Cassia Spectabilis DC:n etanolisen lehtiuutteen toksikologinen arviointi ja suojaavat vaikutukset Plasmodium Berghei -tartunnan saaneiden hiirten maksan ja munuaisten toimintaan
Oct 30, 2023
1. Esittely
Tähän päivään asti ongelmaPlasmodiumloisresistenssi olemassa olevia malarialääkkeitä kohtaan on edelleen suuri ongelma malarian hävittämisessä [1–3]. Siksi tutkimusta uusien malarialääkkeiden lähteiden löytämiseksi, joista yksi on peräisin lääkekasveista, tehdään edelleen [4].In vivojain vitromalariatesteissä on käytetty pitkään malaria. 1900-luvun jälkipuoliskollaPlasmodium bergheitaiPlasmodium yoeliikäytettiin jyrsijöiden tartuttamiseen. Sillä välin,P. bergheisiitä tuli yleisimmin käytetty laji maksavaiheen tutkimukseen, erityisesti hypnotsoiitin muodostumiseen malarian uusiutumisen tutkimiseksi [5–7].
NAPSAUTA TÄSTÄ SAADAksesi yrttiseoksen Cistanchelle munuaisille
Yksi Indonesian perinteisistä kasveista, Caesalpiniaceae-suvun Cassia spectabilis DC, on osoitettu kokeellisesti in vitro P. falciparumia vastaan ja malarian hoidossa in vivo P. bergheitä vastaan [8, 9], mikä osoittaa, että C. spectabilis DC -kasvi on hyvin potentiaalia kehittää edelleen malarialääkkeiden ehdokkaaksi. Aiemmissa töissä on raportoitu, että in vivo -testi C. spectabilis DC -lehtien 90-prosenttisella etanoliuutteella P. berghei ANKA:ta vastaan BALB/c-hiirillä osoitti, että ED50-arvo oli 131,5 mg/kg BW [9], ja se luokitellaan erittäin hyvin. hyvä antimalariavaikutus [10].
Lisäksi C. spectabilis DC:n uutteiden, fraktioiden, alafraktioiden ja eristettyjen yhdisteiden malariavastaiset vaikutukset on testattu in vitro. *Tämän kasvin aktiivinen yhdiste on onnistuneesti tunnistettu yhdisteeksi, joka on identtinen (–){0}}hydroksikassiinin kanssa, ja sen malariavastaisen aktiivisuuden in vitro -testi osoitti erittäin alhaisen IC50:n, 0,016 ug/ml [ 11], joka on luokiteltu erittäin vahvaksi malariavastaiseksi vaikutukseksi [12].
Tämän kasvin tutkimusta malarialääkeresistenssin voittamiseksi on jatkettu tutkimalla C. spectabilis DC -lehtiuutteen parantamisen turvallisuutta ja vaikutuksia maksan ja munuaisten toimintaan P. berghei ANKA -tartunnan saaneilla hiirillä. Tutkimuksia malariaa ehkäisevien lääkekasvien vaikutuksesta loisten saastuttamien hiirten maksan ja munuaisten toimintaan on tehty laajasti [13–16], samoin kuin akuutin ja subakuutin toksisuustestejä [17–20]. Maksalla on tärkeä rooli fysiologisten prosessien säätelyssä. on elin, joka osallistuu useisiin elintärkeisiin toimintoihin, kuten aineenvaihduntaan, eritykseen ja varastointiin. Lisäksi maksalla on tärkeä rooli endogeenisten ja eksogeenisten yhdisteiden detoksifikaatiossa ja erittymisessä [21–24].
Malariatartunta alkaa, kun sporotsoiitit saavat tartunnan malarialoisen tartuttaman naaraspuolisen Anopheles-hyttysen puremasta. Verenruokinnan aikana tartunnan saanut naaras Anopheles ruiskuttaa loisen sporotsoiittivaiheen [25, 26]. Noin tunnin matkustamisen jälkeen ihmiskehossa sporotsoiitit tulevat sitten maksaan, hyökkäävät hepatosyyttejä vastaan ja aloittavat eksoerytrosyyttisen skitsogonian aseksuaalisen syklin. Maksasolujen sisällä loiset lisääntyvät aseksuaalisesti, kunnes ne saavuttavat kypsän skizontin, ja lopuksi suuri määrä merotsoiitteja tuottaa ja saapuu verenkiertoon infektoituneen maksasolupurkauksen jälkeen. *tartunnan saaneet hepatosyytit, jotka aiheuttavat maksavaurioita infektoituneiden maksasolujen ja merotsoiittien repeämisen vuoksi, pääsevät verenkiertoon ja aloittavat punasolujen erytrosyyttisyklin [27, 28]. Maksasoluissa tapahtuvat vauriot voivat lisätä maksan toimintaan vaikuttavien entsyymien, erityisesti transaminaasientsyymien, määrää ja morfologisia muutoksia maksan ulkonäössä [29, 30], kuten hepatomegaliaa. Hepatosplenomegalia on yleinen ominaisuus malariatartunnalla ihmisillä [31] ja hiirillä [32], jonka aiheuttaa krooninen altistuminen malarialoisille. Ei kuitenkaan munuaisten laajentumista malariainfektiossa.
