Lanostaanitriterpenoidit Poria Cocosissa ovat hyödyllisiä immuunisäätelytoiminnassa

Ota yhteyttäoscar.xiao@wecistanche.comLisätietoja

Abstrakti:Poria cocos (Schwein) FA Wolf (syn. Wolfiporia cocos) kuivattu sklerotium, jota kutsutaan laskostukseksi, on syötävä, saprofyyttinen sieni, jota käytetään yleisesti tonic- ja ikääntymistä ehkäisevänä perinteisenä kiinalaisena lääketieteenä. Sitä käytetään perinteisesti yhdessä muiden perinteisten kiinalaisten lääkkeiden kanssa immuniteetin parantamiseksi. Tämä tutkimus osoitti, että lanostaanitriterpenoideja sisältävällä P. cocos -uutteella (Lipucan⑨) ei ole immunotoksisuutta ja se tehostaa epäspesifistä (synnynnäistä) immuniteettia aktivoimalla luonnollisia tappajasoluja ja edistämällä interferonin (IFN-y) eritystä tyypin 1 T-auttajasolujen (Th1) avulla. immuunivaste. Lisäksi P. cocos -uute vähensi merkittävästi interleukiinin (IL-4 ja IL-5) eritystä tyypin 2 T-auttajasolujen (Th2) immuunivasteella, joka liittyy allergiavasteeseen. Puhdistetut lanostaanitriterpenoidit tunnistettiin ensin P. cocosin vaikuttaviksi aineosiksi, joilla on parantunut epäspesifinen immuniteetti edistämällä interferonin (IFN-) eritystä alustavassa tutkimuksessa. Tuloksemme tukevat sitä, että P. cocos -uutteella on hyödyllinen rooli immunosäätelytoiminnassa.

Avainsanat:Poria-kookos; lanostaanitriterpenoidit; immunotoksisuus; Th1/Th2: immunosäätely

1. Esittely

Virusinfektiot, kuten hengitystievirukset (mukaan lukien influenssavirus, rinovirus, adenovirus ja koronavirus), herpes ja ihmisen immuunikatovirus (HIV), uhkaavat vakavasti ihmisten terveyttä. Nämä erittäin tarttuvat hengitystievirukset tartuttavat maailman väestöä, tulevat pandemioksi ja aiheuttavat paljon kuolemia. Tämä uhka on kehittynyt henkilökohtaiseksi terveyskysymykseksi ja myös kansainvälisiksi taloudellisiksi, turvallisuus- ja sosiaalisiksi kysymyksiksi [1]. Rokotus on tällä hetkellä ensisijainen keino hillitä influenssavirusinfektioiden leviämistä. Viruksen pahamaineisen mutatoitumiskyvyn vuoksi uusia rokotteita on kuitenkin kehitettävä joka vuosi. On kiireellisesti kehitettävä tehokkaita viruslääkkeitä tai terapeuttisia lähestymistapoja. Valitettavasti uusien lääkkeiden kehittämiseen tarvitaan useita vuosia ja satoja miljoonia dollareita, usein liian myöhäistä äkillisen virusepidemian torjumiseksi. Viimeaikaiset raportit osoittavat, että yli 50-vuotiaat ihmiset ovat pääosin hengitystievirustartunnan saaneita [2,3]. Ikääntyminen on yksi syy, joka liittyy läheisesti immuunijärjestelmän puutteisiin, mukaan lukien solujen toiminta ja lukumäärä [4-6]. Itsehoito on tärkeä lähestymistapa, jota käytetään useimmissa maissa henkilökohtaisten sairaanhoitokulujen ja sosiaalisen terveydenhuollon taakan vähentämiseksi |7,8]. Immuniteetin vahvistajien kehittäminen isännän vastustuskyvyn lisäämiseksi virusinfektioita vastaan ​​ja isännän sopeutumiskyvyn parantamiseksi on tärkeä lähestymistapa, joka on saanut viime aikoina paljon huomiota [9,10].

