4. Tilastolliset analyysit

Kuvailevat tilastot tehtiin kaikille muuttujille ja ilmaistiin keskihajonnan kanssa. Seerumin ja siemennesteen sLHCGR:n ja tulosmuuttujien (hormonit, murrosiän alkaminen, kivesten koko, ikä ja BMI) välinen suhde määritettiin käyttämällä regressioanalyysiä. Numeeristen muuttujien Gaussin jakauma arvioitiin jäännöspp-kaavioilla regressiomallien validiteetin varmistamiseksi. Tämän seurauksena seerumin ja virtsan sLHCGR:ää käytettiin riippuvaisena muuttujana kaikissa kohorteissa, sLHCGR:ää nuorten terveiden miesten siemennesteessä käytettiin riippuvaisena muuttujana ja sLHCGR siemennesteessä/seerumissa log-muunnettiin riippuvaisena muuttujana yhdistetty analyysi. Havaitsemisrajan alapuolella olevat hormonien ja sLHCGR:n mittaukset asetettiin puoleen tunnistusrajasta. Suuressa kohortissa sLHCGR jaettiin edelleen kvartiileihin ja Kruskal-Wallis suoritettiin käyttämällä Dunn-Bonferroni post hoc -testiä useiden vertailujen mukauttamiseksi. Murrosiän pitkittäiset mittaukset, kliinisten interventioiden tulokset ja sLHCGR:n vertailut saman miehen eri kehon nesteissä analysoitiin Wilcoxonin paritestillä. Kun suoritettiin useita paritestejä, useiden testien merkitsevyystasot korjattiin Bonferroni-menetelmällä. Seuraavat suhteet laskettiin ja analysoitiin riippumattomissa regressiomalleissa: inhibiini B/FSH, testosteroni/LH ja testosteroni/estradioli. Kaikilla esimurrosikäisillä pojilla testosteronin ja estradiolin analyysit (mukaan lukien suhteet) jätettiin huomiotta, koska kaikki mittaukset kahta lukuun ottamatta olivat havaitsemisrajan alapuolella. Kaikissa analyyseissä p <0,05 pidettiin tilastollisesti merkitsevänä erona. Kaikki esitetyt siemennesteen laatuanalyysit mukautettiin siemensyöksyn pidättymisen kestoon.

Napsauta tätä saadaksesi tietääCistanchen hyödyt munuaisille

Tulokset

1. Useita LHCGR:n isoformeja ilmentyy kiveksissä ja havaitaan seerumissa

Lisääntymiskudoksissa tunnistettiin useita LHCGR:n isoformeja käyttämällä eksonien 2-4 alukkeita. Ihmisen kivesnäytteistä ja munasarjojen RNA:sta havaittiin kaksi vahvaa noin 100 ja 200 emäsparin vyöhykettä, jotka varmistettiin LHCGR:ksi suoralla sekvensoinnilla. eksoni 11 ilmentyi myös kiveksessä ja munasarjassa. LHCGR havaittiin ihmisen kiveskudoksesta ja kahdesta seeruminäytteestä; korkean sLHCGR:n miesten seeruminäytteet ja alhaisen sLHCGR:n omaavat miesten seeruminäytteet ELISA-menetelmällä käyttäen Western blot -tekniikkaa (WB) OASG04237:n vastaisilla vasta-aineilla. näytteet Seeruminäytteessä vallitsi pyöreä vyöhyke, jonka koko oli noin 75 kDa. Kaksi 50 ja 75 kDa:n vyöhykettä havaittiin myös käyttämällä LHR029-vasta-ainetta, joka oli sitoutunut LHCGR:n solunulkoiseen osaan, vaikka intensiteetti oli alhaisempi molemmissa seeruminäytteissä verrattuna kivekseen, ja seeruminäytteistä havaittiin jälleen 75 kDa:n vyöhyke. SC-26341-vasta-aine havaitsi tuntemattoman osan LHCGR:n solunulkoisesta rakenteellisesta domeenista, joka osoitti kaikissa näytteissä noin 50 ja 75 kDa:n vyöhykkeitä, ja 75 kDa:n vyöhyke oli paljon vahvempi kiveksissä kuin seeruminäytteissä. Huomionarvoista on, että seerumin kontrolli -2-mikroglobuliinitasot olivat huomattavasti odotettua alhaisemmat verrattuna kiveskudokseen, mikä vaikeuttaa LHCGR-tasojen kvantitatiivista käyttöä ja vertailua kudoksessa ja seerumissa. Tutkimus osoittaa liuskojen ja leikkaamattomien blottien densitometriset lukemat. Aikuisen miehen kiveskudoksen immunohistokemia, jolla oli in situ sukusolukasvaimet ja lievä Leydig-solujen liikakasvu, käyttäen samaa vasta-ainetta (LHR029) kuin ELISA-määritys, osoitti LHCGR:n kalvositoutumisen ja lievän sytoplasmisen ilmentymisen useimmissa Leydig-soluissa.

