Cistanche Tubulosan vesiuutteiden poistaminen käyttäytymispuutteista Alzheimerin taudin kaltaisessa rottamallissa: merkitys amyloidin kertymisen ja keskushermoston toiminnan kannalta
Apr 15, 2024
Tausta
Alzheimerin taudille (AD), etenevälle neurodegeneratiiviselle häiriölle, on tunnusomaista kognitiiviset puutteet ja kolme neuropatologista tunnusmerkkiä: hermosolujen menetys, seniilit plakit ja neurofibrilliset vyöt [1]. AD:n pääpatogeneesi sisältää kolinergisen hypoteesin ja amyloidikaskadihypoteesin [2]. Amyloidikaskadihypoteesin ydinominaisuus on sivutuotteen amyloidipeptidin (A) muodostuminen amyloidiprekursoriproteiinista amyloidogeenisen reitin kautta [1,2]. Kun A kerrostuu aivoihin, se liittyy aivojen hermosolujen menetykseen, erityisesti kolinergisten hermosolujen degeneraatioon perusetuaivoissa (kolinerginen hypoteesi) [2,3]. Useat tutkimukset viittaavat siihen, että A 1-42:n intracisternaalinen infuusio rotille kertyi ensisijaisesti etukuoreen ja hippokampukseen, mikä aiheutti muistivajetta käyttäytymistehtävissä, mukaan lukien estävät välttämistehtävät ja Morris-vesilabyrintti [3,4]. Siten A 1-42 intracisternaalinen infuusio lateraalikammioon on aiheuttanut AD:n kaltaisia patologisia ja käyttäytymismuutoksia eläinmalleissa [3].
Cistanche tubulosa(Schenk) R. Wightia (lyhennettynä CT) käyttää yleisestiperinteiset kiinalaiset lääkärit hoitamaan unohtamista, impotenssi ja seniili ummetus [5]. Viimeaikaiset tutkimukset ovat osoittaneet, että esikäsittely CT:n fenyylietanoidiglykosideilla voi parantaa kinoliinihapon, A 25-35:n tai yhteisen kaulavaltimon ligaation aiheuttamaa estävän välttämisvasteen ja hermosolujen apoptoosin heikkenemistä hiirillä [6-8] sen antioksidanttiaktiivisuus ja solunsisäisten antioksidanttientsyymien, kuten superoksididismutaasin ja glutationiperoksidaasin, aktiivisuuden lisääminen [9]. Fenyylietanoidiglykosidien kokonaismäärä sisältää pääasiassa 2'-asetyylilakteosidin, akteosidin, cistanosidit, ekinakosidin ja isoakteosidin [10]. Ekinakosidi ja akteosidi voivat estää skopolamiinin aiheuttamaa muistin heikkenemistä hiirillä [11,12]. Siksi oletimme, että CT:llä voi olla hyödyllisiä vaikutuksia AD-potilaille. Tämän hypoteesin testaamiseksi käytimme CT-uutetta, jossa fenyylipropanoidiglykosidien pitoisuudet määritettiin, jotta voidaan tutkia vaikutuksia amyloidin aiheuttamiin histopatologisiin ja käyttäytymismuutoksiin AD:n kaltaisessa rottamallissa. Myhrerin neljää käyttäytymistehtävää käsittelevän meta-analyysin mukaan [13] asetyylikolinergisilla ja katekoliminergisillä toimilla on suuri vaikutus oppimiseen ja muistiin. AD:n kaltainen rottamalli aiheuttaa keskushermoston välittäjäaineiden, kuten asetyylikoliinin ja katekoliamiinien, toimintahäiriöitä, jotka liittyvät läheisesti muistin puutteisiin [3,14]. Näin ollen osoitimme edelleen keskeisen välittäjäaineen toiminnan roolin CT-uutteen aiheuttamassa A 1-42-infuusion aiheuttaman muistin heikkenemisen kumoamisessa mittaamalla keskushermoston välittäjäaineiden tasoja ja niihin liittyvien entsyymien aktiivisuutta.
LUONNOLLINEN CISTANCHE TUBULOSA ALZHEIMERIN TAUDIN ESTÄMISEEN PHGS75% ECH 30% ACT 12%
menetelmät
Kasviuutteen valmistus
Biotekniikan kehityskeskus (Taipei, Taiwan, ROC) tunnisti Cistanche tubulosa (Schenk) Wightin (Citu970429) kuivatut materiaalit ja ne talletettiin Sinphar Tian-Li Pharmaceutical Co., Ltd.:hen (Hangzhou, Kiina). CT:n vesipitoinen uute sisältää kolmefenyylietanoidiglykosidit, ekinakosidi (25,4 %), akteosidi (3,8 %) ja isoakteosidi(4,1 %), jotka määritettiin korkean suorituskyvyn nestekromatografialla plus valodiodirividetektorilla Jiang et al [9] menetelmän mukaisesti. CT-uute valmistettiin juuri steriilillä tislatulla vedellä.
