Cistanche Deserticolan kokonaisglykosidien fytokemiallinen seulonta ja estrogeeninen aktiivisuus

Yhteystiedot: Audrey Hu Whatsapp/hp: 0086 13880143964 Sähköposti:audrey.hu@wecistanche.com

Abstrakti

Vuosikymmenten aikana on pyritty jatkuvasti parantamaan ihmisten elämänlaatua. Postmenopausaalinen oireyhtymä on vakava huolenaihe naisten terveyden kannalta. Hormonihoito on tällä hetkellä tämän sairauden hoitomuoto. Tämä hoito voi kuitenkin johtaa estrogeenien väärinkäyttöön, mikä johtaa haittavaikutuksiin ja sivuvaikutuksiin. Tämän seurauksena hormonihoito ei ole onnistunut parantamaan postmenopausaalista oireyhtymää.Cistanche deserticolaon klassinen tonic yrtti perinteisessä kiinalaisessa lääketieteessä. Sillä on merkittävä estrogeeninen aktiivisuus. Tämän yrtin tärkeimmät aktiiviset yhdisteet ovat glykosidit. Edellisessä kokeessa tunnistettiin kolme tärkeää tekijää, jotka vaikuttavat glykosidin kokonaissaantoon, akteosidisaatoon ja estrogeeniseen aktiivisuuteen, nimittäin eluentin pitoisuus, pH ja eluentin tilavuus. Tässä kokeessa määritettiin optimaalinen puhdistusprosessi käyttämällä keskitettyä yhdistelmäsuunnittelu-vaste-menetelmää glykosidien saamiseksi tästä yrtistä. Eluentin (etanolin) konsentraatio 85 prosenttia ja tilavuus 25 BV pH:ssa 11 havaittiin optimaaliseksi. Kaksikymmentäyksi aktiivista yhdistettä tunnistettiin korkean suorituskyvyn nestekromatografialla/kvadrupolilla lentoaikamassaspektrometrialla. Tämä tutkimus tarjoaa arvokkaita näkemyksiä myöhempään syvälliseen tutkimukseen, jossa arvioidaan kokonaisglykosidien estrogeenisiä vaikutuksia.Cistanche deserticola.

Avainsanat: Keskikomposiittisuunnittelu; Cistanche deserticola yhteensä glykosidit; LC/Q-TOF-MS; puhdistus tekniikka; kohdun kasvutesti.

Johdanto

Cistanche deserticolaon syötävä, klassinen tonic yrtti. Se mainittiin ensimmäisen kerran Shen Nongin yrttiklassikossa ja kirjattiin huippuluokkaan. Se on lämmin yrtti ja makea. Sillä on lukuisia lääkinnällisiä ominaisuuksia, kuten maksan ja munuaisten ravitsemus, lihasten ja luiden vahvistaminen, immuunisäätelyn parantaminen sekä ikääntymistä ja kasvaimia ehkäisevä vaikutus [1-4]. Tämän yrtin uutteista on eristetty ja tunnistettu joitakin luonnollisia yhdisteitä, joista tärkeimmät ovat fenyylietanoidiglykosidit, lignanoidit, iridoidit, polysakkaridit ja alkaloidit [5-8].

Lääkekasveista saadut lääkkeet sisältävät erilaisia ​​vaikuttavia yhdisteitä, jotka ovat ensisijaisesti vastuussa terapeuttisista vaikutuksistaan. Eri kasvilähteistä saadun saman lääkkeen teho voi vaihdella sen sisältämien vaikuttavien aineiden tyypin ja määrän erojen vuoksi. Siksi on tärkeää tunnistaa ja määrittää kaikki lääkekasveista saaduissa lääkkeissä olevat aktiiviset yhdisteet. Sama koskee C. deserticolaa. Vastauspintametodologia on kokeellinen menetelmä eri tekijöiden välisen vuorovaikutuksen tutkimiseksi samanaikaisesti [9-10]. Sitä voidaan käyttää fytofarmaseuttisten valmisteiden uuttoparametrien optimointiin ja lääkkeiden vaikuttavien yhdisteiden kvantitatiiviseen arviointiin. Keskikomposiittisuunnittelu (CCD) on yksi kokeellisista suunnitelmista, jotka ovat hyödyllisiä vastepinnan metodologiassa. Ortogonaalisiin ja yhtenäisiin malleihin verrattuna CCD:llä on suurempi tarkkuus ja parempi ennustettavuus [11].

