymistasoihin

Virtsan podosiinin määrä määritettiin virtsasta, joka oli saatu viikolta 12. Prediabeettisella kontrollilla oli lisääntynyt virtsan podosiinin ilmentyminen verrattuna standardoituun NPC:hen. Kuitenkin ruokavalion kanssa ja ilman (OA ja OA plus DI) antaminen johti virtsan podosiinin ilmentymisen merkittävään laskuun verrattuna PC:hen. MET ja MET plus DI vähensivät myös virtsan podosiinin ilmentymistä verrattuna PC:hen. (s<0.05)(see fig="">

Pöytä 1:OA:n vaikutukset (oleanolihappo) ja METonmunuainenPrediabeettisen MDA, SOD ja GPx, Arvot esitetään keskihajonnana ± SD.*=p< 0.05="" denotes="" comparison="" with="" npc;α=""><0.05 denotes="" comparison="" with="">

Kuva 6. Pylväsdiagrammi näyttää OA:n vaikutukset ruokavalion kanssa ja ilman ja Met:n vaikutukset ruokavalion kanssa ja ilman (n {0}} ryhmää kohti) virtsan podosiinin ilmentymistasoihin kaikissa koeryhmissä. Arvot esitetään keskiarvon ± SD standardipoikkeamana. ★=p < 0.05="" tarkoittaa="" suhteessa="" npc:hen;="p">< 0,05="" tarkoittaa="" suhteessa="" pc:hen.="" huom.="" pc="" on="" suhteessa="" npc:hen,="" joka="" on="1," ja="" kaikki="" muut="" hoidot="" ovat="" suhteessa="">

4.8 Vaikutukset munuaisvauriomolekyyliin-1(KIM-1)

Plasman KIM{0}}-pitoisuudet mitattiin käyttämällä ELISA-sarjaa. Tulokset osoittivat, että PC:llä oli merkittävästi korkeampi plasman KIM-lin verrattuna NPC:hen. Kuitenkin hallinto OA (oleanolihappo)ruokavaliolla ja ilman sitä (OA ja OA plus DD johtivat plasman KIM-1 merkittävään laskuun verrattuna PC:hen. MET:n KIM-1 lisääntyi merkittävästi NPC:hen verrattuna. Kun taas MET plus DI laski KIM-1 NPC-alueelle. (s< 0.05)(see="">

Kuva 7.Pylväsdiagrammi näyttää OA:n vaikutukset ruokavalion kanssa ja ilman ja Metin vaikutukset ruokavalion kanssa ja ilman (n {0}}, ryhmää kohti) kaikkien koeryhmien plasman KIM-1-arvoon. Arvot esitetään keskiarvon ± SD standardipoikkeamana. ★=p < 0.05="" tarkoittaa="" vertailua="" npc:hen;="p">< 0,05="" tarkoittaa="" vertailua="">

5. Keskustelu

Aiemmat tutkimukset ovat raportoineet, että ruokavalion aiheuttama prediabeettinen tila liittyy lisääntyneeseen riskiin sairastua sydän- ja verisuonisairauksiin ja varhaisen vaiheen CKD:hen. (krooniset munuaissairaudet) [18]. Prediabetessille on ominaista proteinuria, lisääntynyt eGFR sekä elektrolyyttitasapainohäiriö, jotka ovat kaikki kroonisen munuaisten vajaatoiminnan riskitekijöitä (krooniset munuaissairaudet). Perinteisesti,prediabeteshoidetaan yhdistelmällä farmakoterapiaa ja elämäntapamuutoksia, kuten ruokavalion interventio [19I. Elintapamuutokset liittyvät potilaan heikosti hoitomyöntyvyyteen, mikä vaikuttaa lääkehoidon tehokkuuteen [20]. Laboratoriossamme tehdyt tutkimukset ovat osoittaneet, että OA:n antaminen (oleanolihappo)ruokavalion aiheuttamassa esidiabeteksessa palauttaa insuliiniherkkyyden ja vähentää sydän- ja verisuonikomplikaatioiden riskiä.prediabetessekä ruokavalion kanssa että ilman sitä [21]. Kuitenkin tämän kasviperäisen triterpeenin vaikutukset CKD:n kehittymiseen liittyviin riskitekijöihin (krooniset munuaissairaudet)ei ole vielä tutkittu. Siksi tässä tutkimuksessa pyrittiin tutkimaan kasviperäisten tuotteiden vaikutuksiaoleanolihappo(OA) valituista CKD:n riskitekijöistä (krooniset munuaissairaudet)sekä ruokavalion puuttuessa että läsnä ollessa ruokavalion aiheuttamassa prediabeettisessa rottamallissa. Tässä tutkimuksessa tutkittuja valittuja riskitekijöitä ovat mmmunuainenoksidatiivinen stressi, glomerulusten suodatusnopeus (GFR), reniini-angiotensiini-aldosteronijärjestelmän komponentti, albuminuria, munuaisneste ja elektrolyyttikäsittely kaikissa koeryhmissä.

