Tyrosinaasi-inhibiittoreiden valinta ja karakterisointi Atractylodis Macrocephalae Rhizomasta spektri-aktiivisuussuhteen ja molekyylitelakoinnin perusteella

Copyright © 2021 Yong-Qin Liu et al. 2is on Creative Commons Attribution License -lisenssin alaisena jaettu avoimen pääsyn artikkeli, joka sallii rajoittamattoman käytön, jakelun ja jäljentämisen missä tahansa välineessä edellyttäen, että alkuperäiseen teokseen viitataan asianmukaisesti.

CistancheSen tehtävänä on edistää kollageenin tuotantoa, mikä voi lisätä ihon joustavuutta ja kiiltoa sekä auttaa korjaamaan vaurioituneita ihosoluja.CistancheFenyylietanoli Glykosideilla on merkittävä tyrosinaasin aktiivisuutta hidastava vaikutus, ja vaikutuksen tyrosinaasille on osoitettu olevan kilpailevaa ja palautuvaa estoa, mikä voi tarjota tieteellisen perustan Cistanchen valkaisuaineiden kehittämiselle ja hyödyntämiselle. Siksi cistanchella on keskeinen rooli ihon valkaisussa. Se voiestää melaniinin tuotantoavähentää värjäytymistä ja sameutta; ja edistää kollageenin tuotantoa parantaakseen ihon kimmoisuutta ja hehkua. Koska nämä cistanchen vaikutukset tunnetaan laajasti, monet ihoa valkaisevat tuotteet ovat alkaneet infusoida kasviperäisiä ainesosia, kuten Cistanchea vastatakseen kuluttajien kysyntään, mikä lisää Cistanchen kaupallista arvoaihon valkaisuunTuotteet. Yhteenvetona voidaan todeta, että cistanchen rooli ihon valkaisussa on ratkaiseva. Sen antioksidanttinen vaikutus ja kollageenia tuottava vaikutus voivat vähentää värjäytymistä ja sameutta,parantaa ihon kimmoisuutta ja kiiltoaja saavuttaa siten valkaisuvaikutuksen. Myös Cistanchen laaja käyttö ihonvalkaisutuotteissa osoittaa, että sen roolia kaupallisessa arvossa ei voida aliarvioida.

Napsauta Organic Cistanche valkaisuun

Kysy lisää: david.deng@wecistanche.com WhatApp:86 13632399501

Atractylodis macrocephalus Rhizoma (AMR) on kuuluisa klassinen kiinalainen perinteinen lääketiede (CTM), jota on käytetty monien sairauksien tonicina tuhansia vuosia. Muinaisessa Kiinassa sitä käytettiin palatsin kauneuden lisäravinteena. Esitutkimuksissa havaittiin valkaisevan ihon toiminta ja merkittävä estävä vaikutus tyrosinaasille (TYR), joka on AMR:n melaniinin koostumuksen reaktiivinen entsyymi, ja vastaavaa tutkimusta raportoitiin harvoin. Tässä tutkimuksessa korkean suorituskyvyn nestekromatografiaa (HPLC) ja osittaisen pienimmän neliösumman regressioanalyysiä (PLS) käytettiin tutkimaan kemiallisten aineosien välistä koherenssia ja 11 AMR-erän TYR-aktiivisuutta estävää aktiivisuutta. PLS:n tulokset osoittivat, että kromatografiset piikit 11 (atraktylenolidi III) ja 15 voivat olla tärkeitä tehokkaita ainesosia TYR-aktiivisuuden estämisessä, kuten spektri-aktiivisuussuhteilla varmistetaan. Lisäksi atraktylenolidi III:n TYR:ää estävä aktiivisuus validoitiin in vitro -testillä -arbutiinilla, joka toimi positiivisena kontrollilääkkeenä.Thein vitro -testin ja molekyylitelakan tulokset osoittivat, että atraktylenolidi III:lla on korkea TYR:ää estävä aktiivisuus ja että se voi liittyä TYR-katalyyttitaskussa oleviin tähteisiin.TheSiksi biomääritys, molekyylitelakka ja spektri-aktiivisuussuhteet ovat sopivia yhdistämään näytteiden laatu farmaseuttisiin vaikuttaviin aineisiin. Ja opiskelumme loisi teoreettisen perustan AMR-vesiuutteiden soveltamiselle valkaisukosmetiikassa.

