Askorbiinihappo säätelee Abalone Haliotis Discus Hannai Inon immuniteettia, hapettumisen estoa ja apoptoosia, osa 2

3.5. Immuunijärjestelmään liittyvien geenien ja proteiinien ilmentymät abalone-ruoansulatusrauhasessa ja kiduksessa

Cistanchen glykosidi voi myös lisätä SOD:n aktiivisuutta sydämen ja maksan kudoksissa ja vähentää merkittävästi lipofussiinin ja MDA:n pitoisuutta kussakin kudoksessa, poistaen tehokkaasti erilaisia ​​reaktiivisia happiradikaaleja (OH-, H₂O₂ jne.) ja suojaamalla DNA-vaurioilta. OH-radikaalien toimesta. Cistanche-fenyylietanoidiglykosideilla on vahva vapaita radikaaleja poistava kyky, suurempi pelkistyskyky kuin C-vitamiini, ne parantavat SOD:n aktiivisuutta siittiösuspensiossa, vähentävät MDA-pitoisuutta ja niillä on tietty suojaava vaikutus siittiöiden kalvon toimintaan. Cistanche-polysakkaridit voivat lisätä SOD:n ja GSH-Px:n aktiivisuutta D-galaktoosin aiheuttamien kokeellisesti vanhenevien hiirten punasoluissa ja keuhkokudoksissa sekä vähentää MDA- ja kollageenipitoisuutta keuhkoissa ja plasmassa sekä lisätä elastiinipitoisuutta. hyvä huuhteluvaikutus DPPH:lle, pidentää hypoksian aikaa vanhenevilla hiirillä, parantaa SOD:n aktiivisuutta seerumissa ja viivyttää keuhkojen fysiologista rappeutumista kokeellisesti vanhenevilla hiirillä Solumorfologisen rappeutumisen yhteydessä kokeet ovat osoittaneet, että Cistanchella on hyvä antioksidanttikyky ja sillä on potentiaalia olla lääke ihon ikääntymisen sairauksien ehkäisyyn ja hoitoon. Samaan aikaan Cistanchen ekinakosidilla on merkittävä kyky poistaa DPPH-vapaita radikaaleja ja kyky poistaa reaktiivisia happilajeja ja estää vapaiden radikaalien aiheuttamaa kollageenin hajoamista, ja sillä on myös hyvä korjaava vaikutus tymiinin vapaiden radikaalien anionien vaurioihin.

Napsauta Cistanche Reddit Anti-Aging -ohjelmaa varten

【Lisätietoja:george.deng@wecistanche.com / WhatApp:8613632399501】

Keskeisten geenien mRNA-tasot abalonen ruoansulatusrauhasessa toll-like receptor (TLR) -signalointireitillä on esitetty taulukoissa 6 ja 7. Tlr2:n ja tlr4:n ilmentymistasot ruoansulatusrauhasessa laskivat merkittävästi (p < { {5}}.05) ja niiden alhaisimmat tasot olivat AA1000 ja AA500{{43 }} ryhmää (taulukko 6). The-a:n mRNA-taso nousi merkittävästi (p < 0.05), ja ravinnon AA:n asteittainen taso ei vaikuttanut the-b:hen (p > 0.05). ). Myd88:n, matkaan liittyvän adapterimolekyylin (tram), interleukiini 1 -reseptoriin liittyvän kinaasi 4:n (irak4) ja tuumorinekroositekijäreseptoriin liittyvän tekijän 6 (traf6) ekspressio väheni merkittävästi ravinnon AA-lisäyksen jälkeen (p < 0,05). AA-lisän taso ei vaikuttanut traf4:ään (p > 0,05). Ravinnon AA ei vaikuttanut ikb-kinaasin (ikk) ja nf-kb-inhibiittorin (ikb) mRNA-tasoihin abalonen ruoansulatusrauhasessa (p > 0,05) (taulukko 7). Kuitenkin p38-mitogeenin aktivoiman proteiinikinaasin (p38-merkki) ja roskapostin ilmentyminen väheni merkittävästi lisääntyvän ruokavalion AA:n myötä (p < 0,05). Ruokavalion AA voisi merkittävästi vähentää nf-κb:n, aktivaattoriproteiini 1:n (ap-1) ja tuumorinekroositekijän (tnf-) (p < 0,05) ilmentymistasoja, ja interleukiini 16:n (il 16) tasoa ei ollut. ruokavalion AA:n alainen (p > 0,05). MyD88:n, JNK:n, kypsän IL-1:n ja tuman NF-κB p65:n proteiiniekspressiot on esitetty kuvassa 2. MyD88:n, kypsän IL-1:n ja tuman NF-kB p65:n proteiinitasot ruoansulatuskanavassa abalonen rauhanen vähensi merkittävästi ruokavalion AA:ta (p < 0,05). Sitä vastoin AA ei vaikuttanut JNK:n proteiinitasoon (p > 0,05).