Aiemmat tutkimukset laboratoriossamme ovat raportoineet, että ruokavalion indusoimat prediabeettiset eläimet kehittävät liikalihavuutta, johon liittyy heikentynyt glukoosinsietokyky ja heikentynyt paastoglukoosi insuliiniresistenssin seurauksena. IGT lisää kiertävää glukoosia, mikä lisää plasman osmolaarisuutta[22. Tämä voi lisätä plasman osmoottista painetta ja sen jälkeen janotunnetta, mikä johtaa nesteen nauttimiseen [23). Lisäksi liikalihavuudelle on tunnusomaista myös reniini-angiotensiinijärjestelmän aktivaatio, joka on myös osallisena T2DM:n kehittymisessä. Nykyinen tutkimus paljasti, että prediabeettiset eläimet olivat lisänneet 24 tunnin nesteen saantia ja virtsan määrää. Tämä voi johtua liikalihavuuden ja insuliiniresistenssin seurauksena kohonneista angiotensiini II -tasoista. Mielenkiintoista on, että prediabeettisilla eläimillä oli myös lisääntynyt virtsan eritys, mikä on ristiriidassa RAS-aktivaation tunnetun vaikutuksen kanssa. Hoito OA:lla (oleanolihappo), ruokavalion kanssa ja ilman, nesteen saanti ja virtsaneritys palautuivat asteittain, mikä oli selvempää viikolla 12. Tämä saattaa viitata siihen, että OA (oleanolihappo)voi palauttaa antidiureettisen hormonin säätelyn. Tätä mekanismia ei kuitenkaan vielä ole vahvistettu.

RAS:n aktivaatio vahvistettiin lisäksi plasman kohonneilla aldosteronipitoisuuksilla prediabeettisissa eläimissä. Sen lisäksi, että aldosteroni lisää natriumin reabsorptiota nefroniin, se vähentää myös perifeeristä insuliiniherkkyyttä, mikä johtaa IGT:hen, joka on kroonisen taudin riskitekijä. (krooniset munuaissairaudet)[24]. Mielenkiintoista on, että tässä tutkimuksessa havaittiin, että prediabeettisilla eläimillä oli normaalit plasman natriumpitoisuudet, mutta alentuneet virtsan natriumpitoisuudet. Tämä saattaa viitata siihen, että plasman aldosteronin lisääntyminen vaikutti natriumin takaisinabsorptioon nefronista, mikä johti alhaiseen natriumin virtsaan tai vähentyneeseen natriumin fraktionaaliseen erittymiseen (FENa)[25]. OA (oleanolihappo)hoito sekä ruokavaliointerventioiden läsnä ollessa että ilman sitä johti plasman aldosteronipitoisuuden laskuun ja natriumin erittymisen parantumiseen. Nämä havainnot ovat yhtäpitäviä aiempien tutkimusten kanssa, joissa kerrottiin, että OA (oleanolihappo)alentaa keskimääräistä valtimopainetta deaktivoimalla renniini-angiotensiini-aldosteronijärjestelmän (RAAS) ja vähentämällä natriumin takaisinabsorptiota [26]. RAAS:n normalisoituminen oli ilmeistä plasman aldosteroni- ja virtsan natriumpitoisuuden laskuna [Nat][27. Tämä voi kuitenkin johtua myös sukkinaatin, sitruunahapposyklin tuotteen, joka on kohonnut IGT:n aikana, pelkistymisestä. [28I. Sukkinaatin on raportoitu stimuloivan reniinin vapautumista makula densa -soluista, mikä käynnistää signaloinnin, joka johtaa RAAS:n aktivoitumiseen vuorovaikutuksessa G-proteiinireseptori 91:n (GPR91) metaboliitin kanssa [29]. OA:n antihyperglykeemiset vaikutukset olisivat saattaneet myös johtaa glykolyysin glukoosisubstraatin vähenemiseen, mikä sitten johti vähäiseen pyruvaatin tuotantoon, joka tulee sitruunahappokehään ja tuottaa sukkinaattia [30J. Lisäksi ruokavaliolla on saattanut olla tärkeä rooli glukosurian, sukkinaatin tuotannon ja reniinin erittymisen vähentämisessä hiilihydraattimetaboliittien vähentämisen kautta [31].

