Alustava tutkimus Cistanche Deserticolasta peräisin olevien polysakkaridien edistämisvaikutuksista ja -mekanismista lymfosyyttien lisääntymiseen

menetelmät

MTT-määritystä käytettiin pernan lymfosyyttien proliferaation havaitsemiseksi hiirissä. Syklofosfamidia (Cy) käytettiin toistamaan immuunipuutteisten eläinten eläinmalleja, ja normaalien ja immuunipuutteisten eläinten pernan ja kateenkorvan indeksit mitattiin. Interleukiini-2:n (IL-2) aktiivisuus mitattiin tymosyyttien lisääntymismäärityksellä. Tulokset: Cistanche deserticola -polysakkaridi edisti merkittävästi mitogeenillä (ConA ja LPS) aktivoitujen lymfosyyttien ja aktivoimattomien normaalisolujen lisääntymistä ja lisäsi IL-2:n erittymistä lymfosyyteissä. Vatsaontelonsisäinen anto osoitti, että Cistanche deserticola -polysakkaridi lisäsi merkittävästi normaalien ja immuunipuutteisten hiirten pernaindeksiä, ja sillä oli myös merkittävä antagonistinen vaikutus Cy:n aiheuttamaan kateenkorvaindeksin alenemiseen. Johtopäätös: Cistanche deserticola -polysakkaridi voi merkittävästi edistää pernan lymfosyyttien lisääntymistä hiirillä, mikä saattaa liittyä sen IL-2-erityksen edistämiseen.

Aavikon elävä vesisäiliö

[Avainsanat]Cistanche deserticola polysakkaridi; Perna-indeksi; kateenkorvaindeksi; Lymfosyyttien lisääntyminen; Interleukiini-2

Kasvipolysakkaridit ovat herättäneet laajaa huomiota niiden laajalle levinneiden immunomoduloivien vaikutusten ja suhteellisen alhaisen toksisuuden vuoksi [1]. Cistanche deserticola ma, joka tunnetaan nimellä "Desert Ginseng", on Orobaceae-lajin Cistanche deserticola -kasvin hilseilevä, kuiva, mehevä varsi, jolla on laajat farmakologiset vaikutukset. Sen vesikeite voi merkittävästi lisätä makrofagien fagosyyttiprosenttia ja fagosyyttiindeksiä. Lisätutkimukset ovat osoittaneet, että sen aineellinen perusta on Cistanche deserticolan kokonaispolysakkaridi [3]. Zeng Qunli et ai. [4] ovat havainneet, että yhdellä Cistanche deserticola -polysakkaridin komponentilla on merkittävä proliferatiivinen vaikutus hiiren kateenkorvan lymfosyytteihin in vitro. Cistanche deserticola -polysakkaridin vaikutus lymfosyyttien lisääntymiseen havaittiin in vivo ja in vitro.

Cistanche deserticolan molekyylikaava

1 Materiaalit ja menetelmät

1.1 Lääkkeet ja reagenssit

Cistanche deserticolasta peräisin olevan polysakkaridin toimittaa lääketieteellisen korkeakoulun lääketieteen ja istutuksen instituutin kasvi- ja kemianosasto. Se uutetaan Cistanche-uutejauheesta, ja sen polysakkaridipitoisuus on 87%.

Cistanche-uutejauhe

Ennen kuin käytät in vivo -kokeita, liuotetaan ja laimennetaan fysiologisella suolaliuoksella vaadittuun pitoisuuteen ja keitetään sterilointia varten. Ennen in vitro -kokeiden käyttöä RPMI-1640 viljelyväliaine liuotettiin ja laimennettiin ja suoritettiin korkeapainesterilointi. Lipopolysakkaridi (LPS), konkanavaliini (ConA), deksametasoni (DEX) ja MTT ovat kaikki Sigma Corporationin tuotteita. Syklofosfamidi, Shanxi Taisheng Pharmaceutical Co., Ltd.:n kiinalais-amerikkalainen yhteisyritys, naudan sikiön seerumi, RPMI1640-viljelyalusta ja trypsiini ovat kaikki Gibcon tuotteita. Muut reagenssit ovat kotimaisia ​​analyyttisiä reagensseja.

1.2 Eläimet

BALB c -nuoret hiiret (SPF-taso) tarjoaa Viton Lihua Experimental Animal Technology Co., Ltd. [SCXK (Beijing) 2002-2003]. SPF-luokan eläimiä kasvatetaan huoneessa ja niitä ruokitaan ja juodaan vapaasti.

1.3 Laitteet

Multikan Ascent -entsyymimarkkeri, Thermo Electron Companyn, USA:n, tuote. Leici PHS-3B Precision pH Meter, Shanghai Precision Scientific Instrument Co., Ltd., NAPCOo 5410 hiilidioksidiinkubaattori, NAPCO, USA. BCN-1360 Ultra Clean Workbench, Beijing Donglianhar Instrument Manufacturing Co., Ltd. XDS-1B Käänteinen mikroskooppi, Chongqing Optoelectronic Instrument Co., Ltd.