Ihmiskehon ensimmäinen puolustuslinja taudinaiheuttajia vastaan ​​sisältää fysiologiset esteet, kuten iho, ihonalainen kudos ja limakalvo. Toinen puolustuslinja on immuunijärjestelmä, joka koostuu immuunielimistä, immuunisoluista ja immuunimolekyyleistä. Immuunijärjestelmä on jaettu synnynnäiseen immuniteettiin ja adaptiiviseen immuniteettiin [11]. Synnynnäinen immuunijärjestelmä on epäspesifinen immuunijärjestelmä. Se voi erottaa itsensä ja ei-itsensä ilman toistuvaa altistumista taudinaiheuttajille, kuten bakteereille ja viruksille. Epäspesifisten ominaisuuksiensa vuoksi sillä on laaja kyky taistella useita infektioita vastaan ​​[12]. Luonnolliset tappajasolut (NK) ja interferoni (IFN) ovat synnynnäisen immuunijärjestelmän tärkeimpiä antiviraalisia komponentteja isäntäpuolustuksessa hengitystieinfektioita vastaan ​​[13]. NK-soluilla on kyky tappaa nopeasti virusten infektoimia soluja. Lisäksi NK-solut laukaisevat myös muut immuunisolut, tyypin 1 T-auttajasolut (Th1) vapauttamalla IFN-【14,15】. Interferoneilla on kyky häiritä viruksen replikaatiota ja ne voidaan jakaa kolmeen tyyppiin, mukaan lukien interferonit I (IFN-, IFN-). , II （IFN-y） ja ⅢI （IFN-λ）【16,17】. Viruksen replikaatio on tärkeä viruksen elämän perusvaihe. Soluilla on olennainen rooli puolustautumisessa virusinfektiota vastaan ​​[18]. Tyypin 2 T-auttajasolut (Th2) erittävät pääasiassa interleukiineja (IL:itä), mukaan lukien IL-4 ja IL-5, ja edistävät B-solujen erittymistä immunoglobuliini E(IgE)-vasta-aineita edistäen humoraalista immuniteettia ja aiheuttaa allergiareaktion [19].

Napsauta tätä saadaksesi lisätietoja

Viilausta (Poria cocos(Schwein.)FAWolf(syn. Wolfiporia cocos)) kuivattu sklerotium, tunnettu tonic ja ikääntymistä ehkäisevä perinteinen kiinalainen lääketiede, on käytetty laajasti rauhoittavana ja diureettisena aineena yli kahden tuhannen vuoden ajan [ 20]. P. cocosilla on osoitettu olevan anti-inflammatorisia, kasvainten vastaisia, hyperglykeemisiä, rauhoittavia ja ikääntymistä estäviä toimintoja, ja lanostaanitriterpenoidit on tunnistettu aktiivisiksi komponenteiksi [21-30]. Lisäksi P. cocosin etyyliasetaattifraktion ja raa'an polysakkaridifraktion on osoitettu parantavan immuniteettia eläinmalleissa, jotka perustuvat seerumin hemolyysipitoisuustestiin, mononukleaaristen makrofagien fagosyyttiseen vaikutukseen ja lymfosyyttien transformaatiotasoon. Lanostaanitriterpenoideja pidettiin etyyliasetaattifraktion pääkomponentteina HPLC-analyysin mukaan [31]. On kuitenkin edelleen epäselvää, onko synnynnäisellä ja adaptiivisella immuniteetilla vaikutuksia NK-solujen aktiivisuuteen, IFN:ään, immuunisoluihin tai P.cocosin sytokiineihin ja aktiivisten yhdisteiden selkiytymiseen. Tässä tutkimuksessa tutkittiin P. cocos -uutteiden, patentoidun lanostaanitriterpenoideja sisältävän konsistenssituotteen, immuunijärjestelmän vaikutusta eläinmalleilla. Aktiiviset komponentit tunnistettiin ensin.

