fiKieli
Etusivu / Tietoa / Sisältö

Tietoa

Plumbagiini estää -MSH:n aiheuttamaa melanogeneesiä hiiren B16F10-melanoomasoluissa estämällä tyrosinaasiaktiivisuutta

Apr 25, 2023

Abstrakti:

Viimeaikaiset tutkimukset ovat osoittaneet, että plumbagiinilla on anti-inflammatorisia, antiallergisia, antibakteerisia ja syöpää estäviä vaikutuksia; ei kuitenkaan ole vielä osoitettu, estääkö plumbagiini alfa-melanosyyttejä stimuloivan hormonin (-MSH) indusoimaa melaniinisynteesiä hyperpigmentaation estämiseksi. Tässä tutkimuksessa osoitimme, että plumbagiini estää merkittävästi -MSH:n stimuloimaa melaniinin synteesiä hiiren B16F10 melanoomasoluissa. Ymmärtääksemme plumbagiinin melaniinin synteesiä estävän mekanismin suoritimme solu- tai soluvapaita tyrosinaasiaktiivisuusmäärityksiä ja analysoimme melanogeneesiin liittyvää geeniekspressiota. Osoitimme, että plumbagiini suppressoi suoraan tyrosinaasiaktiivisuutta riippumatta melanogeneesiin liittyvästä transkriptiokoneistosta, joka sisältää mikroftalmiaan liittyvän transkriptiotekijän (MITF), tyrosinaasin (TYR) ja tyrosinaasiin liittyvän proteiinin 1 (TYRP1). Tutkimme myös, oliko plumbagiini myrkyllistä normaaleille ihmisen keratinosyyteille (HaCaT) ja linssin epiteelisoluille (B3), jotka voivat vahingoittua ihonhoitokosmetiikkaa käytettäessä. Yllättäen pienemmät plumbagiinipitoisuudet (0,5–1 µM) estivät tehokkaasti melaniinin synteesiä ja tyrosinaasin aktiivisuutta, mutta eivät aiheuta toksisuutta keratinosyyteissä, linssin epiteelisoluissa ja hiiren B16F10-melanoomasoluissa, mikä viittaa siihen, että plumbagiini on turvallinen iholle levitettäväksi. Yhdessä nämä tulokset viittaavat siihen, että plumbagiinin pigmentaatiota estävä vaikutus saattaa tehdä siitä hyväksyttävän ja turvallisen komponentin käytettäväksi ihonhoitoon tarkoitetuissa kosmeettisissa formulaatioissa, joita käytetään ihon valkaisuun.

Asiaankuuluvien tutkimusten mukaancistancheon yleinen yrtti, joka tunnetaan nimellä "ihmeyrtti, joka pidentää elämää". Sen pääkomponentti oncistanosidi, jolla on erilaisia ​​vaikutuksia, kutenantioksidantti, tulehdusta ehkäisevä, jaimmuunijärjestelmän toiminnan edistäminen. Mekanismi cistanchen jaihon valkaisuunpiilee cistanchen antioksidanttisessa vaikutuksessaglykosidit. Ihmisen ihossa oleva melaniini muodostuu tyrosiinin hapettumisesta, jota katalysoityrosinaasi, ja hapetusreaktio vaatii hapen osallistumista, joten kehon happivapaista radikaaleista tulee tärkeä melaniinin tuotantoon vaikuttava tekijä. Cistanche sisältää cistanosidia, joka on antioksidantti ja voi vähentää vapaiden radikaalien muodostumista kehossa, jotenestää melaniinin tuotantoa.

where can i buy cistanche

Napsauta Cistanche Tubulosa Supplement -kohtaa

Lisätietoja:

david.deng@wecistanche.com WhatApp:86 13632399501

Avainsanat:plumbagiini; melanogeneesi; pigmentaatio; tyrosinaasi

1. Esittely

Melaniini koostuu ryhmästä pigmenttejä, jotka syntetisoituvat orvaskeden melanosyyteissä ja joilla on tärkeä rooli ihon suojaamisessa ultraviolettisäteilyn (UV) vaurioilta [1]. Epänormaali melanogeneesi, joko lisääntynyt tai vähentynyt melaniinin tuotanto, liittyy läheisesti useisiin ihosairauksiin, mukaan lukien melanooma ja pigmenttihäiriöt, kuten kloasma ja pisamia [2,3]. Melaniinin biosynteesin käynnistävät useat ärsykkeet, mukaan lukien UV-säteily, tulehdussytokiinit ja hormonaalinen signalointi. Tarkemmin sanottuna UV-säteilylle altistuneista keratinosyyteistä vapautuva melanosyyttejä stimuloiva hormoni (-MSH) voi stimuloida melaniinin biosynteesiä epidermaalisissa melanosyyteissä aktivoimalla cAMP-PKA-CREB (syklinen adenosiinimonofosfaatti-proteiinikinaasi A-cAMP vasteelementtiä sitova proteiini) -akselin [3] . Aktivoitu cAMP-PKA-CREB-akseli johtaa mikroftalmiaan liittyvää transkriptiotekijää (MITF) koodaavan mRNA:n kasvuun. MITF lisää tyrosinaasin (TYR), tyrosinaasiin liittyvän proteiinin 2 (TYRP1) ja tyrosinaasille liittyvän proteiinin 2 (TYRP2) geeniekspressiota -MSH-stimulaatiolla melanosyyteissä [3,4]. Lisäksi monet signaalireitit, jotka säätelevät solujen kasvua, mukaan lukien mitogeeniaktivoidut proteiinikinaasit (MAPK:t), solunulkoinen vastekinaasi (ERK) ja AKT, ovat välttämättömiä melanogeneesille säätelemällä MITF:n vakautta ja aktiivisuutta [5].

