Tutkimus Cistanche Deserticolan kokonaisglykosidien suojamekanismista alkoholin aiheuttamia vaurioita vastaan ensisijaisesti viljellyissä hiiren maksasoluissa
Jun 04, 2025
Tavoite:
Tutkia Cistanche deserticolan kokonaisglykosidien suojaavaa vaikutusta primaariviljeltyihin maksasoluihin. Menetelmät: Primaariset hepatosyytit kerättiin in situ -perfuusiomenetelmällä, ja Cistanche deserticolan kokonaisglykosidien vaikutus alkoholin vahingoittamien primääriviljeltyjen maksasolujen eloonjäämisasteeseen arvioitiin MTT-menetelmällä; Cistanche deserticolan kokonaisglykosidien vaikutus primäärisesti viljeltyjen hepatosyyttien ja alkoholin vahingoittamien tumien morfologiaan arvioitiin fluoresenssimikroskopialla; Cistanche deserticolan kokonaisglykosidien vaikutus alkoholin vaurioittamien primääriviljeltyjen maksasolujen apoptoosiin havaittiin virtaussytometrialla; Immunosytokemiallista värjäystä käytettiin havaitsemaan Cistanche deserticolan kokonaisglykosidien vaikutus bcl-2:n ja c-fos:n ilmentymiseen. Tulokset: Alkoholivamman jälkeen primaaristen hepatosyyttien eloonjäämisaste laski, ja apoptoosissa ja nekroosissa oli ilmeisiä muutoksia. Apoptoosia inhiboivan geenin bcl-2 ilmentyminen väheni ja apoptoosia edistävän geenin c-fos ilmentyminen lisääntyi. Cistanche deserticolan kokonaisglykosidit voivat merkittävästi parantaa solujen eloonjäämisnopeutta, parantaa apoptoosia ja nekroosia, tehostaa bcl-2:n ilmentymistä ja estää c-fos:n ilmentymistä. Vaikutus oli annoksesta riippuvainen. Johtopäätös: Cistanche deserticola -glykosidit voivat suojata primaarisesti viljeltyjä hepatosyyttejä lisäämällä apoptoosia estävän geenin bcl-2 ilmentymistä, vähentämällä apoptoosia edistävän geenin c-fos ekspressiota, vähentämällä apoptoosia ja nekroosia ja lisäämällä solujen eloonjäämisastetta.
Avainsanat: Cistanche deserticolan kokonaisglykosidit; Ensisijainen kulttuuri; hepatosyytti; Alkoholin aiheuttama maksavaurio; Apoptoosi
Cistanche-uutejauhe
Viime vuosina ihmisten elintaso on kohentunut, ja alkoholin kulutus on lisääntynyt nopeasti, ja siihen on liittynyt erilaisten alkoholiperäisten sairauksien lisääntyminen, ja alkoholiperäinen maksavaurio on yksi tärkeimmistä ongelmista. Tutkimukset ovat osoittaneet, että Cistanche deserticolalla on suojaavia vaikutuksia, jotka parantavat immuunitoimintaa, ikääntymistä, säteilyä, hapettumista, lipidien peroksidaatiota ja alkoholin aiheuttamaa maksavauriota [1]. Glykosidit ovat Cistanche deserticolan tärkeimmät vaikuttavat aineet.Aiemmissa kokeissa on eläinkokeilla varmistettu, että Cistanche deserticolan kokonaisglykosidit voivat vähentää vapaiden radikaalien tuotantoa, tehostaa vapaiden radikaalien ja niiden aineenvaihduntatuotteiden poistokykyä ja estää siten lipidien peroksidaatiota ja toimia suojaavana roolina alkoholin aiheuttamassa maksavauriossa.[2]. Tässä kokeessa tutkitaan Cistanche deserticolan kokonaisglykosidien suojaavaa vaikutusta alkoholiperäiseen maksavaurioon solutasolla maksasolujen primääriviljelmän kautta.