Cistanche voi estää ikääntymistä

2. Materiaalit ja metodit

2.1. Kasvimateriaalit

P. cocos(Schwein.)FAWolfin kuivattu selerotium uutettiin käyttämällä 75-prosenttista etanolia P. cocos -uutteen (Lipucan) saamiseksi. Tämän uutteen valmistaa Sinphar Tian-Li Pharmaceutical Co., Ltd., Hangzhou Sinphar Group, Kiina, ja sen on kehittänyt Sinphar R&D Center, Taiwan. Uute sisältää neljä pääasiallista lanostaanitriterpenoidia (kuva 1, yhdisteet 1-4), jotka on analysoitu ultra-performance-nestekromatografialla (UPLC) [32]. Neljän suurimman lanostaanitriterpenoidin pitoisuus oli 6,2 prosenttia. Kaupallista kapselia (FL), joka sisältää 27.0 mg P. cocos -uutetta, käytettiin immunosäätelyaktiivisuuden vaikutuksen tutkimiseen.

2.2 Lanostaanitriterpenoidien eristäminen ja puhdistaminen P. cocosista

Kuivattu P.cocos (10 kg) uutettiin kolme kertaa refluksoimalla 75-prosenttisella etanolilla 3 tunnin ajan [24]. Väkevöity uute kromatografoitiin silikageelillä (70-230 mesh) käyttämällä yhä polaarisempia CH2Cl:n ja MeOH:n seoksia (CH2Cl:MeOH, 97:3; CH2Cl2:MeOH, 96:4; CH2Cl:MeOH, 90:10, ja 100 % MeOH). Ohutkerroskromatografian (TLC) mukaan kerättiin neljä fraktiota (Fr.1-Fr.4) lisäerotusta varten. Fr.{20}}Fr.3:lle suoritettiin preparatiivinen korkean erotuskyvyn nestekromatografia (HPLC) (Waters Prep 150 LCsystem, Milford, MA, USA) Waters XBridge RP-18-kolonnissa (250 mm×). 19 mm, 5 um, Milford, MA, USA) käyttäen 80-prosenttista metanolia liikkuvana faasijärjestelmänä. Virtausnopeus oli 18 ml/min. Neljä suurta kiinnostavaa huippua kerättiin valikoivasti. Kohdeyhdisteitä sisältävät fraktiot tiivistettiin edelleen kuiviin, ja niistä muodostui tumulosiinihappoa (1) (120,1 mg), polyfonihappoa C (2) (16,0 mg), 3-epi-dehydrotumulosihappoa (3) (12,1 mg) ja dehydrotumulosihappo(4) (6,8 mg). Niiden rakenteet selvitettiin NMR (ydinmagneettiresonanssi) -spektroskopia-analyysillä ja sähkösumutusionisaatiomassaspektrometrillä (ESI-MS) ja vertaamalla kirjallisuuden tietoihin [32].

2.3. Alustava eläintutkimus lanostanetriterpenoidiyhdisteillä (1-3) IFN-r-analyysitutkimukselle

Tätä tutkimusta varten valmistettiin puhdistetut lanostaanitriterpenoidiyhdisteet, mukaan lukien tumulosiinihappo (1), polyfonihappo C(2) ja 3-epidehydrotumulosihappo (3), esitutkimusta varten käyttämällä BALB/c:tä (hiirikantaa) albiinohiiristä) uroshiiret. Yhdisteiden 1-3 ja steriilin tislatun veden (kontrolliryhmä) (1 ml/hiiri) (1 ml/hiiri) oraalisen antamisen jälkeen 4 päivää hiiret tapettiin viidentenä päivänä ja pernasolut kerättiin. Tuore perna siirrettiin viljelylevylle, joka sisälsi 10 ml Roswell Park Memorial Institute (RPMI){8}} -viljelyalustaa. Sitten perna jauhettiin hienon verkon päällä pernasolujen vapauttamiseksi. Elatusaineeseen suspendoidut pernasolut siirrettiin sitten 50 ml:n kartiomaiseen sentrifugiputkeen ja sentrifugoitiin nopeudella 1300 rpm 10 minuuttia. Supernatantti heitettiin pois ja pelletti suspendoitiin uudelleen 1 ml:aan kylmää punasolua (RBC) hajottavaa puskuria, joka sisälsi EDTA-NH4CI:a. Soluja inkuboitiin huoneenlämpötilassa 10 minuuttia ja pestiin sitten kolme kertaa viljelyväliaineella sentrifugoimalla. Pernasolususpensiota viljeltiin sitten 24-kuoppalevyllä tiheydellä 1 × 10 astetta soluja/ml elatusaineessa, joka sisälsi RPMl 1640:tä täydennettynä 10 prosentilla naudan sikiön seerumilla (FBS), 2 mM L-glutamiinilla, antibiootteja ja 1 ug/ml concanavalin A:ta (ConA) 37 asteessa 3 päivän ajan. Viljelmän pernasolujen supernatantit kerättiin. IFN-pitoisuudet mitattiin käyttämällä Enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA) -kittiä (R&D Systems, Minneapolis, MN, USA).

