Alustava tutkimus pastanäytteistä, joille on ominaista antioksidanttiyhdisteet ja niiden biologinen aktiivisuus munuaissoluissa

Yhteystiedot: Audrey Hu Whatsapp/hp: 0086 13880143964 Sähköposti:audrey.hu@wecistanche.com

Federico Di Marco et ai

Abstrakti:Pasta on yksi peruselintarvikkeistaVälimerenruokavaliosta, ja tästä syystä se valittiin tähän tutkimukseen arvioimaan sen antioksidanttisia ominaisuuksia. Pastatyyppejä valittiin kolme: tattari-, ruis- ja munapasta. Laadullis-kvantitatiiviset karakterisointianalyysit suorittiHPLC-DADtunnistaa antioksidanttisia yhdisteitä. Tiedot osoittivat karotenoideja, kuten luteiinia, ja polyfenoleja, kuten indolietikkahappoa (karotenoidit {{0}},08 - 0,16 mg/100 g,polyfenolit3,7 - 7,4 mg/100 g). Havaittujen metaboliittien vaikutuksen arvioimiseksi suoritettiin in vitro -kokeetmunuainensolumallit: HEK-293 ja MDCK. Karoteenin, indolietikkahapon, kahvihapon, alkoholipitoisten ja karotenoideilla rikastettujen uutteiden standardit pastanäytteistä testattiin hapettumisenestoaineen läsnä ollessa elinkelpoisuuden vaihteluiden määrittämiseksi. -karoteeni- ja indolietikkahappostandardit vaikuttivat suojaavasti HEK-293-soluihin, kun taas MDCK:hen ei havaittu vaikutusta. Testatut pitoisuudet ovat todennäköisimmin niiden pitoisuuksien rajoissa, jotka kehossa saavutetaan tavallisten pasta-aterioiden nauttimisen jälkeen. Karotenoidilla rikastetut uutteet ja vesialkoholiuutteet osoittivat erilaisia ​​vaikutuksia, kun havaittiin ruispastan vesialkoholiuutteen ja tattaripastan karotenoidilla rikastetun uutteen pelastuksia, kun taas munapastalla oli miedompia annoksesta riippuvia vaikutuksia olettaen, että prooksidantti käyttäytyy korkeissa pitoisuuksissa. Alustavat tulokset viittaavat siihen, että käyttäytyminen voidaan jäljittää kokonaisiin fytokomplekseihin yksittäisten molekyylien osalta ja vaatii lisätutkimuksia.

Avainsanat:pasta;Välimerenruokavalio; polyfenolit; karotenoidit; antioksidanttiyhdisteet;munuainenterveys;HPLC/DADanalyysit

Cistanche tubulosa ehkäisee munuaissairauksia, napsauta tästä saadaksesi näytteen

1. Esittely

Siitä huolimatta ei ole olemassa ainutlaatuista määritelmääVälimerenruokavalion – johtuen kulinaaristen perinteiden vaihteluista ja mukautuksista ei vain Välimeren alueella vaan myös ympäri maailmaa [1] – Välimeren ruokavalion voidaan ajatella sisältävän useita terveellisen ruokavalion tärkeät kriteerit täyttäviä osia: vähäinen tyydyttyneiden ravintoaineiden pitoisuus. rasvahapot, korkea yhdistelmähiilihydraattipitoisuus, ravintokuitu- ja antioksidanttimolekyylit sekä runsaasti vihanneksia.

On vaikea määrittää, mitä elintarvikkeita tai niiden sisältämiä vaikuttavia aineitaVälimerenruokavalio on eniten vastuussa terveyshyödyistä; kerääntyvät tiedot viittaavat siihen, että sen tärkeimmät hyödyt ovat monimutkaisten ja laajan valikoiman eri ravintoaineiden yhdistelmässä, jotka ovat vuorovaikutuksessa synergistisesti ja additiivisesti [2].

Viime vuosina kasvava kirjallisuus (havainnointitutkimukset ja satunnaistetut kontrollitutkimukset) on osoittanut Välimeren ruokavalioon liittyvät terveyshyödyt vähentäen riskiä sairastua useisiin kroonisiin sairauksiin, kuten sydän- ja verisuonisairauksiin [3–5], diabetekseen [6–10], syöpä [11,12], liikalihavuus [13-15] tai kognitiivinen terveys [16-19] ja elinajanodote [20].

Verenpaineen [21], lipidiprofiilin [22,23], insuliiniresistenssin [24] ja suojan oksidatiiviselta stressiltä, ​​tulehdukselta, verihiutaleiden aggregaatiolta ja endoteelin toimintahäiriöiltä [25–28] vaikuttavat vaikutusmekanismit [25–28]. myönteisiä vaikutuksia yleiseen terveyteen. Kaikki nämä välimerelliseen elämäntapaan sitoutumisen edistämät biologiset vaikutukset voisivat olla merkityksellisiä edellä mainittujen kroonisten sairauksien lisäksi myös munuaisten rappeutumisen ehkäisyssä väestössä. Krooninen munuaissairaus (CKD) edustaa maailmanlaajuista kansanterveysongelmaa, joka vaikuttaa yli 750 miljoonaan ihmiseen maailmanlaajuisesti ja toimii usein hiljaa ja esteettä oireettoman kliinisen esityksensä ansiosta. Erilaiset todisteet ovat korostaneet vahvaa yhteyttä Välimeren ruokavalion ja munuaisten säilyvyyden välillä [29].

Ottaen huomioon kaikki edellä mainitut vaikutukset munuaisten toiminnan heikkenemisen riskitekijöinä, munuaista voidaan pitää yhtenä ensisijaisena kohteena. Äskettäinen kohorttitutkimusten meta-analyysi on osoittanut, että kasviperäiset ruokavaliot, kuten Välimeren ruokavalio tai ruokavalion lähestymistapa verenpainetaudin lopettamiseksi (DASH), liittyivät pienempään tapaturmariskiin.CKDja albuminuria väestössä [30]. Yksi selitys voisi olla, että hedelmät ja vihannekset sisältävät tulehdukselta ja endoteelin toimintahäiriöiltä suojaavia bioaktiivisia yhdisteitä, jotka edistävät suodatusfraktion dynaamisia muutoksia, mikä johtaa glomerulusten suodatusnopeuden asteittaiseen vähenemiseen, solunulkoisen nesteen tilavuuden kasvuun, epänormaaliin ionitasapainoon ja munuaisten hypoksiaan. mikä johtaa munuaisten toiminnan menetykseen [31–33]. Lisäksi vihannesten, hedelmien, viljan ja palkokasvien kulutuksen lisääntyminen on saattanut johtaa eläinproteiinin kulutuksen vähenemiseen, mikä vaikuttaa positiivisesti happo-emästasapainoon ja glomerulaariseen hemodynamiikkaan.munuainen, joka suojaa sitä glomeruluskleroosilta ja toiminnan menetykseltä [34–37].