1. Materiaalit ja menetelmät
1.1 Reagenssi ja instrumentti Cistanche deserticolan kokonaisglykosidit, tummanruskea jauhe, jonka tarjoaa Lanzhoun yliopiston farmasian koulu, sisältää 88,6 % fenyylietanolin glykosideista. Liuota kahdesti tislattuun veteen ja laimenna viljelyliuos vaadittuun pitoisuuteen. Entsyymimarkkeri (Beckman Coulter AD340), fluoresenssimikroskooppi (Olympus, BX51), käänteisfaasikontrastimikroskooppi (Leica DMI3000B), virtaussytometria (Beckman colter cell, CellLabQuanta SC) jne.
Cistanche-jauhe
Napsauta tästä nähdäksesi Cistanche deserticola suojaa maksatuotteita
【Kysy lisää】 Sähköposti: xue122522@foxmail.com / WhatsApp: 0086 18599088692 / Wechat: 18599088692
1.2 Primaariset hepatosyytit eristettiin ja viljeltiin in situ -perfuusiomenetelmällä [3].
Yksi Kunming-hiiri nukutettiin 0,5-prosenttisella pentobarbitaali-0,5 ml:n vatsaontelonsisäisellä injektiolla. Rutiininomaisen ihon desinfioinnin jälkeen avaa vatsa, siirrä maha-suolikanavaa vasemmalle, paljasta porttilaskimo, puhkaise infuusiolaitteen infuusioneula varovasti porttilaskimon kauimmasta päästä ja sido ja kiinnitä se. Käännä infuusiosarjan virtaus maksimiin (noin 4 ml/min) ja pudota kalsiumiton esiperfuusioliuos esilämmitettynä 37 asteeseen. Kun maksa on turvonnut, leikkaa alemman onttolaskimon distaalinen pää nopeasti pois ja purista alemman onttolaskimon proksimaalista päätä ajoittain niin, että maksa vuorotellen vetäytyy sisään ja laajenee. Kun jäännösveri huuhtoutuu pois ja maksa on tasaisen keltaista ja valkoista, lämmintä 0,05 % kollagenaasi (Sigma) -perfuusioliuosta käytetään ruoansulatusperfuusioon. Ruoansulatus pysähtyy, kun maksa muuttuu pehmeäksi ja joustamattomaksi, maksakapselin alle ilmaantuu pieniä tyhjiä tai jopa maksakudokseen tulee halkeamia. Irrota maksa varovasti, siirrä se steriilille levylle, joka sisältää oikean määrän korkeasokerista DMEM-viljelyalustaa (Sigma), irrota maksan kuori ja ravista sitä varovasti, sitten hajoa maksasolut elatusaineeseen, kerää ne kartiomaiseen putkeen, ravista ja viljele 10 minuuttia (värähtelytaajuus on 100 astetta/min), 1000 r/min) ja hävitä supernatantti. Solut suspendoitiin elatusaineeseen, suodatettiin 200 meshin nylonverkolla ja suodos sentrifugoitiin toistuvasti 3 kertaa (4 astetta, 1000 r/min) maksan parenkyymasolujen saamiseksi. Säädä solukonsentraatio arvoon 5 × 106 solua/ml, inokuloi ne 25 ml:n viljelypulloon, joka on esikäsitelty rotan hännän kollageenilla, ja inkuboi niitä sitten 37-asteisessa 5 % CO2-inkubaattorissa. Vaihda liuos 24 tunnin kuluttua, hävitä kiinnittymättömät solut ja jatka viljelyä myöhempien kokeiden käyttöä varten.