2.4. Eläinmalli ja koeaikataulu

Naaraspuoliset BALB/c-hiiret ostettiin National Taiwan University Animal Centeristä. Eläimiä on pidetty yksilöllisesti tuuletetuissa häkeissä 22 ± 2 asteen lämpötilassa, lämpötila ja kosteus 40-60 prosenttia, 12 h/12 ​​h valo/pimeä -jakso ja vapaa pääsy ravintoon ja veteen. Yhden viikon totuttelun jälkeen hiiret ryhmiteltiin satunnaisesti ruumiinpainon mukaan ja niitä käytettiin kokeisiin. Neljä erilaista annosta, 26 mg/kg (FL200), 52 mg/kg (FL400), 104 mg/kg (FL800), 156 mg/kg (FL1200), liuotettiin vastaavasti steriiliin tislaukseen. vettä (0,4 ml) ja annettuna suun kautta viitenä peräkkäisenä päivänä viikossa 9 viikon ajan. Kontrolliryhmälle syötettiin steriiliä tislattua vettä (0,4 ml). Hiirille injektoitiin ovalbumiinille (OVA) spesifistä antigeeniä intraperitoneaalisesti kolmannella, viidennellä ja seitsemännellä viikolla. OVA on kananmunanvalkuaistaergeeni, jota esiintyy pääasiassa munanvalkuaisissa. Sitä käytetään yleensä allergioiden aiheuttamiseen kokeellisissa eläinmalleissa. Pernasolut kerättiin lisätutkimuksia varten. Hiiret lopetettiin käyttämällä hiilidioksidieutanasiaa 9 viikon kokeen jälkeen. Eläinten hoito- ja käyttölaitoskomitean (IACUC) hyväksyntänumero tälle tutkimukselle on A9647.

2.5. Kokoelma pernanäytteitä

Perna, tummanpunainen pitkänomainen elin hiiren vatsan vasemmassa yläkulmassa, kerättiin. Kun sidekudos oli poistettu varovasti pienillä saksilla ja pihdeillä, pernat asetettiin soluviljelyalustaan ​​(RPMI 1640 -elatusaine, jossa oli 10 prosenttia naudan sikiön seerumia (HyClone)). Punnituksen jälkeen pernanäytteet jauhettiin puhtaalla ja steriilillä 5 ml:n ruiskun työntimellä. Pernasolususpensio imettiin uuteen 15 ml:n sentrifugiputkeen 3 ml:n steriilillä yksipakkaisella muovipisaralla. Suspendoidut solut kerättiin 5 minuutin saostuksen jälkeen. Suspendoituja soluja sentrifugoitiin nopeudella 1500 rpm 7 minuuttia ja supernatantti heitettiin pois solulavatten saamiseksi. Sitten lisättiin 1 ml punasolujen hajoamispuskuria punasolujen poistamiseksi 1 minuutin ajaksi. Yhdeksän ml 10-prosenttista naudan sikiön seerumia lisättiin nopeasti viljelyalustaan, sentrifugointivaihe toistettiin ja supernatantti heitettiin pois. RBClysis-puskurin aiheuttaman pernan solujen eheyden vaurioitumisen välttämiseksi näyte pestiin kolme kertaa Hank's Balanced Salt Solution (HBSS) -puskuriliuoksella. Sitten pernasolut suspendoitiin 10-prosenttiseen naudan sikiön seerumiviljelyalustaan ​​analyysiä ja kokeita varten.