Aiheet
Tässä tutkimuksessa käytettiin urospuolisia Sprague-Dawley-rottia, jotka painoivat 300-350 g ja jotka hankittiin yhtiöltä BioLASCO Taiwan Co. Ltd.. Ne sijoitettiin satunnaisesti neljän rotan tiheyteen metalliverkkohäkkiä kohti (39 × 26 × 21 cm) lämpötilalla (23 ± 1 astetta) ja kosteudella (60 %) säädellyssä ympäristössä, jossa heillä oli vapaa pääsy pelleteissä olevaan standardiruokaan. ja vesijohtovettä ja 12 h - 12 h valo/pimeä-jaksolla (vaalea vaihe: 08:00 - 20:00 h). Kiinan lääketieteellisen yliopiston Institutional Animal Care and Use Committee (IACUC) hyväksyi koeprotokollan (protokollanro 99- 127-B) ja eläinten hoito suoritettiin eläinkokeiden hoidon ja käytön ohjaavien periaatteiden mukaisesti. Laboratorioeläimet. Yhden viikon sopeutumisen jälkeen rottia käytettiin alla oleviin kokeisiin.
AD-tyyppinen rottamalli
AD:n kaltainen rottamalli kehitettiin infusoimalla A 1-42 aivokammioon [4]. Lyhyesti sanottuna rotat nukutettiin fenobarbitaalilla (45 mg/kg, ip) ja sijoitettiin David Kopfin stereotaksiseen instrumenttiin. Infuusiokanyyli istutettiin vasempaan aivokammioon (AP -1.5, ML +0.9, V -3.6 bregmasta) ja jatkuva infuusio A {{10 }} (300 pmol/päivä) pidettiin vähintään kaksi viikkoa kiinnittämällä infuusiokanyyli miniosmoottiseen pumppuun (Alzet 2002; Alza, Palo Alto, CA, USA).
Kokeellinen aikataulu
Kanyylin istutuksen ja mini-osmoottisen pumpun kiinnittämisen jälkeen aloitettiin A 1-42 -infuusio, ja tämä päivä nimettiin päiväksi 0. Seuraavana päivänä (päivä 1) rotille annettiin suun kautta steriiliä tislattua vettä, CT-uutetta (100, 200 mg/kg) tai donepetsiiliä (0,75 mg). /kg) koko A 1-42 -infuusiojakson ajan. CT-uutetta (100, 200 mg/kg) tai donepetsiiliä (0,75 mg/kg) annettiin myös edelleen rotille 1 tunti ennen käyttäytymiskokeita, mukaan lukien avoimen kentän testi ja reikätesti (päivä 7 A 1-42 -infuusion jälkeen) , estävän välttämistesti (päivä 8-9 A 1-42-infuusion jälkeen) ja Morris-vesilabyrintti (päivä 10-14 A 1-42-infuusion jälkeen). Päivänä 15 A 1-42 -infuusion jälkeen rotat tapettiin 1 tunti viimeisen CT-uutteen (100, 200 mg/kg) tai donepetsiilin (0,75 mg/kg) annon jälkeen asetyylikoliiniesteraasin (AChE) ja monoamiinioksidaasin (MAO) aktiivisuudet aivoissa sekä keskushermoston välittäjäaineiden ja niiden metaboliittien tasot. Leikkauksen, lääkehoidon ja käyttäytymistestien aikataulu on esitetty kuvassa 1.
Liikkumis- ja tutkimustoiminta
Liikunta- ja tutkimustoimintaa mitattiin avoimen kentän tehtävällä (Coulbourn Instruments LLC, PA, USA). Jokainen eläin asetettiin yksitellen laitteeseen ja tarkkailtiin 10 minuutin ajan liikeajan, pituuden ja nopeuden (liikkumisaktiivisuus), reikään tulon ja käytetyn ajan (tutkimuksellinen toiminta) tallentamiseksi TruScan-ohjelmistolla v 2.07 (Coulbourn Instruments LLC, PA, USA) [15].