1.3 Primäärisesti viljeltyjen hiiren hepatosyyttien kasvukäyrän määrittäminen
Säädä puhdistetut maksasolut arvoon 5 x 106 solua/ml, siirrosta ne 24-kuoppaiselle levylle ja 1 ml solususpensiota siirrostettiin jokaiseen kuoppaan. Yhteensä 21 kuoppaa ympättiin, ja DMEM-korkean sokerin viljelyalustaa, joka sisälsi 10 % naudan sikiön seerumia (Sigma), viljeltiin 7 päivää. Tee 3 reikää satunnaisesti joka päivä, sulata ja puhalla 0,25 % trypsiiniä tasaisesti, laske laskentataululla ja piirrä kasvukäyrä
1.4 Alkoholisten hepatosyyttivauriomallin luominen.
Yllä olevalla menetelmällä saadut logaritmiset hepatosyytit siirrostettiin 96-kuoppaiselle levylle, joka oli esikäsitelty rotan häntäkollageenilla, ja 100 solua siirrostettiin kuhunkin kuoppaan 50 µl:lla. DMEM-viljelyalustaa, jossa oli 10 % naudan sikiön seerumia, viljeltiin 24 tuntia ja sitten vaihdettiin vielä 24 tuntia. Perustettiin tyhjä ryhmä ja viisi alkoholiinterventioryhmää (50, 75, 100, 125, 150 mmol/L) ja jokainen ryhmä perustettiin viidellä toistolla. Kun hepatosyyttejä oli viljelty eri alkoholipitoisuuksilla 24 tuntia, 0,5 % MTT (Sigma) 20 lisättiin jokaiseen kuoppaan μ 50 μl. Jatka viljelyä 4 tuntia, hävitä supernatantti ja lisää DMSO 150 jokaiseen kuoppaan μ 50. Laita se ravistelupöytään ja sekoita 15 minuuttia, mittaa absorbanssiarvo aallonpituudella 570 nm ja laske solujen eloonjäämisaste. Annettavan ryhmän/verrokkiryhmän solujen eloonjäämisprosentti × 100 %
1.5 Cistanche deserticolan kokonaisglykosidien vaikutus primääriviljeltyjen hepatosyyttien eloonjäämisasteeseen
Alkoholin aiheuttama loukkaantuminen. Rotan hännän kollageenilla esikäsitellylle 96-kuoppaiselle levylle siirrostetaan edellä olevilla menetelmillä saadut maksasolut ja siirrostetaan kuhunkin kuoppaan 100 µl tai 50 µl. DMEM-viljelyalustaa, jossa oli 10 % naudan sikiön seerumia, viljeltiin 24 tuntia ja sitten vaihdettiin. Toisen 24 tunnin kuluttua antoryhmään lisättiin GC:t, joiden lopullinen pitoisuus oli 0,2, 0,4 ja 0,8 g/l. Etanolimalliryhmä ja nollaryhmä jatkoivat viljelyä lisäämättä lääkkeitä, ja jokaiseen ryhmään asetettiin viisi monikuoppaa. 24 tunnin kuluttua malliryhmään ja GCs-interventioryhmään lisättiin alkoholia, jonka lopullinen pitoisuus oli 100 mmol/l. 12 tunnin viljelyn jälkeen solujen eloonjäämisaste mitattiin MTT-menetelmällä.
1.6 Cistanche deserticolan kokonaisglykosidien vaikutus primääriviljeltyjen hepatosyyttien ja alkoholin vahingoittamien ytimien morfologiaan
Aseta esisteriloitu kansilasi 6-kuoppaiselle levylle, jonka inokulaatiokonsentraatio on 5 x 106 solua/ml solususpensiota, malliryhmä, Cistanche deserticola -ryhmä (0,2, 0,4, 0,8 g/l) ja nollaryhmä. 24 tunnin viljelyn jälkeen lisää 100 mmol/l alkoholia lopulliseen pitoisuuteen. 24 tunnin viljelyn jälkeen ota 95-prosenttinen etanoli lasilevyltä ja kiinnitä se 15 minuutiksi. PBS pestään kahdesti ja dispergoidaan sitten uudelleen PBS:ään. Säädä solukonsentraatio arvoon 5 × 104 solua/ml, lisää 10 μl akridiinioranssi-etylideenibromidi-seosta (Sigma) (0,01 μ G/ml akridiinioranssiliuosta, 0,02 μ G/ml prometatsiiniliuosta, fluoresoiva 0 havaittu, sekoitettu tilavuussuhde: 1/1). mikroskoopilla.