2.6. Epäspesifinen immuunivaste

2.6.1. Pernasolun pinnan merkkiaineanalyysi

Immuunisoluanalyysi suoritettiin käyttämällä fluoresoivia monoklonaalisia vasta-aineita, jotka sitoutuvat spesifisesti erilaisiin immuunisoluihin käyttämällä fluoresoivaa virtaussytometriä. Virtaussytometriaa (Epics XL-MCL Beckman Coulter, Brea, CA, USA) käytetään tietyn immuunisolun osuuden laskemiseen, kuten tärkeimmät histokompatibiliteettikompleksit tyyppi I (MHC I), CD4 plus T-solu, CD8 plus T-solu, NK-solut ja makrofagit.

2.6.2. Luonnollisten tappajasolujen aktiivisuusanalyysi

YAC-1 (solulinja, joka on herkkä NK-solujen aktiivisuuden vaikutukselle) hiiren lymfoomasolulinjaa (ATCC) käytettiin NK-solujen kohteena tässä kokeessa. Kun BALB/c-naarashiiren pernasoluja viljeltiin yhdessä YAC-1-solujen kanssa samassa maljassa, luonnolliset tappajasolut tappavat YAC-1-soluja. Kolmen tunnin sytotoksisuusreaktion jälkeen tapetut YAC-1-solut värjättiin väriaineella (LIVE/DEAD Cell-Mediated Cytotoxicity Kit, Molecular Probes, L-7010). Siksi virtaussytometriaa käytettiin fluoresenssin intensiteetin havaitsemiseen ja analysoimiseen käyttämällä WinMDI 2.8 -ohjelmistoa (Purdue University Cytometry Laboratories, West Lafayette, IN, USA). Effektorisolun (E) suhde kohdesoluun (T) on 100:1 ja 200:1 (Efektorisolu on pernasoluja ja kohdesolu YAC-1-soluja).

2.6.3. Sytokiinien eritys pernasoluanalyysin avulla

Kun pernasoluja oli stimuloitu ConA:lla (konsentraatio 2,5 ug/ml) 48 tunnin ajan, soluviljelmän supernatantti kerättiin ja säilytettiin -20 asteessa sytokiinianalyysiä varten käyttämällä OptEIA hiiren IL-5 ELISA-sarjaa ( Pharmigen, 555236, Franklin Lake, NJ, USA) ja DouSet-hiiri IFN-ELISA -sarja (R&D Systems, DY485, Minneapolis, MN, USA). Päällystyspuskuri (pH: 9,6) valmistettiin sisältämään sopiva määrä hiiren sytokiinivasta-aineita (L-5 ja IFN-y) 96-kuoppalevyllä (Nunc-Immuno plate, MaxiSorp, Thermo). Scientific, Roskilde, Tanska). Seisottuaan 4 °C:ssa yön yli, sitoutumattomat vasta-aineet huuhdeltiin fosfaattipuskuroidulla suolaliuoksella, jossa oli Tween20 (PBST) -puskuria, ja sitten lisättiin 200 µl/kuoppa estopuskuria (1 % BSA PBS:ssä). 2 tunnin kuluttua huoneenlämmössä näyte huuhdeltiin PBST-puskurilla ja näytteeseen lisättiin 100 µl/kuoppa soluviljelmän supernatanttia tai rekombinanttisytokiinistandardia. 4 asteen yön yli olon jälkeen näyte huuhdeltiin PBST-puskurilla. Sitten lisättiin sopiva konsentraatio kytkettyä biotiinia (biotiini) anti-sytokiinivasta-ainetta (100 ul/kuoppa). 2 tunnin kuluttua huoneenlämpötilassa näyte huuhdeltiin PBST-puskurilla. Sitten lisättiin avidiiniperoksidaasi (100 µl/kuoppa) (Sigma, St. Louis, MO, USA). 1 tunnin huoneenlämpötilassa olon jälkeen lisättiin tetrametyylibentsidiini (TMB) (R&D Systems, Minneapolis, MN, USA) substraattia 5 minuutin värireaktion ajaksi, ja sitten lisättiin 50 µl 2,5-prosenttista H2SO4:a värireaktion pysäyttämiseksi. Absorbanssi mitattiin 450 nm:ssä.