Postmenopausaalinen oireyhtymä voi heikentää merkittävästi naisten elämänlaatua. Normaalisti estrogeenia käytetään tämän tilan hoitoon. Estrogeenin pitkäaikainen käyttö voi kuitenkin johtaa väärinkäyttöön, mikä aiheuttaa erilaisia ​​haittavaikutuksia ja sivuvaikutuksia. Siksi postmenopausaalisen oireyhtymän hoitoon on ehdottomasti valittava vaihtoehtoinen hoito, mieluiten estrogeenia sisältävä kasviperäinen lääkeaine [12-13].

Alustavassa kokeessa C. deserticolasta saatujen erilaisten luonnollisten yhdisteiden rakenteet tunnistettiin massaspektrometrialla (MS) [14]. Vahvistettiin, että glykosidit ovat tärkeimmät aktiiviset yhdisteet, joilla on merkittävä estrogeeninen aktiivisuus [14-15]. Turvallisen ja tehokkaan estrogeenisen vaikuttavan aineen kehittämiseksi uuteen lääkkeeseen tarvitaan TGCD:n perusteellinen tutkimus puhdistuksen jälkeen. Tässä tutkimuksessa CCD:tä käytettiin ensin optimoimaan C. deserticolan (TGCD) kokonaisglykosidien puhdistus. Myöhemmin kohdun kasvutestiä käytettiin arvioimaan saman glykosidin estrogeenisiä aktiivisuuksia. Korkean suorituskyvyn nestekromatografiaa/kvadrupolia lentoaikamassaspektrometriaa (HPLC/Q-TOF-MS) käytettiin TGCD-yhdisteiden kvalitatiiviseen analyysiin puhdistuksen jälkeen. Tätä menetelmää sovellettiin erilaisten aktiivisten yhdisteiden läsnäolon osoittamiseksi, joilla on estrogeenista aktiivisuutta TGCD:ssä. Tämä voi samanaikaisesti tarjota perustan sen kliiniselle käytölle postmenopausaalisessa oireyhtymässä, joka korvaa estrogeenia.

Kokeellinen menettely

Instrumentit

Agilent 1290 HPLC -järjestelmä (Agilent Technologies, Palo Alto, CA, USA), Agilent 6530 -sarjan kvadrupoli lentoajan LC/MS (Q-TOF) -järjestelmä (Agilent Technologies, Palo Alto, CA, USA) ja Chemical HPLC{ {5}}D-työasemia käytettiin kromatografisina välineinä tietojen käsittelyssä. Ultrapuhdasta Milli-Q-vettä käytettiin koko tutkimuksessa. AR1140 elektroninen analyyttinen vaaka (Ohaus International Ltd.); 680 mikrolevylukija (Bio-Rad Corporation); ja 64R nopeaa sentrifugia (Beckman Coulter Allegra) käytettiin näytteen valmistukseen.

Lääkkeet ja kemikaalit

Professori Zhang Delian (Harbin University of Commerce, Kiina) osti C. deserticolan huumemarkkinoilta. Standardi dietyylistilbestroli (99-prosenttinen puhdas, eränro 60518) ostettiin Dr. Ehrenstorferilta (Saksa). Muut standardit akteosidi (111530-200505) ja ekinakosidi (111670-200503) saatiin National Institute for the Control of Pharmaceutical and Biological Products -instituutista, Peking, Kiina. Kunkin standardin puhtaus oli > 98 prosenttia. Asetonitriili (ACN), metanoli ja muurahaishappo (MS-laatu) ostettiin Thermo Scientific Pierceltä (Rockford, IL, USA). Ultrapuhdas vesi saatiin Hangzhou Wahaha Group Co., Ltd.:ltä (Hangzhou, Kiina). Kaikki kaupallisesti saatavilla olevat reagenssit olivat analyyttistä laatua.