1.7 Cistanche deserticolan kokonaisglykosidien vaikutus alkoholin vahingoittamien primääriviljeltyjen hepatosyyttien apoptoosiin
Säädä digestoidun solususpension tiheys arvoon 5 × 106 solua/ml, ympätään kuusikuoppalevylle ja viljellään 24 tuntia. Aseta malliryhmä, cistanche deserticola -ryhmä (0,2, 0,4, 0,8 g/l) ja tyhjä ryhmä. Lisää 24 tunnin viljelyn jälkeen alkoholia lopullisella pitoisuudella 100 mmol/L, inkuboi 24 tuntia, sulata ja kerää solut, pese ne kahdesti PBS:llä, kiinnitä ne 4 asteeseen yön yli 70 % esijäähdytetyllä etanolilla, pese ne kahdesti PBS-liuoksella, lisää RNA-entsyymi (Sigma), PI (100 μS) veteen ja laita haude (100 μS G/7m) 30 min. Apoptoosinopeus mitattiin virtaussytometrialla.
1.8 Cistanche deserticolan kokonaisglykosidit voivat estää alkoholin, bcl-2:n ja pro-apoptoottisen geenin c-fos vaurioittamien primääriviljeltyjen maksasolujen apoptoosia
Fos-ilmentymisen vaikutus otettiin kolmelta kuuden kuopan viljelylevyltä, joista jokainen oli kolmen kuopan ryhmä. Perustettiin malliryhmä, Cistanche deserticola -ryhmä (0,2, 0,4, 0,8 g/l) ja nollaryhmä. Kuhunkin reikään laitettiin yksi steriili objektilasi. Logaritmisen kasvuvaiheen solut otettiin ja trypsiinidigestiota käytettiin yksisolususpension valmistukseen, ja solutiheys säädettiin arvoon 5 x 106/ml ja ympättiin 6-kuoppalevylle, 2 ml/kuoppa. 24 tunnin viljelyn jälkeen lisää alkoholia, jonka lopullinen pitoisuus on 100 mmol/L, ja jatka viljelyä 24 tuntia. Ota soluja täynnä olevat objektilasit ulos, pese ne PBS:llä kahdesti ja värjää ne rutiininomaisella immunohistokemiallisella ABC-menetelmällä. Lyhyet vaiheet ovat seuraavat: kiinnitä ne 40-prosenttisella paraformaldehydillä 10 minuutiksi, sulje ne normaalilla lampaan seerumilla 30 minuutiksi, pudota ja lisää polyklonaalinen bcl-2-vasta-aine (Invitrogen) (1:75) tai c-fos-polyklonaalinen vasta-aine (Invitrogen) (1:50), reagoida huoneenlämmössä A125 tuntia, lisää väriä huoneenlämmössä 12 tuntia. DAB ja sulje ne gelatiinilla. Bcl-2- ja c-fos-proteiinin ilmentymistä verrattiin valomikroskopialla ja valokuvauksella.
1.9 Tilastollinen käsittely Kokeelliset tiedot käsiteltiin SPSS 13.5 -ohjelmistolla. Se ilmaistaan keskiarvona ± standardipoikkeama (x ± s), ja ryhmien väliseen vertailuun käytetään t-testiä. P<0.05 indicates that the difference is statistically significant.
2 tulosta
2.1 Primaariviljeltyjen hiiren hepatosyyttien kasvukäyrä on esitetty kuvassa 1. Voidaan nähdä, että hepatosyyttien määrä kasvoi inkubaatioajan myötä ja siirtyi logaritmiseen kasvuvaiheeseen 4. päivänä.
