Harjoituksen aiheuttamien hyötyjen ajallinen kestävyys hippokampuksesta riippuvaisessa muistissa ja synaptisessa plastisuudessa naarashiirillä, osa 1

Abstrakti

Harjoitus helpottaa aivotursoalueen neurogeneesiä ja neuroplastisuutta, mikä puolestaan ​​edistää kognitiivista toimintaa. Aiemmat tutkimuksemme ovat osoittaneet, että uroshiirillä vapaaehtoinen harjoittelu mahdollistaa laivapokampuksesta riippuvaisen oppimisen olosuhteissa, jotka ovat normaalisti kynnyksen alapuolella pitkäaikaisen muistin muodostumiselle istuvat eläimet. Tällaista kognitiivista tehostumista voidaan ylläpitää pitkään harjoituksen lopettamisen jälkeen ja se voidaan ottaa uudelleen käyttöön myöhemmällä kynnyksen alapuolella harjoituskerralla, mikä viittaa siihen, että harjoituksen aiheuttamat hyödyt ovat ajallisesti dynaamisia.

Neuroplastisuus viittaa hermosolujen kykyyn sopeutua jatkuvasti ulkoisiin ärsykkeisiin ja sisäisiin aktiviteetteihin. Tällä kyvyllä on keskeinen rooli muistin muodostumisessa ja tallentamisessa. Tästä huolimatta neuroplastisuus liittyy läheisesti muistiin.

Neuroplastisuus tapahtuu hermosolujen välisten synaptisten yhteyksien kautta. Kun saamme uuden asian, aivojen neuronien väliset yhteydet muuttuvat muodostaen uusia synaptisia yhteyksiä. Tämä prosessi vaatii toistuvaa harjoittelua ja toistoa pitkäaikaisten ja stabiilien synaptisten yhteyksien tuottamiseksi. Vain tämä pitkäaikainen synaptinen yhteys voi vaikuttaa muistiin ja tallentaa sen.

Myös neuroplastisuus muuttuu iän ja kokemuksen myötä. Neuroplastisuus on erittäin voimakasta nuorena, ja aivot voivat muodostaa uusia synaptisia yhteyksiä hyvin nopeasti, kun opimme uusia asioita. Mutta ikääntyessämme neuroplastisuus vähenee, mikä tarkoittaa, että uuden tiedon oppiminen on vaikeampaa. Jos kuitenkin säilytämme positiivisen asenteen sekä halun ja tavan oppia ennakoivasti uusia asioita, voimme silti säilyttää tietyn tason neuroplastisuutta. Tämä tarkoittaa, että voimme jatkaa oppimista ja kasvamista parantaen muistiamme ja älykkyyttämme.

Yhteenvetona voidaan todeta, että neuroplastisuus ja muisti liittyvät läheisesti toisiinsa. Positiivisen asenteen säilyttäminen ja tapa oppia aktiivisesti uutta tietoa voivat auttaa meitä ylläpitämään hyvää hermoplastisuutta ja siten parantamaan muistia ja älykkyyttä. Opiskelkaamme hellittämättä, ylläpitäkäämme positiivista asennetta ja kehittäkäämme jatkuvasti kykyjämme ja ominaisuuksiamme. Voidaan nähdä, että meidän on parannettava muistiamme. Cistanche deserticola voi parantaa muistia merkittävästi, koska Cistanche deserticola on perinteinen kiinalainen lääkeaine, jolla on monia ainutlaatuisia vaikutuksia, joista yksi on muistin parantaminen. Jauhetun lihan teho perustuu sen sisältämiin erilaisiin vaikuttaviin ainesosiin, mukaan lukien happo, polysakkaridit, flavonoidit jne. Nämä ainesosat voivat edistää aivojen terveyttä monin tavoin.

Napsauta Tiedä 10 tapaa parantaa muistia

Naisilla ei ole vielä määritelty sitä, missä määrin liikunnan hyödyt voidaan säilyttää, ja tämän ylläpitämisen taustalla olevat mekanismit. Tässä tutkimme harjoitusparametreja, jotka vaaditaan harjoituksen hyötyjen aloittamiseksi ja ylläpitämiseksi naaraspuolisilla C57BL/6J-hiirillä. Käyttämällä kynnyksen aliversiota hippokampuksesta riippuvaisesta tehtävästä, nimeltään Object-location memory (OLM) -tehtävä, osoitamme, että 14d vapaaehtoista harjoitusta mahdollistaa oppimisen kynnyksen alarajojen hankintaolosuhteissa naarashiirillä. Alkuharjoituksen jälkeen 7 päivän istumisviive johtaa suorituskyvyn heikkenemiseen, mitä voidaan helpottaa uudelleen, kun eläimet saavat 2 pv uudelleenaktivoivaa harjoitusta istumisviiveen jälkeen.