Tästä huolimatta on olemassa useita tutkimuksia, joissa on ristiriitaisia ​​tietoja proteiinipitoisen ruokavalion vaikutuksesta munuaisten toiminnan heikkenemiseen väestössä [38–41]. Kasvava näyttö viittaa siihen, että proteiinilähteellä on tärkeä rooli munuaisten toiminnan säilymisessä ja että siirtyminen eläinperäisestä proteiinilähteestä kasviperäiseen voi olla hyödyllistä [42,43].

Pasta on yksi eniten kulutetuista elintarvikkeista maailmassa ja yksi Välimeren ruokavalion peruselintarvikkeista. Perinteisesti Italia on pastankulutuksen päätuottaja ja johtaja, vaikka pastaa kulutetaan maailmanlaajuisesti alhaisten kustannusten, maun ja pidemmän säilyvyysajan vuoksi kuin muita leipomotuotteita [44]. Pasta on hyvä hiilihydraattien ja energian lähde (100 g keitettyä pastaa sisältää noin 31 g hiilihydraatteja ja noin 158 kcal), mutta siinä on tyypillisesti vähän lipidejä, proteiineja, fosforia ja kaliumia, jotka ovat ravintoainekomponentteja, joita on rajoitettu useimmissa munuaisruokavalioissa. munuaissairaus (saatavilla verkossa osoitteessa https://fdc.nal.usda.gov, käytetty 1. joulukuuta 2020). Luonnollisesti rikastettu vehnäpasta, joka muodostaa suurimman osan kaupallisesti saatavasta pastasta, sisältää myös hyvät tiamiini-, riboflaviini-, niasiini-, folaatti-, rauta- ja seleenipitoisuudet sekä polyfenoleja. Lisäksi pastaa kulutetaan aina yhdessä muiden elintarvikkeiden kanssa, joita voitaisiin pitää vahvempana polyfenolien lähteenä, kuten oliiviöljyn ja vihannesten kanssa. Pasta valmistetaan yleensä durumvehnän mannasuurimosta sen erinomaisten reologisten ominaisuuksien, pastan ylivoimaisen värin, kypsennyslaadun ja kuluttajan hyväksynnän vuoksi, mutta viime aikoina pastaa voidaan valmistaa myös muista viljoista, kuten riisistä, alkaen. tattari, ruis, speltti.

Kuluttajat ovat viime vuosina alkaneet tiedostaa, että tasapainoisella ruokavaliolla, kuten Välimerellä, voi olla myönteinen vaikutus terveyteen, minkä vuoksi elintarviketeollisuus pyrkii vastaamaan näihin vaatimuksiin tuottamalla laadukkaita ja terveysvaikutteisia elintarvikkeita ja elintarvikkeiden ainesosia.

Vaikka täydennettyjä elintarvikkeita on tuotettu terveellisiin tarkoituksiin, ihmiset voitaisiin saada omaksumaan niitä tasapainoisen ruokavalion sijaan. Tämä on niin tärkeä aihe, joka saa FDA:n julkaisemaan ad hoc -asiakirjan nimeltä "FDA:n linnoituspolitiikka", jotta se antaa vastauksen toisaalta elintarviketeollisuudelle ja toisaalta akateemiselle maailmalle [44].

Tasapainoinen, riittävä ja monipuolinen ruokavalio on tärkeä askel kohti onnellista ja terveellistä elämäntapaa ilman riskiä, ​​että ylikuormitetaan joitain täydennetyn ruoan sisältämiä lisäaineita. Juuri tästä syystä ei-perinteiset viljat ja pseudoviljat on löydetty uudelleen, ja ne ovat tasoittaneet tietä niiden käytölle funktionaalisina elintarvikkeiden ainesosina, koska niillä on joitain ravitsemuksellisia ja toiminnallisia ominaisuuksia, jotka puuttuvat tai puuttuvat perinteisistä viljoista. Tattari ja ruis ovat runsaasti fytokemikaalien, kuten polyfenolien, lähteitä, yhdisteitä, jotka korreloivat voimakkaasti antioksidanttiaktiivisuuden kanssa [45,46].

Maaliskuussa 2005 käynnistetty MOLI-SANI-projekti osallistui noin 25,000 Molisessa (Italia) asuvaa kansalaista arvioimaan sydän- ja verisuonitautien, kasvainten ja hermoston rappeutumissairauksien taustalla olevia ympäristö- ja geneettisiä tekijöitä. MOLI-SANI-projektin tutkimuksen mukaan pastan nauttiminen liittyy alhaisempaan painoindeksiin ja alhaisempaan keskuslihavuuden tasoon. Monet tutkimukset ovat vahvistaneet, että korkeakalorinen ruokavalio johtaa painonnousuun eivätkä hiilihydraatteja sisältävä ruokavalio. Itse asiassa, jos pastaannos on oikea ja kastike ei ole liian kalorinen, pastalautasen kaloripitoisuus voi olla päivittäistä energiantarvetta kunnioittava [47]. Pastaa arvostetaan suuresti, koska sen ominaisuuksia ei ole liitetty ainoastaan ​​kehon painonhallintaan, vaan myös useisiin myönteisiin terveysominaisuuksiin [48]. Terveillä koehenkilöillä tehty satunnaistettu, kontrolloitu tutkimus osoitti, että ruispohjaiset tuotteet parantavat sokeritasapainon säätelyä, lisäävät ruokahalun ja aineenvaihdunnan säätelyyn osallistuvien suoliston hormonien määrää. Ruis vähentää aterian jälkeistä ruokahalua vähentämällä ruokahalua myöhemmillä aterioilla, lisäämällä kylläisyyttä ja vähentämällä nälän tunnetta lisäämällä kylläisyyshormonien GLP-1 (glukagonin kaltainen peptidi-1) ja peptidi YY (PYY) määrää. Alempi aterian jälkeinen glukoosivaste havaittiin ryhmällä, joka söi ruispohjaisia ​​ruokia, verrattuna puhdistettua vehnää kuluttaviin henkilöihin. Tämä johtuu siitä, että ruis on alhaisen glykeemisen indeksin omaava vilja, jota voidaan käyttää myös diabeetikoille [49]. Ruis voi parantaa plasman lipidiprofiilia, itse asiassa kokonaisen rukiin saanti liittyy käänteisesti LDL-kolesterolin pitoisuuteen, LDL/HDL-suhteeseen ja triglyseridien pitoisuuteen. Tämä vaikutus johtuu kuitujen ja -glukaanien läsnäolosta [50].

