Wenyang Tongbian -rakeiden valmistustekniikka

Abstrakti:

TavoiteMäärittää ja optimoida Wenyang Tongbian -rakeiden valmistustekniikka.

menetelmätVesikeite uutettiin. Indekseinä käytettiin echinacea-glykosidin määrää monarkkilääkkeessä ja saantoyhdistettä. L9 (34) ortogonaalitestiä käytettiin optimoimaan Wenyang Tongbian -rakeiden uuttaminen. Paras muovausprosessi optimoitiin rakeistusvaikeuden, muovattavuuden ja partikkelisaannon perusteella. Tulokset Optimaalinen uutto sisälsi 1 0 kertaisen veden lisäämisen ja uuttamisen 3 kertaa, 1 tunti joka kerta. Paras muodostusprosessi: apuaineen tyyppi oli dekstriini, apuaineiden suhde oli 1∶0,9 ja paras kostutusaine oli 85 % etanolia. Päätelmä Uutto- ja muovausprosessi on vakaa ja kohtuullinen, yksinkertainen ja toteutettavissa, hyvällä toistettavuudella, mikä voi tarjota perustan Wenyang Tongbian -rakeiden teolliselle tuotannolle.

Avainsanat: Wenyang Tongbian -rakeet; ortogonaalinen testi; louhinta; muovaus

UUSI YRTTIFORMULAATIO MUNUAISILLEYANG-PUITE

Wecistanchen tukipalvelu

Sähköposti:wallence.suen@wecistanche.com

Whatsapp/Puhelin:+86 15292862950

Yangin puutos ummetuson yleistä vanhuksilla ja naisilla. Hoitomenetelmä ei saa olla yksinkertainen puhdistus. Warming Yang -menetelmällä voidaan saavuttaa hyviä tuloksia [1]. Wenyang Tongbian Granules on sairaalassa käytettävä valmiste, joka on kehitetty Hubein provinssin perinteisen kiinalaisen lääketieteen sairaalan professorin Lin Aizhenin kliinisen kokemuksen perusteella vanhusten toiminnallisen ummetuksen hoidosta. Se koostuu Cistanche deserticolasta, kanelinkuoresta, astragaluksesta ja Atractylodes macrocephalasta. Koostumuksessa Cistanche deserticola toimii virkistävänä munuaisten yangina ja hyödyttää esanssia ja verta, ja se on tärkein lääke, joka lämmittää yangia; kanelinkuoren tehtävänä on lämmittää meridiaaneja ja vapauttaa verisuonia, täydentää tulta ja tukea yangia; astragaluksen tehtävänä on nostaa yangia ja täydentää qi:tä, kutistaa haavaumia ja edistää kudosten uusiutumista; ja Atractylodes macrocephala vahvistaa pernaa ja täydentää qi:tä, kuivattaa kosteutta ja edistää diureesia.

Tutkimukset ovat osoittaneet, että fenyylietanoliglykosidit ovat Cistanche deserticolan tärkeimmät vaikuttavat aineet [2]. Niiden joukossa ekinakosidi ja verbaskosidi ovat Cistanche deserticolan laadunvalvontaan tyypillisiä ainesosia, kuten Kiinan farmakopeassa on määritelty. Liu Xianhong et ai. [3] päätteli in vivo ihmiskokeissa, että Cistanche deserticola soveltuu ummetuksen kliiniseen hoitoon ja voi hoitaa sekä oireita että perimmäistä syytä. Kanelinkuoren tärkeimpiä kemiallisia komponentteja ovat haihtuvat öljyt, polysakkaridit, flavonoidit jne. Nykyaikaiset farmakologiset tutkimukset ovat osoittaneet, että kanelinkuorella on farmakologisia vaikutuksia, kuten verisuonia laajentavia, mahahaavoja ehkäiseviä ja antibakteerisia vaikutuksia [4]. Astragalus-polysakkaridit, flavonoidit ja astragalosidi IV ovat tärkeimmät kemialliset komponentit, joilla on immunomodulatorisia vaikutuksia [5]. Atractylodes macrocephala vahvistaa pernaa ja säätelee suolistoflooran häiriöitä, ja sitä voidaan käyttää kliinisesti ruoansulatuskanavan toimintahäiriöiden hoitoon [6]. Alkuperäistä reseptiä käytetään pääasiassa kiinalaisessa lääketieteessä, mutta sillä on haittoja, kuten keittämisen epämukavuus, suuri annostus ja kantohaitat. Jotta tätä kliinistä kokemusta koskevaa reseptiä voitaisiin käyttää laajalti kliinisessä käytännössä, se kehitettiin rakeiksi. Tässä kokeessa käytettiin indikaattoreina tahnan saantoa ja päälääkkeen pääasiallisen vaikuttavan aineen ekinakosidin pitoisuutta, jatkettiin perinteisen vesikeittoprosessin käyttöä ja L9 (34) ortogonaalitestimenetelmällä optimoitiin lisätyn veden määrä. , keittoaika ja keittoajat uuttoprosessissa parhaan uuttoprosessin saavuttamiseksi. Samaan aikaan tutkittiin rakeiden muovausprosessia vakaan ja kohtuullisen muovausprosessin määrittämiseksi, mikä tarjosi referenssin valmisteen pilottituotantoon, laadunvalvontaan ja kliiniseen käyttöön [7-8].