1.4 Menetelmä

1.4.1 Vaikutus lymfosyyttien lisääntymiseen [5]:

Pernan lymfosyyttien rutiinivalmistelu BALB/c-hiiristä käyttämällä RPMI-1640:ää solukonsentraation säätämiseen 1 × 107 ml:ksi, siirrostettu 96-kuoppaiselle viljelylevylle ja jokaiseen kuoppaan lisätty 100 solususpensiota μL-50. Sitä viljeltiin yhdessä eri konsentraatioiden kanssa Cistanche deserticola polysakkaridia (Cistanche deserticola polysakkaridin lopullinen pitoisuus aktivoimattomien lymfosyyttien proliferaatiota varten oli 6,25, 12,5, 25, 50 ja 100 mg/l järjestyksessä; Cistanche deserticola -polysakkaridin lopullinen pitoisuus aktivoituneen aavikkopolysakkaridin polysakkaridia varten lymfosyytit olivat järjestyksessä 3,9, 7,8, 15,6, 31,2 ja 62,5 mg/l, ja lopullinen Cistanche deserticola -polysakkaridin pitoisuus LPS-aktivoitujen B-lymfosyyttien proliferaatiota varten oli 1,56, 3,13, 6,25, ja 125 mg/L ja 125 mg/l. Kontrollina käytettiin RPMI-1640 välinettä. Jokaisen reiän kokonaistilavuus on 200 µl. Kun lisätään mitogeeni ConA ja LPS (kontrolli on RPMI-1640, joka sisältää vastaavat ConA- tai LPS-pitoisuudet), molempien lopulliset pitoisuudet ovat vastaavasti 2,5 mg/l ja 10 mg/l. Eri hoitoja varten tehtiin kolme rinnakkaista reikää. Aseta viljelylevy 37-asteiseen, 5 % CO2:lla kyllästettyyn kosteusinkubaattoriin 68 tunniksi, lisää MTT:tä ja jatka viljelyä 4 tuntia. Mittaa A540 nm -arvo entsyymimarkkerilla käyttämällä MTT-menetelmää proliferaation havaitsemiseksi. Kun vertaat kutakin ryhmää, muunna A540nm-arvo lymfosyyttien proliferaationopeudeksi seuraavan kaavan mukaisesti:lymfosyyttien lisääntymisnopeus=AA-näyte A kontrolli × 100 %.

Cistanchen vaikutukset - Paranna immuniteettia

1.4.2 Vaikutus immuunielimien painoon normaaleissa hiirissä [6,7]:

Nuoret BALB c -hiiret (urospuoliset, 4 viikon ikäiset, ruumiinpaino 10-15 g) jaettiin satunnaisesti nollakoekontrolliryhmään (suolaliuos) ja eri annosryhmiin (125 mg (kg · bw) ja 250 mg (kg · bw)), kussakin ryhmässä oli 11 rottaa. Lääkettä annettiin intraperitoneaalisesti kerran päivässä 7 peräkkäisenä päivänä. Hiiret tapettiin kohdunkaulan sijoiltaanmenon jälkeen. Perna ja kateenkorva otettiin, rasva- ja fasciakudos poistettiin ja pintaneste kuivattiin suodatinpaperilla. Punnituksen jälkeen pernan indeksi=100 × pernan paino (mg) ruumiinpaino (mg); Hthymusindex=100 × kateenkorvan paino (mg) kehon paino (mg). Laske pernaindeksi ja kateenkorvaindeksi kullekin 100 mg:lle ruumiinpainoa.

1.4.3 Vaikutus immuunijärjestelmän painoon immuunipuutteisilla hiirillä [7,8]:

Nuoret BALB c -rotat (uros, 6 viikkoa vanha, ruumiinpaino 15-20 g) jaettiin satunnaisesti 12 ryhmään ruumiinpainon mukaan. Lukuun ottamatta normaalia kontrolliryhmää (vastaavan tilavuuden fysiologista suolaliuosta vatsaontelonsisäinen injektio) muille ryhmille annettiin Cy 50 mg (kg · bw) päivittäin intraperitoneaalisesti ja testilääkeliuos annettiin vatsaontelonsisäisesti [125 ja 250 Mg (kg · bw)], normaalille kontrolliryhmälle ja malliryhmälle annettiin kerran sama tilavuus 1 vuorokautta. päivä. Eläimen painon muutoksia havaittiin kokeen aikana . 24 tuntia viimeisen annon jälkeen, pernan ja kateenkorvan indeksit mitattiin ja laskettiin samalla menetelmällä kuin kohdassa 1.4.2.