Pasta tunnetaan hyvin hiilihydraattien lähteenä, mutta se voi sisältää myös vähäisiä yhdisteitä, kuten karotenoideja [51], erityisesti luteiinia ja muita antioksidantteja, kuten polyfenoleja. Näitä bioaktiivisia molekyylejä voidaan rikastaa erilaisissa pastatyypeissä raaka-aineista riippuen. Esimerkiksi durumvehnän karotenoidipitoisuus on korkeampi kuin leipävehnän [52] ja antioksidanttien tasoa voidaan lisätä sisällyttämällä pastatuotteisiin lesefraktiota ja koko durumvehnän ydin [53]. Tattari on merkittävä fenoliyhdisteiden, vitamiinien ja välttämättömien aminohappojen lähde [54], kun taas kananmunan lisääminen pastan valmistukseen välittää karotenoideja ja luteiinia. Karotenoidit osallistuvat ehkäisevään toimintaan, erityisesti tulehdusoireyhtymässä, ja niiden rooli johtuu niiden antioksidanttisista ominaisuuksista [55] vapaita radikaaleja ja singlettihappea vastaan ​​[56]. Pasta sisältää erilaisia ​​antioksidanttimolekyylejä ja usein kuluttajille runsasta kulutusta voidaan pitää tärkeänä tällaisten terveellisten yhdisteiden lähteenä.

Tässä näytämme, että erityyppiset pastat, nimittäin tattari-, ruis- ja munapasta, sisältävät erilaisia ​​määriä antioksidanttiyhdisteitä, joilla on rooli munuaissolujen elinkyvyn parantamisessa vakaassa tilassa tai oksidatiivisen stressin induktion yhteydessä.

2. Materiaalit ja metodit

2.1. Näytteet

Keitetystä pastasta analysoitiin ja testattiin kolme näytettä: yksi näyte täysjyvätattaripastaa (1), yksi näyte täysjyväruispastaa (2) ja yksi näyte munapasta kivijauhetusta durumvehnäjauhosta (3).

2.2. Pastanäytteiden valmistus

Yhteensä 50 g täysjyvätattaripastaa tai täysjyväruispastaa keitettiin 500 ml:ssa vettä 7 minuuttia; 50 g munapastaa kivijauhettua durumvehnäjauhoa keitettiin 500 ml:ssa vettä 1 minuutin ajan valmistajan ohjeiden mukaisesti.

Karotenoideilla rikastettujen uutteiden saamiseksi 10 g keitettyä pastaa liuotettiin 100 ml:aan asetonia, kylmään sonikoitiin 30 minuuttia. Näytettä sentrifugoitiin 5 minuuttia 5000 rpm:llä, supernatantti on kuivahaihdutettu pyöröhaihduttimella ja jäännös liuotettiin asetoniin tai DMSO:hon riippuen alavirran analyysistä. Polyfenoleilla rikastettujen uutteiden saamiseksi 10 g kutakin keitettyä pastanäytettä liuotettiin 50 ml:aan 70:30 EtOH/H20:ta pH:ssa 3,2. Näytteitä ravisteltiin 24 tuntia, sentrifugoitiin 5 minuuttia nopeudella 1400 rpm. Näytettä sentrifugoitiin 5 minuuttia nopeudella 5 000 rpm ja supernatantti kerättiin ja analysoitiin HPLC-DAD:ssä, samalla kun erä kuivahaihdutettiin ja jäännös liuotettiin DMSO:hon solukäsittelyä varten.

2.3. HPLC-DA-MS-analyysi

Karotenoidien ja polyfenolien laadulliset kvantitatiiviset analyysit suoritettiin käyttämällä HP 1100 -nestekromatografiaa, joka oli varustettu DAD-detektorilla ja jota hallinnoi HP 9000 -työasema (Agilent Technologies, Palo Alto, CA, USA) ja yhdistetty amassing-spektrometriin. jossa on API/electrospray-liitäntä (Agilent Technologies). Massaspektrometrin toimintaolosuhteet olivat seuraavat: kaasun lämpötila, 350 ◦C; typen virtausnopeus, 11,0 l/min; sumuttimen paine, 40 psi; kvadrupolilämpötila, 100 ◦C; ja kapillaarijännite 4000 V. Massaspektrometria käytettiin positiivisessa ja negatiivisessa tilassa 80–180 eV.

Yhdisteet erotettiin käyttämällä 25 0 × 4,6 mm id, 5 um LUNA C18 -kolonnia (Phenomenex, Torrance, CA, USA). UV/Vis-spektrit tallennettiin alueella 190-600 nm ja kromatogrammit hankittiin aallonpituudella 250, 280, 330, 350 ja 450 nm. Näytteet analysoitiin gradienttieluoimalla vastaavalla nopeudella 0,8 ml/min. Liikkuva faasi karotenoideille oli monivaiheinen lineaarinen liuotingradienttijärjestelmä (liuotin A: asetoni, liuotin B: H20, pH 3,2 muurahaishapolla), alkaen 80 prosentista asetonista 100 prosenttiin 30 minuutissa. polyfenolit eluoitiin käyttämällä seuraavaa gradienttia: 90-prosenttisesta H20:sta (säädetty pH-arvoon 3,2 muurahaishapolla) 100-prosenttiseen CH3CN:ään 40 minuutissa. Kaikki käytetyt liuottimet olivat HPLC-laatuisia (BDHLaboratory Supplies, Poole, UK).

2.4. Kvantitatiivinen analyysi

Yksittäisten polyfenoliyhdisteiden kvantifiointi suoritettiin suoraan HPLC-DAD:lla käyttämällä viiden pisteen regressiokäyrää (R2 suurempi tai yhtä suuri kuin 0,998) alueella 0–30 µg perustuen aitoja standardeja. Erityisesti flavonolit määritettiin aallonpituudella 350 huvittavaa kversetiini-3-O-glukosidia vertailuyhdisteenä, kun taas kofeiinihappojohdannaiset määritettiin 330 nm:ssä käyttäen klorogeenihappoa vertailuyhdisteenä ja indolietikkahappojohdannaista 280 nm:ssä käyttäen kolmea indolietikkahappoa. (Sigma-Aldrich, St. Louis, MO, USA). Karotenoidit määritettiin 450 nm:ssä käyttämällä beetakaroteenia vertailuyhdisteenä (Extrasynthese, Lione, Francia). Kaikissa tapauksissa johdannaisten todelliset pitoisuudet laskettiin molekyylipainoerojen korjausten soveltamisen jälkeen.