C. deserticolan puhdistusliuoksen kokonaisglykosidien valmistaminen

Kun oli upotettu 75-prosenttiseen etanoliin 12 tunniksi, C. deserticolan raakajauhe (100 g) uutettiin 800 ml:lla 75-prosenttista (tilavuus/tilavuus) etanolia 80 asteessa 150 minuutin ajan palautusjäähdyttäen. Sitten se suodatettiin kaksikerroksisen suodattimen läpi ja uutettiin sen jälkeen 800 ml:lla 75-prosenttista etanolia kahdesti vielä 150 minuutin ajan. Sen jälkeen suodokset yhdistettiin ja väkevöitiin tyhjössä 45 °C:ssa. Uute saatiin poistamalla liuotin. Tietty määrä tislattua vettä lisättiin uutteeseen, jotta saatiin konsentraatio 0,5 g/ml, jota käytettiin puhdistusprosessin seulomiseen.

AB{0}} makrohuokoisella hartsilla tapahtuvaa adsorptiota varten testinäyteliuoksen pH säädettiin arvoon 11. Ensin käytettiin 2 BV tislattua vettä epäpuhtauksien pesemiseen. Sitten eluentti konsentraatiolla 25 BV 85 % etanolia eluoitiin ja kerättiin. Lopuksi kerätty puhdistettu eluentti yhdistettiin. Tietty määrä tislattua vettä lisättiin uutteeseen, jotta saatiin konsentraatio 1,5 g/ml, jota käytettiin mahalaukunsisäiseen antamiseen. Positiivista kontrollia varten valmistettiin dietyylistilbestroliliuos (20 ug/ml) dietyylistilbestrolijauheen kanssa.

Puhdistussuhteen ({{0}},6) mukaan tietty määrä uutetta (vastaa 1 g C. deserticolaa) siirrettiin 10 ml:n mittapulloon, liuotettiin 50-prosenttiseen (v/v) metanoliliuokseen ultraäänihauteessa 5 minuutin ajan ja laimennettiin 10 ml:ksi. Lääkeliuos saatiin supernatantin suodattamisen jälkeen 0,45 μm:n suodatinkalvon läpi. Akteosidi ja ekinakosidi (kumpaakin 1 mg) sekoitettiin ja liuotettiin täydellisesti 10 ml:aan 50-prosenttista (tilavuus/tilavuus) metanoliliuosta. Lopuksi standardiliuos suodatettiin 0,45 μm Millipore-suodattimen läpi ennen analyysiä.

LC-MS-olosuhteet

Kromatografinen erotus suoritettiin HPLC-järjestelmässä (Agilent 129{{10}}), joka oli varustettu kvaternaarisella liuottimen syöttöjärjestelmällä, tyhjiökaasunpoistolaitteella ja valodiodirividetektorilla. MS/MS-analyysi suoritettiin instrumentilla Agilent-1290 HPLC/6530 Q-TOF-MS, joka oli varustettu sähkösumutusionisaatiolähteellä sekä positiivisessa että negatiivisessa ionitilassa. Erotukseen käytettiin Waters Symmetry shield RP C18 -kolonnia (4,6 × 250 mm, 5 μm) (Waters Corporation, Milford, MA, USA). Liikkuva faasi käsitti 0,2-prosenttista muurahaishapon vesiliuosta (v/v) (A) ja ACN:ää (B), ja sitä pumpattiin virtausnopeudella 0,5 ml/min. Kunkin näytteen injektiotilavuus oli 10 µl. Gradienttieluointiohjelma oli seuraava: 5–23 prosenttia B:tä 0–35 minuuttia, 23–25 prosenttia B:tä 35–65 minuuttia ja 25–5 prosenttia B:tä 65–70 minuuttia. Kolonnin lämpötila pidettiin 30 asteessa. Kromatogrammeja seurattiin ja ne rekisteröitiin 330 nm:ssä. Sumutuskaasun paine asetettiin arvoon 30 Psi ja kapillaarijännite oli 3,5 kV. Kuivan kaasun virtausnopeus oli 8 l/min 30 asteen lämpötilassa. Vaippakaasun lämpötila asetettiin 400 asteeseen virtausnopeudella 12 l/min. Törmäysenergiaksi asetettiin 10–20 eV matalan energian skannauksissa ja 30–50 eV korkean energian skannauksissa. Massaspektritiedot tallennettiin skannausalueella 50–1000 Da positiivisten ja negatiivisten ionien skannausmoodissa. Tässä tutkimuksessa nopea ja tehokas vertailu TGCD:n ja standardien välillä suoritettiin samoissa LC-MS-olosuhteissa.