1.4.4 Vaikutus IL-2 toimintaan:

① IL-2 [9]:n induktio: Lisää 50 ui jokaiseen 96-kuoppaisen solulevyn kuoppaan μL Eri konsentraatiot Cistanche deserticola polysakkaridia (lopulliset pitoisuudet järjestyksessä: 3,91, 7,82, 15,63, 31,25, 62,5 mg/l, lisää kontrolliin 25 mg/l L viljelyalustaa) ja 50 µl ConA:ta (lopullinen konsentraatio 5 mg/l), lisää 1 lisää per kuoppa × 106 pernasolua. Inkuboi 37-asteisessa, 5 % CO2:lla kyllästetyssä kosteudessa inkubaattorissa 24 tuntia, sentrifugoi 20 minuuttia nopeudella 2500 rpm, ota solusupernatantti ja säilytä se - 20 asteessa valmiustilaa varten. ② IL-2 aktiivisuuden havaitseminen [9,10]: Perusmenetelmä perustuu kirjallisuuteen [9] ja sopivat säädöt tehdään kirjallisuuden [10] mukaan. Perinteinen BALB c -hiiren tymosyyttisuspension valmistus, 96-kuoppainen soluviljelylevy, 1 inokulaatio kuoppaa kohden × 106 tymosyyttiä, samalla kun lisätään 50 solua kuoppaa kohden μL ConA (lopullinen konsentraatio 2,5 mg/L), ja lisätään sitten valmistettu IL-2-supernatantti 50 μl kontrolliliuokseen (lisätään 50 μl nollaviljelyyn). inkuboi yhdessä 54 tuntia, lisää MTT, jatka inkubointia 4 tuntia, sentrifugoi 10-15 minuuttia nopeudella 1000 rpm, hävitä supernatantti ja lisää DMSO 100 per kuoppa μL, ravista mikrooskillaattorilla 8 minuuttia ja mittaa A540 nm entsyymimerkkiarvo.

1.5 Tilastollinen analyysi

Tiedot ilmaistiin keskiarvona ja standardipoikkeamana (x ± s). Tietojen kokoamiseen käytettiin Microsoft Excel -ohjelmistoa ja suoritettiin t-testi. P<0.05 and P<0.01 were significant differences, both of which were statistically significant.

2. Tulokset

2.1 Vaikutus lymfosyyttien lisääntymiseen

Kuten taulukosta 1 voidaan nähdä, Cistanche deserticola -polysakkaridin lisääminen hiiren pernan lymfosyyttien viljelyalustaan ​​in vitro pitoisuudessa yli 25 mg/l voi merkittävästi stimuloida lymfosyyttien proliferaatiota, mikä osoittaa, että Cistanche deserticola -polysakkaridilla itsessään on mitoottinen vaikutus. Samaan aikaantaulukosta 2 ja 3 voidaan nähdä, että CDPS:llä on merkittävä edistävä vaikutus ConA-indusoitujen T-lymfosyyttien tai LPS-indusoitujen B-lymfosyyttien lisääntymiseen.

Tab.1 Cistanche deserticola -polysakkaridin vaikutus aktivoimattomien lymfosyyttien proliferaatioon (x ±s, n =3)

Ei: verrokkiryhmään verrattuna *P<0.05.

Tab.2 Cistanche deserticola -polysakkaridin vaikutus ConA:n indusoimaan T-lymfosyyttien proliferaatioon (x ±s, n =3)

 

Huomautus: ConA-ryhmään verrattuna *P<0.05, ＊＊P <0.01.

Tab.3 Cistanche deserticola -polysakkaridin vaikutus LPS:n indusoimaan B-lymfosyyttien proliferaatioon (x ±s, n =3)

Huomautus: verrattuna LPS-ryhmään *P<0.05, ＊＊P <0.01.

2.2 Vaikutus immuunielimien painoon normaaleissa hiirissä

Kuten taulukosta 4 voidaan nähdä,Cistanche deserticola -polysakkaridi voi merkittävästi lisätä normaalien BALB/cc nuorten rottien pernaindeksiä, mutta se ei vaikuta kateenkorvaan.

2.3 Vaikutus immuunijärjestelmän painoon immuunipuutteisilla hiirillä

Taulukosta 5,voidaan nähdä, että Cy-immunosuppressiivisen ryhmän hiirten perna- ja kateenkorvan elinindeksit ovat alhaisemmat kuin kontrolliryhmän, ja Cistanche deserticola -polysakkaridi (125, 250 mg/kg) voi parantaa merkittävästi pernan ja kateenkorvan indeksejä.

2.4 Vaikutus IL-2 toimintaan

Kuten taulukosta 6 voidaan nähdä,kun Cistanche deserticola -polysakkaridin annos saavuttaa 7,82 mg/l, se voi lisätä merkittävästi IL-2:n vapautumista hiiren pernasoluista.