Inhiboiva välttelytesti Käytettiin rottien eston välttämislaitteistoa (Coulbourn Instruments LLC, PA, USA). Huone oli pimeä kokeellisten istuntojen aikana, jotka suoritettiin 09:00 ja 12:00 välillä. Harjoituskokeen aikana (päivä 8) kukin rotta sijoitettiin valoosastoon selkä giljotiinin oveen päin ja mitattiin aika (läpivaiheen latenssi), kunnes rotta tuli pimeään osastoon. Kun rotta tuli pimeään osastoon,
ovi oli kiinni. Välttämätön jalkaisku (0,8 mA 2 s) toimitettiin ristikon lattian läpi. Rotta poistettiin pimeästä osastosta 5 sekuntia shokin jälkeen. Sitten rotta laitettiin takaisin kotihäkkiinsä säilytyskokeeseen asti. Kaksikymmentäneljä tuntia myöhemmin suoritettiin säilytyskoe (päivä 9). Rotta asetettiin jälleen valoosastoon, ovi avattiin ja läpivientiviive kirjattiin muistin säilymisen mittana [15]. Ylärajaksi asetettiin 300 sekuntia.
Morris-vesilabyrinttitehtävä Tilallisen suorituskyvyn arvioimiseksi rotat testattiin Morris-vesilabyrintissa, joka koostui mustasta pyöreästä ruostumattomasta altaasta (halkaisija 165 cm ja korkeus 60 cm), täytettynä. 23 ± 1 asteen vedellä 35 cm:n syvyyteen. Labyrintti jaettiin maantieteellisesti neljään yhtä suureen neljännekseen ja sisälsi vapautuspisteitä jokaiseen neljännekseen. Valkoisen rotan sijainti mustassa poolissa tallennettiin videokameralla ja EthoVision XT -ohjelmistolla (Noldus Information Technology, Leesburg, VA, USA) varustetulla automaattisella videoseurantajärjestelmälaitteella. Uintireitti ja pakolatenssi alustan löytämiseksi kirjattiin jokaiselle kokeelle. Kullekin rotalle annettiin kaksi koetta päivässä neljän peräkkäisen päivän ajan (päivä 10 - 13 A 1-42-infuusion jälkeen), jotta löydettiin pleksilasista piilotettu alusta (halkaisija 10 cm), joka sijaitsi keskellä koillista. kvadrantissa ja upotettuna 1,0 cm vedenpinnan alapuolelle. Koe aloitettiin asettamalla rotta veteen altaan seinään päin yhdessä neljästä neljänneksestä. Jokaisessa kokeessa rotan annettiin uida korkeintaan 120 sekuntia löytääkseen alustan. Kun se onnistui, rotan annettiin 30-toinen lepoaika alustalla. Jos se epäonnistui keskeytetyn ajanjakson aikana, rotalle annettiin 120 sekuntia ja se asetettiin sitten fyysisesti alustalle ja annettiin 30-sek lepojakso. Kummassakin tapauksessa rotalle annettiin välittömästi seuraava koe lepoajan jälkeen [15]. Neljää päivittäistä istuntoa seuraavana päivänä (päivä 14) koetintesti suoritettiin vertailumuistin mittana. Plexiglass-lava poistettiin altaalta, ja jokainen rotta vapautettiin neljännestä vastapäätä alustaa. Anturin testistä 60 sekunnin aikana mitatut parametrit olivat aika ja etäisyys kussakin kvadrantissa, joka kului erityisesti harjoituskvadrantin alustan etsimiseen, sekä uintinopeus [15].
LUONNOLLINEN CISTANCHE TUBULOSA ALZHEIMERIN TAUDIN HOITOON PHGS75% ECH 30% ACT 12%
1-42 immunohistokemiallinen värjäys
Rotat nukutettiin natriumpentobarbitaalilla (45 mg/kg) ja perfusoitiin suolaliuoksella heidän sydämen vasemman kammion kautta, mitä seurasi 4 % paraformaldehydillä fysiologisessa suolaliuoksessa. Jälkifiksaation jälkeen koko aivot poistettiin ja valmisteltiin parafiiniviipaleita varten. Jokaisesta rottasta otettiin kolme aivoleikkaa (10 μm) mikrotomilla (Leica 2030 Biocut). Kudoksia inkuboitiin yön yli 4 asteessa hiiren monoklonaalisen anti-ihmisamyloidiproteiinin 17-24 kanssa (laimennus 1:300, Dakopatts A/C; Glostrup, Tanska). Immunoleimattuja leikkeitä kehitettiin 0,05 % diaminobentsidiinillä käyttäen Vectastain-pakkausta (Vector Laboratories, Burlingame, CA, USA). Aivoleikkeet mitattiin 40-kertaisella suurennuksella, ja vähintään 20 kenttää kustakin aivolohkosta laskettiin kuva-analysaattorilla (Leica, Q500MC, Nussloch, Saksa).