2.7. Spesifinen immuunivaste ovalbumiinilla (OVA) indusoiduilla hiirillä

BALB/c-naarashiiriin injektoitiin intraperitoneaalisesti OVA:ta antigeeninä ja CFA:ta (Complete Freund's Adjuvant) adjuvanttina. Pernasoluviljelyolosuhteet olivat samat kuin edellä. Sytokiinit (L-4) analysoitiin ELISA:lla.

2.8. Tilastolliset analyysit

Tiedot ilmoitettiin keskiarvoina (SD) ja analysoitiin käyttämällä yksisuuntaista ANOVAa. Arvoja pidettiin tilastollisesti merkittävinä p<0.05. dunnett's="" test="" was="" used="" to="" identify="" the="" differences="" between="">

3. Tulokset

3.1. Neljän P.cocosin lanostaanitriterpenoidiyhdisteen 1-4 eristäminen ja tunnistaminen

Kuivattu P.Anti-aging -vesisäiliöcocos (10 kg) uutettiin kolmesti refluksoimalla 75-prosenttisella etanolilla 3 tuntia. Konsentroitu uute kromatografoitiin silikageelillä ja C18-kolonnilla, jolloin saatiin neljä pääasiallista lanostaanitriterpenoidiyhdistettä: tumulosiinihappo (1), polyfonihappo C (2), 3-epi-dehydrotumulosihappo (3) ja dehydrotumulosihappo (4). ), vastaavasti (kuva 1). Niiden rakenteet selvitettiin NMR-spektroskopialla (taulukko S1) ja ESI-MS-analyysillä (kuvat S2, S4, S6 ja S8) ja vertaamalla kirjallisuuden tietoihin [32,33]. Kohteen 1-4 UPLC-kromatogrammit on esitetty kuvissa S1, S3, S5 ja S7.

3.2. Alustava tutkimus BALB/c-uroshiirillä Lanostane Triterpenoid Compoundsilla 1-3

Lanostaanitriterpenoidiyhdisteillä (1-3) käsitellyistä hiiristä eristettyjä pernasoluja viljeltiin viisi päivää yhden pernasolun läsnä ollessa. Pernan T-lymfosyyttien erittämän IFN-y:n määrä mitattiin. Sen jälkeen kun hiirille oli annettu 2,5 mg/kg/vrk tai suurempi annos yhdistettä 1,5 ja 10 mg/kg/vrk 2 ja 20 mg/kg/vrk 3, ConA:n erittämä IFN-y. -stimuloidut pernan T-solut lisääntyivät merkittävästi (taulukot 1 ja 2). Alustava tutkimus osoittaa, että lanostaani 1-3 lisäsi IFN-y:n eritystä ConA:n stimuloimista pernasoluista.

3.3. Turvallisuusarvio P. cocos -uutteen eläintutkimuksesta

Taulukot 3 ja 4 osoittavat, että P. cocos -uute ei vaikuttanut ruumiinpainoon ja pernan painoon.cistanche benefíciosTaulukko 5 osoittaa myös, että immuunisoluilla, kuten kokonais-T-soluilla, kokonais-B-soluilla, MHC II:lla (suurin histoyhteensopivuuskompleksi tyyppi II, CD4 plus T-solut, CD8 plus T-solut, NK-solut ja makrofagit P. cocos -uuteryhmässä ei merkittävää eroa vertailuryhmään verrattuna Yllä olevien tulosten perusteella tulisi arvioida, ettei immunotoksisuuden riskiä pitäisi olla P. cocos -uutteen ruokintakokeen aikana.