Kohdun kasvutesti

Tämä tehtiin tiukasti National Institutes of Healthin koe-eläinten hoito- ja käyttöoppaan suositusten mukaisesti. Harbinin kauppakorkeakoulun eläineettinen komitea tarkasteli ja hyväksyi kaikki kokeelliset menettelyt.

Epäkypsät naaraspuoliset Kunming-hiiret (noin 21 päivää syntymästä, vieroitettuja), jotka painoivat 12 ± 2 g, ostettiin Changchun National Biological Industry Base Laboratory Animal Centeristä (Changchun, Kiina). Hiiret pidettiin lämpötilasäädellyssä huoneessa (22 ± 2 astetta) ruoan ja veden kanssa ad libitum. Eläinkokeet aloitettiin viiden päivän totuttelun jälkeen. Hiiret paastosivat yön yli vedellä ad libitum ennen testiliuoksen antamista mahalaukunsisäisesti.

Hiiret jaettiin satunnaisesti 22 ryhmään, joissa kussakin ryhmässä oli 10 eläintä. Heille annettiin saman tilavuuden kokeellisia lääkkeitä kahdesti päivässä (aamulla ja illalla) neljän päivän ajan seuraavasti:

Ryhmä 1: C. deserticolan puhdistusliuoksen mahansisäiset kokonaisglykosidit (20 ml/kg), (liuoksen tilavuus/hiiren paino),

Ryhmä II: mahalaukunsisäinen tislattu vesi (negatiivinen kontrolliryhmä) ja

Ryhmä III: Intragastrinen dietyylistilbestroli (20 ug/ml) (positiivinen kontrolliryhmä).

Viidentenä päivänä kaikki hiiret tapettiin. Kohdut poistettiin välittömästi ja punnittiin ja kohtukertoimet laskettiin.

Tilastollinen analyysi

Kaksisuuntaista parinäytteen t-testiä käytettiin tunnistamaan tilastollisesti merkitseviä eroja eri parametrien välillä eri koeryhmissä. Analyysi suoritettiin SPSS-tilastoohjelmistolla (SPSS for Windows v21.0, SPSS Inc., USA). Erot katsottiin tilastollisesti merkittäviksi 95 prosentin luottamustasolla (p <>

tulokset ja keskustelu

Akteosidien ja kokonaisglykosidien lineaarisuus ja korrelaatio

Akteosidisaannon lineaarinen regressioyhtälö oli y {{0}}x – 14,75 (jossa x on akteosidin pitoisuus ja y on sitä vastaava piikin pinta-ala) korrelaatiokertoimella r=1 pitoisuusalueella 0,12−{{10}},72 mg/ml. Tämä osoitti lineaarista kalibrointikäyrää. Glykosidien kokonaissaannon lineaarinen regressioyhtälö oli y=26.074x plus 0,0866 (missä x on glykosidien kokonaispitoisuus ja y on sitä vastaava piikin pinta-ala) korrelaatiokertoimella r { {12}}.9982 pitoisuusalueella 0,013–0,065 mg/ml. Tämä osoitti myös lineaarista kalibrointikäyrää.

Metodologinen tutkimus

Metodologisessa tutkimuksessa tutkittiin näytteiden tarkkuutta, toistettavuutta, stabiilisuutta ja talteenottoa. Tarkkuuskokeessa akteosidien suhteellinen standardipoikkeama (RSD) oli 1,43 prosenttia ja kokonaisglykosidien 0.05 prosenttia. Uusittavuuskokeessa akteosidien ja kokonaisglykosidien RSD oli 0,10 prosenttia ja 1,44 prosenttia. 24 tunnin stabiilisuuskokeessa akteosidien ja kokonaisglykosidien RSD oli 0,14 prosenttia ja vastaavasti 0,90 prosenttia. Talteenottokokeessa akteosidin saanto oli 100,50 prosenttia RSD:n ollessa 2,08 prosenttia, kun taas kokonaisglykosidien saanto oli 99,12 prosenttia, kun RSD oli 1,65 prosenttia. Kaikki RSD - arvot olivat alle 3 prosenttia . Nämä tulokset osoittivat hyvää tarkkuutta ja toistettavuutta. Lisäksi näyte oli stabiili 24 tuntia. Myös talteenottotulokset ovat sallitulla alueella (95–105 prosenttia). Siksi tätä menetelmää voidaan käyttää akteosidien ja glykosidien kokonaissaannon määrittämiseen puhdistuksen jälkeen.