Kortikaalisten ja hippokampuksen välittäjäaineiden tasojen mittaus
Asetyylikoliinitasojen mittaamiseksi rotat tapettiin mikroaaltosäteilytyksellä. Katekoliamiinitasojen mittaamista varten rottien päät leikattiin. Heidän aivonsa poistettiin nopeasti kallosta ja erotettiin välittömästi aivokuoreen ja hippokampukseen jäällä Glowinskin ja Iversenin protokollan mukaisesti [16]. Sitten kaikki aivokudokset homogenisoitiin jääkylmällä 0,2 M perkloorihapolla ja sentrifugoitiin 14, 000 rpm 15 minuuttia 4 asteessa. Supernatantit kerättiin, laitettiin 0,22 μM Ultrafree MC -sentrifugisuodatinyksiköihin (Millipore, USA) ja sentrifugoitiin jälleen 5 minuuttia 4 asteessa. Kerätyt näytteet säilytettiin -80 asteessa keskushermoston välittäjäaineiden ja niiden metaboliittien pitoisuuksien mittaamista varten korkean suorituskyvyn nestekromatografialla ja sähkökemiallisella detektiolla (EICOM HTEC-500, Japani).
Kortikaalisen ja hippokampuksen AChE- ja MAO-aktiivisuuden määrittäminen
Kukin aivokuori ja hippokampus homogenisoitiin 9-voltin jääkylmässä fosfaattipuskuroidussa suolaliuoksessa. Homogenaatteja sentrifugoitiin 12, 000 rpm 15 minuuttia 4 asteessa, ja supernatantit säilytettiin -80 asteessa käyttöön asti. AChE-aktiivisuus mitattiin Ellmanin menetelmällä [17]. Aivohomogenaatteja inkuboitiin 5,5'-ditiobis(2-nitrobentsoehapon) kanssa 25 asteessa 10 minuuttia ja sitten lisättiin asetyylitiokoliinia värin kehittämiseksi. 5-tio-2-nitrobentsoehapon tuotanto mitattiin 412 nm:ssä. AChE-aktiivisuus ilmaistiin U AChE:nä per mg proteiinia. MAO-A- ja MAO-B-aktiivisuudet määritettiin inkuboimalla reaktioseosta, joka sisälsi rotan aivohomogenaatteja, 5 U/ml piparjuuriperoksidaasia, 100 μM ampleksipunaista ja substraattia (5 mM serotoniinia MAO-A:lle tai 5 mM bentsyyliamiinia MAO- B) 25 asteessa 60 min. Entsyymiaktiivisuus ilmaistiin aktiivisuuden prosentteina suhteessa vehikkelillä infusoituihin rottiin [18]. Proteiinipitoisuus määritettiin BioRad-proteiinimäärityssarjalla käyttäen naudan seerumin albumiinia standardina.
Tilastollinen analyysi
Inhibiittoreiden välttämistestin tiedot analysoitiin käyttämällä Kruskal-Wallis ei-parametrista yksisuuntaista varianssianalyysiä, jota seurasi Mann-Whitneyn U-testi. Avaruussuorituskyvystä, koetintestistä, amyloidikertymän suhteesta, AChE:n ja MAO:n aktiivisuudesta sekä keskushermoston välittäjäaineiden ja niiden metaboliittien tasoista saaduille tiedoille suoritettiin yksisuuntainen varianssianalyysi (ANOVA), jota seurasi Scheffin testi. Tilastollisen merkitsevyyden kriteeri oli P < 0,05 kaikissa tilastollisissa arvioinneissa.
Tulokset
CT:n tai donepetsiilin vaikutukset liikunta- ja tutkimustoimintoihin
Liikenteen ajassa, pituudessa tai nopeudessa ei ollut eroa ajoneuvoon infusoidun ja A 1-42-infusoidun ryhmän välillä (P > 0.05). TT-uute (100, 2{{20}}0 mg/kg) tai donepetsiili (0,75 mg/kg) eivät muuttaneet liikeaikaa, pituus tai nopeus A 1-42--infusoitujen rottien (P > 0,05) (kuva 2 (A) - (C)). Reiässä vietetty aika ja reikään sisäänpääsy väheni hieman, mutta ei tilastollisesti merkitsevästi ajoneuvoa saaneiden ja A 1-42- 42- -infusoitujen ryhmien välillä (P > 0,05). CT-uute (100, 200 mg/kg) ei muuttanut A-1-42--infusoitujen rottien reikässä vietettyä aikaa tai reikiin pääsyä (P > 0,05). Donepetsiili annoksella 0,75 mg/kg lisäsi kuitenkin reiässä vietettyä aikaa ja A-1-42--infusoitujen rottien tulomäärää reikään (P < 0,05) (kuvio 2 (D) ja (E)).