1. Esittely

Tyrosinaasi (TYR), jota kutsutaan myös polyfenolioksidaasiksi, on polyfunktionaalinen glykosyloitu kuparia sisältävä entsyymi, jota esiintyy laajalti eläinten, kasvien ja mikro-organismien eliöissä [1–3]. Molekyylihapen läsnä ollessa TYR katalysoi tyrosiinin ensin hapettumaan dopaksi ja sitten hapettuu edelleen dopakinoniksi, joka isomeroituu muodostaen dopa-pigmenttiä. Dopa-pigmentti muodosti lopulta melaniinia CO2:n ja TRP:n-2 kanssa, jotka aiheuttavat erilaisia ​​ihosairauksia, kuten hyperpigmentaatiota, melasmaa, pisamia ja ikääntymisläiskiä [4, 5]. TYR:llä on tärkeä rooli, koska se on kriittinen entsyymi ja restriktioentsyymi melaniinin koostumuksen aikana [6–8]. Pigmenttitäplät ja melanooma lisääntyivät huomattavasti TYR:n aktiivisuuden ja määrän lisääntyessä [9]. Nykyään TYR-inhibiittorit ovat saaneet laajaa huomiota, koska niitä on käytetty latenttina hypopigmentoituneina aineina [10].

Atractylodis macrocephalus rhizoma (AMR), Atractylodes macrocephalaKoidz.:n kuiva juurakko, on yksi kiinalaisista kasviperäisistä lääkkeistä, jotka on koottu Kiinan farmakopeaan [11–15]. Muinaisessa Kiinassa AMR valittiin muodostamaan kuuluisa klassinen valkaisukaava nimeltä "Seven-White Ointment" ja sitä käytettiin palatsin kauneuden lisäravinteena [16]. On raportoitu, että AMR sisälsi pääasiassa seskviterpenoideja ja triterpenoideja (mukaan lukien atractylenolide I, atractylenolide II ja atractylenolide III), polyasetyleenit, kumariineja ja fenyylipropanoideja, flavonoideja ja flflavonoidiglykosideja, polysakkarideja, steroideja, [17,1-kontinentteja]. Sen vaikutuksia valkaisevaan ihoon ja vaikuttaviin ainesosiin on kuitenkin raportoitu harvoin.Thespektri-aktiivisuussuhteen tutkimusta sovellettiin niiden merkityksen selvittämiseksi.

Spektri-aktiivisuussuhteen tutkimuksella voidaan paitsi kiertää puutteita kemiallisten aineosien ja farmakodynamiikan välillä, myös liittää sormenjäljet ​​farmakodynamiikkaan riittävästi matemaattisen mallin avulla [19, 20].ThSpektri-aktiivisuussuhde tutkii sormenjäljen ja farmakodynamiikan välistä merkitystä tarjotakseen uskottavan menetelmän kiinalaisen kasviperäisen lääketieteen aineellisen perustan selkiyttämiseen [21].Thesormenjäljet ​​määritettiin yleensä HPLC:llä, UPLC:llä, GC:llä, GC MS:llä ja LC-MS:llä [19, 22–24]. Mallit yleensä hankkivat "farmakodynamiikka"-tiedot [25].TheTiedonkäsittelymenetelmät sisältävät pääasiassa pääkomponenttianalyysin (PCA), osittaisen pienimmän neliösumman (PLS) regressioanalyysin, ortogonaalisen osittaisen pienimmän neliösumman erotteluanalyysin (OPLS-DA), kanonisen korrelaatioanalyysin (CCA) ja harmaarelaatioanalyysin (GRA) yleensä [26–29].

Selventämään AMR:n komponentteja, jotka myötävaikuttavat TYR:n estoaktiivisuuteen [30, 31], 11 AMR-erän sormenjäljet ​​määritettiin HPLC:llä; TYR:n estoaktiivisuuden farmakodynamiikka in vitro arvioitiin biokemiallisella entsymaattisella menetelmällä. 2e tehokkaat yhdisteet valittiin spektri-aktiivisuussuhdemallilla, joka määritettiin korreloimalla sormenjälkipiikkejä farmakodynaamisten tietojen kanssa. Lisäksi vaikuttavat aineet validoitaisiin in vitro -testeillä ja molekyylitelakointikokeilla. 2is-tutkimus voisi luoda teoreettisen perustan AMR:n soveltamiselle pigmentoituneiden ihosairauksien hoitolääkkeenä ja sen kehittämiselle valkaisukosmetiikkaa täydentävänä lisäaineena.