Maksan toimintahäiriö voidaan havaita plasmassa vapautuvan plasman glutamiinioksaloetikkatransaminaasin (SGOT) ja plasman glutamiinipyruviinitransaminaasin (SGPT) maksasolutransaminaatiolla tai kudoksen histologisella tutkimuksella [33]. Yleisin vaurio on apoptoottisen solukuoleman aktivaatio tai hepatosyyttinekroosi [34–36]. Kliinisesti merkittävä munuaisten osallistuminen liittyy P. falciparumin ja P. malariaen aiheuttamaan infektioon. *P. falciparum -infektio tuottaa akuutteja ilmenemismuotoja, jotka vaihtelevat oireettomista virtsaamishäiriöihin ja lieviin elektrolyyttihäiriöihin akuutin munuaisten vajaatoiminnan (ARF) tai akuutin munuaisvaurion (AKI) yhteydessä, jotka vaativat dialyysihoitoa [27, 37]. *AKI-tapausten malarian komplikaatiossa tiedetään lisäävän korkeaa kuolleisuutta, joka on noin 75 % tapauksista. *Histologinen tutkimus ehdottaa glomerulonefriittia, akuuttia tubulusnekroosia ja interstitiaalista nefriittiä tärkeimpänä hemodynaamisena tekijänä malariaan liittyvässä AKI:ssa [38]. Yleensä munuaisten vajaatoiminnan aste voidaan havaita riittävällä määrällä proteiinia virtsassa ja plasman urea-, kreatiniini- ja plasman elektrolyyttitasojen noususta [39].
*C. spectabilis DC (EECS) -lehtien 90-prosenttisen etanoliuutteen toksisuus BALB/c-hiirillä, jota seuraavat entsyymitutkimukset, voi vaikuttaa histopatologiaan sekä maksan ja munuaisten toimintaan EECS-annon jälkeen.
2. Materiaalit ja metodit
2.1. Kasvimateriaali ja EECS:n valmistus. *e C. spectabilis
DC-lehdet ostettiin ja määritettiin LIPI:stä (Indonesia Research Centre), Botanical Garden, Purwodadi, Itä-Jaava, Indonesia (B-160/IPH.06/KS.02/III/2019). *Näyte talletettiin herbaarioksi Universitas Airlanggan farmasian tiedekunnan farmakognosian ja fytokemian laitokselle. *Lehdet huuhdeltiin perusteellisesti vesijohtovedellä vieraiden epäpuhtauksien poistamiseksi, kuivattiin 45 asteessa ja jauhettiin jauheeksi myllyllä. *Uutto suoritettiin maseroimalla jauhemaista kasvimateriaalia (500 g) pullossa, joka sisälsi 2500 ml 90 % etanolia (25–30 astetta) 3 × 24 tunnin ajan. *Uuttoliuotin erotettiin, suodatettiin suodatinpaperin läpi ja haihdutettiin alennetussa paineessa pyöröhaihdutuksella. *Etanoliuutteen saanto 1000 g:n kuivapainosta C. spectabilis DC -lehtijauhetta oli 10,20 % (w/w) ja sitä käytettiin tässä kokeessa.
2.2. Eläimet.
Tutkimuksessa käytettiin 6–8 viikon ikäisiä BALB/c-uroshiiriä, paino 25–30 g. Kaikki hiiret saatiin Farma Veterinary Centeristä, karjan ja eläinten terveyden pääosaston maatalousministeriöstä, Surabayasta, Itä-Jaavasta, Indonesiasta. *Eläimet pidettiin normaaleissa olosuhteissa ja niitä ruokittiin kantarehulla ja vedellä ad libitum. *Tutkimusprotokollan hyväksyntä saatiin Eläintutkimuksen eettiseltä komitealta, Universitas Air langga, Indonesia, numero 2.KE.181.10.2018.