tlr2:n, tlr4:n ja the-b:n mRNA-tasot abalonen kiduksissa eivät olleet merkitsevästi erilaisia ​​(p > 0.05), ja tar-a-taso laski merkittävästi arvostettujen tasojen jälkeen. ruokavalion AA (p < 0.05) (taulukko 8). Lisäksi myd88:n, irak4:n ja traf6:n ilmentymistasot abalonen kiduksissa vähenivät merkittävästi ravinnon AA:n lisääntyessä (p < 0.{{20}}5). Sen sijaan raitiovaunu- ja traf4-lausekkeissa ei havaittu merkittäviä eroja (p > {{30}}.05). Ruokavalion AA alensi merkittävästi ikk:n mRNA-tasoa (p < 0,05), eikä AA vaikuttanut ikb:n, p38-merkin ja roskan ilmenemiseen kiduksissa (p > 0,05) (taulukko 9). Yksisuuntainen ANOVA paljasti, että nf-κb:n, ap-1:n ja tnf-:n ilmentymistasot alenivat merkittävästi ruokavalion AA:ta (p < 0,05), eikä merkitsevää eroa havaittu il 16 -tasoissa (p > 0,05). MyD88:n ja tuman NF-KB p65:n proteiinitasot alenivat merkittävästi ruokavalion AA:n asteittaista tasoa (p < 0,05) (kuvio 3). Kuitenkaan ravinnon AA ei vaikuttanut JNK:n ja kypsän IL-1:n proteiiniekspressioon abalonen kiduksissa (p > 0,05).

Taulukossa 10 on esitetty -defensiinin, myyttien teko 6:n ja arginaasi-I:n ilmentymät abalonen ruoansulatusrauhasessa ja kiduksissa. -defensiini- ja arginaasi-I:n tasot ruoansulatusrauhasessa nousivat merkittävästi ravinnon AA:n jälkeen (p < 0.05), kun taas myyttien tekoon 6 ei vaikuttanut ravinnon AA (p) > 0,05). Sitä vastoin -defensiinin ja arginaasi-I:n mRNA-tasot kiduksissa eivät olleet merkitsevästi erilaisia, ja myyttien teko 6:n ilmentyminen lisääntyi merkittävästi ravinnon AA:lla (p < 0,05).

