Tutkimus perinteisen kiinalaisen lääketieteen monomeerien terapeuttisista vaikutuksista ja mekanismeista myöhään alkaneen hypogonadismin rottamallilla

 

Abstrakti

Tavoite
Arvioida kolmen perinteisen kiinalaisen lääketieteen (TCM) monomeerin terapeuttisia vaikutuksia ja mekanismeja.icariin, verbascoside, jaginsenosidi Rg1- päällämyöhään alkava hypogonadismi (LOH)rottamallissa ja tutkia niiden potentiaalialuonnolliset interventiot ikääntymiseen liittyvään testosteronin laskuunkeski-ikäisillä miehillä.

menetelmät
Myöhään alkavan hypogonadismin (LOH) malli perustettiin iäkkäillä miehilläSprague-Dawley-rotatintraperitoneaalisella injektiollasyklofosfamidi, simuloi androgeenin puutetta. Kolme TCM-monomeeriäicariin, verbascoside, jaginsenosidi Rg1- annettiin suun kautta 60 päivän ajan.

Hoidon lopussa mitattiin ruumiinpaino ja lisääntymiselinten (kivekset, lisäkives, siemenrakkulat jne.) painot.Histopatologiset muutoksetkiveskudoksessa arvioitiin käyttämällähematoksyliini-eosiini (H&E) -värjäys. Seerumin tasotFSH, LH, jatestosteronitestattiin kauttaELISA. Ilmaisuandrogeenireseptori (AR)proteiini ja mRNA arvioitiin käyttämälläWestern blotjakvantitatiivinen reaaliaikainen PCR (qRT-PCR).

 

 

 

Tulokset

Ginsenoside Rg1osoitti merkittävin parannus vuonnakehon painojalisääntymiselinten paino(P < 0,01).

Icariinlisäsi painoa merkittävästikivekset, epididymis, jasiemenrakkulat(P < 0,01).

Verbascosidekohtalaisen parantunut siemenrakkuloiden paino (P < 0,05).

Kaikki kolme TCM-monomeeriä tehokkaastikäänteinen kivesten rappeumaLOH-rotissa siementiehyiden rakenteen palauttaminen ja niiden lukumäärän lisääminenspermatogeenisiä solujajakypsä siittiö.

Kaikki monomeeriryhmät osoittivat kykynsäalentaa seerumin FSH- ja LH-tasojasamalla kunnostaa seerumin testosteronia. Theicariin ryhmäosoittivat merkittävimmät endokriiniset parannukset (P < 0,01).

Ilmaisutasotandrogeenireseptori (AR)sekä proteiinissa että mRNA:ssa säädeltiin merkittävästi kaikissa käsitellyissä ryhmissä. Vaikutusicariinoliselvempi kuin testosteronipropionaatti, joka osoittaa avoimakas säätelyvaikutus AR-signalointiin.

 

Johtopäätös

Tämä tutkimus viittaa siihenginsenosidi Rg1on tehokkain parantamisessakehon ja elinten painoLOH-rotissa, kun taasicariinnäyttää voimakkaimman vaikutuksenlisää testosteronin tuotantoajaparantaa AR-ilmaisua. Kaikki kolme monomeeriaicariin, verbascoside, jaginsenosidi Rg1-osoittisuojaavia vaikutuksia kivesten rappeutumista vastaanjatukea miehen lisääntymiskykyä endokriinistä toimintaa, joka tarjoaa lupaavia luonnollisia vaihtoehtoja hoitoonikään liittyvä hypogonadismi.