CT:n tai donepetsiilin vaikutukset estävään välttämistehtävään ja Morris-vesilabyrinttiin
Inhiboivan välttämistestin hankintakokeessa ei ollut eroa läpivientilatenssissa minkään hoitoryhmän välillä (tietoja ei esitetty). Retentiotutkimuksessa havaittiin kuitenkin merkittävää laskua läpiviennin latenssissa A 1-42--infuusioryhmissä verrattuna vehikkeliä saaneeseen ryhmään (P < 0.0{{12) }}1). CT-uute (100, 200 mg kg) tai donepetsiili (0,75 mg/kg) lisäsi retentiokokeen vaiheittaista latenssia A 1-42--infuusiorotilla (P < 0,001) (Kuva 3 (A)).
Spatiaalinen suorituskyky kahdeksan neljän harjoituspäivän kokeessa (päivästä 10 päivään 13 A 1-42-infuusion jälkeen), erityisesti kokeissa 3 - 7, A 1-42--infuusioryhmässä oli merkitsevästi. heikentynyt verrattuna ajoneuvoilla infusoituneeseen ryhmään (P < {{10}}.01). CT-uute (200 mg/kg) tai donepetsiili (0,75 mg/kg) A 1-42-infuusion jälkeen paransi A 1-42 -infuusion aiheuttamaa spatiaalisen suorituskyvyn heikkenemistä (P < 0,05, P < 0,01) (kuva 3 (B)).
Verrattuna ajoneuvoilla infusoituneeseen ryhmään, 1-42-infuusioryhmä osoitti merkittävästi vähemmän aikaa, joka vietti lava-kvadrantissa harjoituksen aikana (P < 0.001 ). Kaikki CT-uutteen ja donepetsiiliannokset (0,75 mg/kg) pidensivät merkittävästi alustaneljännessä vietettyä aikaa verrattuna A-1-42--infuusioryhmään (P < 0,001) (Kuva 3 (C) ). Uintinopeudessa ei ollut eroja vehikkelillä infusoidun ryhmän, 1-42-infuusioryhmän tai CT-uutteen tai donepetsiilihoitoryhmien välillä (P > 0,05) (Kuva 3 (D)).
CT:n tai donepetsiilin vaikutukset A 1-42 -kertymiin
Amyloidiproteiinin kerääntyminen A-{0}}-infusoitujen rottien aivoihin oli enemmän kuin vehikkelillä infusoitujen rottien (kuvio 4 (A) ja (B)). CT-uute (10{{20}}, 200 mg/kg) tai donepetsiili (0,75 mg/kg) vähensi amyloidiproteiinin kertymistä A:n aivoihin 1-42-infusoidut rotat (kuva 4 (C) - (E)). CT-uutteen tai donepetsiilin vaikutukset A 1-42 -kertymän suhteeseen A 1-42--infusoitujen rottien aivoissa on esitetty kuvassa 4 (F). Verrattuna vehikkeliä saaneeseen ryhmään, 1-42-infuusioryhmässä oli merkittävästi suurempi A 1-42 -kertymäsuhde aivoihin (P < 0,01). CT-uute (100, 200 mg/kg) tai donepetsiili (0,75 mg/kg) vähensi A 1-42:n kertymisen suhdetta A 1-42--infusoitujen rottien aivoihin (P < 0,05, P < 0,01) .
CT:n tai donepetsiilin vaikutukset aivojen välittäjäaineisiin ja niiden metaboliitteihin
Jatkuva {0}} infuusio alensi aivokuoren ja hippokampuksen asetyylikoliinitasoja (P < 0.05 aivokuorelle, P < 0.001 hippokampuksella), mutta vain alensi hippokampuksen koliinitasoja (P < 0,01). CT-uute (200 mg/kg) tai donepetsiili (0,75 mg/kg) kumosi tämän aivokuoren ja hippokampuksen asetyylikoliinitasojen alenemisen A 1-42--infusoiduilla rotilla (P < 0,05) (taulukko 1).
Jatkuva A:n {{0}} infuusio alensi aivokuoren ja hippokampuksen DA-tasoja (P < 0.01), mutta vain alensi hippokampuksen NE-tasoja (P < {{1{{ 13}}}}.05). CT-uute (100 ja 200 mg/kg) vain kumosi DA-tasojen laskun A 1-42--infusoitujen rottien hippokampuksessa (P < 0,05). Donepetsiili ei muuttanut hippokampuksen DA-tasojen laskua (P > 0,05), mutta liioitteli hippokampuksen NE-tasojen laskua A 1-42--infusoiduilla rotilla (P < 0,01) (taulukko 1).