TGCD:n yksitekijätutkimus

TGCD:n puhdistukseen makrohuokoisella hartsilla voivat vaikuttaa monet tekijät, kuten hartsityyppi, staattiset adsorptiotekijät (adsorptioaika, vuotopitoisuus ja näyteliuoksen pH) ja eluointiolosuhteet (virtausnopeus, tilavuus ja pitoisuus). Käyttäen adsorptiokapasiteettia ja TGCD:n desorptio- ja eluoitumisnopeuksia indekseina, koeolosuhteet määritettiin yksitekijäkokeiden tulosten perusteella. AB-8-tyypin makrohuokoisella adsorptiohartsilla määritettiin seuraavat optimaaliset olosuhteet: 0,5 mg/ml näyteliuosta, pH 10, staattinen adsorptioaika 8 h, 2 BV tislattu vesi epäpuhtauksien pesuun, 20 BV 80 % etanoli eluenttina ja virtausnopeus 0,5 BV/min. Tarkemmat tulokset on esitetty kuvissa 1-7.

CCD TGCD-puhdistustekniikan optimointiin

Yksitekijätutkimuksen tulosten perusteella indekseiksi valittiin kolme puhdistusmenetelmään merkittävästi vaikuttavaa tekijää, nimittäin näyteliuoksen pH (x1), eluentin pitoisuus (x2) ja eluentin tilavuus (x3). CCD-periaatteen mukaan jokaisella tekijällä on viisi tasoa. Näiden eri tekijöiden enimmäis- ja vähimmäistasot asetettiin alustavan kokeen tulosten mukaan. Tekijätasot on esitetty taulukossa 1 ja kokeelliset tulokset on esitetty taulukossa 2.

Glykosidien ja akteosidien kokonaissaannot määritettiin TGCD:n puhdistusmenetelmän optimoimiseksi. Ensinnäkin glykosidien ja akteosidien kokonaissaannot asetettiin numeeristen toivottavuuden kriteerien (d) mukaisiksi välillä {{0}}-1. Sitten laskettiin yleinen toivottavuus (OD) [OD=(d1, d2, d3,....,dn)1/n, missä n on indeksinumero]. SPSS21.{{10}} -ohjelmistoa ja suunnitteluasiantuntijaohjelmistoa käytettiin useaan lineaariseen regressioon ja binomisovitukseen riippumattomien muuttujien ja OD:n kanssa, p < 0.05="" otettiin="" huomioon.="" yhtälön="" tilastollisesti="" merkitsevä="" standardi.="" parhaiten="" sopivaksi="" malliksi="" valittiin="" yhtälö,="" jolla="" on="" suurempi="" r-arvo="" (multiple="" korrelaatiokerroin).="" monimuuttuja="" lineaarinen="" yhtälö="" esitetään="" muodossa="" y="–" 1.02="" –="" 0.131x1="" plus="" 0.034x2="" plus="" 0,012x3="" (r="" {{="" 25}}.55,="" s="0.004)." binomiyhtälö="" on="" y="–" 21,92173="" –="" 0,74079="" x="" 1="" plus="" 0,62914="" x="" 2="" plus="" 0,041161="" x="" 3="" plus="" 0,014972="" x="" 1="" x="" 2="" plus="" 2,06050*10-4="" x="" 1="" x="" 3="" plus.="" {56}}.78730="" ×="" 10-3x22="" -="" 2.89446="" ×="" 10-3x32="" (r="0.91," p="0.012)." yllä="" olevista="" yhtälöistä="" voidaan="" nähdä,="" että="" monimuuttujan="" lineaarisen="" regressioyhtälön="" korrelaatiokerroin="" on="" pienempi.="" riippumattomien="" ja="" riippuvien="" muuttujien="" välinen="" korrelaatio="" on="" erittäin="" alhainen="" ja="" sen="" käyttöä="" lineaarisessa="" mallissa="" pidettiin="">

