Tutkimus Rouchongrongista (Cistanche Deserticola) peräisin olevan fenyylietanoidiglykosidiuutteen parantavista vaikutuksista lipidiaineenvaihduntaan ApoE:n maksassa - / - Hiiret, joilla on runsasrasvainen ruokavalio ACOX1 - CPT2-ilmentymien säätelyn perusteella

TIIVISTELMÄ Tavoite:Tutkimaanfenyylietanoidiglykosidiuutteen vaikutuksetalkaenCistanche deserticola(PGCD) lipidien aineenvaihduntaan ApoE-/- hiirten maksassa runsasrasvaisen ruokavalion indusoimana. Menetelmät: 70 urospuolista ApoE-/- hiirtä, joita ruokittiin runsasrasvaisella ruokavaliolla, jaettiin 5 ryhmään, malli (MOD) ryhmä, positiivinen kontrolliryhmä, hiirille annettiin atorvastatiinia[20 mg/(kg·d)] + etsetimibeä[20 mg/(kg) ·d)](A + E), PGCD:n pieni-, keski- ja suuriannosryhmät annettiinPGCD[250, 500, 1000 mg/(kg·d)]; muuta 14 urospuolista C57BL/6J-hiirtä, joilla oli achow-ruokavalio, asetettiin normaaliksi kontrolliryhmäksi (CON). 12. viikonloppuna todettiin TG-pitoisuus sekä ALT:n ja AST:n aktiivisuus seerumissa ja maksakudoksessa käyttöohjeiden mukaisesti. Tuore maksakudos homogenoitiin ja rasvahapposyntaasin (FAS), pitkäketjuisen asyyli-CoA-dehydrogenaasin (LCAD) ja glutationiperoksidaasin (GSH - Px) sisältösuperoksididismutaasi (SOD)aktiivisuudet testattiin ELISA-menetelmällä, kun taas malondialdehydin (MDA) ja lipidiperoksidin (LPO) pitoisuudet havaittiin kidmetodilla. Asyylikoentsyymi A oksidaasi 1:n (ACOX1) ja karnitiinipalmitoyylitransferaasi 2:n (CPT2) mRNA-ekspressiot havaittiin RT-PCR-kokeilla.

KLIKKAA TÄSTÄ TIETÄÄN 80 %FENYYLETANOIDIGLYKOSIIDITLUONNOLLINEN ORGAANINEN KISTANKSIUUTE

Wecistanchen tukipalvelu - Kiinan suurin vesisäiliön viejä:

Sähköposti:wallence.suen@wecistanche.com

Whatsapp/Puhelin:+86 15292862950

Osta lisätietoja teknisistä tiedoista:

https://www.xjcistanche.com/cistanche-shop

Tulokset:Toisin kuin malliryhmässä,kolmen annoksen PGCD alensivat kaikki TG-tasojamaksassa ja seerumissa annosriippuvaisella tavalla ja alensi ALT:n ja AST:n aktiivisuutta seerumissa. Kolmen annoksen PGCD vähensi FAS-pitoisuutta annoksesta riippuvaisella tavalla ja nosti LCAD-pitoisuutta maksassa merkittävästi.PGCD edistettyGSH-Px:n ja SOD:n ja SOD:n aktiivisuudet vähensivät MDA- ja LPO-pitoisuuksia maksassa merkittävästi. RT-PCR-kokeet osoittivat, että PGCD nosti ACOX1- ja CPT2-mRNA-tasoja maksakudoksessa.

Johtopäätös:PGCD voi parantaa lipidiaineenvaihduntaa ja oksidatiivista stressivastetta ja vähentää lipidien kertymistä maksakudoksessa säätelemällä ACOX1:n ja CPT2:n mRNA-ilmentymiä.