2. Materiaalit ja metodit

2.1. Kemikaalit ja materiaalit.Metanoli (suurempi tai yhtä suuri kuin 99,5 prosenttia) ostettiin yhtiöltä Sinopharm Chemical Reagent Co., Ltd. (Shanghai, Kiina). Fosforihappo (suurempi tai yhtä suuri kuin 99 prosenttia) ostettiin yhtiöltä Chengdu Jinshan Chemical Reagent Co., Ltd. (Chengdu, Kiina). Asetonitriili ostettiin yhtiöltä Tiandi Reagent Co., Ltd. (USA). Atractylodes III (suurempi tai yhtä suuri kuin 98 prosenttia), fosfaattipuskuri, tyrosinaasi ja L-tyrosiini ostettiin Beijing Soleibao Technology Co., Ltd.:ltä (Peking, Kiina). -Arbutiini (suurempi tai yhtä suuri kuin 99,7 prosenttia) ostettiin Kiinan elintarvike- ja lääketunnistuksen akatemialta. Tyrosinaasi ja L-tyrosiini liuotettiin fosfaattipuskuriin (pH 6,8) ennen käyttöä. Atraktyloosit III ja -arbutiini liuotettiin 50-prosenttiseen metanoliin (tilavuus/tilavuus).Thepuhdas vesi ostettiin Hangzhou Wahaha Baili Food Co., Ltd.:ltä (Hangzhou, Kiina). Comix C18 -kolonni (250 × 4,6 mm, 5 μm) ostettiin yhtiöltä Guangzhou Philemon Scientific Instrument Co., Ltd. (Guangzhou, Kiina).

2.2. Kasvimateriaalit.The11 erää AMR-lääkenäytteitä kerättiin, ja ne on esitetty taulukossa 1.Theyllä olevat näytteet vahvisti professori Ronggui Qin (School of Pharmacy, Guizhou Medical University).

2.3. Poisto.Kunkin näytteen yrttipalat (noin 10 g) punnittiin tarkasti ja laitettiin sitten pyöreäpohjaiseen pulloon, lisäämällä vettä ja refluksoimalla uuttamiseksi. Tuotteet kuivattiin alipaineessa AMR-vesiuutteen saamiseksi. 2en, AMR:n vesiuutteet (noin 3000 mg) punnittiin tarkasti ja liuotettiin 50 % metanoliin (tilavuus/tilavuus).

2.4. HPLC-analyysi.Comix C18 käänteisfaasikromatografiakolonni (250 × 4,6 mm, 5 μm).Theliikkuva faasi 0,1 % fosforia oli happaman veden (A)-asetonitriilin (B) seos; eluointijärjestelmä on suunniteltu ja lueteltu taulukossa 2.Theseuraava nopeus vahvistettiin arvoon 0,6 ml/min. 2e kolonnin lämpötila oli 30 astetta.TheUA:n aallonpituus oli 210 nm.Theinjektiotilavuus oli 30 µl.

Havaitsemismenetelmä varmistettiin tarkkuustestillä, toistettavuustestillä ja stabiilisuustestillä.

2.5. Kemometrinen analyysi.Tässä tutkimuksessa 11 AMR-erän sormenjälkien yhteiset huipputiedot tuotiin ohjelmistoon SIMCA14.1 HCA:ta, PCA:ta ja OPLS-DA:ta varten.

2.6. TYR-inhibitiotesti in vitro. TheAMR-uutteet liuotettiin fosfaattipuskuriin (pH 6,8), säilytettiin 4 asteessa ja käytettiin sitten entsyymin määritykseen.

Tässä tutkimuksessa L-tyrosiinia käytettiin substraattina määrittämään TYR-aktiivisuuden esto.Thereaktioliuokset valmistettiin taulukon 3 mukaisesti ja AMR:n estonopeus TYR-aktiivisuuteen määritettiin. Ensin reaktioliuokset laitettiin 37-asteiseen vesihauteeseen 10 minuutiksi. Toiseksi TYR-liuos lisättiin välittömästi T2- ja T4-reaktioliuoksiin. Toiseksi, reaktioliuokset reagoivat 37 asteen vesihauteen vakiolämpötilassa 10 minuuttia sen jälkeen, kun ne oli sekoitettu kokonaan. Lopuksi absorbanssiarvojen reaktioliuokset mitattiin välittömästi 475 nm:ssä. Estoasteet (prosenttia) saatiin yhtälöstä: estoaste (prosentti) =[(AT2-AT1) - (AT4-AT3)]/(AT2-AT1) × 100 prosenttia.

2.7. Spektri-aktiivisuussuhdeanalyysi. TheOhjelmistoa "Kiinan perinteisen lääketieteen kromatografinen sormenjälkien samankaltaisuuden arviointijärjestelmä 2012 A Edition" käytettiin säätämään kunkin piikin retentioaikoja, ja piikin pinta-ala (PA) käsiteltiin tasauksella.Then, kvantitatiiviset tiedot saatiin.ThePLS-regressioyhtälö asetettiin ohjelmistolla SIMCA14.1; piikin pinta-ala otettiin riippumattomaksi muuttujaksi (X), ja TYR-inhibitionopeus asetettiin riippuvaiseksi muuttujaksi (Y).

2.8. Atractylodes III:n estävä vaikutus TYR:ään ja molekyylitelakointiin.Atractylenolide III:n TYR:ää estävän vaikutuksen todistamiseksi in vitro -entsymaattiset aktiivisuustestit suoritettiin -arbutiinilla, joka toimi positiivisena kontrollilääkkeenä.

