Oksidatiivisen stressin ja interleukiini-1-ristipuheen vaikutus krooniseen tulehdukseen EAP-rotilla ja anemone tomentosan interventioon

 

 

Abstrakti

Tavoitteet: Tutkia oksidatiivisen stressin ja interleukiini-1:n (IL-1) ristiinpuhumisen roolia kroonisessa eturauhastulehduksessa kokeellisessa autoimmuunista eturauhastulehdusta (EAP) sairastavilla rotilla ja selvittää mekanismia, jolla Anemone tomentosa hoitaa EAP-rottia. Menetelmät: Kolmekymmentä Wistar-rottaa jaettiin satunnaisesti viiteen ryhmään (kukin n=6): normaali, malli, pieniannoksinen Anemone tomentosa, keskiannoksen Anemone tomentosa ja korkean annoksen Anemone tomentosa. Lääkehoidon jälkeen Western blottausta käytettiin TLR-4-, IRAK1- ja pNF-κB p65 -proteiinien havaitsemiseen eturauhaskudoksesta. Seerumin superoksididismutaasi (SOD), glutationiperoksidaasi (GSH-Px) ja malondialdehydi (MDA) mitattiin käyttämällä määrityssarjoja. Tulehdukselliset sytokiinit, mukaan lukien interleukiini-1 ja interleukiini-10, mitattiin ELISA:lla. Tulokset: Normaaliryhmään verrattuna TLR-4-, IRAK1- ja pNF-κB p65 -proteiinien ilmentyminen malliryhmän eturauhasessa lisääntyi merkittävästi (P ​​< 0,01). Seerumin SOD- ja GSH-Px-tasot laskivat (P < 0,01), kun taas MDA- ja interleukiini-1-tasot nousivat (P < 0,01). Malliryhmään verrattuna Anemone tomentosa -interventio vähensi merkittävästi TLR-4-, IRAK1- ja pNF-κB p65 -proteiinin ilmentymistä EAP-rottien eturauhasessa (P < 0,01). Seerumin SOD, GSH-Px ja interleukiini-10 säädeltiin merkittävästi (P ​​< 0,01 tai P < 0,05), kun taas MDA ja interleukiini-1 olivat alasäädeltyjä (P < 0,01 tai P < 0,05). Histologia osoitti, että eturauhasvaurio ja tulehdussolujen infiltraatio paranivat Anemone tomentosa -hoidon jälkeen. Johtopäätös: IRAK1 voi olla keskeinen solmu, joka välittää oksidatiivisen stressin ja IL-1:n välistä ristipuhelua tulehduksen aikana EAP-rotilla. Anemone tomentosan anti-inflammatorinen mekanismi EAP-rotilla voi sisältää oksidatiivisen stressin ja IL-1:n vähentämisen säätelemällä TLR-4/IRAK1/NF-κB p65-signalointireittiä.

Yrtti Cistanche lisäravinteet

 

 

 

Napsauta saadaksesi lisätietoja

 

 

 

Avainsanat

Krooninen eturauhastulehdus; kokeellinen autoimmuuninen eturauhastulehdus (EAP); oksidatiivinen stressi; interleukiini-1 (IL-1); IRAK1; TLR-4/IRAK1/NF-κB p65-signalointireitti; SOD; GSH-Px; MDA; ELISA; Western blot; Anemone tomentosa; Dahuocao (Zhuang-lääketiede); Perinteinen kiinalainen lääketiede; TCM-yrtti eturauhastulehdukseen; Kiinan kansanlääketiede; anti-inflammatorinen; antioksidanttihoito

 

 