2.5. Fenolipitoisuus yhteensä

Kokonaisfenolipitoisuus määritettiin Folin-Ciocalteu-menetelmällä, jonka ovat kuvanneet Singleton et al. [57] ja hieman modifioitu Dewanton et al. [58]. 125 µl:aan sopivasti laimennettua näyteuutetta lisättiin 0,5 ml deionisoitua vettä ja 125 µl Folin-Ciocalteu-reagenssia. Seosta pidettiin 6 minuuttia ja sitten lisättiin 1,25 ml 7-prosenttista vesipitoista Na2C03-liuosta. Lopullinen tilavuus säädettiin 3 ml:ksi vedellä. 90 minuutin kuluttua absorptio mitattiin aallonpituudella 760 nm vettä vastaan ​​nollakokeena. Kokonaisfenolien määrä ilmaistaan ​​gallushapon ekvivalentteina (GAE, mg gallushappoa/100 g näytettä) gallushapon kalibrointikäyrän kautta. Kalibrointikäyrä vaihteli välillä 20-500 µg/ml (R2=0.9969) [57,58].

2.6. Soluviljely

Human Embryonic Kidney 293 (HEK-293) -soluja ja Madin-Darby koiran munuaissoluja (MDCK) viljeltiin DMEM:ssä, jota oli täydennetty GlutaMAXilla, 10 % (v/v), sikiön naudan seerumilla, 100 U/ml penisilliiniä ja 100 µg:lla /ml streptomysiiniä 37 ◦C:ssa 5 prosentin CO2:lla.

2.7. MTT-määritys

5{{10}}00 solua/kuoppa MDCK- ja HEK-293-soluja ympättiin 96-kuoppaisille levyille ja annettiin kiinnittyä 24 tuntia. Elinkykytutkimuksia varten soluja inkuboitiin 24-72 tuntia beetakaroteenin, indoli-3-etikkahapon, kahvihapon (DMSO:ssa) ja pastauutteiden kanssa yksinään tai magnesiummonoperoksiftalaatin (MMPP, Sigma-Aldrich) kanssa. , St. Louis, MO, USA). Käsittelemättömiin näytteisiin käytettiin alustassa olevaa DMSO:ta yhtäläisinä pitoisuuksina kuin testatuille yhdisteille käytettiin. Testattu konsentraatio standardien osalta vaihteli välillä 2 pM - 10 uM, kun taas MMPP:llä 0,001 - 0,05 mg/ml. Solujen elinkelpoisuus mitattiin 3-(4,5-dimetyylitiatsol-2-yyli)-2,5-difenyylitetratsoliumbromidi (MTT, Sigma-Aldrich, St. Louis, MO, USA). Levyjä inkuboitiin 37 °C:ssa 1 tunti ja sitten MTT-pelkistyksellä tuotettu Formazan liuotettiin DMSO:hon. Absorbanssi määritettiin mikrolevylukijalla (Mithras LB 940-Berthold) 570 nm:ssä. Solujen elinkelpoisuuden prosenttiosuus laskettiin käyttämällä suhdetta AbsTEST/AbsCTRL.

2.8. Tilastollinen analyysi

Jokainen koe suoritettiin neljänä rinnakkaisena ja toistettiin vähintään kolme kertaa. Erot elinkelpoisuusprosentteissa arvioitiin käyttämällä parillista Studentin t-testiä ja kaksisuuntaista ANOVA-testiä, mitä seurasi posthoc-testi Holmin korjauksella useiden metaboliittien pitoisuuksien vertailua varten (p < 0,05).="" tulokset="" ilmaistiin="" keskiarvona="" ±="" standardivirhe="" ja="" analyysi="" suoritettiin="" r-studio-ympäristössä="" [59]="" r-versiolle="" 3.6.3="" [60]="" käyttäen="" pakettia="" "tidyverse"="">

3. Tulokset ja keskustelu

3.1. Pastanäytteiden kemiallisen laadun määritys

Ruoan ravitsemukselliset tiedot mahdollistavat tietoisten ruoka- ja ruokavaliovalintojen tekemisen. Pasta valmistetaan perinteisesti mannasuurimosta, mutta myös muiden viljojen kanssa kaikki sisältävät tärkkelystä pääainesosana ja sen jälkeen proteiinia, rasvaa, vitamiineja, kivennäisaineita ja bioaktiivisia yhdisteitä [62]. Taulukossa S1 on raportoitu ravitsemustiedot.

Vertaaksemme eri viljalähteistä tai tiettyjen ainesosien täydentämisestä johtuen useiden bioaktiivisilla yhdisteillä rikastettujen pastatyyppien ravintoarvoja analysoimme tattaripastaa, ruispastaa ja munapastaa. Jotta saataisiin uutteita, jotka olivat rikastettuja pastanäytteissä esiintyvien yhdisteiden eri alaluokissa, suoritettiin ja analysoitiin sekä vesialkoholi- että asetoniuuttoja. Yksittäiset polyfenolit tunnistettiin alustavasti käyttämällä HPLC-DAD-MS-analyysin tietoja vertaamalla ja yhdistämällä niiden retentioaikoja sekä massaspektrometriaa ja UV-spektrejä (katso sama esimerkki MS-spektreistä kuvista S1-S5) ja vertaamalla tuloksia standardeihin (kaempferoli, kversetiini, rutiini ja ferulihappo) ja aikaisemmat bibliografiset teokset. Erityisesti vesialkoholiuutteista tunnistettiin flavonoideja, kahvi- ja indolietikkahappojohdannaisia ​​(taulukko 1): indolietikkahappojohdannainen on pääyhdiste, kuten edellä on kuvattu jopa mannasuurimoille. [63]. Suhteelliset koostumukset huomioon ottaen tattaripasta osoitti korkeampia flavonoideja, erityisesti kversetiinijohdannaiset ovat tärkeimmät flavonolit, kuten aiemmin on raportoitu tattarissa [64,65], ja mitätön määrä kofeiinihappojohdannaisia; ruispastassa oli korkeampia kofeiinihappojohdannaisia, erityisesti ferulihappoa [66] ja alhainen flavonoidien pitoisuus; kananmunapastassa oli vain vähän flavonoideja (apigeniinijohdannainen [67]) eikä kofeiinihappojohdannaisia.

Esimerkkinä keitettyjen pastanäytteiden kromatografiset profiilit, jotka on tallennettu aallonpituudella 350 nm, on esitetty kuvassa 1. Kuvassa näkyy analysoitujen näytteiden laadullinen koostumus.

Luteiini oli tärkein asetoniuutteista tunnistettu karotenoidi, jolla oli samanlainen suhteellinen pitoisuus suhteessa karotenoidilajiin, kuten taulukosta 2 käy ilmi, aiempien tutkimusten mukaisesti [68]. Karotenoideja ei havaittu ruispastassa.