Fysiologisissa olosuhteissa plasman aldosteronin lisääntyminen lisää tubulaarista Nat-reabsorptiota Nat/Kf ATPaasikanavien kautta, mikä johtaa K:n erittymiseen [32. Insuliiniresistenssi voi kuitenkin liittyä maksan ketonien tuotantoon, mikä nostaa veren pH:ta ja vetyionin (H) erittymistä natrium-vetyvaihtimen kautta erittymään [33I. Kiinnostavaa kyllä, tässä tutkimuksessa havaittiin, että natriumin takaisinabsorption lisääntyminen liittyi vähäinen kaliumin erittyminen OA:ssa (oleanolihappo)- hoidettuja eläimiä. Tämä voi johtua natrium-vety-antiportin stimulaatiosta ketoasidoosituotannon aiheuttaman veren pH:n nousun seurauksena [6]. Tämä saattaa selittää natriumin takaisinabsorption lisääntymisen ilman voimakasta kaliumin erittymistä [34j. Nämä havainnot yhtyivät aikaisempien tutkimusten havaintoihin, jotka ovat raportoineet, että OA (oleanolihappo)lisää natriumin erittymistä ja siten alentaa systeemistä verenpainetta [6]. Tämän tutkimuksen tulokset viittaavat kuitenkin siihen, että OA edistää natriumin erittymistä natrium-vety-antiport-erityksen kautta pikemminkin kuin natrium-kalium-ATPaasien [6]. Aiemmat tutkimukset ovat myös raportoineet, että ruokavaliot, joissa on enemmän kasviperäisiä proteiineja, parantavat metabolista asidoosia ja hidastavat diabeettisen nefropatian etenemistä [33I. Tämä voi myös viitata siihen, että ruokavalion interventio on saattanut edistää natriumin erittymisen paranemista.

Keskivaikea hyperglykemiaprediabeteson riippumattomasti osallisena mitokondrioiden toimintahäiriöissä ja lisännyt reagoivien happilajien (ROS) tuotantoa, mikä johtaa myöhemmin oksidatiiviseen stressiin [35I. Aiemmat tutkimukset ovat välttäneet, että munuaisten oksidatiivinen stressi liittyy lisääntyneeseenmunuainenvammoja. glomerulusten tyvikalvon eheyden menetys ja proteinuria [36]. Tämä tutkimus osoittikin, että prediabeettisilla eläimillä oli lisääntynyt munuaisten lipidiperoksidaatio, kohonnutmunuainenvauriomolekyyli-1(KIM-1) virtsan podosiini ja lisääntynyt albumiini-kreatiniinisuhde. Tämä voi johtua glukoosin suuresta virtauksestamunuainenperifeerisen insuliiniresistenssin vuoksi, joka voi johtaa ROS:n ja edistyneen glykosylaation lopputuotteiden (AGE:iden) muodostumiseen [371. Hyperglykemia johtaa nikotiiniamidiadeniinidinukleotidifosfaattivety (NADPH) oksidaasientsyymin aktivoitumiseen, mikä katalysoi superoksidin (O2) tuotantoa munuaissoluista [37I. Lisäksi oksidatiivinen stressi ja hyperglykemia liittyvät myös voimakkaasti kehittyneiden glykaation lopputuotteiden (AGE:iden) muodostumiseen glukoosin ei-entsymaattisen reaktion kautta proteiinin, rasvojen tai nukleiinihappojen kanssa [38I. ROS liittyy solu-solu- ja solu-matriksiadheesioliitosten katkeamiseen, mikä johtaa endoteelisolujen irtautumiseen tyvikalvosta, mikä johtaa KIM{8}}:n liikkumiseen vereen [39].