3.6. Immuunijärjestelmään liittyvien geenien ilmentyminen ruoansulatusrauhasessa vasteena Vibrio Parahaemolyticukselle

Useiden kriittisten geenien ilmentymistasot TLR-signalointireitillä, jotka sisältävät tlr4:n, myd88:n, tram-, nf-κb-, ap-1- ja tnf- abalonen ruoansulatusrauhasessa V. parahaemolyticus -infektion jälkeen, on esitetty kuvassa 4. tlr4:n, myd88:n, tram:n, nf-κb:n, ap-1:n ja tnf-:n mRNA-ilmentymät lisääntyivät merkittävästi V. parahaemolyticus -annoksen jälkeen (p < 0.05). Tlr4:n kertainen muutos oli suurin AA0-ryhmässä (10.24-}kertainen) 24 tuntia tartunnan jälkeen, ja sen jälkeen korkein taso laski arvoon 3.{{ 20}}kertainen AA5000-ryhmässä klo 6.00. myd88:n mRNA-taso nousi merkittävästi 12–72 tunnin kohdalla AA0-ryhmässä (6{28}}-kertainen) ja 6-12 tunnin kohdalla AA5000-ryhmässä (3{33}}-kertainen) V. parahaemolyticus -infektio. Tramin ilmentyminen abalonen ruoansulatusrauhasessa V. parahaemolyticus -infektion jälkeen lisääntyi merkittävästi 12 tunnista 72 tuntiin AA0-ryhmässä ja 12 tunnista 24 tuntiin AA5000-ryhmässä. Nf-κb:n kertainen muutos saavutti korkeimman tason 48 tunnin kohdalla AA0-ryhmässä (10.55--kertainen), mitä seurasi korkeimman tason lasku 12 tunnin kohdalla AA5000-ryhmässä (3.{48). }}taiton muutos). Ap-1:n ilmentymistaso nousi merkittävästi 6 tunnista 72 tuntiin AA0- ja AA50-ryhmissä ennen kuin se palautui normaalille tasolle 72 tunnin kohdalla jatkuvan AA-lisäyksen jälkeen. TNF-kerroinmuutos saavutti huippunsa 24 tunnin kuluttua V parahaemolyticus -infektion jälkeen AA0-, AA50-, AA100-, AA200- ja AA500-ryhmissä, ja oli korkeimmillaan 12 tunnin kohdalla AA1000- ja AA5000-ryhmissä.

Tulokset -defensiinin ja myyttien tekemisen 6 tasoista ruoansulatusrauhasessa V. parahaemolyticus -infektion jälkeen on esitetty kuvassa 5. -defensiinin ja myyttien teko 6:n ilmentymistasot abalonen ruoansulatusrauhasessa lisääntyivät merkittävästi V. parahaemolyticus -infektion jälkeen ( p < 0.05). -defensiinin mRNA-taso nousi merkittävästi AA0, AA50, AA100 ja AA200 ryhmissä 12 tunnin ja 24 tunnin kohdalla ja saavutti huippunsa 12 tunnin kohdalla AA200, AA500, AA1000 ja AA5000 ryhmissä neljällä .51-fold, 4.74-fold, 5.20-fold ja 5.{26}}fold. Myyttien tekemisen 6 kertainen muutos abalonen ruoansulatusrauhasessa nousi merkittävästi 12 tunnista 24 tuntiin AA0-, AA50-, AA100-, AA200- ja AA500-ryhmissä ja 6 tunnista 72 tuntiin AA1000- ja AA5000-ryhmissä. Myyttien tekemisen korkein ilmentymistaso 6 havaittiin 12 tunnin kohdalla AA5000-ryhmässä 582--kertaisella.

3.7. Hapettumisen estoon ja apoptoosiin liittyvien geenien ja proteiinien ilmentyminen ruoansulatusrauhasessa ja kiduksessa

Nf-e2-liittyvän tekijän-2 (nrf2), gpx:n, kissan ja cuznsodin mRNA-tasot abalonen ruoansulatusrauhasessa nousivat merkittävästi ruokavalion AA:n asteittain (p < {{4) }}.05) (Taulukko 11). Sitä vastoin Keap1:n mRNA- ja proteiinitasot laskivat merkittävästi ravinnon AA:n jälkeen (p < 0.05), eikä AA vaikuttanut glutationi-s-transferaasiin (GST) (kuva) 6, Taulukko 11) (p > 0.05). Kiduksissa nrf2:n ja gpx:n mRNA-tasot nostivat merkittävästi ravinnon AA:ta (p < 0,05) (taulukko 11). Kuitenkaan keap1:n, cat:n, GST:n ja cuznsodin ilmentymät kiduksissa eivät olleet alttiina ravinnon AA-asteille (p > 0,05). Ruokavalion AA:lla ei havaittu merkittävää vaikutusta Keap1:n proteiiniekspressioon abalonen kiduksissa (p > 0,05) (kuva 6).