2. sLHCGR on havaittavissa kehon nesteistä, mutta ei havaittavissa Xenograft-hiirten seerumista

SLHCGR:ää ei havaittu karvattomien hiirten seerumeissa, joissa oli tai ei ollut TCam{0}}-ksenograft-kasvaimia ja joita oli käsitelty in vivo vektorilla, LH:lla tai hCG:llä.

Viljelty TCam{0}}-soluelatusaine osoitti kuitenkin alhaisia, mutta havaittavissa olevia sLHCGR-tasoja, ja näiden kahden yhdistelmä osoitti, että ihmisen ELISA ei ristireagoinut minkään seerumin hiiren proteiinin kanssa. sLHCGR:ää ei myöskään havaittu käsittelemättömässä elatusaineessa, joka sisälsi naudan sikiön seerumia.

sLHCGR havaittiin terveiden ja hypogonadaalisten miesten virtsasta vertailukelpoisina tasoina (keskiarvo {{0}}.024 pmol/ml vs. {{20}}.{{ 28}}21 pmol/ml). Virtsatasot olivat keskimäärin noin 100 kertaa alhaisemmat kuin seerumi (keskiarvo 2,21 pmol/ml, hypogonadismi keskimäärin 1,80 pmol/ml), mikä viittaa siihen, että eliminaatio munuaisten kautta ei liity hypogonadismiin eivätkä yli 10 vuoden ikäerot vaikuta siihen. Lisäksi virtsan alhainen pitoisuus viittaa siihen, että sLHCGR, kuten muutkin proteiinit, ei suodatu tai erity munuaisten uudelleenabsorptiokapasiteetin ylittävinä määrinä. Erityisesti sLHCGR:n keskimääräinen seerumipitoisuus kahdeksalla miehellä, joilta molemmat kivekset oli poistettu, oli verrattavissa nuorten miesten (keskiarvo 2,04 pmol/ml vs. 2,21 pmol/ml) ja hypogonadaalisten miesten (keskiarvo 2,04 pmol/ml vs. keskiarvo) pitoisuuteen. 1,80 pmol/ml). Lisäksi sLHCGR-tasot havaittiin sekä ihmisen sikiön lisämunuaiskudoksista että ihmisen sikiön munuaiskudoksista (keskiarvo 0,15 pmol/ml ja 0,14 pmol/ml) (kuva 1E), jotka olivat korkeampia kuin TCam:sta vapautuneet sLHCGR-tasot{{23} } soluja in vitro (keskiarvo 0,03 pmol/ml). Kokonais-sLHCGR mitattiin kolmen miehen ja kolmen postmenopausaalisen naisen seerumista maksan, munuaisten ja alaraajojen valtimo- ja laskimovaiheista. Kaikissa näytteissä yhdellä miehellä ja kahdella naisella oli toteamisrajan yläpuolella, kun taas muilla ei havaittu. Emme havainneet merkittävää eroa sLHCGR:ssä valtimon puolelta laskimopuolelle missään elimessä, ja siksi jätimme nämä elimet pois alkuperäpaikoista (t-testi: p-arvo kaikki > 0,31)