Krooninen eturauhastulehdus (CP)on yksi yleisimmistä urologian ja andrologian sairauksista. Kiinassa CP:n raportoitu esiintyvyys vaihtelee 6,0 prosentista 32,9 prosenttiin [1]. Kliinisesti sille on ominaista pääasiassa krooninen lantiokipu, ja siihen voi liittyä eriasteisia virtsaamisoireita ja seksuaalisia toimintahäiriöitä, jotka vaikuttavat vakavasti potilaiden elämänlaatuun. Tutkimusraporttien [2] mukaan CP:n patogeneesi voi liittyä patogeeniinfektioon, oksidatiiviseen stressiin, virtsan refluksiin, sukupuolihormonitasojen muutoksiin, neuroendokriinisen epätasapainon häiriöihin ja immuuni-inflammatorisiin vasteisiin. Nykyiset tutkimukset osoittavat, että eturauhasen tulehduksellisessa tilassa muodostuu suuri määrä reaktiivisia happilajeja (ROS). korkea-ROS-mikroympäristö indusoi oksidatiivista stressiä ja osallistuu CP:n esiintymiseen ja kehittymiseen [3]. Sytokiinit ovat sääteleviä proteiinipolypeptidejä, joilla on tärkeä rooli CP:n esiintymisessä ja kehittymisessä; taudin vakavuus korreloi interleukiini-1:n (IL-1) tason kanssa eturauhasen eritteissä [4], mikä tarjoaa mahdollisen terapeuttisen lähestymistavan. Monimutkaisen patofysiologian vuoksi CP:n nykyaikaisilla lääketieteellisillä hoidoilla on tiettyjä rajoituksia [5]. Viime vuosina perinteinen kiinalainen lääketiede (TCM) on osoittanut suotuisaa tehoa CP:n hoidossa, kivun ja virtsaamisoireiden lievittämisessä ja tyypillisten etujen osoittamisessa.

TCM:n näkökulmasta tämän taudin etiologiaan ja patogeneesiin kuuluvat munuaisten vajaatoiminta, kostea lämpö ja veren pysähdys [6]. Zhuangin etnomelääketieteellinen yrtti Dahuocao (Anemone tomentosa; pistävä, hieman karvas, ominaisuuksiltaan neutraali) puhdistaa lämpöä ja karkottaa kosteutta, edistää diureesia lievittää stuntumaa, vahvistaa qi:tä ja vahvistaa munuaisia ​​[7]. Kliiniset havainnot viittaavat siihen, että Dahuocao voi parantaa CP-oireita [8] ja säädellä tulehduksellista sytokiinien eritystä CP-mallirotilla [9]. Sen mekanismi saattaa liittyä mikroRNA-146a/Toll-like reseptori-4 (TLR-4)/nukleaarinen transkriptiotekijä-κB (NF-κB) -reitti, joka on peräisin eturauhasen corpora amylaceasta [10]. Tämän perusteella tässä tutkimuksessa havaittiin oksidatiivisen stressin ja IL-1:n välisen ristivuorovaikutuksen roolia kroonisessa eturauhastulehduksessa kokeellisessa autoimmuunisen eturauhastulehduksen (EAP) rottamallissa ja tutkittiin Dahuocao-keiton interventiovaikutusta.

Materiaalit

1.1 Koeeläimet

Kolmekymmentä urospuolista Wistar-rottaa ostettiin yhtiöltä Changsha Tianqin Biotechnology Co., Ltd. (lisenssinro: SCXK2019-0013), 8 viikon ikäisiä, ruumiinpaino 200 ± 17 g. Eläinten eettinen hyväksyntänumero: DW20220926-202, Guangxin kiinalaisen lääketieteen yliopisto. Eläimiä pidettiin Key Laboratory of Molecular Biology for Prevention and Treatment -laboratoriossa TCM:ssä, Guangxissa.

 

1.2 Tärkeimmät instrumentit ja reagenssit

Elektroforeesilaite (Beijing Liuyi, DYCZ-24DN), nukleiinihapon/proteiinin kvantisoija (Denovix DS-11), puolikuiva siirtojärjestelmä (ATTO WSE-4040, AE6675L). Täydellinen Freundin adjuvantti (Sigma-Aldrich, F5881). TLR-4-vasta-aine (Affinity, AF7017), interleukiini-1-reseptoriin liittyvä kinaasi-1 (IRAK1) -vasta-aine (Affinity, AF4742), fosfo-NF-κB p65-vasta-aine (Affinity, AF2006). GSH-Px-sarja (Nanjing Jiancheng, A005-1), SOD-sarja (Nanjing Jiancheng, A001-1), MDA-sarja (Nanjing Jiancheng, A003-1). IL-1 ELISA (Lianke Bio, EK301BHS), IL-10 ELISA (Lianke Bio, EK310).

menetelmät

 

2.1 EAP-rottamallin valmistelu

Puhdistettujen rotan eturauhasproteiinien valmistus seurasi aikaisempia menetelmiä [10]. Immunisaatiomallinnus [10–11] suoritettiin vakiintuneiden protokollien mukaisesti. Onnistunut mallinnus osoitti limakalvolaskoksen katoaminen eturauhastiehyissä, epätäydellinen acini, stroomaturvotus ja tulehdussolujen infiltraatio [12].