Antioksidanttisten sekundaaristen metaboliittien esiintyminen on arvioitu myös pastanäytteissä (taulukko 3). Biokomponenttien kokonaisantioksidanttikapasiteetti, joka todennäköisesti johtuu fenolin/polyfenolin aktiivisuudesta, arvioitiin ja tällaisten molekyylien lukumäärä pääteltiin.

3.2. Indoli-3-etikkahapon vaikutus,8-Karoteeni ja kofeiinihappo vaikuttavat solujen elinkykyyn

Välimeren ruokavalio on tunnustettu antioksidanttimolekyylien lähteeksi, joka suojaa elimiä oksidatiiviselta stressiltä ja tukee tervettä tilaa [2]. Siksi mietimme, voivatko pastanäytteissämme havaitut biomolekyylit vaikuttaa solujen elinkykyyn ja missä määrin. Käytimme terveitä munuaissoluja HEK-293 ja MDCK indolietikkahapon, -karoteenin ja kofeiinihapon standardiyhdisteiden aktiivisuuden määrittämiseen. Munuaiset ovat erityisen herkkiä oksidatiiviselle stressille ja vapaiden radikaalien kerääntyminen johtaa munuaisten vajaatoimintaan [69]. Soluja inkuboitiin standardiyhdisteiden skalaarikonsentraation kanssa ja solujen elinkelpoisuus mitattiin eri ajankohtina (kuvio 3 ja kuva S6).

Niillä ei havaittu olevan mitään myrkyllistä vaikutusta HEK{{0}}-soluihin kaikilla testatuilla pitoisuuksilla inkubointiaikoina. Vain -karoteeni vähensi solujen elinkelpoisuutta u-muotoisella tavalla HEK-293-soluissa ja annoksesta riippuvaisella tavalla MDCK-soluissa (kuvio 3). On huomattavaa, että tavallisen pasta-aterian (yleensä 80 g) nauttimisen jälkeen elimistössä todennäköisesti saavutetut pitoisuudet ovat alhaisimpien testattujen (2 × 10_5 –2 × 10_4 uM, [70) ,71]), joka paransi heikosti molempien solulinjojen elinkelpoisuutta. Toisaalta korkeammilla pitoisuuksilla, yli 0,2 uM, joita voidaan saada vain farmakologisesti, kahvihappo paransi merkittävästi solujen elinkelpoisuutta, kun taas indolietikkahappo ja -karoteeni osoittivat vertailukelpoisia vaikutuksia pitoisuuden nousun (2–20 uM) kanssa. ) HEK-293-soluissa koko ajan.

3.3. Indoli-3-etikkahapon, karoteenin ja kofeiinihapon vaikutus MMPP-käsiteltyihin soluihin

Seuraavaksi mietimme, voivatko indolietikkahappo, karoteeni ja kofeiinihappo torjua hapettavan aineen MMPP aiheuttamaa stressiä. Ensin testasimme MMPP-vaikutuksen altistamalla HEK-293- ja MDCK-solut sarjalaimennoksille (0.005–0,05 mg/ml) lääkkeelle, ja solujen elinkelpoisuus määritettiin. Annosriippuvainen lasku MMPP-hoidon jälkeen havaittiin ja IC50 oli vertailukelpoinen kahdessa testatussa solulinjassa. 20–25 µg/ml MMPP:n kanssa inkuboinnin jälkeen solujen elinkelpoisuus laski merkittävästi noin 50–60 prosenttiin (kuva 4) ja puolimaksimaalisen estopitoisuuden (IC50) laskettiin olevan 26 µg/ml HEK:lle{{16} } ja 22 ug/ml MDCK:lle.

Sitten testasimme antioksidanttimolekyyliemme suojaavaa aktiivisuutta MMPP-käsitellyillä soluilla täydentämällä soluväliainetta 2 × 10_5 nM indolietikka-, -karoteeni- tai kofeiinihapolla. HEK-293:n ja MDCK:n lievä positiivinen vaikutus solujen elinkelpoisuuteen varmistettiin käyttämällä standardeja sellaisenaan annoksella, joka oli todennäköisesti peräisin pasta-annoksesta (kuva 5).

Kuten odotettiin, MMPP laski solujen elinkelpoisuuden 60–65 prosenttiin; käsittely indolietikkahapolla tai karoteenilla torjuu MMPP-vaikutusta ja pelasti solujen elinkelpoisuuden 30 prosentilla (p < 0,001)="" ja="" 27="" prosentilla="" (p=""> 0,01) HEK-293-soluilla, kun taas kofeiinihapolla ei ollut merkittävää vaikutusta. Hapettimen läsnäollessa beetakaroteeni ja indolietikkahappo osoittivat suojaavaa vaikutusta soluihin alhaisella pitoisuudella, kun taas kahvihappo ei torjunut oksidatiivista stressiä pitoisuudessa, joka tarvitaan solujen elinkyvyn parantamiseen. Nämä positiiviset vaikutukset johtuvat todennäköisesti indolietikkahapon ja karotenoidien antioksidanttisista ominaisuuksista, jotka voivat merkittävästi tasapainottaa MMPP-välitteistä sytotoksisuutta tässä koetilanteessa käytetyllä annoksella. Siitä huolimatta, MMPP-käsitellyissä MDCK-soluissa ei havaittu mitään merkittävää pelastusta, mikä viittaa siihen, että vaikka standardit yksinään osoittivat merkittävästi positiivista vaikutusta solujen elinkelpoisuuteen, ne eivät riitä torjumaan MMPP:n aiheuttamaa oksidatiivista stressiä. Alkion HEK 293 -solut näyttävät olevan nopeampia järjestämään puolustuslinjaa stressiä vastaan ​​kuin aikuisen MDCK, oletettavasti johtuen ylimääräisistä solujen redox-homeostaasijärjestelmistä.

3.4. Pastaperäisen karotenoidilla rikastetun fraktion vaikutus MMPP:n aiheuttamaan sytotoksisuuteen

Tattaripastan ja munapastan asetoniuutosta saatujen karotenoideilla rikastettujen fraktioiden vaikutusten arvioimiseksi munuaissoluihin oksidatiivisen stressin läsnäollessa, HEK-293-soluja inkuboitiin eri pitoisuuksilla uutteita, joiden arvo oli 2 × { {3}} uM - 2 × 10_3 uM MMPP:n läsnä ollessa 72 tunnin ajan (kuva 6 ja taulukko S2). Käytetty pitoisuus viittaa uutteessa havaittuun -karoteenipitoisuuteen (taulukko2). Luteiinipitoisuus vaihteli välillä 1,5 × 10_6 uM - 1,5 × 10_3 uM tattaripastassa ja 1,34 × 10_6 uM - 1,34 × 10_3 uM munapastassa.