CT:n tai donepetsiilin vaikutukset aivojen AChE-, MAO-A- ja MAO-B-aktiivisuuteen
Jatkuva A:n {{0}} infuusio lisäsi aivokuoren ja hippokampuksen AChE-aktiivisuutta (P < 0.05 hippokampukselle, P < 0.0 1 aivokuorelle). CT-uute (200 mg/kg) tai donepetsiili (0,75 mg/kg) vain kumosivat aivokuoren AChE-aktiivisuuden kasvun A 1-42--infuusioroissa (P < 0,05 donepetsiilille, P < 0,01 CT:lle) (Kuva 5 ( A) ja (B)).
Jatkuva A:n {{0}} infuusio lisäsi aivokuoren MAO-A- ja MAO-B-aktiivisuutta (kuva 5 (C) ja (E), P < 0.05, P < 0.01), mutta vähensi hippokampuksen MAO-A- ja MAO-B-aktiivisuutta rotilla (kuva 5 (D) ja (F), P < 0.05) . CT-uute annoksella 200 mg/kg vain kumosi kortikaalisen MAO-A-aktiivisuuden kasvun A 1-42--infusoiduilla rotilla (kuva 5 (C), P < 0,01). Donepetsiili (0,75 mg/kg) ei muuttanut MAO-A- ja MAO-B-aktiivisuuksien muutosta A 1- 42--infusoiduissa rotissa (kuvio 5 (C) - (F), P > 0,05).
Keskustelu
Monet raportit soluviljelmämäärityksistä ja eläinkokeista osoittivat, että A on avainproteiini AD-potilailla [2,3]. A 1-42 aiheutti neuronivaurion ja apoptoosin oksidatiivisen stressin kautta in vitro [2,3]. A 1-42:n sisäinen injektio rotille aiheutti muistin heikkenemistä, muutoksia aivojen morfologiassa ja kolinergisen hermosolujen rappeutumista [3,4]. Tässä tutkimuksessa A 1-42:n jatkuva infuusio aivokammioon osmoottisella pumpulla (Alzet 2002) aiheutti käyttäytymishäiriöitä, mukaan lukien tutkimuskäyttäytymistä,
estävä välttämisvaste ja Morris-vesilabyrintin avaruudellinen suorituskyky rotilla. Nämä oireet olivat samanlaisia kuin aikaisemmissa raporteissa [3,4]. Donepetsiili, selektiivinen AChE:n estäjä, omaa hermoja suojaavaa aktiivisuutta A:n aiheuttamaa toksisuutta vastaan in vitro ja in vivo [19,20]. Nykyiset tietomme ovat yhdenmukaisia yllä olevan raportin [20] kanssa, joka osoittaa, että donepetsiili paransi A 1-42 -infuusion aiheuttamia käyttäytymishäiriöitä rotilla. CT-uutteen (100, 200 mg/kg) mahalaukunsisäinen anto koko A 1-42 -infuusiojakson aikana paransi havaittuja A 1-42:n aiheuttamia käyttäytymishäiriöitä. Tämä muistia parantava vaikutus on yhdenmukainen muiden raporttien kanssa, jotka osoittavat, että Cistanche-lajin fenyylietanoidiglykosidit voisivat suojata estävän välttämisvasteen heikkenemistä, jotka aiheutuvat akuutista A 25-35 -injektiosta hiirissä [6]. Viimeaikaiset kliiniset raportit osoittivat myös, että AD-potilaat, joille annettiin CT-glykosideja 48 viikon ajan, eivät osoittaneet kognitiivisten toimintojen pahenemista [21]. Lisäksi CT-uute käytetyllä annoksella (100, 200 mg/kg) sisälsi ekinakosidia (25,4, 50,8 mg), akteosidia (3,8, 7,6 mg) ja isoakteosidia (4,1, 8,2 mg) tässä tutkimuksessa suoritetun määrämäärityksen mukaan.Ekinakosidi (50 mg/kg) ja akteosidi(1 mg/kg) voi estää skopolamiinin aiheuttamia muistihäiriöitä hiirillä [11,12]. Niinpä suosittelemme sitäCT on mahdollinen amnesiaa ja dementiaa ehkäisevä kasvikun se kvantifioidaan ja standardoidaan sen fenyylietanoidiglykosidien, erityisesti ekinakosidin, akteosidin ja isoakteosidin, kautta.