Cistanche-uute

3. LC-MS/MS ihmisen seerumissa

Normaalien miesten (n:2), kivesten sukusolusyöpäpotilaiden (1 seminoma, 1 nonseminoma) ja raskaana olevien naisten (n:2) seerumeita käytettiin proteiinigeelielektroforeesiin albumiinin ja globuliinin ehtymisen jälkeen. Neljä 75, 60, 50 ja 35 kDa:n vyöhykettä uutettiin raskausseerumeista ja analysoitiin matalan herkkyyden LC-MS/MS:llä, koska signaali oli voimakkain tässä. mikään LC-MS/MS ei havainnut LHCGR:n tryptisiä peptidejä. IgG:n ja albumiinin poistamisen jälkeen eniten proteiinia sisältävät peptidit olivat albumiini, komplementti C3, -1-antitrypsiini ja D-vitamiinia sitova proteiini, ja kaikki havaitut proteiinit olivat plasmaproteiineja.

4. Seerumin sLHCGR. Päivittäinen vaihtelu, vakaus, uusittavuus, jäätyminen ja sulatus

Käytimme kolmea eri LHCGR-sarjan erää NBCL ELISA -määrityksestä, joiden CV-arvot olivat 16 ja 19 prosenttia ja pitoisuudet 0,4 ja 1,7 pmol/ml, vastaavasti. vuodenajan tai vuorokaudenajan verinäytteenotto ei vaikuttanut sLHCGR-tasoihin (joko siemennesteen tai seerumin tasoihin). 18 aikuista Klinefelterin oireyhtymää Miespotilaita, joilla oli sLHCGR, mitattiin jatkuvasti 4-40 kuukauden ajan, ja yksilöiden välinen vaihtelu oli vähäistä. sLHCGR-tasot olivat vakaat kaikilla paitsi kahdella miehellä. Lisäksi 16-30 kuukauden mittaiset sarjamittaukset 23 miehellä, joilta poistettiin kivekset, osoittivat, että seerumin sLHCGR-tasot olivat merkitsevästi kohonneet vain yhdellä miehellä tänä aikana, kun taas seerumin sLHCGR-tasoissa ei ollut yleistä eroa muilla 22 miehellä. miehet. Useat jäädytys-sulatukset alensivat sLHCGR-pitoisuuksia ~40 prosenttia.

5. Seerumin ja virtsan LHCGR:iin vaikuttaa hoito ihmisen koriongonadotropiinilla

5000 IU hCG:n injektio vähensi seerumin sLHCGR-arvoa 8 tunnin kuluttua (Wilcoxonin paritesti p=0.031), ja lasku vahvistui entisestään 24 tunnin kuluttua (Wilcoxonin paritesti p=0 0,016, Bonferroni korjattu, p <0,025). Vain kaksi miestä, joilla oli korkeimmat lähtötason sLHCGR-arvot, havaittiin seerumissa 24 tuntia injektion jälkeen. HCG:n nopea vaikutus verenkierron sLHCGR-tasoihin näkyi myös virtsassa, jossa virtsan sLHCGR-tasot putosivat alle havaintorajan kaikilla miehillä 24 tunnin kuluttua (Wilcoxonin paritesti p=0.0078). Perustason seerumin sLHCGR ennen hCG-injektiota ei korreloi virtsan sLHCGR-, seerumin testosteroni- tai seerumin LH-tasojen kanssa tai seerumin testosteronin δ- tai δ seerumin LH-tasojen kanssa. Virtsan sLHCGR ei korreloi iän tai seerumin lisääntymishormonien kanssa. hCG indusoi seerumin testosteronin nousun arvosta 19,6 nmol/L (3,3 SD) arvoon 28,2 nmol/l (4,4 SD) 24 tunnin kuluttua (Wilcoxonin paritesti: p= 0,001) ja arvoon 43,9 nmol/l (8,6). SD) 72 tunnin kuluttua, kun taas 24 LH laski merkittävästi 24 tunnin jälkeen (Wilcoxonin paritesti: p= 0.43 8 tunnin kohdalla, p= 0.001 24 tunnin kohdalla, p= 0). 001 klo 72).