Molemmissa asetoniuutteissa luonnollisten fytokompleksien läsnäolo osoitti erilaisia ​​vaikutuksia yksittäiseen standardiin verrattuna, mikä johti enemmän aktiivisuuteen pienemmillä pitoisuuksilla. Kun munapastasta saatujen uutteiden pitoisuus kasvaa, havaittiin solujen elinkelpoisuuden väheneminen. Pienin karotenoidiuutteiden pitoisuus (2 × 10-6 µM) aiheutti vaatimattoman positiivisen vaikutuksen yksinään tai MMPP:n läsnä ollessa HEK-293-soluissa. Tattaripastauute paransi solujen elinkelpoisuutta uutena, mutta myös MPP:n läsnä ollessa, joka vaihteli 32 ± 5 prosentista pienimmällä pitoisuudella 21 ± 9 prosenttiin pitoisuudella 2 × 10–4 µM.

Asetoniuutteiden aktiivisuus arvioitiin myös MDCK-soluilla MMPP:n läsnä ollessa tai ilman sitä ja verrattiin HEK-293-soluissa saatuun aktiivisuuteen (kuvio 7 ja taulukko S2).

Karotenoidilla rikastetut uutteet antoivat yleisen elinkelpoisuutta edistävän vaikutuksen kaikilla testatuilla pitoisuuksilla molemmille pastatyypeille. Mitä tulee HEK-293 tattariin, pastauute antoi paremman pelastuksen MMPP-käsittelyssä kaikilla annoksilla 50 ± 7 prosentista 82 ± 5 prosenttiin verrattuna HEK-239-soluihin; munapastan uutteet pelastivat vain pienimmällä karotenoidien pitoisuudella 2 × 10_6 uM MMPP:n läsnä ollessa, mikä viittaa siihen, että uutteiden erityisellä koostumuksella on keskeinen rooli vasteessa. Siten tattaripasta osoitti suurempaa pelastuskykyä solujen elinkelpoisuuteen verrattuna munapastaan, ja koska kokeet suoritettiin käyttämällä samaa määrää -karoteenia, ero saattoi johtua vähäisten yhdisteiden, kuten flavonoidiyhdisteiden, läsnäolosta. entisessä.

Karotenoidilajit osallistuvat erilaisiin kemiallisiin reaktioihin, joissa on hapettimen ja antioksidantin kaksoisluonne riippuen biologisesta kontekstista ja niiden pitoisuudesta: tämä korkea reaktiivisuus johtuu konjugoitujen kaksoissidosten läsnäolosta [72]. Niiden antioksidanttirooli yhdistettiin kykyyn siirtää hapettavien lajien ja radikaalien antamia elektroneja [73,74]. Voimakkaiden hapettumisolosuhteiden läsnä ollessa niiden aktiivisuus voidaan muuntaa prooksidantiksi [75]. Tapauksissamme tämä löydös havaittiin munapastassa HEK-293:n (sekä yksinään että MMPP:n läsnä ollessa) ja MDCK-soluissa MMPP:n läsnä ollessa, missä eri annokset asetoniuutetta tuottivat päinvastaisia ​​vaikutuksia.

3.5. Hydroalcoholic Extractin vaikutus MMPP:n aiheuttamaan sytotoksisuuteen

Myöhemmin arvioimme tattaripastasta, ruispastasta ja munapastasta saatujen vesialkoholiuutteiden vaikutuksia munuaissoluihin testaamalla erilaisia ​​pitoisuuksia 5 × 10_5 uM - 5 × 10_1 uM MMPP:n kanssa tai ilman sitä. (Kuva 8 ja taulukko S3). Käytetty konsentraatio viittaa uutteessa havaittuun kokonaisfenolipitoisuuteen (taulukko 3). Taulukossa 1 ilmoitettujen pastanäytteiden sisällön mukaan tattaripastan indolietikkahapon pitoisuus oli 1,85 × 10_5 uM arvosta 1,85 × 10_1 uM, kahvihappojohdannaisten pitoisuus 3,5 × 10_6 uM arvoon 3,5 × 10_2 uM, ja flavonoidien sisältö oli 2,8 × 10_5 uM - 2,8 × 10_1 uM; ruispastassa indolietikkahapon pitoisuus oli 2,2 × 10_5 uM - 2,2 × 10_1 uM, kahvihappojohdannaisten pitoisuus 1,95 × 10_5 uM - 1,95 × {{37} } uM ja flavonoidilajeille 8,5 × 10_6 uM - 8,5 × 10_2 uM; munapastassa indolietikkahapon pitoisuus oli 4,25 × 10_5 uM - 4,25 × 10_1 uM, flavonoidilajeilla 7,5 × 10_6 uM - 1,85 × 10_2 uM, kun kofeiinihappojohdannaisia ​​ei ollut läsnä.

Munapastan vesialkoholiuutteella ei ollut merkittävää vaikutusta HEK{0}}-elinkelpoisuuteen oksidatiivisesta stressistä riippumatta. Tattaripastan uute osoitti solujen elinkelpoisuuden paranemista MMPP-käsittelyn jälkeen vain korkeimmalla pitoisuudella (28 ± 6 prosenttia). Pelkästään ruispastauute osoitti yleistä solujen elinkelpoisuuden paranemista kaikilla annoksilla 14 ± 7 prosentista 18 ± 1 prosenttiin sekä MMPP:n läsnä ollessa 27 ± 3 prosentista 13 ± 3 prosenttiin. Uutteissa oleva Phyto-kompleksi osoittautui aktiivisemmaksi kuin yksittäiset standardit, mikä vaikutti solujen elinkelpoisuuteen pienemmillä pitoisuuksilla verrattuna jälkimmäiseen. Nämä tulokset viittaavat siihen, että vesialkoholiuutteissa päärooli pelastamisessa voidaan katsoa johtuvan kofeiinihappojohdannaisten läsnäolosta, mikä havaitsi korkeamman pelastuskyvyn ruispastalle ja vähäisemmän vaikutuksen kananmunan jätteelle, jossa niitä ei voida havaita.

Vesialkoholiuute testattiin sitten MDCK-soluilla samoissa olosuhteissa kuin ennen ja solujen elinkelpoisuus arvioitiin (kuvio 9 ja taulukko S4).