 

Avainsanat

myöhään alkava hypogonadismi (LOH); Icariin; Verbascoside; ginsenosidi Rg1; Perinteinen kiinalainen lääketiede; Luonnollinen testosteronin tehostin; Ikääntyvän miehen oireyhtymä; Androgeenireseptorin ilmentyminen; Yrttiterapia miesten terveydelle

Napsauta kuvaa saadaksesi lisätietoja TCM-yrtteistä seksuaaliterveyteen

 

 

Tausta

Myöhäinen hypogonadismi (LOH)keski-ikäisillä ja vanhuksilla miehillä liittyy läheisestiikään liittyvä androgeenitason lasku, erityisesti testosteroni. Vuoden 2021 väestöpohjainen epidemiologinen tutkimus tehtiin kuudessa Kiinan edustavassa provinssissa6 296 40–79-vuotiasta miestä, paljasti seuraavat LOH:n esiintyvyysluvut:

3.2%50-vuotiailla miehillä

11.2%60-vuotiaana

24.0%70-vuotiaana [1]

LOH:lle on ominaistaalentunut seerumin testosteroniyhdessä tähdistön kanssaandrogeenin puutteen oireitakuten:

Matala libido

Erektiohäiriöt

Masennus ja ärtyneisyys

Kognitiivinen heikkeneminen ja muistin menetys

Nämä oireet voivatheikentää merkittävästi fyysistä ja henkistä hyvinvointia, samoin kuinelämänlaatua [2–3].

Tällä hetkellä,testosteronikorvaushoito (TRT)on LOH:n yleisin hoitomuoto ja voi väliaikaisesti lievittää oireita. Kuitenkin huoliasydän- ja verisuoniriski, eturauhasen terveys, japitkäaikaista turvallisuuttajää [4]. Siksi kiinnostus tutkimista kohtaan kasvaaluonnollisia, turvallisempia vaihtoehtoja, varsinkin alkaenPerinteinen kiinalainen lääketiede (TCM).

Tämän tutkimuksen tarkoituksena on arvioidaterapeuttisia vaikutuksia ja mekanismejakolmesta TCM-monomeeristäicariin, verbascoside, jaginsenosidi Rg1- käyttämällä aLOH:n rottamalli.

 

1. Materiaalit ja menetelmät

1.1 Koeeläimet

Kuusikymmentä15 kuukauden ikäiset urospuoliset Sprague-Dawley (SD) -rotat(700–800 g) saatiin tammikuussa 2022 Kiinan Three Gorges Universityn eläinkoekeskuksesta. Lisenssinumerot:

Eläintodistus: Ei. 42010200007997

Tuotantolisenssi: SCXK (E) 2022-0012

Rotat pidettiin kontrolloidussa ympäristössä (lämpötila: 19–23 astetta, suhteellinen kosteus: 55–65 %), joissa oli luonnollinen valo-pimeä kierto ja vapaa pääsy ruokaan ja veteen. Jälkeen1 viikko sopeutumista, kokeilut alkoivat.

1.2 Reagenssit ja instrumentit

Syklofosfamidi(Nanjing Jiancheng)

Icariin(Nanjing Guangrun Biotech)

Ginsenoside Rg1(Shanghai Macklin)

Verbascoside(Shanghai Zhenzhun Biotech)

AR-vasta-aine(Santa Cruz, USA)

- aktiini vasta-aine(Sigma, USA)

H&E värjäyssarjat(Shanghai Yiji Industrial)

ELISA-sarjat seerumin FSH:lle, LH:lle ja testosteronille(Shanghai Meilian)

qRT-PCR-reagenssit (SYBR Green I)(Shanghai Julu Biotech)

Instrumentit: Termomikrolevylukija, Olympus-optinen mikroskooppi, LI-COR Odyssey -kuvausjärjestelmä, ABI qRT-PCR-laite

 

1.3 Eläinten ryhmittely ja LOH-mallin induktio

Rotat jaettiin satunnaisesti6 ryhmää (n=10 ryhmää kohti):

Kontrolliryhmä:

Intraperitoneaalinen (ip) injektio 0,9 % suolaliuosta 5 päivän ajan

Oraalinen suolaliuos (1 ml/100 g) 60 päivän ajan

Malliryhmä:

ip syklofosfamidi 20 mg/kg/vrk 5 päivän ajan

Sen jälkeen oraalinen suolaliuos 60 päivän ajan

Testosteronipropionaatti (positiivinen kontrolli):

ip syklofosfamidi (sama kuin yllä)

Testosteronipropionaatin ihonalainen injektio 5 mg/kg/vrk 7 päivän ajan

Icariin ryhmä:

ip syklofosfamidi (sama)

Suun kautta otettava icariin 200 mg/kg/vrk 60 päivän ajan

Verbascoside ryhmä:

ip syklofosfamidi (sama)

Suun kautta otettava verbaskosidi 200 mg/kg/vrk 60 päivän ajan

Ginsenoside Rg1 -ryhmä:

ip syklofosfamidi (sama)

Suun kautta otettava ginsenosidi Rg1 200 mg/kg/vrk 60 päivän ajan

Kaikki hoidot annettiin välillä8.00–11.30. Arvioinnit suoritettiin24 tuntia viimeisen annoksen jälkeen.

 

1.4 Paino ja sukuelinten indeksi

Punnituksen jälkeen rotat lopetettiin kohdunkaulan dislokaatiolla. Thekivekset, lisäkives ja siemenrakkulatleikattiin ja punnittiin.

Yksikivekset jokaiselta rotaltakiinnitettiin4 % paraformaldehydiä72 tunnin ajan, dehydratoitu asteittain alkoholilla, upotettu parafiiniin, leikattu (5 μm) ja värjättyHematoksyliini-eosiini (H&E). Morfologisia muutoksia havaittiin valomikroskopiassa.

 

1.5 Seerumin hormonianalyysit

Rotat nukutettiin3 % pentobarbitaalinatriumiaja verta kerättiin kauttasydänpunktio. Seerumi erotettiinsentrifugointi nopeudella 3000 rpm 10 minuuttia 4 asteessa. Mittaukseen käytettiin ELISA-sarjojaFSH, LH ja testosteronitasot valmistajan protokollien mukaan.

 

1.6 AR Protein Expression (Western Blot)

Kiveskudos hajotettiin ja proteiinipitoisuus mitattiin. Samat määrät proteiinia erotettiin10 % SDS-SIVU, siirretään PVDF-kalvoille ja inkuboidaan primääristen vasta-aineiden kanssaARja-aktiini (1:1000)yön yli. Toissijaista vasta-aineinkubaatiota seurasi kemiluminesenssidetektio.ImageJkäytettiin analyysiin.

 

1,7 AR-mRNA-ekspressio (qRT-PCR)

Kokonais-RNA uutettiin kiveskudoksesta. cDNA syntetisoitiin käänteistranskriptiolla. qRT-PCR suoritettiin käyttämällä SYBR Green -menetelmää.

AR-alukkeet:

Eteenpäin: 5′-CAGGGACCA CGTTTTACCCA-3′

Käänteinen: 5′-TTCCCTTCCGCAGCTCTTTT-3′

- aktiinialukkeet (sisäinen kontrolli):

Eteenpäin: 5′-CCACCATGTACCCAGGCATT-3′

Käänteinen: 5′-CGGACTCATCGTACTCCTGC-3′

Lämpökierto: 95 astetta 15 minuutin ajan (esidenaturointi), jota seuraa 40 sykliä 95 astetta 15 s ja 60 astetta 1 min. Tiedot analysoitiin käyttämällä2^-ΔΔCtmenetelmä.

 

1.8 Tilastollinen analyysi

Tiedot analysoitiin käyttämälläSPSS 26.0.

Tulokset esitetään muodossakeskiarvo ± keskihajonta (x̄ ± s)

t-testikäytettiin kahden ryhmän vertailuissa

Yksisuuntainen ANOVAkäytettiin useiden ryhmien vertailuihin

P < 0,05pidettiin tilastollisesti merkittävänä