LUONNOLLINEN CISTANCHE TUBULOSA ALZHEIMERIN TAUTEEN PHGS75% ECH 30% ACT 12%
Amyloidikaskadihypoteesin mukaan A:n aiheuttamat muistivajeet johtuvat solunsisäisestä oksidatiivisesta stressistä ja hermosolujen apoptoosista, joita edistää A:n muodostuminen ja sitä seuraava aggregaatio ja kerrostuminen [2,3]. Laskeuma liittyy läheisesti keskusetuaivojen kolinergisten hermosolupiirien toimintahäiriöön [2,3]. Sentraalisten kolinergisten hermosolujen toimintahäiriö, mukaan lukien alentuneet aivojen asetyylikoliinitasot ja AChE-aktiivisuuden lisääntyminen, liittyy amnesian ja A-kertymän asteisiin AD-aivoissa [2,3]. Yllä olevien tulostemme mukaan tutkimme edelleen CT-uutteen tai donepetsiilin vaikutuksia A -
aiheuttamia patologisia muutoksia rotilla. Havaitsimme, että A 1-42 jatkuva infuusio aiheutti merkittävän patologisen muutoksen A-kertymässä hippokampuksen ja prefrontaalisen aivokuoren ympärillä ja siihen liittyvän merkittävän biokemiallisen muutoksen: asetyylikoliini- ja koliinitasojen laskun ja AChE-aktiivisuuden lisääntymisen erityisesti hippokampuksen alueet. Nämä patologiset oireet olivat samankaltaisia kuin muut raportit [4,22], jotka osoittavat, että A:n sisäinen injektio 1-42 2 viikon ajan aiheuttaa A:n kerääntymisen rotan aivoihin käyttämällä immunohistokemiallista värjäystä ja aiheuttaa sitten AChE-aktiivisuuden noususäätelyä sisällä ja sen ympäristössä. seniilit plakit. Tämä ylössäätely rohkaisee A:n kokoamista fibrilleiksi, ja nämä A-fibrillit johtavat lopulta A-neurotoksisuuteen ja erityisesti kolinergiseen toimintahäiriöön [23]. A 1-42-infusoiduissa rotissa donepetsiili vähensi A:n kertymän suhdetta ja muutosta aivokuoren AChE-aktiivisuudessa ja palautti ACh-tasot kaikilla aivoalueilla. Nykyiset tietomme olivat yhdenmukaisia toisen raportin [19,20] kanssa, joka osoittaa, että donepetsiili saattaa estää AChE:n aktivaatiota tuottaen hermoja suojaavia ja muistia parantavia vaikutuksia A 1-42:a vastaan. CT-uute (100, 200 mg/kg) vähensi myös A:n kerääntymistä erityisesti hippokampuksen alueilla, mutta vain 200 mg/kg annostus kumosi aivokuoren AChE-aktiivisuuden muutokset ja aivokuoren ja hippokampuksen asetyylikoliinitasojen laskun. Näiden patologisten ja biokemiallisten tulosten perusteella ehdotimme, että CT-uute annoksella 200 mg/kg käänsi aivokuoren ja hippokampuksen kolinergisen toiminnan vähentämällä A:n kertymistä. Muut raportit osoittavat, että Cistanche-lajin fenyylietanoidiglykosidit tai akteosidit voisivat suojata A 25-35:n aiheuttamia muistihäiriöitä tai hermosolujen vaurioita antioksidanttimekanismin kautta ja vähentämällä Bax/Bcl2-suhdetta in vivo tai in vitro [6,24] . Äskettäinen raportti osoitti lisäksi, että akteosidi esti A-1-42-aggregaatiota annoksesta riippuvalla tavalla käyttämällä tioflaviini-T-määritystä [25].Ekinakosidivähentynyt AChE-aktiivisuus SAMP/8-hiirillä [12]. Siten ehdotamme, että CT-uutteen muistia parantavat vaikutukset voivat liittyä vähentyneeseen A-kertymään ja neurotoksisuuteen, mikä johtaa negatiivisten muutosten kumoamiseen aivokuoren ja hippokampuksen kolinergisessä toiminnassa.