Telakointisimulaatioissa sovellettiin AutoDock4.2-ohjelmaa. Agaricus bisporuksen (PDB ID: 2Y9X) kiderakenne otettiin TYR:n 3D-rakenteeksi [32]. Teimme simulaatioita TYR:n telakoitumisesta Atractylodes III:een. AutoDock Vinan telakointia varten ruudukon koko on suunniteltu (x, y, z) =(16, 12, 14) ja ruudukon keskikohta (x, y, z) { {10}} (−10.348, −28.279, −45.925). Jokaisessa simulointimenettelyssä oletusparametrien eteneminen tapahtuu AutoGridista ja AutoDockista. Lamarckin geneettinen algoritmi (LGA) otettiin käyttöön sopivimpien ligandin sitoutumissuuntausten määrittämiseksi.

3. Tulokset ja keskustelu

3.1. Metodologian validointi.Tarkkuus, toistettavuus ja stabiilisuus validoitiin analyysimenetelmälle. Tarkkuustestauksessa suhteellisten retentioaikojen (RRT) ja suhteellisten huippualueiden (RPA) tarkkuus ei ylittänyt {{0}}.02 prosenttia ja 4 prosenttia RSD:ssä; samankaltaisuus oli 1. RRT:n ja RPA:n toistettavuus oli alle 0,11 prosenttia ja 4 prosenttia RSD:ssä, ja samankaltaisuus oli suurempi tai yhtä suuri kuin 0,998. Stabiilisuus arvioitiin testaamalla yhtä laboratorioympäristön lämpötilassa säilytettyä näyteliuosta 0, 6, 8, 12 ja 18 tunnin kuluttua. Yhteisten huippujen RRT-arvot olivat alle 0,1 prosenttia ja RPA-arvot 4 prosenttia; samankaltaisuus oli yli 0,999.Thetulokset viittaavat siihen, että AMR-kokeellinen järjestelmä sormenjälkien analysointiin on vakaa ja luotettava.

3.2. HPLC-sormenjälkien määrittely ja samankaltaisuusanalyysi.Atractylodes III -vertailuaineiden sormenjälki on esitetty kuvassa 1(a). AMR-näyte osoitti suotuisaa segregaatiota piikkiensä kesken (kuvio 1(b)). Täydellisissä olosuhteissa luotiin HPLC-sormenjäljet ​​11 eri AMR-näyteerästä (kuvio 1(c)) ja yhtäläisyydet laskettiin. Samankaltaisuuksien tulokset on esitetty taulukossa 4, joka osoitti, että kaikki 11 näytteen samankaltaisuusarvot olivat suurempia kuin 0,8, mikä osoittaa, että kaikki näytteet olivat samanlaisia ​​​​kemiallisten koostumusten tyypeissä. Kuusitoista yhteistä piikkiä havaittiin vertaamalla niiden retentioaikaa UV-spektrissä. Piikki 11 tunnistettiin Atractylodes III:ksi vertailuaineilla. 16 yhteisen piikin PA:n RSD:t olivat 1,18 prosentin ja 58,68 prosentin välillä (taulukko 5). Nämä tulokset osoittivat, että eri tuotantoalueilta peräisin olevien AMR-kemiallisten aineiden pitoisuudet olivat erilaisia.

3.3. Kemometrinen analyysi

3.3.1. HCA. HCA:ta käytettiin tunnistamaan AMR eri tuotantoalueilta erilaisten klustereiden ja sormenjälkien samankaltaisuuden perusteella. Indikaattorina käytettiin yhteistä piikin pinta-alaa 11 AMR-erässä ja klusterianalyysi suoritettiin ohjelmistolla SIMCA14.1. Tulokset on esitetty kuvassa 2. 11 AMR-erän näytteet jaettiin 3 luokkaan, kun luokkaetäisyydet vaihtelivat välillä 20-30, joista S4, S8, S9, S1 ja S3 ryhmiteltiin luokkiin I ja S7 oli ryhmiteltiin luokkaan II, kun taas S2, S5, S10, S6 ja S11 ryhmiteltiin luokkaan III.

3.3.2. PCA. Tässä tutkimuksessa laskettiin 11 AMR-erän PCA; 16 pääkomponentissa viiden ensimmäisen pääkomponentin varianssin kumulatiivinen vaikutus oli 91,3 prosenttia .TheKahden ensimmäisen komponentin pistematriisia käytettäisiin analysointiin, koska kumulatiivinen varianssi ylitti 65,9 prosenttia.Thesiksi, joidenkin tietojen puuttuessa, rakentaa pääkomponentin kaksiulotteinen taso, jonka mukaan abskissa oli pääkomponentti ja ordinaatta toinen pääkomponentti. Sitten 11 näytettä projisoitiin 2D-tasolle niin, että niiden luonnollinen kerääntyminen havaittiin (kuva 3(a)). Todettiin, että S4:llä, S8:lla, S9:llä, S1:llä ja S3:lla oli selvät luokitukset, S7 voidaan jakaa yhteen tyyppiin ja S2, S5, S10, S6 ja S11 toiseen tyyppiin.ThePCA:n tulos oli yhdenmukainen HCA-tuloksen kanssa.