1 Instrumentit ja reagenssit

1.1 Laitteet

Alliance e2695korkean suorituskyvyn nestekromatografi, 2998 diodirividetektori (Waters, USA), ES225SMDR 1/100, 000 analyyttinen vaaka (Precisa, Sveitsi), UPT-11-10T ultrapuhdas vesikone (Shenzhen UPT Technology Co., Ltd.), KQ-500VDE-kaksitaajuinen CNC-ultraäänipuhdistin (Kunshan Ultrasonic Instrument Co., Ltd.).

1.2 Koelääkkeet

Viini Cistanche-viipaleet(eränumero: 2322050113, valmistettu Sisä-Mongoliassa), kaneliviipaleet (eränumero: 2323020103, valmistettu Guangxissa), astragalus-viipaleet (eränumero: 2323020105, valmistettu Gansussa), Atractylodes macrocephalatchs10,8 ang ) (Hubei Chenmei Chinese Medicine Co., Ltd., Institute of Instituten pääapteekkari Chen Shuhe on tunnistanut kaikki viipaleet aitoiksiPerinteinen kiinalainen lääketiedeHubein provinssin perinteisen kiinalaisen lääketieteen sairaalasta, ja he ovat päteviä vuoden 2020 painoksen mukaankiinalainen farmakopeaosa I). Ekinakosidivertailuaine(eränumero: 111670-201907, puhtaus: 91,8%, China Food and Drug Inspection Research).

Dekstriini (eränumero: 230102), maissitärkkelys (eränumero: 221008) (Henan Zhenghong Pharmaceutical Excipients Co., Ltd.), sakkaroosi (eränumero: TF28221205), mikrokiteinen selluloosa (eränumero: TF471211:0) TF463Y230101) (Hunan Jiudian Hongyang Pharmaceutical Co., Ltd.).

2 Menetelmät ja tulokset

2.1 Ekinakosidipitoisuuden määrittäminen

2.1.1 Kromatografiset olosuhteet: Agilent 5 TC-C18 (250 nm × 4,6 mm, 5 μm) käytettiin kromatografiapylväänä; metanolia käytettiin liikkuvana faasina A, 0,1 % muurahaishappoliuosta liikkuvana faasina B, gradienttieluointi (0-17 min, 26,5 % A; 17-20 min, 26,5 % → 29,5 % A; 20-54 min,

29,5 %A, 54-55 min, 29,5 % → 26,5 %A; 55-60min, 26,5 %A); virtausnopeus 1.{11}} ml·min-1; kolonnin lämpötila 30 astetta; diodiryhmäilmaisin, ilmaisuaallonpituus 330 nm; injektiotilavuus 10 µl; teoreettisen kilpinumeron, joka lasketaan ekinakosidipiikin perusteella, tulee olla vähintään 3000[9].