Entsyymi tyrosinaasi, monitoiminen kuparia sisältävä oksidaasi, näyttelee keskeistä roolia melaniinin biosynteesissä katalysoimalla reaktioita, joissa L-tyrosiini hydroksyloituu L-dihydroksifenyylialaniiniksi (L-DOPA) ja L-DOPA hapettuu o-kinoniksi (dopakinoni). ) [5,6]. Siksi jotkin tyrosinaasin estäjät estävät myös melaniinin biosynteesiä, ja näihin kuuluvat resveratroli, arbutiini ja honokioli, joita kaikkia on käytetty ihon valkaisussa kosmeettisissa sovelluksissa [7].

does cistanche work

Plumbagiini on yksinkertainen hydroksyylinaftokinoni, joka uutettiin ensin Plumbago-suvun kasvien juurista ja jolla on osoitettu olevan merkittäviä lääkinnällisiä ominaisuuksia [8]. Plumbagiinin anti-inflammatorisia, syöpää, allergiaa ja antibakteerisia vaikutuksia on raportoitu [8,9]. On todellakin raportoitu, että plumbagiini estää neutrofiilien aktivaatiota, angiogeneesiä ja kollagenaasin ilmentymistä suppressoimalla topoisomeraasi-II:ta, mikä viittaa plumbagiinin käyttöön mahdollisena lääkkeenä nivelreuman hoidossa [10]. Lisäksi useat raportit ovat osoittaneet, että plumbagiinilla on syöpää estävää vaikutusta useissa eri tyyppisissä syövissä, mukaan lukien rintasyöpä [11], eturauhas [12], munasarja [13], keuhkosyöpä [14], ihosyöpä [15] ja maksasyövä. [16]. Vaikka käy selväksi, että plumbagiini voi olla käyttökelpoinen terapeuttisena interventiona erilaisten ihmisten sairauksien hoidossa, plumbagiinin hyperpigmentaatioon liittyvää melanogeneesiä estävää vaikutusta ei ole koskaan raportoitu.

Tässä tutkimuksessa arvioimme plumbagiinin estäviä vaikutuksia -MSH:n stimuloimaan melanogeneesiin. Tässä osoitamme, että plumbagiini estää merkittävästi -MSH:n aiheuttamaa melaniinin biosynteesiä hiiren B16F10 melanoomasoluissa estämällä tyrosinaasiaktiivisuutta, mutta että se ei estä MITF-välitteistä geeniekspressiota, joka liittyy melanogeneesiin.

2. Tulokset

2.1. Plumbagiinin kemiallinen rakenne ja sytotoksiset vaikutukset B16F10-hiiren melanoomasoluissa

Ennen kuin tutkimme plumbagiinin melanogeenisiä vaikutuksia, arvioimme ensin sen myrkyllisyyden melaniinia tuottavissa B16F10-hiiren melanoomasoluissa. Plumbagiinin kemiallinen rakenne on esitetty kuvassa 1A. Sytotoksisuusmäärityksemme tulokset, joissa plumbagiinipitoisuudet alle 5 uM eivät vaikuttaneet solujen elinkelpoisuuteen B16F10-soluissa, esitetään kuviossa 1B.

cistanche tubulosa supplement

2.2. Plumbagin estää -MSH-indusoitua melaniinin synteesiä B16F10-hiiren melanoomasoluissa

Seuraavaksi tutkimme plumbagiinin estäviä vaikutuksia melanosyyttejä stimuloivan hormonin (-MSH) indusoimaan melaniinin synteesiin B16F10-soluissa. Osoitimme, että plumbagiini suppressoi voimakkaasti -MSH:n aiheuttamaa melaniinin kertymistä B16F10-solujen viljelyalustassa (kuvio 2A). Vahvistaaksemme plumbagiinin estävän vaikutuksen -MSH:n aiheuttamaan melaniinin synteesiin määritimme solunulkoisen tai solunsisäisen melaniinipitoisuuden plumbagiinin puuttuessa tai läsnä ollessa -MSH-stimuloiduissa B16F10-soluissa. Kuviot 2B ja C osoittavat, että plumbagiini vähentää merkittävästi solunulkoista ja solunsisäistä melaniinipitoisuutta.