3.4. Ei-spesifinen immuunivasteen arviointi

Luonnon tappajasoluilla (NK-soluilla) on keskeinen rooli epäspesifisessä immuniteetissa. Taulukko 6 osoittaa, että FL400-ryhmä indusoi merkitsevästi NK-soluaktiivisuuden kasvua verrattuna FL200-ryhmään. Se on taipumus lisätä P.cocos-uutteen NK-soluaktiivisuuden vaikutusta. Sytokiinit ovat kemikaaleja, mukaan lukien interleukiinit (IL) ja interferoni (IFN), jotka säätelevät immuunivastetta tai solujen kasvua 【34】. Analysoimme IFN- (Th1-immuunivasteen) ConA- ja LPS-indusoitujen pernasolujen pitoisuuden ja FL200-, FL400-, FL800-käsitellyistä hiiristä eristettyjen ConA-indusoitujen pernasolujen IL-5 (Th2-immuunivaste) -pitoisuuden, ja FL1200 (taulukot 7 ja 8). FL800- ja FL1200-ryhmät stimuloivat merkittävästi IFN-y:n tuotantoa hiiren pernasoluissa ConA:n läsnä ollessa (taulukko 7). Taulukko 7 osoittaa myös, että FL200:lla, FL400:lla, FL800:lla ja FL1200:lla käsitellyistä hiiristä eristettyjen IL-5-hiirien pernasolukonsentraatiolla oli merkittävästi vähentynyt vaikutus annoksesta riippuvaisella tavalla. Lisäksi FL400-, FL800- ja FL1200-ryhmät stimuloivat myös merkittävästi IFN-tuotantoa hiiren pernasoluissa LPS:n läsnä ollessa (taulukko 8).

4. Keskustelu

Ihmisen immuunijärjestelmä on vastuussa vieraiden patogeenien torjunnasta terveyden suojelemiseksi.puritaanit c-vitamiiniRiittämätön vastustuskyky tekee elimistöstä yleensä alttiita infektioille ja vaatii siksi riittävää vastustuskykyä, mutta se vaatii myös tiukkoja säätelymekanismeja liiallisten sivuvaurioiden välttämiseksi. Immuunitasapainon ylläpitäminen on immuunijärjestelmän tärkein tehtävä[35]. Monet todisteet osoittivat, että immuunitasapaino korreloi voimakkaasti Th1/Th2-soluvasteen kanssa36,37]. Stressi ja ikääntyminen voivat saada Th1/Th2 menettämään tasapainon ja kallistumaan kohti Th2:ta, mikä voi aiheuttaa infektioita ja allergisia sairauksia [38-40]. Tämä tehokkaan tasapainoimmuniteetin etsiminen on kiireellistä. Lisäksi on ilahduttavaa, että vuosikymmeniä kestäneestä tieteellisestä tutkimuksesta ihmisen immuunijärjestelmästä ja sen vasteesta tartuntataudeissa saatu tieto auttaa tuottamaan tietoa terapeuttisesta tutkimuksesta ja kehityksestä, ja sillä on myös ehkäiseviä strategioita virusepidemioiden leviämistä varten [41] , A42]. Monet aiemmat tutkimukset P. cocosin farmakologisesta tutkimuksesta ovat suuntautuneet P. cocos -proteiiniin [43,44] tai polysakkarideihin [45,46]. P. cocosista peräisin olevien lanostaanitriterpenoidien tehokkuudesta on tehty useita tutkimuksia, kuten hypoglykemia [25], syövän vastainen [24] ja rauhoittava vaikutus [28].mikä on cistancheAiemmat tutkimukset ovat osoittaneet, että P. cocosin etyyliasetaattifraktio sisältää pääkomponentin triterpenoideja ja sillä on immuunijärjestelmää vahvistavaa vaikutusta. Tutkimuksemme arvioi P. cocos -immuniteettitoimintoa vakiintuneessa hiirimallissa, joka sisälsi puhdistetun lanostaanitriterpenoidiyhdisteen alustavan seulontatutkimuksen. Osoitimme tässä tutkimuksessa, että P.cocos-uutteella (Lipucan), joka sisältää 6,2 prosenttia neljästä lanostaanitriterpenoidista, on monia hyödyllisiä tehtäviä immunosäätelyssä.