2.3. Välitön myrkyllisyystesti.
EECS punnittiin ja suspendoitiin uudelleen 0,5 % natriumkarboksimetyyliselluloosaan (Na CMC) haluttujen annosten saamiseksi. BALB/c-hiiriä pidettiin paastossa 24 tuntia ennen kuin niille ruokittiin uutteella. *Eläimet jaettiin kolmeen ryhmään, joista jokainen sisälsi viisi hiirtä. *e annokset kullekin ryhmälle olivat 1250; 2 500; ja 5,000 mg/kg BW, vastaavasti. Kunkin hiiren yleistä käyttäytymistä tarkkailtiin jatkuvasti tunnin ajan kunkin annoksen jälkeen, ajoittain neljän tunnin välein ja sen jälkeen 24 tunnin ajan [40–42].
2.4. Subakuutti toksisuustesti.
Subakuutti toksisuustestissä hiiret ryhmiteltiin kolmeen ryhmään ja kutakin ryhmää käsiteltiin EECS:llä kerralla, viisi kertaa ja kymmenen kertaa 150 mg/kg BW päivittäisellä oraalisella annoksella 28 päivän ajan; normaalille kontrolliryhmälle annettiin vain ruokaa ja juomaa ad libitum [43]. * Eläimiä tarkkailtiin 28 päivän ajan myrkyllisyyden merkkien varalta. Tarkkailujakson lopussa kaikki eläimet tapettiin eetteripuudutuksessa ja elintärkeät elimet, kuten maksat ja munuaiset, poistettiin kaikista eläimistä karkeita ja histopatologisia tutkimuksia varten.
2.5. Jyrsijän loinen.
Plasmodium berghei ANKA:n klorokiiniherkkyys saatiin Institute of Biomolecular Eijkmanista, Jakarta, Indonesia, ja sitä ylläpidettiin tässä tutkimuksessa käytetyllä sarjasiirrolla.
2.6. EECS:n vaikutus SGOT:n ja SGPT:n plasmatasoon.
*is-koe oli Petersiin [44] perustuva vaimentava testi. *on suppressiivinen testi tehtiin ennen EECS:n arviointia plasman SGOT- ja SGPT-tasoilla. *e eläintä infektoitiin P. berghei ANKA:lla ja jaettiin viiteen ryhmään A, B, C, D ja E. *e eläimet hoidettiin pian tartunnan jälkeen päivänä 0 (D0) ja jatkui päivittäin kolmen päivän ajan (D1-D3). Ryhmä A negatiivisena kontrollina sai 0,5 % Na CMC:tä suun kautta. Ryhmille B ja C hoidetuille ryhmille annettiin EECS:ää yhtenä oraalisena annoksena 150 ja 200 mg/kg BW, vastaavasti. Ryhmä D oli positiivinen kontrolli, jolle annettiin klorokiinia kerta-annoksena 100 mg/kg BW. Lisäksi ryhmä E terveenä kontrollina ei ollut infektoitunut loisilla, ja sille annettiin vain ruokaa ja juomaa ad libitum. Neljäntenä päivänä (D4) valmistettiin kunkin hiiren verinäytteet ja niitä tutkittiin mikroskooppisesti. Lisäksi plasma kerättiin ennen SGOT- ja SGPT-tasojen mittaamista.
2.7. EECS:n vaikutus maksan ja munuaisten histopatologiaan.
Tarkkailujakson lopussa kaikki eläimet tapettiin eetteripuudutuksessa ennen maksan ja munuaisten poistamista. Kun elimet oli punnittu, kudokset kiinnitettiin sitten 10-prosenttiseen formaldehydiliuokseen ja prosessoitiin edelleen hematoksyliini-eosiini (H&E) -värjäystä varten. *Histopatologinen havainto suoritettiin EECS:n toksikologisen vaikutuksen selvittämiseksi kudosten degeneratiivisiin ja nekroottisiin soluihin. * Vahingot luokiteltiin Gibson-Corley et al. [45].
2.8. Tilastollinen analyysi.
*e tiedot esitettiin keskiarvona ± standardipoikkeama (SD). Yksisuuntaista varianssianalyysiä (ANOVA) käytettiin normaalisti jakautuneiden tietojen vertaamiseen hoitojen kesken, mitä seurasi post hoc moninkertainen vertailutesti, kun saatiin erilainen merkitsevyys. Kun tiedot eivät jakautuneet normaalisti, hoitojen välisiä eroja arvioitiin Kruskal-Wallis- ja Mann-Whitney U-testillä.
Wecistanchen tukipalvelu - Kiinan suurin vesisäiliön viejä:
Sähköposti:wallence.suen@wecistanche.com
Whatsapp/Puhelin:+86 15292862950
Osta lisätietoja teknisistä tiedoista:
https://www.xjcistanche.com/cistanche-shop