how to take cistanche

2.3. Plumbagin ei säätele -MSH-indusoitua melanogeneesin geeniekspressio- ja signaalinsiirtokaskadeja

Koska mikroftalmiaan liittyvä transkriptiotekijä (MITF) on olennainen transkriptiotekijä, joka säätelee melanogeneesiin liittyvää geeniekspressiota -MSH-PKA-CREB-akselin kautta, tutkimme, voisiko plumbagiini säädellä melanogeneesiin liittyvää MITF-välitteistä geeniekspressiota. Ensin määritimme ajankohdan maksimaaliselle melanogeneesigeenin ilmentymiselle MITF:lle, tyrosinaasille (TYR) ja tyrosinaasille liittyvälle proteiinille 1 (TYRP1) -MSH-stimulaation alaisena. MITF on voimakkaasti lisääntynyt 2 tunnin -MSH-hoidon jälkeen (kuvio 3A). TYR ja TYRP1 lisääntyivät dramaattisesti 48 tunnin -MSH-hoidon jälkeen (kuva 3A). MITF- ja tyrosinaasiproteiinitasot nousivat vasteena -MSH-käsittelylle, eivätkä plumbagiinikäsittely estäneet niitä (kuvio 3B). Johdonmukaisesti plumbagiini ei estänyt MITF-, TYR- ja TYRP1-mRNA-tasoja -MSH-stimulaation jälkeen, mikä viittaa siihen, että plumbagiini ei säätele melanogeneesigeenin ilmentymiseen liittyvää transkriptiokoneistoa B16F10-soluissa (kuvio 3C). Koska melanogeneesiä varten vaaditaan AKT:n, ERK1/2:n ja CREB:n (pääasialliset signaalinsiirtokaskadit, jotka säätelevät melanogeneesiä) fosforylaatio ja aktivointi [3], tutkimme edelleen, sääteleekö plumbagiini näitä melanogeneesiin liittyviä signaalinsiirtoreittejä. Tuloksemme, jotka on kuvattu kuvassa 3D, osoittavat, että plumbagiini ei muuta AKT-, ERK1/2- tai CREB-signalointia -MSH-hoidon jälkeen.

cistanche side effects reddit

2.4. Plumbagin estää tyrosinaasiaktiivisuutta

Koska suorat tai epäsuorat tyrosinaasia estävät luonnontuotteet voivat olla hyödyllisiä ihoa valkaisevan kosmetiikan kehittämisessä, tutkimme seuraavaksi plumbagiinin estävää vaikutusta tyrosinaasientsyymiaktiivisuuteen. Tässä tutkimuksessa osoitimme, että plumbagiini suppressoi merkittävästi -MSH:n indusoimaa solujen tyrosinaasin entsymaattista aktiivisuutta B16F10-soluissa (kuvio 4A). Sen ymmärtämiseksi, estääkö plumbagiini tyrosinaasiaktiivisuutta suoraan vai epäsuorasti, mitattiin soluton tyrosinaasiaktiivisuus. Plumbagiini estää voimakkaasti myös sieniperäisen tyrosinaasin L-DOPA-hapetusaktiivisuutta, mikä viittaa siihen, että plumbagiini estää melanogeneesiä inhiboimalla suoraan tyrosinaasiaktiivisuutta (kuva 4B). Lisäksi 1,1-difenyyli-2-pikryylihydratsyyli (DPPH) -määrityksen avulla havaittiin merkitsevä nousu radikaalien poistamisessa näytteissä, joita käsiteltiin C-vitamiinilla ja plumbagiinilla pitoisuuksilla, jotka vaihtelivat välillä 0.1 5 mg/ml asti. Tämän seurauksena 5 mg/ml plumbagiinia osoitti samanlaista vaikutusta radikaaleja poistavaan aktiivisuuteen kuin 0,1 mg/ml C-vitamiinia (kuvio 4C).

cistanche for sale

2.5. Plumbagin ei ole myrkyllinen normaaleissa keratinosyyteissä ja linssin epiteelisoluissa

Koska kosmetiikka, kuten ihovoide, on tarkoitettu ulkoiseen käyttöön ja sytotoksisuus voi aiheuttaa iho-ongelmia, tutkimme edelleen, onko plumbagiini myrkyllistä normaaleille keratinosyyteille (HaCaT) ja linssin epiteelisoluille (B3) ja voiko siitä olla hyötyä ihon valkaisuun. kosmetiikka. Näin ollen havaitsimme, että pienemmät plumbagiinipitoisuudet (1–5 µM) eivät aiheuta toksisuutta HaCaT- ja B3-soluissa, mutta ne ovat tehokkaita melaniinin synteesin estämisessä (kuva 5A). Lisäksi plumbagiini ei indusoinut DNA-vaurioon liittyvää H2AX:tä eikä vähentänyt solujen apoptoosiin liittyviä poly(ADP-riboosi)polymeraasi- (PARP) ja kaspaasi{10}}-proteiineja HaCaT- ja B3-soluissa (kuva 5B), mikä viittaa siihen, että plumbagiini saattaa olla hyväksyttävää käytettäväksi ihonvalkaisutuotteissa ilman ihotoksisuutta.