 

2.2 Dahuocao-keittämisen valmistus

Dahuocao (Anemone tomentosa) keite valmistettiin aikaisempien kokeellisten menettelytapojen mukaisesti [10].

 

2.3 Ryhmittely ja lääkkeiden antaminen

Kolmekymmentä rottaa jaettiin satunnaisesti satunnaislukutaulukon avulla normaali-, malli- ja pieni-, keski- ja suuriannoksista Dahuocao-ryhmiin (n=6 ryhmää kohti). Onnistuneen mallinnuksen jälkeen pienet, keskisuuret ja suuret annokset saaneet ryhmät saivat Dahuocao-keittoa letkulla pitoisuuksina 1,46 g/ml, 2,92 g/ml ja 5,84 g/ml (4 ml/kg·d). Normaali- ja malliryhmät saivat suolaliuosta (4 ml/kg·d). Hoidot annettiin kerran päivässä 4 viikon ajan.

2.4 Eturauhasen histopatologia (H&E-värjäys)

Eturauhaskudokset kiinnitettiin, upotettiin ja leikattiin; leikkeet värjättiin hematoksyliini-eosiinilla ja tutkittiin valomikroskopialla akinaaristen rakenteellisten muutosten ja tulehdussolujen infiltraation arvioimiseksi.

 

2.5 Seerumin oksidatiivisen stressin merkkiaineet: SOD, MDA, GSH-Px

Seerumin SOD-, MDA- ja GSH-Px-tasot mitattiin tarkasti vastaavien pakkauksen ohjeiden mukaisesti.

 

2.6 Seerumin IL-1:n ja IL-10:n ELISA-määritys

Seerumin IL-1- ja IL-10-pitoisuudet mitattiin tarkasti ELISA-sarjan protokollien mukaisesti.

 

2.7 TLR-4:n, IRAK1:n ja pNF-κB p65:n Western blot -detektio eturauhasessa

Noin 50 mg eturauhaskudosta jauhettiin hienoksi jauheeksi nestetypessä, jaettiin eriin ja hajotettiin RIPA-puskurissa. Proteiinit erotettiin elektroforeesilla, siirrettiin, estettiin, inkuboitiin primääristen vasta-aineiden kanssa, pestiin, inkuboitiin sekundaaristen vasta-aineiden kanssa, pestiin ja kuvattiin. Proteiinin ilmentyminen kvantifioitiin kohde/kodinpitovyöhykkeen harmaaarvoina.

 

2.8 Tilastollinen analyysi

Tiedot analysoitiin käyttämällä SPSS 22.0:aa. Normaalisti jakautuneet tiedot, joiden varianssi on homogeeninen, esitetään keskiarvona ± SD ja analysoidaan yksisuuntaisella ANOVAlla LSD-t post hoc -testeillä. Ei-normaalit tai heteroskedastiset tiedot esitetään muodossa M (QR) ja analysoidaan ei-parametrisilla testeillä. Kaksipuolinen P < 0,05 katsottiin tilastollisesti merkitseväksi.

Tulokset (lyhyt oikaisu selvyyden vuoksi)

Normaaliin verrattuna: Eturauhasen TLR-4, IRAK1 ja pNF-κB p65↑ (P < 0,01); seerumin SOD ja GSH-Px↓ (P < 0,01); MDA ja IL-1 ↑ (P < 0,01).

Vs. malli: Anemone tomentosa (Dahuocao) vähentää TLR-4/IRAK1/pNF-κB p65 (P < 0,01); lisääntynyt SOD, GSH-Px ja IL-10 (P < 0,01 tai P < 0,05); alentunut MDA ja IL-1 (P < 0,01 tai P < 0,05). Histologia osoitti lievittynyttä rauhasvauriota ja tulehduksellista infiltraatiota.

Johtopäätös
IRAK1 voi edustaa keskeistä solmua oksidatiivisen stressin ja IL-1:n välisessä keskustelussa kroonisen eturauhastulehduksen aikana EAP-rotilla. Anemone tomentosa (Dahuocao), TCM/Zhuangin etnomelääketieteellinen yrtti eturauhastulehdukseen, voi estää kroonista tulehdusta vähentämällä oksidatiivista stressiä ja IL-1:tä säätelemällä TLR-4/IRAK1/NF-κB p65-signalointireittiä.

Viranomaiset ja hankintatiedot

Epidemiologia ja biolääketieteellinen konteksti perustuvat kansalliseen urologian/andrologian kirjallisuuteen [1–6].