2.2 Alkoholin eri pitoisuuksien vaikutus primääriviljeltyjen hiiren maksasolujen eloonjäämisasteeseen
Taulukosta 1 voidaan nähdä, että alkoholilla on voimakas vauriovaikutus primaariviljeltyihin maksasoluihin ja vaikutus on annoksesta riippuvainen. Testin tarpeiden mukaan seuraavassa testissä käytetään työpitoisuutena 100 mmol/L ja solujen eloonjäämisaste on 43,40 %.
2.3 Cistanche deserticolan kokonaisglykosidien vaikutus alkoholin vahingoittamien primääriviljeltyjen maksasolujen eloonjäämisasteeseen
Voidaan nähdä taulukosta 2. Alkoholivamman jälkeen hepatosyyttien eloonjäämisaste on laskenut merkittävästi. Cistanche deserticolan kokonaisglykosidit voivat lisätä merkittävästi hepatosyyttien eloonjäämisastetta (P<0.05), and the effect is dose-dependent (P<0.05).
aavikon ginseng
2.4 Cistanche deserticolan kokonaisglykosidien vaikutus primääriviljeltyjen hepatosyyttien ja alkoholin vahingoittamien ytimien morfologiaan.
Atsidiinioranssi näyttää vihreää fluoresenssia soluihin joutuessaan, kun taas prometatsiini voi värjätä vain nekroottiset solut, joiden solukalvo on epätäydellinen. Havainnon avulla (kuva. 2) havaittiin, että nollaryhmän maksasolut olivat tasaisesti vihreitä, eikä nekroottisissa soluissa ollut brominpunaista värjäytymistä (A); Alkoholikäsittelyn jälkeen hepatosyytit pienenivät ja ilmestyi suuri määrä brominpunaisella värjättyjä nekroottisia soluja ja apoptoottisia soluja, joiden ytimessä oli kromatiinipitoisuus (ydin oli kirkkaan vihreä) (B). Siksi uskotaan, että alkoholi voi myös aiheuttaa solunekroosia samalla kun se indusoi hepatosyyttien apoptoosia. GC:t voivat vähentää merkittävästi nekroosia ja apoptoosia, ja vaikutus korreloi positiivisesti annoksen kanssa (C, D, E).
Kuva. 2 Havainto Cistanche deserticolan kokonaisglykosidien vaikutuksesta ensisijaisesti viljeltyjen maksan tumien morfologiaan fluoresenssimikroskoopilla (akridiinioranssi värjäys, 400)
V: Tyhjä ryhmä; B: Malliryhmä; C:0.2g/L-GCs; D:0.4g/L-GCs; E:0.8g/L-GC
2.5 Cistanche deserticolan kokonaisglykosidien vaikutus alkoholin vahingoittamien primääriviljeltyjen maksasolujen apoptoosiin
Cistanche-uutejauhe
Kuten kuvasta 3-B voidaan nähdä, hepatosyyttien apoptoosinopeus alkoholivaurion jälkeen on lisääntynyt merkittävästi (34,7 %), ja Cistanche deserticolan kokonaisglykosidit voivat merkittävästi lisätä maksasolujen eloonjäämisnopeutta annoksesta riippuvalla tavalla, mikä on yhdenmukainen fluoresenssimikroskoopilla havaittujen tulosten kanssa.
Kuva. 3 Cistanche deserticolan kokonaisglykosidien vaikutus alkoholin vahingoittamien primaarisesti viljeltyjen maksasolujen apoptoosiin
V: Tyhjä ryhmä; B: Malliryhmä; C:0.2g/L-GCs; D:0.4g/L-GCs; E:0.8g/L-GC
Immunosytokemian avulla havaittiin, että apoptoosia inhiboivan tekijän bcl-2:n ilmentyminen väheni (4-B) ja c-fos:n ilmentyminen lisääntyi (5-B) sen jälkeen, kun maksasolut olivat vaurioituneet alkoholin vaikutuksesta. Cistanche deserticolan kokonaisglykosidit voivat merkittävästi lisätä bcl-2:n (4-C, D, E) ilmentymistä ja estää c-fos:n (5-C, D, E) ilmentymistä. Tulokset näkyvät kuvassa. 4-5.