Kukin piste kuormituskaaviossa edusti kromatografista huippua, joka edustaa kunkin kromatografisen piikin osuutta kromatografisen huipun kokonaisvaltaisessa vaikutuksessa.pääkomponentit.Themuuttujien painoarvo voiheijastavat kemiallisen koostumuksen välistä korrelaatiotaja otos suurimmassa määrin.Thekauempanakuormituskaavion alkuperä, sitä suurempi muuttujapaino.Thetulos on esitetty kuvassa 3(b), joka ehdottiettä kromatografiset huiput 9, 11 (atraktylenolidi III),ja 12:lla oli suurempi vaikutus ensimmäiseen pääkomponenttiin. Kuitenkin kromatografiset piikit 4, 5, 6, 15 ja 16oli suurempi vaikutus toiseen pääkomponenttiin. Seosoitti, että yllä olevilla kromatografisilla huipeilla saattaa olla asuurempi vaikutus luokitukseen.

3.3.3. OPLS-DA.The11 näytettä jaettiin kahteen ryhmään, joista S1, S3, S4, S8 ja S9 olivat ensimmäinen ryhmä ja S2, S5, S6, S7, S10 ja S11 toinen ryhmä.TheKaikkien näytteiden yhteiset huipputiedot tuotiin SIMCA14.1-ohjelmistoon OPLS-DA:lle. R2 X ja R2 Y kuvaavat mallin selitysnopeutta x- ja y-matriiseille erikseen ja Q2 kuvaa mallin ennustuskykyä.Thetulokset osoittivat, että R2 X:n, R2 Y:n ja Q2:n arvot olivat vastaavasti 0,939, 0,992 ja 0,583, jotka kaikki olivat suurempia kuin {{ 9}}.5, mikä osoittaa, että malli pystyi erottamaan nämä kaksi näyteryhmää ja että sillä oli parempi sovitus- ja ennustuskyky tietojenkäsittelyssä. Sitä voitaisiin käyttää erottamaan AMR eri tuotantoalueilta (kuva 4(a)).

TheProjektion (VIP) kannalta tärkeiden muuttujien profiili OPLS-DA-mallissa voi kuvastaa kunkin kromatografisen huipun panosta näytteeseen.The16 kromatografisen piikin VIP-arvot heijastivat vaikutusvoimaa jokaisessa AMR-näytteessä. Perustuen valintaperiaatteeseen, jonka mukaan VIP-arvo oli suurempi kuin 1.0 ja virhepalkki oli pienempi kuin origo (kuva 4(b)), valittiin 4 tärkeää kromatografista huippua, jotka järjestettiin järjestykseen: huippu 1 > huippu 6 > huippu 16 > huippu 5.

Thekuormitusdiagrammin analyysitulokset on esitetty kuvassa 4(c), joka osoitti, että yllä olevien 4 tärkeän kromatografisen piikin paikat olivat kaukana origosta. Ehdotettiin, että 4 kromatografista piikkiä vaikuttivat merkittävästi AMR:n luokitukseen, ja nämä neljän kromatografisen piikin edustamat komponentit saattoivat olla kunkin näytteen päämarkkerikomponentit.

3.4. AMR:n inhiboivan aktiivisuuden arviointi TYR:ssä in vitro.TheEri tuotantoalueilta peräisin olevan AMR:n estävät vaikutukset TYR-aktiivisuuteen määritettiin biokemiallisella entsyymimenetelmällä.Thenäytteiden vaikutukset TYR-aktiivisuuteen on lueteltu taulukossa 6. Jokainen näyte, jonka pitoisuus oli 10 mg/ml, saattoi inhiboida TYR-aktiivisuutta ja farmakologinen aktiivisuus oli huomattavan erilainen, joista S5:n estoaste oli suurin ja S6:n pienin.

3.5. Spektri-vaikutussuhteiden analyysi. Tässä artikkelissa PLS:ää sovellettiin spektri-aktiivisuussuhteen analysointiin.Theosittainen regressiokerroin ja VIP-arvo on esitetty kuvissa 5(a) ja 5(b), jotka osoittivat, että kromatografiset piikit 1, 2, 5, 6, 7, 9, 10, 11, 15 ja 16 korreloivat positiivisesti TYR-aktiivisuuden esto, mutta kromatografiset piikit 3, 4, 8, 12, 13 ja 14 korreloivat negatiivisesti niiden kanssa. TYR-aktiivisuuden estoon positiivisesti korreloivien kromatografisten piikkien joukossa kromatografisten piikkien 11 (Atractylodes III) ja 15 VIP-arvot olivat suurempia kuin 1, mikä osoitti, että nämä kaksi komponenttia vaikuttavat merkittävästi TYR-aktiivisuuden estoon.