Kiimasyklin arviointi paljastaa parantuneen pyörän käyntiaktiivisuuden kiimavaiheen aikana suhteessa diestrusvaiheeseen, kun taas kiimavaihe harjoittelun tai testin aikana ei vaikuttanut OLM:n suorituskykyyn. Samoja harjoitusparametreja käyttämällä osoitamme, että 14 p:n harjoitus tehostaa pitkäaikaista tehokkuutta ( LTP) hippokampuksen CA1-alueella, vaikutus, joka jatkuu koko tämän hampaiden viiveen ja uudelleenaktivoivan harjoituksen jälkeen. Aiemmat tutkimukset ovat ehdottaneet harjoituksen aiheuttamaa BDNF:n lisääntymistä mekanismiksi, joka perustuu harjoitusvälitteiseen synaptiseen plastisuuteen ja kognitioon.

Arvioimme hippokampuksen Bdnf:n mRNA-ilmentymisestä muistin haun jälkeen ei kuitenkaan paljasta eroa harjoitusolosuhteiden ja kontrollin välillä, mikä viittaa siihen, että jatkuvaa Bdnf:n ylössäätelyä ei välttämättä tarvita harjoituksen aiheuttamien hyötyjen ylläpitämiseksi. Yhdessä tietomme osoittavat, että 14 päivää vapaaehtoista harjoittelua voi saada aikaan pitkäkestoisia etuja hermosolujen ja kognitiivisten toimintojen suhteen naarashiirillä, mikä on ensimmäinen todiste harjoituksen aiheuttamien hyötyjen ajallisesta kestävyydestä naarailla.

Avainsanat

Harjoittele; Oppiminen; Heippokampus; Synaptinen plastisuus; BDNF; Kiiman kierto.

1. Esittely

Liikunnan vaikutukset aivojen terveyden tukemiseen ja ylläpitämiseen ovat hyvin dokumentoituja. Aivoissa hippokampus on kriittinen oppimiselle ja muistin muodostukselle, koska tämän aivorakenteen häiriö johtaa muistin heikkenemiseen (Packard & McGaugh, 1996; Riedel et ai., 1999; Scoville & Milner, 1957). Siksi poikkeavat morfologiset ja toiminnalliset muutokset hippokampuksessa johtuvat ikääntymiseen ja sairaustiloihin liittyvistä kognitiivisista heikentymistä (Bettio et al., 2017).

Tutkimukset sekä ihmisillä (10 Brinkeet al., 2015; Erickson et al., 2011; Pajonk et al., 2010; Teixeira et al., 2018) ja eläinmalleilla (Cooper et al., 2018; Neeper et al., 1996; O'Callaghan et ai., 2007; Van Praag, 2008) ovat osoittaneet harjoituksen vaikutukset aivoturson rakenteellisen ja toiminnallisen eheyden tukemiseen, mikä viittaa siihen, että fyysinen harjoittelu on tehokas ei-farmakologinen interventio kognitiivisten häiriöiden hoitoon sekä fysiologisissa että patologisissa olosuhteissa (Intlekofer). & Cotman, 2013; Lauretta et ai., 2021; Liu ym., 2011; Muscari ym., 2010).

Huolimatta runsaasta tutkimuksesta liikunnan hyödyllisistä vaikutuksista ja hippokampuksen ja kognitiivisten toimintojen välisestä suhteesta, harjoituksen aiheuttamien hyötyjen ajallisesta dynamiikasta tiedetään vain vähän. Toisin sanoen kuinka kauan harjoituksen kesto vaaditaan hippokampuksen toiminnan lisäämiseen, ja kuinka kauan nämä edut jatkuvat harjoituksen lopettamisen jälkeen?