Tab.4 Cistanche deserticola -polysakkaridin vaikutus immuunielimien painoon normaaleissa hiirissä (x ±s, n =11)

Huomautus: verrokkiryhmään verrattuna *P<0.01.

Tab.5 Cistanche deserticola -polysakkaridin vaikutus immuunielinten painoon immuunivajautuneilla hiirillä (x ±s, n =12)

Huomautus: verrokkiryhmään verrattuna ## P < 0,01; verrattuna malliryhmään *P<0.01.

Tab.6 Cistanche deserticola -polysakkaridin vaikutus pernan lymfosyyttien IL-2-tuotantoon hiirillä( x ±s, n =3)

Huomautus: verrokkiryhmään verrattuna *P<0.01.

3. Keskustelu

ConA- ja LPS-indusoitu pernan lymfosyyttien proliferaatio hiirillä on in vitro -koe T- ja B-lymfosyyttien toiminnan havaitsemiseksi, ja se on tärkeä spesifisen immuunikyvyn indikaattori. Tutkimukset ovat osoittaneet, että kun Cistanche deserticola -polysakkaridin lopullinen pitoisuus on yli 25 mg/l, se voi merkittävästi edistää lymfosyyttien lisääntymistä, mikä osoittaa, että sillä on tietty mitoottinen vaikutus. Mitogeenin (ConA tai LPS) läsnä ollessa pienempi annos Cistanche deserticola -polysakkaridia voi parantaa elimistöä, osoittaa merkittävää proliferatiivista aktiivisuutta. Tiedämme, että ConA ja LPS indusoivat pääasiassa T-lymfosyyttien tai B-lymfosyyttien proliferaatiota, vastaavasti. Tutkimukset ovat osoittaneetcistanche-jauheen terveyshyödyt: Cistanche deserticola -polysakkaridi voi edistää sekä T-lymfosyyttien että B-lymfosyyttien lisääntymistä, mutta sen proliferatiivinen vaikutus B-lymfosyytteihin on merkittävästi voimakkaampi kuin T-lymfosyyttien.

Cistanche-jauheen terveyshyödyt - Improve immuniteetti

Napsauta tästä nähdäksesi Cistanche Improve Immunity -tuotteet

【Kysy lisää】 Sähköposti: xue122522@foxmail.com / WhatsApp 0086 18599088692 / WeWeChat18599088692

Kateenkorva ja perna ovat eläinten tärkeimmät immuunijärjestelmät. Pernan immuunisolut ovat pääasiassa kypsiä B-lymfosyyttejä, kun taas kateenkorva on pääasiassa epäkypsiä T-lymfosyyttejä. Kateenkorva- ja pernaindeksit voivat kuvastaa immuunielinten kehitystä ja immuunisolujen toiminnallista tilaa. Cistanche deserticola -polysakkaridin vatsaontelonsisäinen injektio voi merkittävästi lisätä normaalien ja immunosuppressoituneiden hiirten pernaindeksiä ja sillä on merkittävä antagonistinen vaikutus Cy:n aiheuttamaan kateenkorvan atrofiaan hiirillä.

Cistanche deserticola -polysakkaridilla ei ole merkittävää vaikutusta kateenkorvaindeksiin normaaleissa eläimissä, mikä on yhdenmukainen sellaisten in vitro -kokeiden tulosten kanssa, joissa Cistanche deserticola -polysakkaridi edistää B-lymfosyyttien proliferaatiota T-lymfosyyttien sijaan.

Cistanche-lisä lähellä minua-Improveimmuniteetti

IL-2 on T-lymfosyyttien tuottama sytokiini solusyklin G1-vaiheesta S-vaiheeseen. Se on tärkeä T-solujen kasvutekijä, joka toimii autokriinisenä kasvutekijänä. Lisäksi IL-2 voi edistää B-solujen lisääntymistä ja vasta-ainesynteesiä [11,12]. Cistanche deserticola -polysakkaridi edistää IL-2:n vapautumista lymfosyyteistä, mikä on ilmeisesti sukua Cistanche deserticola -polysakkaridille, joka edistää pernan lymfosyyttien lisääntymistä.

Lääketieteelliset tutkimukset osoittavat, että Cistanche sisältää polysakkarideja, ekinakosideja ja akteosidia, jotka voivat aktivoida lymfosyyttejä ja parantaa kehoa; cistanchen toiminnallisilla komponenteilla Fenyylietanoidiglykosidit vaikuttavat merkittävästi solujen palautumiseen 60 Co:n gammasäteilyvaurion jälkeen, ja ne voivat myös parantaa immuunijärjestelmää säteilyvaurioita vastaan. Cistanche deserticola -lisäravinteiden päivittäinen käyttö voi parantaa vastustuskykyä.