Kliiniset tutkijat havaitsivat, että AD-potilailla on monimutkaisia neurokemiallisia häiriöitä, mukaan lukien katekoliminergiset, kolinergiset ja glutamiinirgiset hermosolut [26]. Joissakin raporteissa havaittiin myös, että AD-potilailla on lisääntynyt MAO-B-aktiivisuus terveisiin verrokkeihin verrattuna, ja tämä lisääntynyt MAO-B-aktiivisuus saattaa heijastaa poikkeavuuksia dopaminergisissa järjestelmissä [27]. AD:n kaltaisissa rottamalleissa A 1-42 aiheuttaa myös katekolaminergisen toimintahäiriön [14]. Jotkut nootrooppiset aineet tai selegiliini paransivat A-indusoituja muistivajeita tehostamalla katekoliminergistä aktiivisuutta tai moduloimalla MAO-aktiivisuutta [4,28]. Tässä tutkimuksessa A 1-42 jatkuva infuusio aiheutti myös aivokuoren ja hippokampuksen DA-tasojen ja hippokampuksen NE-tasojen laskun. Havaitsimme myös, että A 1-42 jatkuva infuusio johti erilaiseen muutokseen aivokuoren ja hippokampuksen MAO-aktiivisuuksissa, mikä sisälsi aivokuoren MAO-A- ja MAO-B-aktiivisuuksien lisääntymisen ja hippokampuksen MAO-A:n ja MAO:n heikkenemisen. -B-toimintaa. Nämä katekoliminergisen toimintahäiriön patologiset oireet olivat samanlaisia kuin muut raportit [14,27]. Donepetsiili ei muuttanut näitä A 1-42 -infuusion aiheuttamia katekoliminergisiä muutoksia, mutta alensi hippokampuksen NE- ja MHPG-tasoja verrattuna A 1-42--infusoituun rottiin. Tämä tieto on yhdenmukainen toisen raportin [19,20] kanssa, joka osoittaa, että donepetsiilillä on muistia parantavia vaikutuksia A 1-42 vastaan, jotka vaikuttavat pääasiassa sen selektiivisten AChE:tä inhiboivien vaikutusten kautta, mutta mahdollisesti aiheuttavat aluespesifisiä muutoksia joissakin välittäjäaineissa. CT-uute vain kumosi A 1-42-infuusion aiheuttaman hippokampuksen DA-tasojen laskun ja aivokuoren MAO-A-aktiivisuuden lisääntymisen. Tästä syystä ehdotamme, että CT-uute annoksella 200 mg/kg kumosi negatiiviset vaikutukset hippokampuksen dopaminergiseen toimintaan pääasiassa vähentämällä A:n kerääntymistä hippokampuksen alueilla. Donepetsiili kuitenkin vähensi myös A:n kertymistä, mutta ei vaikuttanut hippokampuksen dopaminergiseen toimintaan.
Johtopäätös
Nykyisten tietojemme ja muiden raporttiemme perusteella CT on mahdollinen muistin ja dementiaa ehkäisevä kasvi [6-8,21]. Ekinakosidin ja akteosidin pitoisuudet tässä käytetyssä CT-uutteen annoksessa ovat riittävät tuottamaan muistia parantavia vaikutuksia SAMP/8-hiirissä tai skopolamiinin aiheuttamaa muistinmenetystä [11,12]. Tästä syystä ehdotamme edelleen, että dementiaa torjuvana kasvina on tärkeää standardoida ekinakosidin, akteosidin ja isoakteosidin pitoisuusalueet CT-uutteessa. Lisäksi CT-uutteen muistia parantava mekanismi, joka eroaa donepetsiilin mekanismista, vähentää A:n kertymistä ja kolinergisiä toimintahäiriöitä estämällä AChE-aktivaatiota ja aktivoimalla nikotiinireseptoreita ja fosfoinositidin 3-kinaasi/Akt-reittejä [19,20] , johtuu A-kertymän vähenemisestä ja kolinergisen ja hippokampuksen dopaminergisen toimintahäiriön palautumisesta. Lisäksi muut raportit ovat osoittaneet tämänCistanche-lajin fenyylietanoidiglykosidien kokonaismääräniillä on neuroprotektiivisia ja muistia parantavia vaikutuksia antioksidanttisten ja neurotrofisten vaikutustensa ansiosta [9, 29, 30]. Ekinakosidilla ja akteosidilla on myös hermostoa suojaavia vaikutuksia H2O2- MPTP- tai A 25-35--indusoidussa neurotoksisuudessa antioksidantti- ja neurotrofisten aktiivisuuksien kautta [24,31,32]. Tästä syystä tulevaisuudessa tulisi tutkia, toimiiko CT-uutteen suojaava vaikutus AD:n kaltaisessa rottamallissa aggregaatiota estävän, hermostoa suojaavan tai neurotrofisen vaikutuksen kautta A:ta vastaan.
LUONNOLLINEN CISTANCHE TUBULOSA Alzheimerin taudin hoitoonPHGS75% ECH 30% ACT 12%