Vielä harvemmissa tutkimuksissa on yritetty tutkia molekyylimekanismeja, jotka ovat taustalla harjoituksen aiheuttamien hyötyjen ylläpitämiseksi. Koska ihmisten harjoitusohjelmat ovat vähemmän jäykkiä ja johdonmukaisia ​​kuin eläinkokeissa käytetyt (Lee & Skerrett, 2001), on tärkeää kehittää harjoitusprotokollat, jotka ovat joustavia eivätkä vaadi päivittäistä harjoitusrutiinia, mutta voivat silti harjoittaa ja ylläpitää harjoituksen aiheuttamaa kognitiivista toimintaa. etuja. Eläinkokeissa on vaikea tunnistaa harjoituksen vähimmäiskestoa, joka vaaditaan harjoituksen hyötyjen aloittamiseksi ja ylläpitämiseksi, koska tutkimuksissa käytetyt harjoitusprotokollat ​​vaihtelevat huomattavasti (Loprinzi etal., 2019). Tästä syystä on edelleen tärkeää tutkia harjoituksen kynnystä, joka saa aikaan ja ylläpitää kognitiivisia etuja, ja taustalla olevia mekanismeja.

Harjoitus helpottaa neuroplastisuutta, neurogeneesiä ja myöhemmin oppimista ja muistia sellaisten mekanismien kautta, jotka indusoivat aivoperäisen neurotrofisen tekijän (BDNF) neurotrofista vaikutusta hippokampuksessa (Alomari et al., 2013; Cotman et al., 2007; Cotman & Berchtold, D2002; et ai., 2011; Triviño-Paredes et ai., 2016; Van Praag, Christie, et ai., 1999; Van Praag, Kempermann, et ai., 1999). Sekä naaras- että urosjyrsijöillä harjoittelu parantaa käyttäytymissuorituskykyä monissa erilaisissa muistitehtävissä, mukaan lukien voimakkaasti spatiaalisesti suuntautuneet, hippokampukseen perustuvat tehtävät: Morris-vesilabyrintti (MWM), objektipaikannusmuisti (OLM) ja säteittäinen käsivarsilabyrintti muiden lisäksi hippokampukseen perustuvat muistitehtävät, kuten kontekstuaalisen pelon ehdollistaminen, passiivinen välttäminen ja uusien esineiden tunnistus (Intlekofer et al., 2013; Lambert et al., 2005; O'Callaghan et al., 2007; Van Praag, Christie et al., 1999; Van Praag, Kempermann, et ai., 1999; Vivar, Potter ja Van Praag, 2012).

Urosjyrsijät, tutkimuksemme ja muut ovat havainneet, että harjoituksen vähimmäiskesto 2 viikkoa vaaditaan oppimisen ja muistin parantamiseksi, mikä voidaan ylläpitää passiivisuusjakson ajan ja aktivoida uudelleen aloittamalla uudelleen lyhyen, kynnystä pienemmän 2d-harjoituksen (Berchtold et al., 2010; Butler et ai., 2019; Intlekofer et ai., 2013). Molekyylitasolla 2 viikon harjoitus indusoi hippokampuksen aivoista peräisin olevan neurotrofisen tekijän proteiinin säätelyä urosrotilla (Berchtold et al., 2005).

Sen jälkeen, kun kohonneet BDNF-tasot ovat laskeneet lähtötasolle, myöhempi uudelleenkäynnistys lyhyeen, kynnystä pienempään 2d-harjoitukseen voi jälleen helpottaa hippokampuksen BDNF:n kohoamista (Berchtold et al., 2005). Tämä viittaa harjoitusvälitteiseen BDNF-ylössääntelyyn mahdollisena mekanismina, joka käynnistää pitkäkestoisia hermosolujen muutoksia mahdollistaen alhaisemman harjoitustiheyden ärsykkeen hyödyntämään näitä mukautuksia ja helpottamaan kognitiivisia etuja.

BDNF-signalointi edistää proteiinisynteesistä riippuvaisia ​​mekanismeja indusoimaan hippocampallong-term potentiation (LTP), joka on solujen korrelaatti oppimisesta ja muistista (Panja &Bramham, 2014; Silva, 2003). Siksi hippokampuksen LTP:n tehostamisen harjoituksen jälkeen ehdotetaan harjoitusohjatun oppimisen taustalla (L. Bettio et al., 2019; Liuet al., 2011). Tietojemme mukaan mikään tutkimus ei ole toistaiseksi tutkinut, jatkuuko LTP:n paraneminen harjoituksen lopettamisen jälkeen kummallakaan sukupuolella. Useat tutkimukset ovat osoittaneet, että deksariharjoittelu tehostaa tehokkaasti LTP:tä gyrushammassa (Farmer et al., 2004; Van Praag, Christie, et ai., 1999; Vasuta et al., 2007), mutta harjoituksen tutkimisesta on yllättävän vähän tutkimusta. moduloi synaptista plastisuutta CA1-alakentässä (Cotman et al., 2007), joka toimii aivotursoalueen tutkituimpana tilamuistin kontekstissa (Patten et al., 2015). Näin ollen harjoituksen ja CA1-plastisuuden välinen suhde on edelleen tutkittavana.