Mutta binomiyhtälön korrelaatiokerroin oli korkea ja se johti hyvään sovitukseen. Tästä syystä valittiin binomimalli. Perustuen pintakuvion ja ääriviivakartan kattavaan analyysiin yhdistettynä koetietoihin (OD-arvo lähellä {{0}}.6), saatiin puhdistusmenetelmän optimaalinen alue. Kuvasta 8 voidaan nähdä, että suurin OD-arvo muodostui, kun näyteliuoksen (A) pH oli välillä 9-10 ja eluentin pitoisuus (B) oli välillä 79-85 prosenttia. . Kuvasta 9 näkyy, että suurin OD-arvo saatiin, kun näyteliuoksen (A) pH-arvo oli välillä 9-10 ja eluentin tilavuus (C) oli välillä 20-25 BV. Kuvasta 10 näkyy, että suurin OD-arvo saatiin, kun eluentin pitoisuus (B) oli välillä 80-85 prosenttia ja eluentin tilavuus (C) oli välillä 20-25 BV. Näiden tietojen kattavan analyysin perusteella näyteliuoksen pH:n, eluentin pitoisuuden ja eluentin tilavuuden määritettiin olevan alueella 9–10, 80–85 prosenttia ja 20–25 BV. Muuttuvien johdannaisten tulosten monimuuttujabinomiaaliyhtälön ja optimaalisen kaavion perusteella parhaaksi TGCD-puhdistusmenetelmäksi todettiin eluentin (etanoli) pitoisuus 85 prosenttia ja tilavuus 25 BV pH:ssa 11. Vastaava OD-arvo oli 0,8332. ja glykosidien kokonaissaanto oli 73,0339 prosenttia. Kuvien 8-10 visuaalinen vaikutelma osoittaa, että paras menetelmä on se, jossa näiden kahden tekijän väliset vuorovaikutukset on otettu huomioon, vaikka kaavasta päätelty paras menetelmä tunnistaa sen, jossa näiden kolmen tekijän vuorovaikutus on otettu huomioon. Kaksi tulosta erosivat toisistaan, ja optimaalisena puhdistusmenetelmänä pidettiin eluentin (etanolin) pitoisuutta 85 prosenttia ja tilavuutta 25 BV pH:ssa 11.

Kohdun kasvun mittaus

Kunkin ryhmän kohtukerroin on esitetty taulukossa 3. Verrattuna negatiiviseen kontrolliryhmään muiden ryhmien tulokset olivat merkittävästi erilaisia. Havaittiin, että TGCD, joka oli saatu 20 eri puhdistusmenetelmästä, vaikutti kaikilla estrogeenisillä vaikutuksilla.

Vahvistava kokeilu

CCD:n ja kohdun kasvutestin kattavat tulokset osoittivat, että optimaalisena puhdistusmenetelmänä pidettiin eluentin (etanolin) pitoisuutta 85 prosenttia ja tilavuutta 25 BV pH:ssa 11.

validointiprosessissa glykosidien kokonaissaanto oli 70,9150 prosenttia. Ennusteiden ja toteutuneiden arvojen keskimääräinen poikkeama oli 2,1180 prosenttia. Voidaan siis olettaa, että mallin ennustettavuus ja kokeellinen uskottavuus ovat hyviä.

TGCD:n tunnistaminen puhdistuksen jälkeen

Retentioajan ja MS-tietojen perusteella spekuloitiin 21 luonnollista ainesosaa, mukaan lukien kampneosidi 1, 2'-asetyylilakteosidi, cistanosidi A, cistanosidi B, syringalidi A 3'- - L-ramnopyranosidi, tubulosidi A, tubulosidi B, salidrosidi, Tistanosidi G, teniposidihappo, dekofeoyylilakteosidi, 8-epilogaanihappo, ekinakosidi, cistanosidi F, tistatubulosidi B1, isoakteosidi, akteosidi, cis-akteosidi, kankanosidi E, osmantusidi B ja tistanosidi C. MS- ja MS-retentioaika/, MS-tiedot, kaava ja oletetut yhdisteet on esitetty taulukossa 4.

Q-TOF-MS soveltuu erityisen hyvin lääkeaineiden ja elintarvikkeiden monimutkaisten molekyylikomponenttien rakenteelliseen tunnistamiseen, koska se voi tarjota mahdollisia alkuainekoostumuksia tarkan molekyylimassan ja fragmentti-ionien rakenteellisten ominaisuuksien avulla. Järjestelmällisen rakenteellisen karakterisoinnin luomiseksi käytettiin tunnistamiseen myös Q-TOF-MS-, MS-tietoja, tietokantahakua ja julkaistua viitekirjallisuutta. Kunkin kohdekomponentin molekyylikaava pääteltiin emo-ionista, ja se sovitettiin tunnettujen yhdisteiden kanssa. Tämä kaava voitaisiin määrittää tarkemmin siihen liittyvistä fragmentti-ioneista. Esimerkiksi piikki 5 osoitti vallitsevan deprotonoidun ionin m/z 654:ssä (C30H38O16), joka oli identtinen kampneosidi 1:n alkuainekoostumuksen kanssa. Kofeoyylin hävikki muodostui fragmentti-ionista m/z:ssä 493, ja rha-osa muodostettiin fragmentti-ionista m/z:llä 347.