Kuva. 4 Cistanche deserticolan kokonaisglykosidien vaikutus bcl-2:n ilmentymiseen alkoholin vahingoittamissa primääriviljeltyissä maksasoluissa (400)
V: Tyhjä ryhmä; B: Malliryhmä; C:0.2g/L-GCs; D:0.4g/L-GCs; E:0.8g/L-GC
Kuva. 5 Cistanche deserticolan kokonaisglykosidien vaikutus c-fos:n ilmentymiseen alkoholin vahingoittamissa primääriviljeltyissä maksasoluissa (400)
V: Tyhjä ryhmä; B: Malliryhmä; C:0.2g/L-GCs; D:0.4g/L-GCs; E:0.8g/L-GC
3 Keskustelu
kiinalainen yrtti cistanche
Berry et ai. Ensin perustettiin in situ -perfuusiomenetelmä, jossa käytetään kollagenaasia maksan perfusoimiseksi maksasolujen saamiseksi fysiologisissa olosuhteissa, ja sen myöhemmin kehittivät Seglen et ai. [4] tehdä tästä kollagenaasiperfuusioteknologiasta täydellisempää. Tällä menetelmällä on korkea solusaanto ja korkea eloonjäämisaste. Tässä kokeessa primaariset hepatosyytit saatiin hiiren hepatosyyttien in situ -perfuusiolla ja niitä viljeltiin. Menetelmä oli stabiili ja solujen aktiivisuus oli voimakasta. Kasvukäyrätestin avulla havaittiin, että saadut primaariset hepatosyytit tulivat logaritmiseen kasvuvaiheeseen 4 päivän kuluttua.
MTT-kolorimetrinen mikroanalyysi on herkkä menetelmä solujen kasvun ja eloonjäämisen havaitsemiseksi hyvällä toistettavuudella. Sukkinaattidehydrogenaasi elävien solujen mitokondrioissa voi pelkistää keltaisen MTT:n sinivioleteiksi kiteiksi, kun taas kuolleilla soluilla ei ole tällaista toimintaa [5]. Solujen aktiivisuus voidaan heijastaa mittaamalla optinen tiheys. Tässä kokeessa MTT-menetelmällä havaittiin, että hepatosyyttien eloonjäämisprosentti alkoholivamman jälkeen väheni merkittävästi ja Cistanche deserticolan kokonaisglykosidit saattoivat merkittävästi lisätä maksasolujen eloonjäämisprosenttia (P<0.05), and the effect was dose-dependent (P<0.05).
Apoptoosi on erityinen solukuoleman muoto. Kun solut läpikäyvät apoptoosin, tapahtuu erityisiä morfologisia ja biokemiallisia muutoksia [6-8]. Kokeessa varmistui, että suurin osa maksasoluista oli apoptoottisia alkoholihoidon jälkeen ja soluissa ilmeni selviä morfologisia muutoksia, jotka olivat seuraavat: solut pienenivät, solupinnan mikrovillit katosivat, solupinta kutistui, ilmaantui tyhjiöitä, tuman kondensaatiota ja apoptoottisten kappaleiden muodostumista; Siihen liittyy nekroosi. Cistanche deserticolan kokonaisglykosideilla käsittelyn jälkeen apoptoosinopeus laski merkittävästi ja myös nekroositilanne helpotti.