Useat tutkimukset ovat tukeneet hypoteesia, että liikunnan aiheuttamat hyödyt ovat ajallisesti dynaamisia (Berchtold et al., 2005, 2010; Butler ym., 2019; YP Kim et al., 2003). Naaraseläinten osalta ymmärryksemme tästä prosessista on vähemmän näkyvä, koska suurin osa työstä on tehty pääasiassa miehillä. Oppimista ja muistia koskevat tutkimukset ovat osoittaneet, että samankaltaisiin käyttäytymistuloksiin sukupuolten välillä voi liittyä erilaisia ​​hermomekanismeja (Becker & Koob, 2016; Keizer & Wood, 2019; Sase et al., 2019). Huolimatta tiedoista, jotka osoittavat, että harjoitus parantaa molempien sukupuolten neuroplastisuutta ja kognitiota, on olemassa selkeää näyttöä harjoituksen sukupuolispesifisistä vaikutuksista ja taustalla olevista mekanismeista.

Epäinhimillisillä liikunta parantaa esineiden sijaintimuistia miehillä eikä naisilla (Colemanet al., 2018). Jyrsijöillä liikunta parantaa selektiivisesti toisen sukupuolen suorituskykyä tietyissä muistitehtävissä (Barha et al., 2017). Molekyylitasolla BDNF:n jakautuminen useiden aivorakenteiden ja hippokampuksen osa-alueiden välillä on erilainen sukupuolten välillä (Bakos et al., 2009; Franklin & Perrot-Sinal, 2006). Kertyvä näyttö on myös korostanut sukupuolten välisiä eroja BDNF:n toiminnoissa ja mekanismeissa (Chan & Ye, 2017). Esimerkiksi lisääntymishormoni estrogeeni voi säädellä BDNF:n ilmentymistä erilaisten mekanismien kautta, joista yksi sisältää epigeneettisiä modifikaatioita BDNF-promoottorissa (Fortress et). al., 2014; Moreno-Piovano et ai., 2014; Chan & Ye, 2017).

Hippokampaalin BDNF-proteiinitasot vaihtelevat kiiman aikana, ja suurin ilmentymä havaittiin kiiman ja proestruksen aikana, mikä viittaa siihen, että estrogeenitasojen vaihtelut koko kiiman aikana naisilla vaikuttavat eri tavalla BDNF-ilmentymiseen (Scharfman et al., 2003). Lisäksi kiimakierto voi myös moduloida kohteita alavirtaan BDNF-signalointireiteistä hippokampuksessa (Spencer et al., 2008; Spencer-Segal et al., 2011). Useiden hippokampuksen toimintaan osallistuvien geenien ilmentyminen käy läpi myös dynaamisia muutoksia koko kiiman syklin ajan (Iqbal et al., 2020). Yhdessä nämä tiedot korostavat tarvetta tarkastella liikunnan aiheuttamia hyötyjä erikseen naisilla ja miehillä.

Koska edellinen tutkimuksemme on vahvistanut harjoituskynnyksen, joka aktivoi ja ylläpitää harjoittelun tehostamaa kognitiivista toimintaa uroshiirillä (Butler et al., 2019), käytimme samaa harjoitusparadigmaa tutkiaksemme harjoituksen aiheuttamien hyötyjen ajallista dynamiikkaa naarashiirillä. Tässä tutkimuksessa osoitamme, että naarashiirillä 14 päivän vapaaehtoinen harjoitus mahdollistaa pitkän aikavälin muistin muodostumisen objektipaikannusmuistin (OLM) -tehtävän alikynnysten hankintaolosuhteissa. Samoin kuin miehillä (Butler et al., 2019), alkuharjoituksen aiheuttamat edut säilyvät 7 päivän istumisviivejakson ajan ja ne voidaan aktivoida uudelleen lyhyellä 2 päivän uudelleenaktivointijaksolla mahdollistaakseen pitkäaikaisen muistin muodostumisen kynnyksen alapuolella.