rou cong rong benefits

3. Keskustelu

Plumbagiini on kasviperäinen sekundaarinen metaboliitti, ja sillä on useita biologisia toimintoja, mukaan lukien anti-inflammatoriset, syövänvastaiset, antiallergiset ja antibakteeriset vaikutukset [8,9]. Ei kuitenkaan tiedetty, oliko plumbagiinilla estävä vaikutus hyperpigmentaatioon ja melanoomaan liittyvään melanogeneesiin. Tässä tutkimuksessa osoitimme, että plumbagiini suppressoi voimakkaasti melanogeneesiä B16F10-melanoomasoluissa, ja tämä työ voisi tarjota mahdollisuuden kehittää ihonhoitokosmetiikkaa, joka perustuu plumbagiinin anti-inflammatoriseen, antiallergiseen, antibakteeriseen ja anti-melanogeneesiin.

Koska melanogeneesin noususäätelyä havaitaan usein pahanlaatuisessa melanoomassa, jossa tyrosinaasitasot ovat yli-ilmentyneet veressä sekä kasvainkudoksissa, on ilmeistä, että melanogeneesi on mahdollinen kohde pahanlaatuisten melanoomien kemoterapiassa [1]. Tässä tutkimuksessa havaitsimme, että plumbagiini suppressoi suoraan tyrosinaasiaktiivisuutta riippumatta melanogeneesiin liittyvästä transkriptiokoneistosta (kuva 6). Siksi tuloksemme viittaavat siihen, että plumbagiini voi olla mahdollinen osa ennaltaehkäisevää ja terapeuttista strategiaa pahanlaatuisen melanooman hoidossa. Itse asiassa plumbagiinin melanooman vastaisista, kemosensibilisoivista ja säteilyä aiheuttavista vaikutuksista melanoomahoitoon on raportoitu [17–21].

cistanche chemist warehouse

Aiemmissa tutkimuksissa, jotka käsittelivät plumbagiinin syöpää ja tulehdusta ehkäiseviä vaikutuksia, noin 5–10 µM plumbagiinia (korkeampi kuin tässä tutkimuksessa käytetty pitoisuus) on käytetty in vitro -malleissa [17,22 ,23]. Siksi tutkimme plumbagiinin toksisia vaikutuksia proliferatiivisissa soluissa, mukaan lukien normaalit keratinosyytit (HaCaT) ja linssin epiteelisolut (B3), joita ihonhoitokosmetiikka voi vahingoittaa. Tuloksemme osoittivat, että pienemmät pitoisuudet, noin 0,5–1 µM plumbagiinia, eivät ole myrkyllisiä normaaleille keratinosyyteille ja linssin epiteelisoluille, mutta ovat riittävän tehokkaita vähentämään tyrosinaasin aktiivisuutta ja melaniinin synteesiä. Lisäksi havaitsimme myös, että plumbagiini estää melanogeneesiä tehokkaammin kuin 1 mM arbutiini tai 0,2 mM kojiinihappo, jotka ovat hyvin tunnettuja ihoa valkaisevia aineita. Nämä tulokset viittaavat siihen, että plumbagiini on turvallinen käyttää komponenttina ihoa valkaisevan kosmetiikan kehittämisessä.

Tässä tutkimuksessa tutkimme plumbagiinin estäviä vaikutuksia tyrosinaasientsyymireaktioon käyttämällä L-DOPA-hapetukseen perustuvia soluja ja soluttomia tyrosinaasiaktiivisuusmäärityksiä. Emme kuitenkaan ehdottaneet tarkkaa molekyylimekanismia sille, kuinka plumbagiini estää tyrosinaasiaktiivisuutta. Tätä mekanismia tulisi tutkia edelleen sen määrittämiseksi, onko plumbagiini suoraan vuorovaikutuksessa tyrosinaasin kanssa ja estääkö sen oksidaasiaktiivisuutta vai onko sillä epäsuoria vaikutuksia, jotka johtavat tyrosinaasiaktiivisuuden vähenemiseen.

4. Materiaalit ja menetelmät

4.1. Reagenssit ja vasta-aineet

Sienistä puhdistettu plumbagiini, -MSH (M4135), arbutiini (A4256), kojiinihappo (K3125), L-DOPA (333786) ja tyrosinaasi (T3824) ostettiin Sigma-Aldrichilta (St. Louis, MO, USA). Vasta-aineet MITF:ää (#12590), p-AKTS473:a (#4060), p-AKTT308:aa (#13038), p-CREB:tä (#9198), p-ERK1/2:ta (#4370), ERK1/2:ta (#9102) vastaan H2AX (#9718), PARP (#5625) ja kaspaasi-3 (#9665) ostettiin Cell Signaling Technologylta (Danvers, MA, USA). Tyrosinaasi (sc-7833) ja -tubuliini (sc-9104) ostettiin Santa Cruz Biotechnologylta (Dallas, TX, USA).