Taulukosta 12 erottuu se, että Baxin ja kaspaasi3:n ilmentymistasot abalonen ruoansulatusrauhasessa vähenivät merkittävästi ravinnon AA-arvojen jälkeen (p < 0.05). Sillä välin bcl-2:n mRNA-taso säädeltyi merkittävästi (p < 0.05). Ravinnon AA ei kuitenkaan vaikuttanut kaspaasi7:n ilmentymiseen (p > 0.{{20}}5). Pilkkoutunut kaspaasi3-proteiini ruuansulatusrauhasessa väheni merkittävästi AA:n lisäyksen jälkeen (p < 0,05) (kuvio 6). Kiduksissa kaspaasi7:n ja bcl-2:n mRNA-tasot laskivat merkittävästi ja nousivat, vastaavasti, ravinnon AA:n jälkeen (p < 0,05) (taulukko 12). Tästä huolimatta Baxin ja kaspaasi3:n ilmentymät eivät eronneet merkittävästi kaikkien hoitojen välillä (p > 0,05). Lisäksi katkaistun kaspaasi3:n proteiiniekspressioon abalonen kiduksissa eivät vaikuttaneet ravinnon AA:n asteittaiset tasot (p > 0,05) (kuvio 6).

4. Keskustelu

4.1. Askorbiinihappopitoisuus eri kudoksissa

Tässä tutkimuksessa AA-pitoisuus lihaksessa, kiduksissa ja ruuansulatusrauhasessa lisääntyi ravinnon AA-tasojen noustessa. Samankaltainen tulos löydettiin myös Vundusta (Heterobranchus logfiles), japanilaisesta ankeriaasta ja Chu's croakerista (Nibea-väri) [27,56,57]. AA-pitoisuus oli korkein kiduksissa, jota seurasi abalon ruuansulatusrauhanen. Abalon kidusten, ruuansulatusrauhasen ja lihaksen AA-pitoisuus ei kuitenkaan saavuttanut kyllästymistään 4821,17 mg/kg ravinnon AA:n jälkeen. Kiinalaisella tikkulla (Myxocyprinus asiaticus) AA-pitoisuus maksassa lisääntyi merkittävästi ravinnon AA:lla [58]. Lisääntynyt AA-pitoisuus kiinalaisen tikkarien maksassa ravinnon AA:n jälkeen korreloi maksan terveyteen. Ruohokarppilla AA-pitoisuus pään munuaisissa, pernassa ja ihossa nousi merkittävästi AA-lisän lisäämisen myötä [35]. Päämunuainen, perna ja iho ovat vesieläinten tärkeitä immuunielimiä [59–61]. Nämä tulokset osoittavat, että abalonen ruoansulatusrauhasen ja kidusten lisääntynyt AA-pitoisuus liittyi läheisesti abalonen terveyteen ravinnon AA:n jälkeen ja että AA:n kertyminen heijastaa ravinnon AA-altistustasoja.

4.2. Askorbiinihapon rooli abalonen immuniteetin säätelyssä

Hemosyytit, jotka ovat nilviäisten hemolymfin monipuolisia solukomponentteja, ovat vastuussa monista nilviäisten elämän osa-alueista, kuten immuunivasteesta, biomineralisaatiosta, solujen välisestä kommunikaatiosta ja regeneraatiosta [62,63]. Siksi hemolymfin THC, RB ja PA voivat heijastaa suoraan organismin immuniteettia. AA liittyi läheisesti hemosyyttien THC:hen, RB:hen ja PA:han, mikä johti adaptiivisen immuunijärjestelmän aktivoitumiseen [64,65].

Tässä tutkimuksessa THC:tä, RB:tä ja PA:ta abalonen hemolymfissä lisäsi merkittävästi ravinnon AA. On osoitettu, että asteittain määritellyt ravinnon AA-tasot onnistuivat tehostamaan abalonen immuunitoimintaa. Samanlaisia ​​tuloksia havaittiin Niilin tilapiassa ja ruohokatkarapuissa (Penaeus monodon) [64,66]. Punaisen suoravun (Procambarus clarkii) seerumin RB ja hybridisorubimmonni seerumin PA (Pseudoplatystoma reticulatum × P. corpuscles) vähenivät merkittävästi runsaan AA-lisäannoksen (321,38 mg/kg ja 850 mg/kg) jälkeen. kg) [67,68]. Kuitenkaan ei havaittu merkittävää laskua THC:ssä, RB:ssä ja PA:ssa abalonen hemolymfissä hoidettaessa korkeita AA-lisämääriä (4821,17 mg/kg).