2.1.2 Vertailuliuoksen valmistaminen

Ota sopiva määrä ekinakosidia, punnita tarkasti 9,65 mg, aseta se 25 ml:n mittapulloon, lisää 50 %.

metanolia liukenemaan ja laimentamaan merkkiin asti vertailukantaliuokseksi. Pipetoi tarkasti 1 ml ekinakosidin kantaliuosta 25 ml:n mittapulloon, lisää 50 % metanolia merkkiin asti laimentamiseksi, ravista hyvin ja valmista vertailuliuos, joka sisältää 14,17 ug/1 ml [9].

2.1.3 Testiliuoksen valmistaminen

Ota noin 0,5 g kuivaa tahnajauhetta, jauha se jauheeksi, punnita tarkasti, laita ruskeaan tulpalliseen kartiomaiseen pulloon, lisää 50 ml 50 % metanolia tarkasti, sulje tiiviisti, ravista hyvin, punnitse, käsittele ultraäänellä 40 min (teho 250 W, taajuus 45 kHz), anna jäähtyä, punnita uudelleen, lisää 50 % metanolia laihtuneen painon korvaamiseksi, ravista hyvin, anna seistä, ota supernatantti, suodata se ja ota suodos.

2.1.4 Negatiivisen näyteliuoksen valmistaminen

Ota noin 0,5 g kuivaa tahnajauhetta, jonka koostumus ei ole viinin Cistanche-lääkeaineita, ja valmista negatiivinen näyteliuos kohdan "2.1.3" mukaisesti.

2.1.5 Spesifisyystesti

Pipetoidaan tarkasti testiliuos, vertailuliuos ja negatiivinen näyteliuos, ja mitataan kohdan 2.1.1 mukaisesti kromatografisten olosuhteiden mukaisesti. Kirjaa kromatogrammi. Tulokset on esitetty kuvassa 1. Negatiivisen näytteen kanssa ei ole häiriöitä. Tulokset osoittavat, että menetelmällä on hyvä spesifisyys.

Kuva 1 Wenyang Tongbian -rakeiden spesifinen kromatogrammi

2.1.6 Lineaarisen suhteen tutkimus

Ota sopiva määrä ekinakosidia, punnita se tarkasti 10,11 mg:aan, laita se 25 ml:n mittapulloon, lisää 50-prosenttista metanolia sen laimentamiseksi sarjaksi vertailuliuoskonsentraatioita ja injektoi se kromatografisten olosuhteiden mukaisesti kohdassa "2.1. .1" ekinakosidin huippualueen arvon määrittämiseksi. Piirrä standardikäyrä, jossa ekinakosidin viitemäärän injektiomäärä on vaaka-akseli (ug, X) ja huippualueen integraaliarvo pystyakselina (Y), ja suorita lineaarinen regressio.

Regressioyhtälö on Y=1.294×104X - 4.931×104, r=0.9997. Tulokset osoittavat, että ekinakosidin injektiomäärän huippualueen integraaliarvo on hyvässä lineaarisessa suhteessa välillä 1,4850 ja 371,2392 ug.

2.1.7 Tarkkuustesti

Imu tarkasti 10 μl vertailuliuosta (massapitoisuus 37,12 ug·mL-1) kohdassa "2.1.6", injektoi 6 kertaa, kirjaa ekinakosidin huippupinta-alan arvo vastaavasti ja laske RSD-arvoksi 1,1 %, mikä osoittaa. että instrumentin tarkkuus on hyvä.

2.1.8 Toistettavuustesti

Ota sama kuiva tahna, jauha se jauheeksi, punnita tarkasti 6 annosta, joista kukin on noin 0,5 g, ja laita ne ruskeaan tulpalliseen kartiomaiseen pulloon. Uuta kohdan "2.1.3" menetelmän mukaisesti, määritä pitoisuus ja laske. Tulokset osoittavat, että ekinakosidin keskimääräinen pitoisuus näytteessä on 1,46 mg·g-1, ja RSD-arvo on 2,7 %, mikä osoittaa, että tämän menetelmän toistettavuus on hyvä.

2.1.9 Vakavuustesti

Ota sama näyteliuos, ota tarkasti 10 μL ja injisoi se 0, 2, 4, 8, 12, 18 ja 24 tunnin kuluessa. Huippualueen RSD-arvo on 0,71 %, mikä osoittaa, että näyteliuoksella on hyvä stabiilisuus 24 tunnin sisällä.