4.2. Soluviljelmä ja solujen elinkelpoisuusmääritys

B16F10 (hiiren melanoomasolut), B3 (ihmisen linssin epiteelisolut) ja HaCaT (ihmisen keratinosyytti) soluja viljeltiin Dulbeccon modifioidussa Eaglen alustassa (DMEM), jota oli täydennetty 10 prosentilla naudan sikiön seerumilla ja 25 mM glukoosilla. Soluja inkuboitiin kostutetussa ilmakehässä, jossa oli 95 prosenttia ilmaa ja 5 prosenttia CO2:ta 37 °C:ssa. Elinkyvyn mittaamiseksi soluja inkuboitiin eri konsentraatioiden kanssa dimetyylisulfoksidiin (DMSO) liuotettua plumbagiinia 48 tai 72 tuntia. Inkuboinnin jälkeen viljellyt solut pestiin PBS:llä ja inkuboitiin sitten 0,5-prosenttisen kristalliviolettivärjäysliuoksen kanssa 20 minuuttia huoneenlämpötilassa. Optisen tiheyden mittaamiseksi värjättyjä soluja inkuboitiin 1-prosenttisessa natriumdodekyylisulfaattiliuoksessa (SDS) 15 minuutin ajan huoneenlämpötilassa, minkä jälkeen kunkin kuopan optinen tiheys mitattiin 570 nm:ssä (OD570) käyttämällä absorbanssilukijaa (BioTek, Winooski). , VT, USA).

4.3. Immunoblottaus

Viljellyt solut hajotettiin käyttämällä 1 % IGEPAL (oktyylifenoksipolyetoksietanoli), 150 mM NaCl, 50 mM Tris-HCl (pH 7,9), 10 mM NaF ja proteaasi-inhibiittoriseosta lyysipuskurissa. Proteiininäytteet erotettiin natriumdodekyylisulfaatti-polyakryyliamidigeelielektroforeesilla (SDS-PAGE), ja erotetut proteiinit siirrettiin sitten polyvinylideenidifluoridi (PVDF) -kalvolle (Millipore, Billerica, MA, USA). Kalvoja inkuboitiin yön yli primaaristen vasta-aineiden kanssa (1:1{15}}) 4 ◦C:ssa ja sitten inkuboitiin HRP-konjugoitujen sekundaaristen vasta-aineiden kanssa (1:10 000) 1 tunti huoneenlämpötilassa. Proteiinit visualisoitiin käyttämällä ECL Prime -pakkausta (GE Healthcare, Pittsburgh, PA, USA).

cistanche nedir

4.4 Solunsisäisen ja solunulkoisen melaniinipitoisuuden mittaaminen

Melaniinipitoisuus määritettiin ja kvantifioitiin käyttämällä aiemmin kuvattua menetelmää hieman modifioituna [2,24]. Melaniinipitoisuusanalyysiä varten B16F10-soluja viljeltiin fenolipunavapaassa DMEM:ssä, joka sisälsi 10 prosenttia naudan sikiön seerumia. B16F10-soluja viljeltiin -MSH-käsittelyllä ilman plumbagiinia tai sen läsnä ollessa 3 tai 4 päivää. Viljellyt solut tai elatusaineet kerättiin ja pelletit liuotettiin 1 N NaOH:hon, joka sisälsi 10 % DMSO:ta, 80 °C:ssa 1 tunnin ajan. Melaniinipitoisuus mitattiin käyttämällä absorbanssilukijaa aallonpituudella 475 nm (OD475), ja sitten melaniinipitoisuus normalisoitiin solun proteiinipitoisuuteen.

4.5. RNA:n eristäminen ja kvantitatiivinen RT-PCR

Kokonais-RNA uutettiin B16F10-soluista käyttämällä TRIzolia (Invitrogen, Waltham, MA, USA), ja 2 ug kokonais-RNA:ta käytettiin cDNA-synteesiin käyttämällä suurikapasiteettista cDNA-käänteistranskriptiopakkausta (Applied Biosystems, Waltham, MA, USA). Kvantitatiivinen PCR suoritettiin käyttämällä SYBR Green PCR Master Mixiä (Applied Biosystems). PCR-alukkeiden sekvenssit (50-30 uM) olivat seuraavat: TCAAGTTTCCAGAGACGGGT ja CATCACAGCCTGGAATCAA MITF:lle; ATAGGTGCATTGGCTTCTGG ja TCTTCACCATGCTTTTGTGG TYR:lle; CATTTCCAG CTGGGTTTCTC ja TGGTCTGTGAATCCTTGGAA TYRP1:lle.