3.6. Atractylodes III:n estävä vaikutus TYR:ään ja molekyylitelakointiin.TheAtractylodes III:n estävä vaikutus TYR-aktiivisuuteen määritettiin biokemiallisella entsyymimenetelmällä in vitro käyttäen -arbutiinia positiivisena kontrollina.TheTulokset osoittivat, että Atractylodes III:n ja -arbutiinin estoasteet TYR-aktiivisuuteen olivat 63,68 ± 2,36 prosenttia ja 94,85 ± 0,35 prosenttia, kun näytteiden pitoisuus oli 1 mg/ml.

Molekyylitelakointia käytettiin tutkittaessa Atractylodes III:n sitoutumismekanismia vuorovaikutuksessa TYR:n kanssa (kuvat 6(a)–6(c)).Thesienen tyrosinaasin sitoutumiskohta koostuu kapeasta, matalasta ontelosta, jossa on kaksi kupari-ionia (Cu2 plus), joista kumpikin on stabiloitu kolmella histidiinitähteellä (esim. His 61) entsyymin aktiivisessa keskustassa. Tässä tutkimuksessa Atractylodes III on pienimolekyylinen yhdiste, joka sijaitsee entsyymin aktiivisessa keskustassa ja on vuorovaikutuksessa ympäröivien tähteiden kanssa (His 244, Phe 264, Ala 286, His 263, Val 283, His259, His 85, Asn 260). On huomattava, että Atractylodes III muodosti stabiilin vetysidoksen Asn 260:een sidoksen pituudella 1,9 ˚A.

4. Johtopäätökset

Tässä tutkimuksessa luotiin systemaattinen menetelmä, jossa HPLC-sormenjäljet ​​yhdistettiin kemometriseen analyysiin eri alkuperää olevien AMR-näytteiden erottamiseksi, ja AMR:n valkaiseva vaikutus todettiin biokemiallisella entsyymimenetelmällä. Spektri-vaikutussuhteet osoittivat, että kromatografiset piikit 1, 2, 5, 6, 9, 10, 11, 15 ja 16 korreloivat positiivisesti AMR:n estovaikutuksen kanssa TYR-aktiivisuuteen, joista piikit 11 (atraktylenolidi III) ja 15 voivat olla tärkeitä aktiivisia aineosia. Samaan aikaan atraktylenolidi III:lla on korkea TYR:ää estävä aktiivisuus in vitro -testissä, ja molekyylitelakoinnin tulos osoitti, että sen mekanismi saattaa liittyä aminohappotähteiden sitoutumiseen TYR-katalyyttikapselissa.TheSiksi nämä tulokset osoittivat, että biomääritys, molekyylitelakka ja spektri-aktiivisuussuhteet ovat sopivia yhdistämään näytteiden laatu farmaseuttisiin vaikuttaviin aineisiin.

Tietojen saatavuus

Tämän tutkimuksen tulosten tueksi käytetyt tiedot ovat saatavilla pyynnöstä vastaavalta kirjoittajalta.

Tietojen paljastaminen

Yong-Qin Liua ja Chang-Yan Xua pidetään ensimmäisinä kirjoittajina.

Eturistiriidat

Kirjoittajat ilmoittavat, että heillä ei ole eturistiriitoja tässä tutkimuksessa.

Kirjoittajien panokset

Yong-Qin Liu ja Chang-Yan Xu osallistuivat työhön.

Kiitokset

Tätä tutkimusta sponsoroi Guizhoun maakunnan yliopisto-opiskelijoiden innovaatio- ja yrittäjyyskoulutusohjelma (nro 20195200925).

Viitteet

[1] Y.-L. Wang, G. Hu, Q. Zhang et ai., "Seulonta ja karakterisointi tyrosinaasi-inhibiittoreista Salvia miltiorrhizasta ja Carthamus tinctoriuksesta spektri-vaikutussuhdeanalyysillä ja molecular docking", Journal of Analytical Methods in Chemistry, voi. 2018, artikkelitunnus 2141389, 10 sivua, 2018.

[2] HX Cui, FF Duan, SS Jia, FR Cheng ja K. Yuan, "Torreya grandis fort. ex Lindl:n siemenöljyjen antioksidantti- ja tyrosinaasia estävät vaikutukset", BioMed Research International, voi. 2018, artikkelin tunnus 5314320, 10 sivua, 2018.

[3] Y. Tian, ​​Z. Zhang, N. Gao, P. Huang ja FY Wu, "Leimaton luminesenssimääritys tyrosinaasiaktiivisuuden seurantaan ja inhibiittoriseulomiseen responsiivisilla lantanidikoordinaatiopolymeerinanohiukkasilla", Spectrochimica Acta, osa A: Molecular and Biomolecular Spectroscopy, voi. 228, 2020.