Anemone tomentosan (Dahuocao) identiteetti, ominaisuudet ja TCM-merkinnät viittaavat TCM:n kiinalaisen Materia Medica -kokoelman [7] valtionhallinnon arvovaltaiseen lähteeseen.

Dahuocaon CP/CNP:n kliinisiä havaintoja ja mekaanisia eläintutkimuksia tukevat vertaisarvioidut kiinalaiset aikakauslehdet ja standardoidut kokeelliset ohjeet [8–12], mikä lisää TCM-yrtin käytön uskottavuutta eturauhastulehduksen hoidossa.

 

Viitteet

[1] Mi H, Chen K, Mo ZN. Kroonisen eturauhastulehduksen epidemiologiset ominaisuudet Kiinassa. Chin J Androl. 2012;18(7):579-582.
[2] Zheng XT, Chen SH, Yao WL, et ai. Kroonisen eturauhastulehduksen etiologian ja patogeneesin edistyminen. Moderni diagnoosi ja hoito. 2019;30(11):1810-1813.
[3] Paulis G. Tulehdusmekanismit ja oksidatiivinen stressi eturauhastulehduksessa: antioksidanttihoidon mahdollinen rooli. Res Rep Urol. 2018;10:75-87.
[4] Kang SW, Park JH, Seok H, et ai. Korean punaisen ginsengin vaikutukset tulehduksellisiin sytokiineihin ja apoptoosiin kroonisen ei-bakteeriperäisen eturauhastulehduksen rottamallissa. Biomed Res Int. 2019;2019:2462561.
[5] Xue Y, Duan Y, Gong X, et ai. Perinteinen kiinalainen lääketiede krooniseen eturauhastulehdukseen/krooniseen lantion kivun oireyhtymään: systemaattinen katsaus ja meta-analyysi. Lääketiede (Baltimore). 2019;98(26):e16136.
[6] Sun ZX, Li PC. TCM diagnostinen ja terapeuttinen ajattelu krooniseen eturauhastulehdukseen. Liaoning J Tradit Chin Med. 2019;46(2):268-269.
[7] Kiinan Materia Medican toimituskunta, TCM:n osavaltion hallinto. Kiinalainen Materia Medica. Shanghai: Shanghai Science and Technology Press; 1999: 1768, 3166.
[8] Lu LX, Wu JY, Huang ZM, et ai. Retentioperäruiskeen kliininen havainto Dahuocaolla (Zhuang-lääke) 60 kroonisen eturauhastulehduksen tapauksessa. Hunan J Tradit Chin Med. 2019;35(6):55–56. doi:10.16808/j.cnki.issn1003-7705.2019.06.024.
[9] Wang WJ, Shi H, Zhang J, et ai. Dahuocao estää tulehdusvasteita ei-bakteerisessa eturauhastulehduksessa rottamallissa. Modern Immunology. 2021;41(6):504-508. doi:10.35541/cjd.20201030.
[10] Lu LX, Shi H, Huang ZM, et ai. Eturauhasen corpora amylacea miRNA-146a/TLR-4/NF-κB-reitin rooli EAP-rottien kroonisessa tulehduksessa ja Dahuocaon interventiossa. Chin Gen Pract. 2023;26(20):2518-2524.
[11] Qian Y, Qian XQ, Gong DW, et ai. Resveratrolin interventio sytokiineihin eturauhastulehduksen rotan mallin eturauhaskudoksessa. Chin J Androl. 2017;31(3):14–18.
[12] TCM:n kokeellisen farmakologian ammattikomitea, Kiinan kiinalaisen lääketieteen yhdistys. Spesifikaatioluonnos kroonisen eturauhastulehduksen eläinmallien valmistamiseksi. Chin J Exp Tradit Med Formulae. 2018;24(19):10-14.

Valinnaiset tekijän avainsanat indeksointia varten (löydettävyyden vuoksi)

Perinteinen kiinalainen lääketiede; Zhuang etnomilääketiede; Dahuocao; Anemone tomentosa Maxim.; eturauhastulehdus; krooninen lantion kipuoireyhtymä; TLR4; IRAK1; NF-KB; oksidatiivinen stressi; antioksidanttientsyymit; sytokiinit; ELISA; Western blot; rotan malli; EAP; kasviperäinen anti-inflammatorinen; TCM-yrtti eturauhastulehdukseen.