Standardoitu Cistanche

6. Lasten pitkittäismittaukset osoittavat sLHCGR:n laskun murrosiän aikana vain terveillä pojilla

Sen määrittämiseksi, kuinka lisääntyneen gonadotropiinin erityksen murrosiän jaksot vaikuttavat sLHCGR:ään, 36 normaalia poikaa seurattiin pituussuunnassa ja murrosiän jaksot arvioitiin Tanner-vaiheen avulla.

Yksittäiset puberteetin jälkeiset sLHCGR-tasot olivat merkittävästi alhaisemmat kuin ennen murrosikää (pre-pubertaali vs. post-pubertaali Wilcoxon-paritesti: keskiarvo (1,36 (2,2 SD) pmol/ml vs. 0.6{{10}) } (0,89 SD) pmol/ml p=0,0001). Tämä tukee sitä, että sLHCGR voi laskea seerumin gonadotropiinien lisääntyessä, mutta lisääntymishormonitasot, BMI, ikä tai kivesten koko eivät liittyneet sLHCGR:ään missään vaiheessa Murrosiän aikana emme siis löytäneet yhteyttä sLHCGR:n ja virtsan LH:n tai FSH:n välillä murrosiän aikaan.Vertailuna 7 KS-poikaa seurattiin pitkittäissuunnassa ilman testosteronin aiheuttamaa murrosikää.

KS-ryhmän pojilla ei esiintynyt samanlaista sLHCGR:n laskua murrosiän aikana kuin pojilla, joilla ei ollut kromosomipoikkeavuuksia. Kaikki KS-pojat (yksi lukuun ottamatta) kokivat sLHCGR-huippupitoisuudet murrosiän alkaessa, mutta ne eivät saavuttaneet tilastollista merkitsevyyttä. Klinefelter-poikien gonadotropiinien määrä lisääntyi, mutta tuntemattomista syistä he eivät kokeneet samaa sLHCGR:n laskua, mikä viittaa siihen, että korkea sLHCGR saattaa liittyä sukurauhasten toiminnan heikkenemiseen. Seerumin sLHCGR-tasot olivat hieman alhaisemmat nuorilla KS-miehillä verrattuna nuoriin terveisiin miehiin (0,92 pmol/ml vs. 2,21 pmol/ml, p=0.031, taulukot 1 ja 3). Neljä KS-miestä, joilla oli korkeimmat seerumin sLHCGR-tasot, eivät eronneet fenotyyppisesti muista KS-miehistä.