2.1.10 Näytteen palautustesti

Punnitse tarkasti kuusi annosta samasta testinäyteerästä, kukin 0,24 g, ja aseta ne ruskeaan tulppaan kartiomaiseen pulloon. Lisää testinäytteessä olevien komponenttien massasuhteen 1:1 mukaan tarkasti 0,9 ml ekinakosidivertailuainetta (massapitoisuus on 371,24 ug·mL－ 1) kohtaan "2.1.6", valmistetaan testiliuos kohdan "2.1.3" mukaisesti, määritetään ekinakosidin kromatografisen piikin pinta-ala ja lasketaan pitoisuus. Tulokset osoittavat, että ekinakosidin keskimääräinen talteenottoaste on 101,09 % ja RSD-arvo on 1,6 %.

2.2 Kokeilusuunnitelma ja arviointiindikaattorit

Lisätyn veden määrä (A), uuttoaika (B) ja uuttojen lukumäärä (D) valittiin tutkittaviksi tekijöiksi. Kolme tekijätasoa asetettiin edellisen yksitekijätutkimuksen tulosten mukaan, katso taulukko 1. Kokeessa käytettiin ortogonaalista testitaulukkoa L9 (34), katso taulukko 2. Testissä käytettiin pastan saantoa ja ekinakosidipitoisuutta. arviointiindikaattoreita optimaalisen vedenottoprosessin tutkimiseksi.

Välilehti 1 Ortogonaalisen testin kerroin ja taso

2.2.1 Ortogonaalinen testi

Punnitse reseptisuhteen mukaan 18 annosta kutakin lääkearomia, kukin 55 g, ja suorita vesikeittouutto taulukon 2 ortogonaalisen suunnittelukaavion mukaisesti. Jokaisessa ryhmässä on 2 rinnakkaista annosta. Keittäminen suodatetaan 80-verkkoseulan läpi, suodos yhdistetään, jäähdytetään, keittotilavuus mitataan, 50 ml pipetoidaan tarkasti haihdutusmaljaan, joka on punnittu vakiona, haihdutettu kuiviin. ja kuivattiin alennetussa paineessa 60 asteessa ortogonaalisen kokeellisen näytekuivapastan saamiseksi. Laske tahnan saanto (pastan saanto=(kuivapastan paino × lääkenesteen tilavuus) / (50 × keittokappaleen paino) × 100 %). Kohdan "2.1.1" ja kohdan "2.1.3" mukaisten kromatografisten olosuhteiden mukaisesti ekinakosidin uuttomäärä määritettiin vastaavasti yhdeksässä ortogonaalisten testiuutteiden ryhmässä. Ekinakosidiuuttomäärä=kuivapastan paino × ekinakosidipitoisuus / viini Cistanche-keittiön kappalepaino. Kattavat pisteet=ekinakosidipitoisuus ÷ maksimipitoisuus × 0,5 × 100 % + tahnan saanto ÷ tahnan enimmäissaanto × 0,5 × 100 % [10]. Tulokset on esitetty taulukossa 2.

Kuten taulukosta 3 käy ilmi, ottaen huomioon tahnan saanto ja ekinakosidipitoisuuden kattava pistemäärä arviointiindikaattoreina, taulukon R-arvoväli osoittaa, että kunkin tekijän ensisijaiset ja toissijaiset vaikutukset ovat D > B > A; varianssianalyysin tulokset osoittavat, että D-tekijä (keittoajat) on tilastollisesti merkitsevä (P < 0.05), ja D3-taso on valittu; A-tekijä (veden lisäys) ja B-tekijä (keittoaika) eivät ole tilastollisesti merkitseviä (P > 0,05). Ottaen huomioon, että tämän valmisteen lääkeaineiden imeytymisnopeus on suhteellisen korkea (155 %) ja yhdistettynä tekijöihin, kuten todellisiin tuotantotarpeisiin, optimaalisiksi uutto-olosuhteiksi valitaan A2B1D3, eli 10 kertaa veden lisääminen, decocting 3 kertaa, joka kerta 1 tunnin ajan.