Tattari- ja munapastasta saatu vesialkoholiuute osoitti vastakkaisia ​​vaikutuksia solujen elinkelpoisuuteen: ensimmäinen lisää sitä, kun taas jälkimmäinen vähentää sitä; kummallakaan ei havaittu vaikutusta MMPP-hoitoon. Pelkästään ruispastauute ei osoittanut merkittävää vaikutusta solujen elinkykyyn, mutta se paljastaa vahvan suojaavan vaikutuksen MMPP-välitteiseltä oksidatiiviselta stressiltä kaikilla pitoisuuksilla 50 ± 7 prosentista 61 ± 21 prosenttiin. Vakioolosuhteissa.

MMPP:n puuttuessa munapastan uutteen korkea indolietikkahapon pitoisuus näyttää vaikuttavan myrkyllisesti solujen elinkykyyn. Vertaamalla näitä kahta solumallia havaitsimme erilaisia ​​käyttäytymismalleja tattari- ja ruispastan suhteen ilman MMPP:tä. Erityisesti HEK{0}} osoitti elinkelpoisuuden kasvua jälkimmäisen kanssa, kun taas MDCK edellisen kanssa. Erot liittyvät fotokompleksien toimintaan, joille on ominaista korkeampi flavonoidien pitoisuus tattaripastassa. Solujen elinkelpoisuuden pelastus näytteiden joukossa, kuten molemmissa solulinjoissa havaittiin, vastaa lisääntynyttä kofeiinihappojohdannaisten pitoisuutta ruispastassa.

Kasvikomplekseja sisältävien polyfenolien ja munuaissolujen välisen vuorovaikutuksen tutkimus voisi auttaa tutkimaan näiden yhdisteiden tunnettuja tärkeitä vaikutuksia munuaisten fysiologiaan [76] keskittyen yhteen mahdollisista vehikkeleistä, pastaan, joka tyypillisesti liittyy munuaisten terveelliseen ruokavalioon. Yleissääntönä on, että polyfenolien metaboliittien puoliintumisaika plasmassa on muutama tunti, ja ne eliminoituvat nopeasti munuaisten ja maksan kautta: virtsan ja sapen kautta. Virtsaan erittyneiden polyfenolimetaboliittien kokonaismäärä ei korreloi ainoastaan ​​niiden plasman maksimipitoisuuden kanssa, vaan myös niiden kyvyn kanssa erittyä sappeen eikä virtsateiden kautta. Esimerkiksi kversetiinin ja sen glykosidien virtsaan erittymisen osuus on 0,3–1,4 prosenttia nautitusta annoksesta [77]; kofeiinihapon osuus on 5,9 prosenttia ja ferulihapon 27 prosenttia. Siksi pastaperäisillä polyfenoleilla voi olla positiivinen vaikutus munuaissoluihin niistä riippuen

määrä ja aineenvaihdunta. Lisätutkimuksia tarvitaan, jotta voidaan paremmin määritellä niiden vaikutus munuaisten terveyteen.

Täydentävät materiaalit:Seuraavat ovat saatavilla verkossa osoitteessa https://www.mdpi.com/article/ 10.3390/nu13041131/s1, Taulukko S1: Ravintotaulukko. Taulukko S2 – HEK-293:n ja MDCK:n solujen elinkelpoisuuden vaihtelun havaitseminen tattaripastan ja munapastan kasvavan määrän karotenoideilla rikastetun fraktion kanssa alustalla ja MMPP:llä 72 (HEK-293) ja 24 ( MDCK) tuntia. * p < {{20}.5,="" **="" p="">< 0.01,="" ***="" p="">< {{30}}.001="" .="" taulukko="" s3="" –="" hek-293:n="" solujen="" elinkelpoisuuden="" vaihtelun="" havaitseminen,="" kun="" sitä="" on="" inkuboitu="" kasvavalla="" määrällä="" tattaripastasta,="" ruispastasta="" ja="" munapastasta="" saatua="" vesiliuosta="" alustalla="" ja="" mmpp:llä="" 72="" tunnin="" ajan.="" *="" p="">< 0,5,="" **="" p="">< 0,01,="" ***="" p="">< 0,001.="" taulukko="" s4="" –="" mdck:n="" solujen="" elinkelpoisuuden="" vaihtelun="" havaitseminen,="" jota="" on="" inkuboitu="" kasvavan="" määrän="" vesialkoholiuutteen="" kanssa="" tattaripastasta,="" ruispastasta="" ja="" munapastasta="" alustalla="" ja="" mmpp:llä="" 24="" tunnin="" ajan.="" *="" p="">< 0,5,="" **="" p="">< 0,01,="" ***="" p="">< 0,001.="" kuva="" s1:="" kaempferolin="" ms-spektrit="" tattarikeitetyssä="" pastan="" vesialkoholiuutteessa.="" kuva="" s2:="" kversetiinin="" ms-spektrit="" tattarikeitetyn="" pastan="" vesialkoholiuutteessa.="" kuva="" s3:="" rutiinin="" ms-spektrit="" keitetyssä="" pastan="" vesialkoholiuutteessa.="" kuva="" s4:="" ms-spektrit="" ferulihaposta="" yksi="" ruiskeitetyssä="" pastan="" vesialkoholiuutteessa.="" kuva="" s5:="" apigeniiniglykosidien="" ms-spektrit="" munassa="" keitetyn="" pastan="" vesialkoholiuutteessa.="" kuva="" s6:="" hek-293:n="" solujen="" elinkelpoisuuden="" havaitseminen,="" jota="" on="" inkuboitu="" kasvavalla="" määrällä="" indolietikkahappoa,="" -karoteenia="" ja="" kahvihappoa="" 24="" (a)="" ja="" 48="" (b)="" tunnin="" ajan.="" raportoidut="" arvot="" vastaavat="" solujen="" elinkelpoisuuden="" keskiarvoa="" standardivirheellä="" yli="" kolmen="" biologisen="" toiston.="" solujen="" elinkelpoisuuden="" prosenttiosuus="" laskettiin="" käyttämällä="" suhdetta="">

References

1. Lacatus,u, CM; Grigorescu, ED; Floria, M.; Onofriescu, A.; Mihai, BM Välimeren ruokavalio: Ympäristölähtöisestä ruokakulttuurista nousevaan lääkemääräykseen. Int. J. Environ. Res. Kansanterveys 2019, 16, 942.

2. Jacobs, DR; Gross, MD; Tapsell, LC Ruokasynergia: Toimintakonsepti ravitsemuksen ymmärtämiseksi. Olen. J. Clin. Nutr.2009, 89, 1543S.

3. De Lorgeril, M.; Salen, P.; Martin, J.-L.; Monjaud, I.; Delaye, J.; Mamelle, N. Välimeren ruokavalio, perinteiset riskitekijät ja sydän- ja verisuonikomplikaatioiden määrä sydäninfarktin jälkeen. Levikki 1999, 99, 779–785.