Avainsanat:Cistanche deserticolan fenyylietanoidiglykosidituote; ACOX1; CPT2;lipidien aineenvaihdunta;oksidatiivista stressiä; ApoE-/- hiiret

Alkoholiton rasvamaksasairaus(NAFLD) on yksi maailman yleisimmistä maksasairauksista, ja sen esiintyvyys on lähes 3 0 % väestöstä. Rasvamaksasairaus lisääntyy Kiinassa 0,594 prosentin vuosivauhtia [1]. NAFLD:n esiintyminen ja kehittyminen liittyvät läheisesti kehon liialliseen kalorien saantiin. Runsasrasvainen ruokavalio johtaa liialliseen rasvan kertymiseen maksaan ja indusoi NAFLD:tä[2], ja sen patogeneesin ensimmäinen vaihe on triasyyliglyserolin (TG) laskeutuminen maksasoluihin[2] 3]. Toistaiseksi ei ole olemassa spesifisiä terapeuttisia lääkkeitä, jotka kohdistuvat NAFLD: n patogeneesiin. Turvallisten, tehokkaiden lääkkeiden löytäminen, joilla on selkeät mekanismit NAFLD:n ehkäisyyn ja hoitoon, on tullut tutkijoiden tärkeäksi tehtäväksi. Cistanche deserticola YC Ma on Orobanchaceae-heimon Cistanche-suvun loistavi. Sen pääkomponentilla, fenyylietanoidiglykosidilla, on elimistön immuunijärjestelmää tehostava, ikääntymistä estävä, säteilyä estävä, hapettumisenestoaine ja hepatoprotektiivinen vaikutus sekä muita vaikutuksia[4-5]. Tämän tutkimuksen tarkoituksena on tehdä alustava tutkimus mekanismistaCistanche deserticolan fenyylietanoidiglykosidit(PGCD) lipidiaineenvaihdunnan parantamisessa.

1 Kokeellinen materiaali

1.1 Koelääkkeet

Cistanche deserticolan mehevät varret (kosteuspitoisuus 8,5 %) ostettiin yhtiöltä Hotan Dichen Pharmaceutical Co., Ltd.; fenyylietanoidiglykosidit (pääkomponentit verbaskosidi ja echinaceaside) (molempien puhtaus > 98 %) ostettiin Mansterilta, Chengdulta, Sichuan Biotechnology Co., Ltd.:ltä; Atorvastatiini: Pfizer Shanghai; Ezetimibe: Merck Pharmaceuticals Co., Ltd.

1.2 Koeeläimet

6-8 viikon ikäiset urospuoliset C57BL/6J-hiiret ja ApoE-/--hiiret, paino (20 ± 2) g, ostettu yhtiöstä Changzhou Cavins Experimental Animal Co., Ltd., lisenssinumero: SCXK (Su) 2016-0010 , 12 h / 12 h valojakso, lämpötila (22 ± 1) astetta, kosteus 50% ~ 60%, vapaa ruoan ja veden saanti. Ennen koetta hiirille annettiin normaaliruokavalio 1 viikon ajan sopeutuakseen. Kaikki eläinten hoito ja kokeet noudattavat Shandongin ensimmäisen lääketieteellisen yliopiston kokeellisen eläineettisen komitean määräyksiä (etiikkanumero: W202107080303).

1.3 Kokeellinen reagentit

Rasvainen rehu: Harlan Teklad; TG-, ALT-, AST-sarjat: Beijing Solebao Biotechnology Co., Ltd.; FAS-, LCAD-sarjat: Shanghai Langton Biotechnology Co., Ltd.; GSH-Px-sarja: Shanghai Jining Biotechnology Co., Ltd.; SOD-, MDA-, LPO-, BCA-sarjat: Nanjing Jiancheng Biotechnology Co., Ltd.; Trizol-sarja: Invitrogen, Carlsbad, CA; ACOX1- ja CPT2-alukkeet: suunnitellut Sangon Bioengineering (Shanghai) Co., Ltd.

1. 4 koeinstrumenttia Hei - VAP Expert Rotary Haihdutin: Saksa

Heidolph; Varioskan LUX monitoiminen mikrolevylukija: ThermoFisher; FD8508 tyhjiöpakastuskuivain: Ilshin, Etelä-Korea; F6/10 homogenisaattori: Shanghai Fluoroco; Agilent1260 korkean suorituskyvyn nestekromatografi, Cary 3500 UV-spektrofotometri: Agilent Technologies Ltd.; Quant studio5RT - PCR-laite: Thermo Fisher Biochemicals, Inc.

2.3.1 Paino ja maksaindeksi

12. viikon lopussa hiiret paastottiin ja punnittiin. Hiiret nukutettiin natriumpentobarbitaalilla ja tapettiin. Maksat kerättiin maksaindeksin laskemiseksi.