Bcl-2-geeni on proto-onkogeeni. Tällä hetkellä on löydetty viisi bcl-2-geeniperhettä (bcl-2, bcl-2 x, bax, mcl-1 ja A1), joissa bcl-2 voi estää ohjelmoitua solukuolemaa (PCD). Mekanismin työhön voi kuulua: (1) Ca2+. vapautumisen estäminen Bcl-2 on transmembraaninen proteiini, joka sijaitsee pääasiassa tuman kalvolla. Sisempi ja ulompi tumakalvo on yhdistetty endoplasmisen retikulumin ontelolla. Jälkimmäinen on tärkein solunsisäisen Ca2+ varastointipaikka, jolla on tärkeä rooli solujen apoptoosiprosessissa. Siirtogeenisiä menetelmiä käyttäen havaittiin, että bcl-2:n korkea ekspressio voisi estää Ca2+:n vapautumisen endoplasmisesta retikulumista, joten oletettiin, että bcl-2:n apoptoosia estävä vaikutus voisi liittyä Ca2+-pitoisuuteen endoplasmisessa retikulumissa [9]. (2) Bcl-2:lla on anti-apoptoottinen rooli estämällä pro-apoptoottisten geenien signaalinsiirto tai estämällä näitä indusoituvia geenituotteita. Tutkimukset ovat osoittaneet, että bcl-2-proteiini voi estää P53:n ja c-fos:n indusoimaa apoptoosia [10]. (3) Bcl-2:lla voi olla anti-apoptoottinen rooli estämällä vapaita radikaaleja. Bcl-2:lla on antioksidantin rooli, joka voi estää superoksidin tuotantoa ja toimintaa, mikä estää apoptoosin esiintymistä [11].
Varhaiset välittömät geenit (IEG) ovat geenejä, jotka ilmestyvät aikaisin ja ovat lyhytkestoisia erilaisten haitallisten ärsykkeiden vaikutuksesta. c-fos on yksi proto-onkogeeneistä, joka sijaitsee kromosomissa 14q21-q31. Se on 9 kb:n DNA, joka koostuu neljästä eksonista ja kolmesta intronista [12]. Perustranskriptio on alhainen, mutta se voidaan laukaista erilaisilla toissijaisilla lähettimolekyylillä nopeaa ja ohimenevää ilmentymistä varten. C-fosin proteiinituote on FOS, ja proto-onkogeenin c-Jun koodaama proteiini on JUN. FOS sisältää leusiinivetoketjun (LZ) [13]. FOS ja JUN muodostavat ytimessä LZ-rakenteen kautta heterodimeerin, jota kutsutaan transkriptiotekijäksi AP-1, joka yhdistyy kohdegeenin AP-1-kohdan kanssa ja toimii ytimen kolmantena lähettinä mahdollistaen kohdegeenin ilmentymisen pitkään [14]. Morgan uskoo, että c-fosin erilaiset ilmaisut osoittavat sen toimintojen monimuotoisuutta ja monimutkaisuutta. Ohimenevä ilmentyminen voi olla osallisena solujen suojauksessa, korjauksessa, uudelleenmuodostumisessa ja regeneraatiossa, kun taas jatkuva yliekspressio liittyy sekundaariseen vaurioon. Näiden kahden ilmaisumekanismi on erilainen. Siksi voidaan katsoa, että IEG:illä, kuten c-fosilla, on kaksoisrooli. Kun korjauspuolustusjärjestelmä on kokonaan estetty, ne osallistuvat apoptoosiin; Kun sitä ei ole estetty, sillä on suojaava vaikutus leesion ympärillä oleviin soluihin ja se osallistuu solujen korjaus- ja regeneraatioprosessiin [15]. WebsterKR käyttää antisense-nukleotideja vähentämään c-fos:n transkriptiota ja ehkäisemään apoptoosin esiintymistä, mikä osoittaa, että c-fosin yli-ilmentyminen liittyy erottamattomasti eri sairauksien esiintymiseen ja kehittymiseen [16].
Tässä kokeessa, kun maksasolut olivat vahingoittuneet alkoholilla, apoptoosia estävän tekijän bcl-2:n ilmentyminen väheni merkittävästi ja c-fos:n ilmentyminen lisääntyi, mikä viittaa siihen, että Cistanche deserticolan kokonaisglykosidit voisivat suojata maksasoluja tehostamalla bcl-2:n ilmentymistä, estämällä c-fosin ilmentymistä, vähentämällä maksasoluvaurioita ja apoptoosia.