Kiimasyklin vaiheet eivät vaikuttaneet OLM:n suorituskykyyn harjoittelun tai testin aikana. Vapaaehtoista pyöräilytoimintaa kuitenkin tehostettiin kiimavaiheen aikana. Lisäksi osoitamme, että harjoitus lisää LTP:tä aivoturson CA1-alueella naisilla, ja tämä vaikutus säilyy jopa istuvan viivejakson jälkeen, mikä on ensimmäinen todiste harjoituksen aiheuttaman neuroplastisuuden ajallisuudesta naisilla. Yllätykseksemme hippokampuksen Bdnf-ilmentymisen arviointi muistin haun jälkeen ei tuottanut eroa kokeellisten ryhmien välillä, mikä viittaa siihen, että BDNF:n jatkuvaa lisääntymistä ei ehkä tarvita harjoituksen aiheuttamien kognitiivisten etujen ylläpitämiseksi.

2. Materiaalit ja metodit

2.1. Eläimet

Naaraspuoliset, 8-viikon ikäiset C57BL/6J-hiiret (Jackson Laboratory) pidettiin yksittäin ymmärrettävissä olosuhteissa (20 astetta ± 1 aste; 70 % ± 10 % kosteus; 12 h:12 h valon ja pimeyden sykli) ja niille annettiin mainos libitum pääsy ruokaan ja veteen. Kaikki kokeet suoritettiin valovaiheen aikana. Kaikki kokeet suoritettiin National Institutesof Healthin ohjeiden mukaisesti eläinten hoidosta ja käytöstä, ja Kalifornian yliopiston Irvinen Institutional AnimalCare and Use Committee hyväksyi ne.

2.2. Harjoitushoito

Hiiret jaettiin ryhmiin ({{0}}–0–0: n=8, 14–0–0: n=7, 14–7–0: n=8, 14–7–2; n=8)ja yksittäin joko harjoitushäkeissä (joissa on juoksupyörä) tai istumahäkkeissä (vakiohäkki) ). Harjoitushäkit on valmistettu 9,3 tuumaa × 13,9 tuumaa × 7,7 tuumaa (pituus × leveys × korkeus) polykarbonaatista ja varustettu juoksupyörällä, jonka ympärysmitta on 40 cm, halkaisija 12,7 cm (Lafayette Instruments).

Vapaaehtoista pyörien kulkua valvottiin {{0},110anturin/laskurin kautta, joka oli liitetty keskusliitäntään, joka oli liitetty ScurryActivity-valvontaohjelmistolla (Lafayette Instruments) varustettuun tietokoneeseen. Harjoitusparametrit koostuvat alkuharjoitusjaksosta (0 tai 14p), jota seuraa istumisviive (0 tai 7d), jonka aikana juoksupyörä poistettiin. Tämän toimettomuusjakson jälkeen joillekin hiirille määrättiin uudelleenaktivoiva harjoitus, joka sisälsi 2D-pääsyn juoksupyöriin (katso kuva 1).

2.3. Hiiren kiimajakson vaiheen tunnistaminen

Kiimasyklin vaiheita seurattiin ja tarkkailtiin suunnilleen samaan aikaan (~ 10.00) päivittäin, ensimmäisestä pyörän käyntipäivästä alkaen. Sekä visuaalinen arviointi että emättimen närästys suoritettiin kerran päivässä, kuten ovat kuvanneet McLean et ai. (2012) sekä Ajayi jaAkhigbe (2020). Pipetillä otettiin märät emättimen täplät 5 ul:aan suolaliuosta.

Pseudoraskausvaikutusten estämiseksi (Adler & Zoloth, 1970) pipetin kärki asetettiin huolellisesti, jotta se ei tunkeutuisi emättimen aukkoon. Keräysneste asetettiin lasilevylle ja ilmakuivattiin huoneenlämpötilassa. Kun sively oli täysin kuiva, objektilasit värjättiin 0,1-prosenttisella kristallivioletilla (McLean et al., 2012). Sytologinen arviointi suoritettiin vastaavasti kiiman syklin vaiheiden tunnistamiseksi (katso kuva 2E).