Johtopäätös

Käyttämällä LC-Q-TOF-MS-tekniikkaa on kehitetty ja täysin validoitu yksinkertainen ja vankka TGCD:n kvalitatiivinen analyysimenetelmä. Validointitiedot TGCD:stä peräisin olevien luonnollisten yhdisteiden seulomiseksi ja tunnistamiseksi olivat tyydyttäviä. Kaksikymmentäyksi bioaktiivista yhdistettä TGCD:stä spekuloitiin seuraavasti: salidrosidi, cistanosidi G, geniposidiinihappo, kofeoyylilakteosidi, kampneosidi 1, 8-epilogaanihappo, 2'-asetyylilakteosidi, kistanosidi A, sistanosidi B, syringalidi A3' }}L-ramnopyranosidi, ekinakosidi, kistanosidi F, cistantubulosidi B1, isoakteosidi, akteosidi, tubulosidi A, cis-akteosidi, kankanosidi E, osmantusidi B, sistanosidi C ja tubulosidi B. Näiden yhdisteiden rakenteellinen karakterisointi voi tarjota kokeellisen perustan niiden laadunvalvonta ja kliininen lisäsovellus niiden estrogeenisen aktiivisuuden vuoksi. Tämä voi tarjota uuden ja parannetun terapeuttisen vaihtoehdon postmenopausaalisen oireyhtymän hoitoon, jolloin vältetään estrogeenihoidon sivuvaikutukset ja haittavaikutukset.

Lyhenteet

TGCDCistanche deserticolakokonaisglykosidit LC/Q-TOF-MS nestekromatografia/kvadrupoli lentoaikamassaspektrometria

RSM-vastepinnan metodologia

Keskitetty CCD-komposiittirakenne

MS-massaspektrometria HPLC/Q-TOF-MS Korkean suorituskyvyn nestekromatografia/kvadrupolin lentoaikamassaspektrometria

ACN asetonitriili

BV sängyn tilavuus

OD yleinen toivottavuus

LC-MS nestekromatografia-massaspektrometria

Q-TOF-MS kvadrupolin lentoajan massaspektrometria

TCM perinteinen kiinalainen lääketiede

RSD suhteellinen standardipoikkeama

Kiitokset

Tätä projektia tukivat Kiinan kansallinen luonnontieteellinen säätiö (nro 81073015), Heilongjiangin maakunnan luonnontieteellinen säätiö (ZD2017014), Heilongjiangin maakunnan korkeakoulun nuorten innovatiivisten kykyjen koulutussuunnitelma (UNPYSCT- 2017209). Kirjoittajat vakuuttavat, että tämän artikkelin julkaisemisessa ei ole eturistiriitaa.

Eturistiriita

Kirjoittajat väittävät, ettei eturistiriitaa ole.

Viitteet

[1] Nan ZD, Zeng KW, Shi SP, Zhao MB, Jiang Y., Tu PF, fenyylietanoidiglykosidit, joilla on anti-inflammatorisia vaikutuksia Tarimin autiomaassa viljellyn Cistanche deserticolan varresta, Fitoterapia, 2013, 89, {{4} }.

[2] Guo Y., Cao L., Zhao Q., Zhang L., Chen J., Liu B., Zhao B., Preliminary characterizations, the antioxidant and hepatoprotective activity of polysakcharid from Cistanche deserticola, International Journal of Biological Macromolecules , 2016, 293, 678-685.

[3] Nan ZD, Zhao MB, Zeng KW, Tian SH, Wang WN, Jiang Y., Tu PF, Tarimin autiomaassa viljellyn Cistanche deserticolan varresta peräisin olevat anti-inflammatoriset iridoidit, Chinese Journal of Natural Medicines, 2016, 14, 61-65.