4. Psaltopoulou, T.; Naska, A.; Orfanos, P.; Trichopoulos, D.; Mountokalakis, T.; Trichopoulou, A. Oliiviöljy, Välimeren ruokavalio ja valtimoverenpaine: Kreikan eurooppalainen syövän ja ravinnon tulevaisuudentutkimus (EPIC). Olen. J. Clin. Nutr. 2004, 80, 1012–1018.

5. Estruch, R.; Ros, E.; Salas-Salvad6, J.; Covas, M.-I.; Corella, D.; Ar6s, F.; G6mez-Gracia, E.; Ruiz-Gutierrez, V.; Fiol, M.; Lapetra, J.; et ai. Sydän- ja verisuonitautien ensisijainen ehkäisy Välimeren ruokavaliolla. Z. Gefassmedizin 2013, 10, 28.

6. Uusitupa, M.; Khan, TA; Viguiliouk, E.; Kahleova, H.; Rivellese, AA; Hermansen, K.; Pfeiffer, A.; Thanopoulou, A.; Salas-Salvad6, J.; Schwab, U.; et ai. Tyypin 2 diabeteksen ehkäisy elämäntapamuutoksilla: Systemaattinen katsaus ja meta-analyysi. Ravinteet 2019, 11, 2611.

7. Jannasch, F.; Kröger, J.; Schulze, MB Ruokavaliomallit ja tyypin 2 diabetes: Systemaattinen kirjallisuuskatsaus ja meta-analyysi tulevaisuuden tutkimuksista. J. Nutr. 2017, 147, 1174–1182.

8. Esposito, K.; Chiodini, P.; Maiorino, MI; Bellastella, G.; Panagiotakos, D.; Giugliano, D. Mikä ruokavalio tyypin 2 diabeteksen ehkäisyyn? Prospektiivisten tutkimusten meta-analyysi. Endocrine 2014, 47, 107–116.

9. Huo, R.; Du, T.; Xu, Y.; Xu, W.; Chen, X.; Sun, K.; Yu, X. Välimeren tyylisen ruokavalion vaikutukset glukoositasapainoon, painonpudotukseen ja kardiovaskulaarisiin riskitekijöihin tyypin 2 diabeetikoiden keskuudessa: meta-analyysi. euroa J. Clin. Nutr. 2015, 69, 1200–1208.

10. Martin-Peldez, S.; Fito, M.; Castaner, O. Välimeren ruokavalion vaikutukset tyypin 2 diabeteksen ehkäisyyn, taudin etenemiseen ja niihin liittyviin mekanismeihin. Arvostelu. Ravinteet 2020, 12, 2236.

11. Milajerdi, A.; Namazi, N.; Larijani, B.; Azadbakht, L. Ruokavalion laatuindeksien ja syöpäkuolleisuuden yhdistys: Kohorttitutkimusten systemaattinen katsaus ja meta-analyysi. Nutr. Syöpä 2018, 70, 1091–1105.

12. Schwingshackl, L.; Schwedhelm, C.; Gilbert, C.; Hoffmann, G. Välimeren ruokavalion noudattaminen ja syöpäriski: Päivitetty systemaattinen katsaus ja meta-analyysi. Ravinteet 2017, 9, 1063.

13. Say6n-Orea, C.; Razquin, C.; Bull6, M.; Corella, D.; Fit6, M.; Romaguera, D.; Vioque, J.; Alonso-G6mez, AM; Wärnberg, J.; Martinez, JA; et ai. Ravitsemus- ja käyttäytymisinterventioiden vaikutus vähäenergiaisen Välimeren ruokavalion noudattamiseen potilailla, joilla on metabolinen oireyhtymä: PREDIMED-Plus-satunnaistetun kliinisen tutkimuksen välianalyysi. JAMA J. Am. Med. Assoc. 2019, 322, 1486–1499.

14. Bajerska, J.; Chmurzynska, A.; Muzsik, A.; Krzyz˙ anowska, P.; Ma˛dry, E.; Malinowska, AM; Walkowiak, J. Painonpudotus ja aineenvaihdunnan terveysvaikutukset energiarajoitteisista Välimeren ja Keski-Euroopan ruokavalioista postmenopausaalisilla naisilla: satunnaistettu kontrolloitu tutkimus. Sci. Tasavalta 2018, 8, 11170.

15. Estruch, R.; Martinez-Gonzalez, MA; Corella, D.; Salas-Salvad6, J.; Fit6, M.; Chiva-Blanch, G.; Fiol, M.; G6mez-Gracia, E.; Ar6s, F.; Lapetra, J.; et ai. Runsasrasvaisen Välimeren ruokavalion vaikutus kehon painoon ja vyötärön ympärysmittaan: ennalta määrätty toissijainen tulosanalyysi PREDIMED satunnaistetusta kontrolloidusta tutkimuksesta. Lancet Diabetes Endokrinoli. 2019, 7, e6–e17.

16. Molendijk, M.; Molero, P.; Ortuño Sdnchez-Pedreño, F.; Van der Does, W.; Angel Martinez-Gonzalez, M. Ruokavalion laatu ja masennuksen riski: Prospektiivisten tutkimusten järjestelmällinen katsaus ja annos-vaste-meta-analyysi. J. Affect. Häiriö. 2018, 226, 346–354.

17. Wu, L.; Sun, D. Välimeren ruokavalion noudattaminen ja kognitiivisten häiriöiden kehittymisen riski: Päivitetty systemaattinen katsaus ja meta-analyysi tulevaisuuden kohorttitutkimuksista. Sci. Tasavalta 2017, 7, 1–9.

18. Loughrey, DG; Lavecchia, S.; Brennan, S.; Lawlor, BA; Kelly, ME Välimeren ruokavalion vaikutus terveiden iäkkäiden aikuisten kognitiiviseen toimintaan: Systemaattinen katsaus ja meta-analyysi. Adv. Nutr. 2017, 8, 571–586.

19. Arnold, SE; Arvanitakis, Z.; Macauley-Rambach, SL; Koenig, AM; Wang, HY; Ahima, RS; Craft, S.; Gandy, S.; Buettner, C.; Stoeckel, LE; et a Aivojen insuliiniresistenssi tyypin 2 diabeteksessa ja Alzheimerin taudissa: käsitteitä ja arvoituksia. Nat. Rev. Neurol. 2018, 14, 168–181.

20. Trichopoulou, A.; Vasilopoulou, E. Välimeren ruokavalio ja pitkäikäisyys. Br. J. Nutr. 2020, 84, S205–S209.