Aikaisempi tutkimus raportoi, että ihmisen CD4- ja T-auttajasolut (Th)-solut, mukaan lukien Th1- ja Th2-alajoukot, määritetään niiden erittämien sytokiinien perusteella [36]. Th1-solut erittävät pääasiassa IFN-; Th2-solut tuottavat IL-4, IL-5, indusoivat vasta-ainetuotantoa ja johtavat allergisiin vasteisiin lisäämällä B-solujen IgE-tuotantoa ja edistämällä syöttösolujen kasvua ja eosinofiilien erilaistumista. On hyvin tunnettua, että NK-soluilla ja IFN:llä on tärkeä rooli immuunipuolustuksessa virusinfektioita vastaan. Luontainen immuunijärjestelmä on erittäin tärkeä suojautuakseen viruksia vastaan, jotka alun perin tunkeutuivat kehoon ja aktivoimaan myöhemmän adaptiivisen immuniteetin. NK-solut luokitellaan epäspesifiseksi (synnynnäiseksi) immuniteeksi, joka on vastuussa viruksen infektoituneiden solujen tappamisesta【14】. IFN - estää viruksen elinkaarta ja estää viruksen replikaatiota. IFN- säätelee myös immuunivastetta aktivoimalla epäspesifistä soluvälitteistä immuniteettia ja stimuloimalla spesifistä immuniteettia [17]. Alustavan eläintutkimuksen perusteella P. cocos -uutteen tärkeimmät lanostaanitriterpenoidiyhdisteet, tumulosiinihappo (1), polyfonihappo C (2) ja 3-epi-dehydrotumulosihappo (3) stimuloivat merkittävästi IFN-eritystä pernasolujen toimesta. Aktiivisen Poria-kookosuutteen komponentin vahvistuksella tässä esitutkimuksessa on suuri merkitys tuotteen laadunvalvonnalle sekä biosaatavuus- ja mekanismitutkimuksille. Lisäksi osoitimme tässä tutkimuksessa, että P. cocos -uute stimuloi merkittävästi NK-solujen aktiivisuutta ja IFN-eritystä ilman immunotoksisia ominaisuuksia. Nämä tulokset osoittivat P. cocos -uutteen ja tärkeimpien lanostaanitriterpenoidien 1-3 merkittävät stimuloivat vaikutukset immuunivasteeseen.

Lisäksi havaintomme osoittivat, että P. cocos -uute tukahdutti Th2-immuunivasteen merkitsevällä IL-5-estämisellä (taulukko 7) ei-spesifisessä immuunivastemallissa ja merkittävällä IL-4(taulukko 9)-estämisellä OVA-indusoidussa spesifisessä immuunivastemallissa. IL-4 ja IL-5 johtaisivat allergiseen vasteeseen.SistancheAllergiat, joita kutsutaan myös allergisiksi sairauksiksi, johtuvat immuunijärjestelmän yliherkkyydestä ympäristön aineille, kuten allergiselle astmalle. Potilaan immuunivaste on yleensä Th2. Jos kehon Th1/Th2 saadaan tasapainoon, sen pitäisi parantaa allergiaoireita. Tämä tutkimus osoitti, että P. cocos -uute voi säädellä Th1/Th2-immuunivastetta, vähentää allergisten sairauksien esiintymistä ja siitä voidaan kehittää potentiaalinen antiallergisen sairauden ehdokas.

5. Johtopäätökset

Tämä tutkimus on ensimmäinen, joka osoittaa lanostaanitriterpenoideja sisältävän P. cocos -uutteen epäspesifisen ja spesifisen immuniteetin säätelyn hiirillä. Näitä immuunivasteita ovat NK-solujen aktivaatio, lisääntynyt IFN-eritys ja vähentynyt IL-4 ja IL-5. Tuloksemme tukevat sitä, että P. cocos -uute, jossa ei ole immunotoksisuutta lisättynä ruokavalioon tai käytettynä yksinään, on hyödyllinen immuunisäätelyrooli immuunipuutoksen parantamisessa ja kyvyn ehkäistä infektio- ja allergiavasteita parantamisessa. Tämä on ensimmäinen vahvistus siitä, että lanostaanitriterpenoidit ovat tehokkaita ainesosia ja niitä voidaan käyttää laadunvalvonta-ainesosina P. cocos -uutteen tehokkuuden ylläpitämiseksi.

Tämä artikkeli on poimittu Life 2021:stä, 11, 111. https://doi.org/10.3390/life11020111 https://www.mdpi.com/journal/life