[4] H. Liu, B. Liu, P. Huang, Y. Wu, FY Wu ja L. Ma, "Tyrosinaasin kolorimetrinen määritys perustuu in situ hopeametallointiin, jota kullan nanopartikkelit katalysoivat", MikroChim Acta, voi. 187, nro. 10, s. 551, 2020.

[5] DC Franco, GS de Carvalho, PR Rocha, R. da Silva Teixeira, AD da Silva ja NR Raposo, "Resveratrolinalogien inhiboivat vaikutukset sienten tyrosinaasiaktiivisuuteen", Molecules (Basel, Sveitsi), voi. 17, ei. 10, s. 11816–11825, 2012.

[6] HH Kim, JK Kim, J. Kim, S.-H. Jung ja K. Lee, "Characterization of caffeoylquinic acids from episodes thunbergianus and their melanogenesis inhibitor activity", ACS Omega, voi. 5, ei. 48, s. 30946–30955, 2020.

[7] F. Pintus, D. Span`o, A. Corona ja R. Medda, "Anti tyrosinase activity of Euphorbia characiastracts", PeerJ, voi. 3, s. e1305, 2015.

[8] M. Shi, Y. Zhang, M. Song, Y. Sun, C. Li ja W. Kang, "Psoralea corylifolia L.:n markkerikomponenttien seulonta spektri-efekti-suhteen ja komponenttien koputuksen avulla. UPLC-MS(2)," International Journal of Molecular Sciences, voi. 19, ei. 11, 2018.

[9] G.-H. Wang, C.-Y. Chen, T.-H. Tsai et ai., "Angelica dahurica -juuriuutteiden tyrosinaasia inhiboivien ja antioksidanttisten aktiivisuuksien arviointi neljälle eri probioottiselle bakteerifermentaatiolle", Journal of Bioscience and Bioengineering, voi. 123, nro. 6, s. 679–684, 2017.

[10] YS Lin, HJ Chen, JP Huang et ai., "Kinetics of tyrosinase inhibitory activity using Viti's vinifera leaf extracts", BioMed Research International, voi. 2017, artikkelin tunnus 5232680, 5 sivua, 2017.

[11] S. Yang, J. Zhang, Y. Yan, et ai., "Network pharmacology based strategy to study the farmakologiset mekanismit Atractylodes macrocephala Koidz. for the treatment of chronic gastritis", Frontiers in Pharmacology, voi. 10, s. 1629, 2019.

[12] H.-R. Yang, J. Yuan, L.-H. Liu, W. Zhang, F. Chen ja C.-C. Dai, "Endophytic Pseudomonas fluorescent induced seskviterpenoid accumulation mediated by gibberellihapon ja jasmonic acid in Atractylodes macrocephala Koidz plantlets", Plant Cell, Tissue and Organ Culture (PCTOC), voi. 138, nro 3, s. 445–457, 2019.

[13] L. Hu, X. Chen, J. Yang ja L. Guo, "Perinteisen kiinalaisen lääketieteen Atractylodes macrocephala Koidz. (Baizhu) maantieteellinen autentikointi käyttämällä stabiileja isotooppi- ja monielementtianalyysejä", Rapid Communications in Mass Spectrometry, vol. . 33, ei. 22, s. 1703–1710, 2019.

[14] H. Li ja G. Yang, "Atractylodes macrocephala Koidz. (Asteraceae) täydellinen kloroplastigenomi", Mitokondriaalinen DNA, osa B, voi. 5, ei. 3, s. 2060-2061, 2020.

[15] S. Gu, L. Li, H. Huang, B. Wang ja T. Zhang, "Antitumor, antiviral and anti-inflammatorinen tehokkuus eteeristen öljyjen Atractylodes macrocephala Koidzista", Produced with Different Processing Methods, Molecules , voi. 24, nro. 16, 2019.

[16] J. Wang, L. Peng, M. Shi, C. Li, Y. Zhang ja W. Kang, "Spektriefektisuhde ja komponenttien poisto Angelica dahurica radixissa korkean suorituskyvyn nestekromatografialla-Q Executive hybridi kvadrupoli-orbitran massaspektrometri", Molecules, voi. 22, ei. 7, 2017.

[17] B. Zhu, Q.-L. Zhang, J.-W. Hua, W.-L. Cheng ja L.-P. Qin, "TheAtractylodes macrocephala Koidz.:n perinteiset käytöt, fytokemia ja farmakologia: katsaus", Journal of Ethnopharmacology, voi. 226, s. 143–167, 2018.

[18] Y.-Y. Feng, H.-Y. Ji, X.-D. Dong ja A.-J. Liu, "Atractylodes macrocephala Koidzin alkoholiliukoinen polysakkaridi indusoi Eca-109-solujen apoptoosia", Carbohydrate Polymers, voi. 226, artikkelin tunnus 115136, 2019.