2.4. Subthreshold Object-Location -muisti (OLM) -tehtävä

2.4.1. Laitteisto – Kynnyksen aliarvoinen, 3-minuuttinen objektipaikannusmuisti (OLM) -tehtävä suoritettiin käyttämällä neljän identtisen kammion sarjaa. Jokainen kammio oli valmistettu valkoisesta muovista, jonka mitat olivat 333 mm × 320 mm × 310 mm (pituus × leveys × korkeus) ja sisälsivät ~ 1 cm syviä Sani-Chipsiä (PJ Murphy Forest Products). Jokaisen kammion toiselle puolelle kiinnitettiin pystysuora mattapintainen mustamerkkinauha toimimaan tilanavigointivihjeenä. Jokainen konteksti valaistu himmeällä keltaisella valolla (~15 lx). Tutkimuskäyttäytyminen tallennettiin ja pisteytettiin offline-tilassa käyttämällä ANY-labyrinttiseurantaohjelmistoa (Stoelting Co.).

2.4.2. Kokeellinen suunnittelu – OLM-koulutus, testaus ja analyysi suoritettiin Vogel-Ciernian et al. (2015), jonka hankinnan kesto on säädetty 3 minuuttiin, jonka olemme aiemmin osoittaneet olevan koodauksen alakynnys, mikä johtaa huonoon suorituskykyyn sekä lyhyt- että pitkäaikaisessa muistissa (Butler et al., 2019; Intlekofer et al., 2013; Malvaez et ai., 2013; McQuown et ai., 2011). Ennen OLM-koulutusta hiiriä käsiteltiin ja sitten totutettiin kokeelliseen kontekstiin. Hiiriä käsiteltiin 2 minuuttia päivässä 4 peräkkäisenä päivänä, ja viimeiset 2 päivää olivat päällekkäisiä tottumisen kanssa. Tottuminen tapahtui 6 päivän aikana, jonka aikana hiiret altistettiin kokeelliselle kontekstille 5 minuuttia päivässä. Tottumisistunnot analysoitiin (kuljetun matkan ja nopeuden määrittämiseksi) ANY-labyrintti käyttäytymisanalyysiohjelmistolla. Vähentynyt aktiivisuus päivien aikana käytettiin onnistuneen tottumisen indikaattorina (lisäkuva S1, S2). Harjoitusohjelmasta riippumatta juoksupyörät poistettiin iltana ennen OLM-harjoitusta, jotta pyörän juoksemisen välittömät vaikutukset käyttäytymiseen eliminoitiin.

Totuttelun jälkeen hiiret saivat 3-minuutin keräysistunnon, jossa kaksi identtistä esinettä (100- ml sementillä täytetty dekantterilasi) asetettiin eri paikkoihin (sijainti A1, vasen yläkulma, ioni A2, oikea yläkulma). Esineet sijoitettiin 9 cm etäisyydelle toisistaan, 6 cm sivuseinistä ja 1 cm etuseinästä. Pitkäkestoisuuden arvioimiseksi hiirille tehtiin 5 minuutin testi, 24 tuntia harjoituksen jälkeen, jonka aikana yksi tuttu esine (vastapainotettu) siirrettiin uuteen paikkaan (sijainti A3, pohja keskellä) 2,5 cm pohjaseinästä. Tarkasteltiin kohteen tutkimista romaanissa (sijainti A3) vs. tuttu/kiinteä sijainti (A1).

Tutkimus pisteytettiin vain, kun hiiren pää osoitti kohdetta ja oli 1 cm:n etäisyydellä tai kun nenä kosketti kohdetta. Tutkimuksen kokonaisaika kirjattiin (t) ja uuden kohteen suosiminen ilmaistiin erotteluindeksinä (DI=( romaani −tuttu) / (romaani + tuttu) × 100%). Harjoitteluistunnoissa testiistunnon aikana siirrettäväksi tarkoitettua kohdetta käytettiin uutena objektina, jotta harjoitus- ja testaus-DI:tä voitiin verrata suoraan.

Hiiret jotka tutkivat<2 s during testing or training were excluded from the study. Mice that showed a preference for either object during training (DI > ± 20) were also excluded. All habituation, training, test, and scoring were performed by experimenters blinded to the experimental groups. Mice were sacrificed 60 min after the test and the dorsal hippocampi were dissected and stored at −80 °C until processing for RT-qPCR.

For more information:1950477648nn@gmail.com