[4] Peng F., Chen J., Wang X., Xu C., Liu T., Xu R., Muutokset fenyylietanoidiglykosidien tasoissa, antioksidanttiaktiivisuudessa ja muissa laatuominaisuuksissa Cistanche deserticola -viipaleissa höyrykäsittelyllä, kemiallinen ja Pharmaceutical Bulletin (Tokio), 2016, 64, 1024-1030.

[5] Wang T., Zhang X., Xie W., Cistanche deserticola YC Ma, "Desert Ginseng": katsaus, The American Journal of Chinese Medicine, 2012, 40, 1123-1141.

[6] Song Y., Song Q., Li J., Zhang N., Zhao Y., Liu X., Jiang Y., Tu P., Integroitu strategia kamomillan kvantitatiiviseen erottamiseenCistanche deserticolaja C. tubulosa käyttäen korkean suorituskyvyn nestekromatografia-hybridikolmoiskvadrupoli lineaarista ioniloukkumassaspektrometriaa, Journal of Chromatography A, 2016, 1429, 238-247.

[7] Li Y., Peng Y., Wang M., Zhou G., Zhang Y., Li X., Nopea seulonta ja aineenvaihduntatuotteiden välisten erojen tunnistaminenCistanche deserticolaja C. tubulosa vesiuute rotilla UPLC-Q-TOF-MS yhdistetyllä muodontunnistusanalyysillä, Journal of Pharmaceutical and Biomedical Analysis, 2016, 131, 364-372.

[8] Li WL, Sun XM, Song H., Ding JX, Bai J., Chen Q., HPLC/Q-TOF-MS-pohjainen imeytyneiden aineosien ja niiden aineenvaihduntatuotteiden tunnistaminen rotan seerumissa ja virtsassa Cistanchen oraalisen annon jälkeen deserticola Extract, Journal of Food Science, 2015, 80, H2079-2087.

[9] Almasi A., Dargahi A., Mohamadi M., Biglari H., Amirian F., Raei M., Removal of Penicillin G by the Combination of sonolysis and Photocatalytic (sono-phototcatalytic) process from aqueous solution: Process Optimization käyttäen RSM:ää (Response Surface Methodology), Electron Physician, 2016, 8,

[10] 2878-2887. Hou W., Zhang W., Chen G., Luo Y., Uuttoolosuhteiden optimointi maksimaaliselle fenoli-, flavonoidi- ja antioksidanttiaktiivisuudelle melaleuca-sarvelehtiaineistosta Leaves Using the Response Surface Methodology, PloS One, 2016, 11,

[11] e0162139. Pooralhossini J., Ghaedi M., Zanjanchi MA, Asfaram A., Ultraääniavusteisen uuton valinta yhdistettynä spektrofotometriseen gallushapon nopeaan määritykseen vesinäytteistä: Keskikomposiittisuunnittelu prosessimuuttujien optimointiin, Ultrasonics Sonochemistry, 2017, 34 , 692- 699.

[12] Han L., Boakye-Yiadom M., Liu E., Zhang Y., Li W., Song X., Fu F., Gao X., Fenyylietanoidiglykosidien rakenteellinen karakterisointi ja tunnistaminenCistanches deserticola YC MaUHPLC/ESI-QTOF-MS/MS, Phytochemical Analysis, 2012, 23, 668-676.

[13] Lu D., Zhang J., Yang Z., Liu H., Li S., Wu B., Ma Z., Cistanches Herban kvantitatiivinen analyysi käyttämällä korkean suorituskyvyn nestekromatografiaa yhdistettynä diodirivitunnistukseen ja korkeaan erotuskykyinen massaspektrometria yhdistettynä kemometrisiin menetelmiin. Journal of Separation Science, 2013, 36, 1945-1952.

[14] Li WL, Chen Q., Yang B., Gao S., Zhang JJ, fytoestrogeenisten tehokkaiden uutteiden ja annosten seulontaCistanche deserticola, Chinese Herbal Medicines, 2013, 5, 292-296.

[15] Li YP, Huang FR, Dong J., Xiao C., Xian RY, Ma ZG, Zhao J., Rapid Identification of Cistanche via fluorescence Spectrum Imaging Technology Combined with Principal Components Analysis and Fisher Distinction, Guang Pu Xue Yu Guang Pu Fen Xi, 2015, 35, 689-694.