2.3.2 Seerumin indikaattorin tunnistus

Ota seerumi ja havaitse seerumin aspartaattiaminotransferaasin (AST) ja alaniiniaminotransferaasin (ALT) aktiivisuudet sarjan toiminnan mukaisesti; BCA määrittää seerumin proteiinipitoisuuden ja havaitsee TG-pitoisuuden.

2.3.3 Maksakudoksen lipidiaineenvaihduntaan liittyvien tekijöiden havaitseminen

Punnitse 4 asteen olosuhteissa sopiva määrä tuoretta maksaa ja homogenoi se PBS:ssä, sentrifugoi (sentrifugin säde 7,5 cm, 3 000 r/min) homogenaattia 1 minuutin ajan, ota supernatantti ja mittaa maksan proteiinipitoisuus. maksakudos BCA:lla. TG-pitoisuus kudoksessa, ELISA-menetelmä rasvahapposyntaasin (FAS) ja pitkäketjuisen asyyli-CoA-dehydrogenaasin (LCAD) havaitsemiseksi maksakudoksesta.

2.3.4 Maksakudokseen liittyvien oksidatiivisten tekijöiden havaitseminen

Punnitse 4 asteen olosuhteissa sopiva määrä tuoretta maksaa ja homogenisoi se PBS:ssä, sentrifugoi homogenaattia (keskipakosäde 7,5 cm, 3 000 r/min) 15 minuuttia, ota supernatantti ja mittaa maksan proteiinipitoisuus. BCA:ta sisältävä maksakudos. Noudata reagensseja Laatikon ohjeet havaitsevat superoksididismutaasin (SOD) ja glutationiperoksidaasin (GSH-Px) aktiivisuudet ja havaitsevat samanaikaisesti malondialdehydi- (MDA) ja lipidiperoksiditasot (LPO).

2. 3. 5 RT-PCR-detektio

ACOX1/CPT2-mRNA:n ilmentyminen maksakudoksessa: Ota sopiva määrä tuoretta maksakudosta, käytä Trizol-pakkausta maksakudoksen kokonais-mRNA:n erottamiseen, käytä MuLV-käänteistranskriptaasia cDNA:n syntetisoimiseen ja käytä cDNA:ta templaattina reaaliaikaisen fluoresenssin kvantitatiivisen arvioinnin suorittamiseen. PCR (Qpcr) havaitseminen. reaktio-olosuhteet olivat: esidenaturointi 95 asteessa 2 minuuttia; denaturointi 95 asteessa 10 s, lämpökäsittely: 60 astetta 30 s, pidennys 72 asteessa 35 s, 34 sykliä ja lopuksi pidennys 72 asteessa 5 minuutin ajan ja reaaliaikainen kvantifiointi automaattisella analysaattorilla. ACOX1- ja CPT2-mRNA-ilmentyminen. Rotor-gene Q -ohjelmisto. 1.7 (Qiagen) käytettiin data-analyysiin ja 2-△△Ct-menetelmää käytettiin mRNA:n ja GAPDH:n suhteellisten tasojen laskemiseen. Jokainen koeryhmä suoritettiin rinnakkain > 3 kertaa. Alukesekvenssit ovat seuraavat: GAPDH, ylävirtaan: 5' - GCCACCC AGAAGACTGTG - 3', alavirtaan: 5' - ATGTAGGCCATGAGGTCCAC - 3'; ACOX1, ylävirtaan: 5' -CGCCACCTT CAATCC AGAGT - 3' alavirtaan: 5' -TCTGCGATGCCAAATTCCCT - 3'; CPT2, ylävirtaan: 5'- TCCTCCTACTC AGGACGCAA - 3' alavirtaan: TTGGGATCTTCCGCTCACAC.

2.4 Tilastolliset menetelmät

Tietojen analysointiin käytettiin SPSS 20.0 tilastollista ohjelmistoa. Mittaustiedot ilmaistiin (x ± s). Ryhmien väliseen vertailuun käytettiin yksisuuntaista varianssianalyysiä. P < 0,05 katsottiin tilastollisesti merkitseväksi eroksi.