4.6. Solujen tyrosinaasin aktiivisuusmääritys

Solujen tyrosinaasiaktiivisuus määritettiin käyttämällä aiemmin kuvattua menetelmää modifikaatiolla [25,26]. Viljeltyjä B16F10-soluja inkuboitiin -MSH:n kanssa plumbagiinin puuttuessa tai läsnä ollessa, ja sitten solut pestiin ja hajotettiin PBS:llä, joka sisälsi 1 % natriumdeoksikolaattia ja 0,5 % Triton X{{8} }. Kun proteiinipitoisuus oli määritetty, 50 µg proteiinia inkuboitiin 2,0 mM L-DOPA:n ja 0,1 M PBS:n (pH 6,8) kanssa 1 tunti 37 °C:ssa. L-DOPA:n hapettuminen mitattiin 475 nm:ssä (OD475) käyttämällä absorbanssilukijaa. Aktiivisuus mitattiin käyttämällä seuraavaa kaavaa: tyrosinaasiaktiivisuus (prosenttia)=(näytteen OD475/kontrollin OD475) × 100.

4.7. Soluton tyrosinaasin aktiivisuusmääritys

Plumbagiinin tyrosinaasiaktiivisuutta estävän vaikutuksen määrittämiseksi puhdistettua sienityrosinaasia inkuboitiin 2 tuntia reaktioseoksen kanssa, joka sisälsi 0,1 M PBS:ää (pH 6,8) ja 2 mM L-DOPAa ilman plumbagiinia tai sen läsnä ollessa. . L-DOPA:n hapettuminen dopakromiksi mitattiin aallonpituudella 475 nm (OD475) absorbanssilukijalla. Aktiivisuus mitattiin käyttämällä seuraavaa kaavaa: tyrosinaasiaktiivisuus (prosentti)=(näytteen OD475/kontrollin OD475) × 100.

4.8 DPPH Radical Scavenging Activity Assay

Plumbagiinin radikaaleja poistavan aktiivisuuden määrittämiseksi valmistettiin ja käytettiin {{0}},2 mM DPPH-liuosta metanolissa. Jokainen näyte laimennettiin tislatulla vedellä lopulliseen konsentraatioon 0,1, 0,2, 0,5, 1, 2 ja 5 mg/ml (plumbagiini) tai { {13}}.005, 0.01, 0,05, 0,1, 0,2 ja 0,5 mg/ml (C-vitamiini). Reaktion jälkeen optinen tiheys (OD) mitattiin 517 nm:ssä (OD517) käyttämällä absorbanssilukijaa. Vapaita radikaaleja poistava aktiivisuus laskettiin seuraavalla kaavalla: DPPH radikaaleja poistava aktiivisuus ( prosenttia )=10 − ((ODs/ODc) × 100), missä ODs edustaa näytteiden absorbanssia ja ODc edustaa näytteen absorbanssia. ajoneuvon ohjaus.

4.9. Tilastollinen analyysi

Kaikki tiedot analysoitiin käyttämällä paritonta Studentin t-testiä kahdelle kokeelliselle vertailulle ja yksisuuntaista varianssianalyysiä (ANOVA) Tukeyn post hoc -testillä moninkertaisille vertailuille käyttämällä Prismia (GraphPad Software Inc., La Jolla, CA, USA). Tiedot esitetään keskiarvona ± standardipoikkeama (SD). Keskiarvojen välisiä eroja pidettiin tilastollisesti merkitsevinä, kun niihin liittyvä p-arvo oli pienempi kuin 0,05.

5. Johtopäätökset

Tämän tutkimuksen tärkeimmät havainnot ovat, että plumbagiini (i) suppressoi -MSH:n aiheuttamaa melaniinin synteesiä estämällä tyrosinaasiaktiivisuutta; (ii) ei vaikuta MITF-kytkettyyn transkriptiokoneistoon ja signaalinsiirtokaskadeihin, mukaan lukien melanogeneesiin liittyvä AKT- ja ERK1/2-aktivaatio; ja (iii) ei aiheuta toksisuutta normaaleissa keratinosyyteissä (HaCaT) ja linssin epiteelisoluissa (B3), kun sen pitoisuus oli alle 5 uM. Kaiken kaikkiaan plumbagiini kumoaa -MSH-indusoidun melaniinin synteesin estämällä tyrosinaasiaktiivisuutta CREB-MITF:n transkriptioakselista riippumatta. Nämä tulokset viittaavat siis lupaavaan ja turvalliseen luonnontuotteeseen plumbagiinin hyperpigmentaation vähentämiseen käyttämällä sitä ihoa valkaisevan kosmetiikan kehittämisessä.