Lysotsyymillä, C3:lla ja C4:llä on keskeinen rooli synnynnäisessä immuniteetissa ja ne suojaavat eläimiä patologisilta infektioilta [69–71]. Tässä tutkimuksessa LZM abalonen CFH:ssa lisääntyi merkittävästi ruokavalion AA-tasojen jälkeen. Tämä oli samanlainen kuin aikaisempien tutkimusten tulokset kobialla (Rachycentron canadum), korealaisella kalliokalalla (Sebastes schlegelii) ja ryypylällä (Epinephelus malabaricus) [29,72,73]. AA-puutos vähensi C3- ja C4-pitoisuuksia ruohokarppissa, ja ravinnon AA voi parantaa merkittävästi immuuniparametreja, kuten C3:a ja C4:ää isoahvenessa [35,74]. Tässä tutkimuksessa ravinnon AA-tasot eivät kuitenkaan vaikuttaneet abalonen CFH:n C4-pitoisuuteen. Abalonen CFH:ssa C3-pitoisuus nousi, vaikka ravinnon AA ei merkittävästi parantanut C3-pitoisuutta. Nämä tulokset paljastivat, että AA:n ravintolisä voisi parantaa kykyä eliminoida patogeenien infektio LZM:llä ja C3:lla, ei C4:llä, parantaakseen abalonen immuuniesteitä.

Luontainen immuniteetti on elintärkeä abalonille, koska selkärangattomilla ei ole adaptiivista immuniteettia [43,49]. TLR:illä on elintärkeä rooli synnynnäisessä immuunijärjestelmässä erilaisia ​​mikrobeja vastaan ​​[75]. PAMP-aktivoidut TLR:t värväävät spesifisiä sovitinmolekyylejä aktivoimaan transkriptiotekijöitä, kuten NF-κB ja AP-1, jotka määräävät synnynnäisen immuunivasteen tuloksen [76]. TLR-signalointi luokitellaan kahteen erilliseen reittiin: MyD88--riippuvainen ja MyD88-riippumaton, jotka indusoivat erilaisia ​​sytokiinejä, kuten TNF- ja IL-1-nisäkkäissä ja muissa vesieläimissä [77,78 ]. MyD{13}}riippuvaisessa reitissä MyD88 on vuorovaikutuksessa IRAK4:n kanssa ja sitten vuorovaikutuksessa TRAF6:n kanssa [79]. TRAF6 voi aktivoida TGF- -aktivoituja kinaasi 1:tä (TAK1) ja TAK{22}}sitovia proteiineja (TAB:ita) [80]. TAK1 aktivoi IKK-kompleksin, joka voi fosforyloida IKB:tä, joka sitoutuu NF-kB-alayksiköihin (joka koostuu p50:stä ja p65:stä) ja fosforyloi MAPK:ita ja JNK:ta, mikä edistää AP-1:n siirtymistä ytimeen [81]. IκB:n tuhoutuminen helpottaa NF-κB:n ydintranslokaatiota [82]. Tuman NF-κB ja AP-1 kohdistuvat sytokiinien, kuten TNF- ja IL-1 transkriptioon, jotka tunnetaan hyvin tulehdusta edistävinä välittäjäaineina, jotka edistävät tulehdusta [76,77,83] . MyD{41}}riippumattomassa polussa TRAM tarvitaan, ja sillä on keskeinen rooli tässä polussa [84]. Solunsisäiset komponentit alavirtaan TLR-signalointireitistä ovat yleisesti ja erittäin konservoituneita selkärankaisten ja selkärangattomien välillä [60,85]. TLR4:n maksansisäistä ilmentymistä säädeltiin alaspäin AA-annelluilla hiirillä (Mus musculus) [86]. AA vaikutti suotuisasti hepatosuojaan konkanavaliini A:n aiheuttamaa immunologista maksavauriota vastaan ​​hiirillä estämällä NF-KB-signaalireittiä [87,88]. Siten näistä tuloksista voidaan päätellä, että AA voi vaikuttaa TLR-signalointireittiin. On kuitenkin edelleen epäselvää, kuinka AA säätelee TLR-signalointireittiä vesieläimissä, erityisesti nilviäisissä.