ROS- ja AGE-solut liittyvät glomerulaarisen tyvikalvon podosyyttikerroksen vaurioitumiseen [40]. Tämä voi edelleen vaarantaa yhden nefronin ensisijaisista tehtävistä, joka on estää proteiinien suodattuminen, mikä johtaa proteinuriaan. Kuitenkin hallinto OA (oleanolihappo)ruokavalion kanssa ja ilman sitä johti lipidien peroksidaatioon, KIM-1:n vähenemiseen, virtsan podosiinin vähenemiseen ja albumiini-kreatiniinisuhteen laskuun. Tämä voi johtua munuaisten antioksidanttientsyymien superoksididismutaasin (SOD) ja glutationiperoksidaasin (GPx) merkittävästä parantumisesta, joka havaittiin OA:lla käsitellyissä ryhmissä. SOD neutraloi superoksidin (O2) ja tuottaa vetyperoksidia (HzO2)[41. Vaikka HO2 muuttuu edelleen myrkyttömäksi HO:ksi ja O:ksi, GPx:n vaikutuksesta[42. Nämä tulokset korreloivat Gameden et al., 2019 havaintojen kanssa, jotka raportoivat, että OA (oleanolihappo)parantaa antioksidanttien saatavuutta ruokavalion aiheuttamissa prediabeettisissa eläimissä [21. Tämä voi selittää lisää vähentämistämunuainenvaurioita ja podosyyttivaurioita, jotka havaittiin OA:ta maininneilla eläimillä (oleanolihappo)ruokavaliolla ja ilman. Kerästen tyvikalvon eheyden palauttaminen podosyyttien häviämisen estämisellä voidaan katsoa albumiini-kreatiniini-suhteen vähenemisenä, joka havaitaan OA:ssa (oleanolihappo)- hoidettuja eläimiä.

Munuaisten hyperfiltraatiota (lisääntynyt CRC) on raportoitu myös äskettäin diagnosoiduilla T2DM-potilailla, ja sen on osoitettu edeltävän munuaisten toiminnan heikkenemistä[43]. Heikentynyt glukoosin homeostaasi, johon liittyy hyperinsulinemia, liittyy CRC:n nousuun, jonka tiedetään edeltävän glomerulusvaurioita [44]. Nykyisellä ruokavalion aiheuttamalla prediabeettisella rottamallilla on aiemmin raportoitu olevan sydän- ja verisuonikomplikaatioita, kuten systeeminen korkea verenpaine. Lisäksi nykyisessä tutkimuksessa havaittiin myös, että prediabeettisella ryhmällä oli lisääntynyt CRC. CRC:n lisääntyminen merkitsee glomerulussuodatuksen kohoamista, joka voidaan johtua erilaisista mekanismeista, kuten afferentista glomerulusten vaso-laajenemisesta plasman kohonneen insuliinin ja munuaisten AGE:n seurauksena [45I. Hoito OA:lla (oleanolihappo)johti CRC:n palautumiseen, mikä voi johtua onnistuneesta glykeemisestä hallinnasta, mikä johti plasman insuliinin ja munuaisten AGE:n vähenemiseen. Lisäksi OA:n on aiemmin raportoitu vähentävän hyperinsulinemiaa ja parantavan glukoosin homeostaasia [6]. Vähän natriumia sisältävää ruokavaliota suositellaan usein potilaille, joilla on kohonnut GFR, ja tätä on pidetty yhtenä pidennysmenetelmistä.munuainenselviytyminen [6]. Tässä tutkimuksessa havaittiin myös, että OA (oleanolihappo) ruokavaliolla ja ilman sitä on tehokkaampi vaikutus joihinkin riskitekijöihinmunuainensairauskuten KIM-1 ja GFR verrattuna tavalliseen lääkkeeseen metformiiniin.

Metformiinin käyttöä ei suositella pitkälle edenneille kroonisen taudin vaiheille (krooniset munuaissairaudet)[46. Tämä johtuu metformiiniin liittyvistä vasta-aiheista, kuten maitohappoasidoosista, joka voi johtaa munuaisten vajaatoimintaan[47]. Tässä tutkimuksessa havaitsimme, että metformiinin antamisella ilman ruokavaliointerventiota ei ole suotuisaa vaikutusta tekijöihin, kuten munuaisten nesteen käsittelyyn, eGFR:ään, elektrolyyttikäsittelyyn ja munuaisten oksidatiivisen stressin ruokavalion aiheuttamiin prediabeettisiin eläimiin. Kuitenkin, kun metformiini yhdistettiin ruokavalioon, tehokkuus parani. Tämä on yhtä mieltä aiempien tutkimusten kanssa, jotka viittaavat siihen, että metformiini on riippuvainen elämäntapamuutoksista, kuten ruokavalion ja liikunnan muutoksista.