cistanche norge

Kiitokset:Tätä työtä tuki Konkukin yliopisto vuonna 2016.
Tekijän panokset:Ji-Hong Lim suunnitteli ja suunnitteli kokeet; Taek-In Oh, Jeong-Mi Yun, Eun-Ji Park ja Young-Seon Kim suorittivat kokeet; Ji-Hong Lim, Taek-In Oh ja Yoon-Mi Lee analysoivat tiedot; Ji-Hong Lim ja Yoon-Mi Lee kirjoittivat käsikirjoituksen.
Eturistiriidat: Kirjoittajat eivät julista eturistiriitoja.
Lyhenteet
- MSH alfa-melanosyyttejä stimuloiva hormoni
TYR-tyrosinaasi
L-DOPA L-3,4-dihydroksifenyylialaniini
MITF-mikroftalmiaan liittyvä transkriptiotekijä
TYRP1-tyrosinaasiin liittyvä proteiini 1
CREB cAMP -vasteelementtiä sitova proteiini
PKA-proteiinikinaasi A
ERK1/2 solunulkoinen signaalin säätelemä kinaasi 1/2

Viitteet

1. Riley, PA Melanogeneesi ja melanooma. Pigment Cell Res. 2003, 16, 548–552. [CrossRef] [PubMed]

2. Bae, JS; Han, M.; Yao, C.; Chung, JH Chaetosiini estää IBMX:n indusoimaa melanogeneesiä hiiren B16F10 melanoomasoluissa aktivoimalla ERK:ta. Chem. Biol. Ole vuorovaikutuksessa. 2016, 245, 66–71. [CrossRef] [PubMed]

3. D'Mello, SA; Finlay, GJ; Baguley, BC; Askarian-Amiri, ME Signalointireitit melanogeneesissä. Int. J. Mol. Sci. 2016. [CrossRef] [PubMed]

4. Kim, HJ; Yonezawa, T.; Teruya, T.; Woo, JT; Cha, BY Nobiletin, polyetoksiflflavonoidi, vähensi endoteliinin-1 ja SCF:n aiheuttamaa pigmentaatiota ihmisen melanosyyteissä. Photochem. Photobiol. 2015, 91, 379–386. [CrossRef] [PubMed]

5. Kang, SJ; Choi, BR; Lee, EK; Kim, SH; Yi, HY; Park, HR; Song, CH; Lee, YJ; Ku, SK Kuivatun granaattiomenakonsentraatiojauheen estävä vaikutus melanogeneesiin B16F10-melanoomasoluissa; p38- ja PKA-signalointireittien osallistuminen. Int. J. Mol. Sci. 2015, 16, 24219–24242. [CrossRef] [PubMed]

6. Kim, JW; Kim, HI; Kim, JH; Kwon, OC; Son, ES; Lee, CS; Park, YJ Ganodermanondiolin vaikutukset, uusi melanogeneesin estäjä Ganoderma lucidum -sienestä. Int. J. Mol. Sci. 2016, 17, 1798. [CrossRef] [PubMed]

7. Tsao, YT; Huang, YF; Kuo, CY; Lin, YC; Chiang, WC; Wang, WK; Hsu, CW; Lee, CH Hinokitiol estää melanogeneesiä AKT/mTOR-signaloinnin kautta hiiren B16F10 melanoomasoluissa. Int. J. Mol. Sci. 2016, 17, 248. [CrossRef] [PubMed]

8. Padhye, S.; Dandawate, P.; Yusufifi, M.; Ahmad, A.; Sarkar, FH Näkökulmat plumbagiinin ja sen analogien lääkeominaisuuksiin. Med. Res. Rev. 2012, 32, 1131–1158. [CrossRef] [PubMed]

9. Gupta, SC; Kim, JH; Prasad, S.; Aggarwal, BB Kasvainsolujen selviytymisen, proliferaation, invaasion, angiogeneesin ja metastaasien säätely moduloimalla tulehdusreittejä ravintoaineilla. Cancer Metastasis Rev. 2010, 29, 405–434. [CrossRef] [PubMed]

10. Jackson, JK; Higo, T.; Hunter, WL; Burt, HM topoisomeraasin estäjät niveltulehdusta ehkäisevinä aineina. Inflflamm. Res. 2008, 57, 126–134. [CrossRef] [PubMed]

11. Ahmad, A.; Banerjee, S.; Wang, Z.; Kong, D.; Sarkar, FH Plumbagiinin aiheuttama ihmisen rintasyöpäsolujen apoptoosi välittyy NF-κB:n ja Bcl:n -2 inaktivaatiolla. J. Cell. Biochem. 2008, 105, 1461–1471. [CrossRef] [PubMed]

12. Aziz, MH; Dreckschmidt, NE; Verma, AK Plumbagin, lääkekasviperäinen naftokinoni, on uusi hormoniresistentin eturauhassyövän kasvun ja invaasion estäjä. Cancer Res. 2008, 68, 9024–9032. [CrossRef] [PubMed]

13. Thasni, KA; Rakesh, S.; Rojini, G.; Ratheeshkumar, T.; Srinivas, G.; Priya, S. Estrogeeniriippuvainen solusignalointi ja apoptoosi BRCA1-esti BG1-munasarjasyöpäsoluissa vasteena plumbagiinille ja muille kemoterapeuttisille aineille. Ann. Oncol. 2008, 19, 696–705. [CrossRef] [PubMed]