[19] W. Li, Y. Zhang, S. Shi, et ai., "Antioksidantti- ja tyrosinaasiaktiivisuuden spektri-vaikutussuhde Malus pumila -seuraajien kanssa UPLC-MS/MS- ja komponenttien poistomenetelmällä", Food and Chemical Toxicology, voi. 133, artikkelin tunnus 110754, 2019.

[20] B. Xu, J. Gao, S. Zhao, Y. Li, Y. Du ja H. Pan, "Thespektrivaikutussuhde HPLC-sormenjäljen ja orapihlajan lehtien virkistävän veren ja liukenevan staasivaikutuksen välillä", Chromatographia, osa 83, nro 3, s. 409–421, 2020.

[21] Y. Feng, Z. Jing, Y. Li et ai., "Shuang Huang Lian -injektion anafylaktoidisten komponenttien seulominen analysoimalla spektri-vaikutussuhteita yhdistettynä UPLC-TOF-MS:ään", Biomedical Chromatography, voi. 33, ei. 2, artikkelin tunnus e4376, 2019.

[22] X. Jiang, L. Tao, C. Li et ai., "Ryhmittely, spektri-vaikutussuhde ja kiinalaisen propoliksen antioksidanttiyhdisteet eri alueilta käyttäen monimuuttujaanalyysejä ja off-line anti-DPPH-testiä", Molecules, voi. . 25, ei. 14, 2020.

[23] Y. Zhao, X.-M. Sinä, H. Jiang, G.-X. Zou ja B. Wang, "Spektri-vaikutussuhteet korkean suorituskyvyn nestekromatografian sormenjälkien ja Leontopodium leontopodioides (Willd.) Beauv:n anti-inflammatoristen aktiivisuuksien välillä", Journal of Chromatography B, voi. 1104, s. 11–17, 2019.

[24] X. Zhou, Y. Li, M. Zhang, et ai., "UpLC-sormenjälkien ja Si Jun Zi Tangin keuhkosyövän vastaisen vaikutuksen välinen spektrivaikutussuhde", Evidence-Based Complementary and Alternative Medicine, voi. 2019, artikkelin tunnus 7282681, 9 sivua, 2019.

[25] X. Sun, Q. Zhao, Y. Si et ai., "Sarcandra glabran proteoglykaanien bioaktiivinen rakenteellinen perusta perustuu spektri-vaikutussuhteeseen", Journal of Ethnopharmacology, voi. 259, artikkelin tunnus 112941, 2020.

[26] S. Gao, H. Chen ja X. Zhou, "Study on the spektr-effect ratio of the ksantiinioksidaasia inhiboiva aktiivisuus Ligustrum lucidum", Journal of Separation Science, voi. 42, nro. 21, s. 3281–3292, 2019.

[27] J. Tan, J. Liu, H. Wang, et ai., "Identification of blood-activating component from Xueshuan Xinmaining tablett perustuu spektri-vaikutussuhteeseen ja verkkofarmakologiseen analyysiin", RSC Advances, voi. 10, ei. 16, s. 9587–9600, 2020.

[28] J. Zhang, T. Chen, K. Li et ai., "Rosmariinin aktiivisten ainesosien seulonta perustuu UPLC-sormenjäljen ja verisuoniarelaksanttiaktiivisuuden välisiin spektri-vaikutussuhteisiin käyttäen kolmea kemometriaa", Journal of Chromatography B, voi. 1134-1135, artikkelitunnus 121854, 2019.

[29] Y. Chen, G. Pan, W. Xu et ai., "Spektri-vaikutussuhdetutkimus HPLC-sormenjälkien ja Sabia parviflfloran antioksidanttiaktiivisuuden välillä", Journal of Chromatography B, voi. 1140, artikkelin tunnus 121970, 2020.

[30] M. Liao, P. Yan, X. Liu, et ai., "Spektri-vaikutussuhde shikoniinien ja shikonofuraanien kasvaimia estävälle aktiivisuudelle lääketieteellisessä Zicaossa UHPLC-MS/MS- ja kemometrisillä lähestymistavoilla", Journal of Chromatography B, voi. 1136, artikkelin tunnus 121924, 2020.

[31] JH Wu, YT Cao, HY Pan ja LH Wang, "Tuumorien vastaisten ainesosien tunnistaminen rupikonnamyrkystä spektri-vaikutussuhdeanalyysillä ja sen farmakologisen mekanismin tutkimuksella", Molecules, voi. 25, ei. 18, 2020.

[32] J. Tang, J. Liu ja F. Wu, "Molecular docking studies and biologological assessment of 1,3,4-"tiadiatsolijohdannaiset, joissa on Schiffff-emäsosia tyrosinaasin estäjinä", Bioorganic Chemistry, voi. 69, s. 29–36, 2016.