Parantaa munuaisten toimintaa - kiista

6. Päätelmät ja suositukset

Tämän tutkimuksen tulokset viittaavat siihen, että OA (oleanolihappo)sekä ruokavalion puuttuessa että läsnäollessa parantaa krooniseen munuaisiin liittyviä markkereita (krooniset munuaissairaudet), Tämä näkyi havaitussa muutoksessa parametreihin, kuten veden saantiin, virtsan erittymiseen ja munuaisten elektrolyyttien käsittelyyn. Munuaisten elektrolyyttien ja veden käsittelyn paraneminen selittää edelleen systeemisen verenpaineen laskun, joka havaittiin hoitamattomilla prediabeettisilla rotilla. Lisäksi tämä tutkimus raportoi myös, että OA:n hallinto (oleanolihappo)sisäänprediabetesehkäisee munuaisten oksidatiivista stressiä,munuainenvammat ja sitä seuraava proteinuria. Kaiken kaikkiaan tämän tutkimuksen tulokset viittaavat siihen, että tätä kasviperäistä triterpeeniä voidaan käyttää vaihtoehtoisena hoitona, koska sillä on ihoa suojaavia ominaisuuksia ruokavalion aiheuttamissa ravintoaineissa.prediabetes, Kuitenkin on tehtävä lisää tutkimuksia sen tarkan mekanismin tutkimiseksi, jolla tämä yhdiste vaikuttaa.

7. Opiskelun rajoitukset

GSH ja GSSG, proteiinien hapettumista, antioksidanttikapasiteettia ja antioksidanttigeenien geeniekspressiota voidaan analysoida, jotta voidaan arvioida redox-epätasapainoa, jota ei voitu analysoida budjettirajoitusten vuoksi. Lisäksi tässä tutkimuksessa ei voitu analysoida kaikkia elektrolyyttejä, jotka voivat olla mukana muuttamassa munuaisten toimintaa.

Viitteet

[1] MCThomas, ME.Cooper, P.Zimmet, Changing epidemiology of type 2diabetesmellitus ja siihen liittyvätkrooninenmunuainensairaus, Nat. Rev.Nephrol.12(2)(2016)73-81.

[2] M. May, C. Schindler, Diabeteslääkkeiden kliinisesti ja farmakologisesti merkitykselliset vuorovaikutukset Ther. Adv.Endocrinol. Metab.7 (2) (2016)69-83.

[3] SB Ghaderan, F.Hayatl, S.Shayanpour, S.SB. Mousavi,Diabetesja loppuvaiheen munuaissairaus; katsausartikkeli uusista käsitteistä, J. Ren.Inj.Prev.4(2)(2015)28.

[4] C. Mora-Fernandez, V. Dominguez-PImentel, MM Fuentes, JL. Gomez, A. Martfnez-Caselao. J, EF. Navaho-Gonzalez,DiabetesmunuainensairausFysiologiasta terapiaan, J.Physlol.592 (18) (2014)3997-4012.

[5] L. Rato, M. Alves T. Dlas, G. Lopes, J. Cavaco, S. Socorro, P. Olveilra, Highenergdets voi aiheuttaa esidiabeettista tilaa muuttaen kivesten glykolyyttistä metabolista profiilia ja miesten lisääntymisparametreja, Andrologia 1 (3)(2013)495-504.

[6]L. Mabuza, M. Gamede, S. Maikoo, LBooysen, P. Ngubane, A. Khathi, Effects of a ruthenium Schiff base complex on glucose homeostasis in diet-Induced pre-diabetic rots, Molecules 23 (7) (2018)1721.

[7] ML.B.Duran-Salgado, AF.Rubio-Guera, diabeettinen nefropatia ja tulehdus, Worl J.Diabetes5(3) (2014)393.

[8] N.Rabbanl, PJ Thornalley, Advanced glycation end products in the pathogenesiskrooninenmunuainensairaus. MunuainenInt. 93 (2018) 803-813.

[9] A. Chagnac, B. Zingemman, B. Rozen-Zv, M. Herman-Edelstein, Seuraukset glomerulusten hyperfiltraation: fyysisten voimien rooli patogeneesissäkrooninenmunuainensairaussisäändiabetesja lihavuus, Nephron 143(1)(2019)38-42.

[10] C. Reclo, L. Lazaro, A. Ogulza, L. Lopez-Sanz, S. Bernal, J. Blanco, J. Egldo, C. Gomez-Guerrero, Suppressor of cytokine signaling1 peptidomimetic rajoittaa diabeettisen nefropatian etenemistä, J. Olen. Joten Nephrol.28(2)(2017) 575-585.