14. Gomathinayagam, R.; Sowmyalakshmi, S.; Mardhatillah, F.; Kumar, R.; Akbarsha, MA; Damodaran, C. Plumbagiinin, luonnollisen yhdisteen, syövän vastainen mekanismi ei-pienisoluisissa keuhkosyöpäsoluissa. Anticancer Res. 2008, 28, 785–792. [PubMed]

15. Wang, CC; Chiang, YM; Sung, SC; Hsu, YL; Chang, JK; Kuo, PL Plumbagin indusoi solusyklin pysähtymisen ja apoptoosin reaktiivisten happilajien/c-Jun N-terminaalisten kinaasireittien kautta ihmisen melanooma A375.S2 -soluissa. Cancer Lett. 2008, 259, 82–98. [CrossRef] [PubMed]

16. Shih, YW; Lee, YC; Wu, PF; Lee, YB; Chiang, TA Plumbagin estää maksasyövän HepG2-solujen invaasiota ja migraatiota vähentämällä matriksin metalloproteinaasin-2 ja urokinaasi-plasminogeeniaktivaattorin tuotantoa. Hepatol. Res. 2009, 39, 998–1009. [CrossRef] [PubMed]

17. Anuf, AR; Ramachandran, R.; Krishnasamy, R.; Gandhi, PS; Periyasamy, S. Plumbago rosean ja sen puhdistetun ainesosan plumbagiinin antiproliferatiiviset vaikutukset SK-MEL 28 -melanoomasolulinjoihin. Pharmacogn. Res. 2014, 6, 312–319.

18. Gowda, R.; Sharma, A.; Robertson, GP Selekoksibin ja plumbagiinin synergistiset estovaikutukset melanoomakasvaimen kasvuun. Cancer Lett. 2017, 385, 243–250. [CrossRef] [PubMed]

19. Li, J.; Shen, Q.; Peng, R.; Chen, R.; Jiang, P.; Li, Y.; Zhang, L.; Lu, J. Plumbagin tehostaa TRAIL-välitteistä apoptoosia kuolemanreseptorin säätelyn avulla ihmisen melanooma A375 -soluissa. J. Huazhong Univ. Sci. Technol. Med. Sci. 2010, 30, 458–463. [CrossRef] [PubMed]

20. Nair, S.; Nair, RR; Srinivas, P.; Srinivas, G.; Pillai, MR Plumbagiinin radioherkistävät vaikutukset kohdunkaulan syöpäsoluissa johtuvat apoptoottisen reitin moduloinnista. Mol. Carcinog. 2008, 47, 22–33. [CrossRef] [PubMed]

21. Prasad, VS; Devi, PU; Rao, BS; Kamath, R. Plumbagiinin radiosensitizing vaikutus hiiren melanoomasoluihin, joita kasvatettiin in vitro. Intialainen J. Exp. Biol. 1996, 34, 857-858. [PubMed]

22. Li, YC; Hän, SM; Hän, ZX; Li, M.; Yang, Y.; Pang, JX; Zhang, X.; Chow, K.; Zhou, Q.; Duan, W.; et ai. Plumbagiini indusoi apoptoottista ja autofagista solukuolemaa estämällä PI3K/Akt/mTOR-reittiä ihmisen ei-pienisoluisissa keuhkosyöpäsoluissa. Cancer Lett. 2014, 344, 239–259. [CrossRef] [PubMed]

23. Checker, R.; Sharma, D.; Sandur, SK; Khanam, S.; Poduval, TB Plumbagiinin tulehdusta ehkäisevät vaikutukset välittyvät NF-KB-aktivaation estymisellä lymfosyyteissä. Int. Immunopharmacol. 2009, 9, 949–958. [CrossRef] [PubMed]

24. Kim, B.; Lee, SH; Choi, KY; Kim, HS N-nikotinoyylityramiini, uusi niasiiniamidijohdannainen, estää melanogeneesiä tukahduttamalla MITF-geenin ilmentymistä. euroa J. Pharmacol. 2015, 764, 1–8. [CrossRef] [PubMed]

25. Lee, HY; Jang, EJ; Bae, SY; Jeon, JE; Park, HJ; Shin, J.; Lee, SK Gauguin D:n, erittäin happipitoisen diterpenoidin, joka on peräisin merisienestä Phorbas sp., anti-melanogeeninen aktiivisuus moduloimalla tyrosinaasin ilmentymistä ja hajoamista. Mar. Drugs 2016, 14, 212. [CrossRef] [PubMed]

26. Winder, AJ; Harris, H. Uusia määrityksiä tyrosiinihydroksylaasi- ja DOPA-oksidaasiaktiivisuuksille tyrosinaasista. euroa J. Biochem. 1991, 198, 317-326. [CrossRef] [PubMed]

Lisätietoja: david.deng@wecistanche.com WhatApp:86 13632399501

Saatat myös pitää