Tässä tutkimuksessa tlr2:n ja tlr4:n mRNA-tasot ruoansulatusrauhasessa alenivat merkittävästi ruokavalion AA:n tasoa. On ehdotettu, että AA laukaisi TLR-signalointireitin abalonen ruoansulatusrauhasessa (kuva 7). Termillä-a ja tlr-b:llä oli laajempi hahmontunnistuskapasiteetti, ja ne osallistuivat abalonen antibakteeriseen ja antiviraaliseen immuniteettiin [89]; the-a/b:n taustalla olevaa mekanismia ei kuitenkaan vielä tunneta. Ruokavalion AA ei kuitenkaan vaikuttanut tlr-b:n tasoon, ja AA nosti tlr-a:ta merkittävästi tässä tutkimuksessa. Lisätutkimuksia tarvitaan. Myd88:n, irak4:n ja traf6:n ilmentymistä ja MyD88:n proteiinin ilmentymistä abalonen ruoansulatusrauhasessa säädeltiin alas AA:n lisäyksellä, eikä ravinnon AA vaikuttanut traf4:n tasoon. TRAF4 toimii äänenvaimentimena TLR-välitteisessä signaloinnissa vaimentamalla TRAF6:ta [90]. On osoitettu, että ravinnon AA:n aiheuttama TLR-reitin esto ei välittynyt traf4:n kautta abalonen ruoansulatusrauhasessa. AA ei vaikuttanut iκb:n mRNA-tasoon ruuansulatusrauhasessa. NF-κB voidaan kuitenkin siirtää ytimeen vasta IκB-fosfaatin hajoamisen jälkeen [91]. Ravinnon AA alensi merkittävästi nf-kb:n mRNA-ilmentymiä ja tuman NF-KB p65:n proteiiniekspressiota ruoansulatusrauhasessa. Nämä tulokset viittasivat siihen, että AA saattaa tukahduttaa IKB-proteiinin fosforylaatiota vähentääkseen tuman NF-KB:tä. IKK voi aktivoida NF-κB p65:n laukaisemaan NF-kB:n kanonisen reitin, ja IKK voi aktivoida NF-kB p52:n laukaisemaan NF-KB:n ei-kanonisen reitin [92]. On osoitettu, että ravinnon AA voisi aktivoida NF-KB:n kanonisen reitin abalonen ruoansulatusrauhasessa. Lisäksi ravinnon AA alensi merkittävästi tram-, p38-merkki-, roska-, ap-1- ja tnf-:n mRNA-ilmentymiä ja kypsän IL-1-proteiinin tasoa. Nämä tulokset viittaavat siihen, että ravinnon AA voisi estää TLR-signalointireitin Myd88-riippuvaisen reitin kautta NF-κB:n, p38 mark/ap-1 ja JNK/ap-1 sekä Myd{{ 43}}itsenäisiä reittejä lievittää tulehdusta abalonen ruoansulatusrauhasessa. Kiduksissa AA vaikutti myös TLR-signalointireittiin (kuva 7). Kuitenkaan kypsän IL-1:n tram-, p38-merkki- ja roska- ja proteiiniekspression mRNA-tasot eivät olleet merkitsevästi erilaisia. Nämä tulokset osoittivat, että ruokavalion AA voi tukahduttaa TLR-signalointireitin Myd{47}}riippuvaisen reitin kautta, ei MyD{48}}riippumattoman. Estetty TLR-reitti lievitti tulehdusta abalonen kiduksissa NF-κB- ja p38-mark/ap{51}}-reitin kautta, ei JNK/ap{52}}-reitin kautta. Ruokavalion AA:lla oli voimakkaampi vaikutus TLR-polkuun ruoansulatusrauhasessa kuin abalonen kiduksissa.

【Lisätietoja:george.deng@wecistanche.com / WhatApp:8613632399501】