7. Seerumin sLHCGR liittyy terveillä miehillä sukurauhasmarkkerin inhibiini/FSH-suhteeseen ja estradioliin

Yleisen väestön 148 miehen perusominaisuudet. Seerumin sLHCGR korreloi negatiivisesti sukurauhasen merkkiaineen inhibiini B/FSH -suhteen kanssa (-0.004, p=0.027, ja kahden äärioikean poikkeaman poisto ei muuttanut korrelaatiota : -0.003, s=0.018). Myöhemmässä slicer-kvartiilin kerrostumisessa havaittiin merkittävä laskeva suuntaus: alimman sLHCGR-kvartiilin miehillä oli huomattavasti suurempi inhibiini B/FSH:n suhde kuin miehillä korkeimmassa sLHCGR-kvartiilissa useiden vertailujen oikaisun jälkeen. Seerumin sLHCGR ei kuitenkaan liittynyt minkään muun hormonin tai siemennesteen laatuun, ikään, BMI:hen tai kivesten kokoon. Vertailun vuoksi 297 hedelmättömälle miehelle, joilla ei ollut vakavia liitännäissairauksia, tehtiin poikkileikkaustutkimus, ja heidän seerumin sLHCGR-arvo oli keskimäärin 1,05 pmol/ml (SD 3,15), ja 117:llä 297 miehestä oli jopa havaitsemattomia sLHCGR-tasoja. Tässä kohortissa emme löytäneet yhteyttä sLHCGR:n ja inhibiini B/FSH -suhteen (-0.0010, p=0.28) tai minkään mitatun hormonin, kivesten koon, BMI:n tai iän välillä. Inhibiini B/FSH -suhteessa ei ollut eroa, kun miehet jaettiin sLHCGR-kvartiileihin (Kruskal-Wallis p=0.56). Yhdistimme käytetystä kohortista kaikki miehet, joilla on normaalit sukupuolikromosomit ja jotka ovat alkaneet murrosiässä. Tämä lisäsi saatavilla olevien seerumin sLHCGR-tapausten kokonaismäärää (n=488), mikä lisäsi ikäjakaumaa (11.7-58,0 vuotta) ja BMI-aluetta (16.3-56,3 vuotta). ). Seerumin sLHCGR korreloi negatiivisesti estradiolin (-0.009, p=0.020), iän (-0.060, p=2.11 × 10-7) kanssa. ), ja BMI (-0.072, p=0.004), mutta ei muiden hormonien kanssa erikseen. Sama negatiivinen korrelaatio havaittiin inhibiini B/FSH -suhteelle (-0,003,p=0,045), kun analysoitiin vain terveitä miehiä kaikista yllä olevista kohortteista.

Cistanche-lisäosa

Johtopäätökset

Yhteenvetona tämä tutkimus osoittaa, että sLHCGR vapautuu seerumiin ja joihinkin kehon nesteisiin. Seerumin sLHCGR-tasot liittyvät murrosiän kehitykseen ja sukurauhasten toimintaan, ja korkeat seerumin hCG-tasot estävät niitä tilapäisesti. Seerumin sLHCGR:llä voi olla prognostista arvoa sukurauhasten toiminnan merkkiaineena. sLHCGR vapautuu seerumiin kivesten ja muiden elinten kautta, mikä voi viitata LH:n tai hCG:n ekstragonadaaliseen rooliin pojilla ja miehillä.

Cistancheon erinomainen lisä niille, jotka kärsivät munuaissairaudesta tai haluavat parantaa munuaisten terveyttä. Sen kyky parantaa munuaisten toimintaa, suojata oksidatiiviselta stressiltä, ​​vähentää tulehdusta ja lievästi diureettinen vaikutus tekee siitä arvokkaan työkalun munuaisiin liittyvien sairauksien torjunnassa. Kuten minkä tahansa lisäravinteen kohdalla, on tärkeää neuvotella terveydenhuollon ammattilaisen kanssa ennen kuin aloitat Cistanchen käytön.

VIITTEET

1. Bukovsky, A.; Indrapichate, K.; Fujiwara, H.; Cekanova, M.; Ayala, ME; Dominguez, R.; Caudle, MR; Wimalsena, J.; Vanhin, RF;Copas, P.; et ai. Useita luteinisoivan hormonin reseptoreiden (LHR) proteiinivariantteja, anti-LHR-mAb-kloonin 3B5 lajien välinen reaktiivisuus, LHR:n solunsisäinen sijainti ihmisen istukassa, lantionpohjassa ja aivoissa sekä LHR:n mahdollinen rooli epänormaalin raskauden kehittymisessä.Reprod. Biol. Endokrinol.2003, 1, 46.

2. Bozon, V.; Couture, L.; Pajot-Augy, E.; Richard, F.; Remy, J.-J.; Salesse, R. Solunsisäisesti loukkuun jääneen lutropiinireseptorin eksodomeenin pelastaminen endodomeenin avulla ja toiminnallisen kalvoreseptorin palauttaminen: Ekso- ja endodomeenien välinen vuorovaikutus. Protein Expr. Purif.2002, 25, 114–123.

3. Funaro, A.; Sapino, A.; Ferranti, B.; Horenstein, AL; Castellano, I.; Bagni, B.; Garotta, G.; Malavasi, F. Koriongonadotropiinireseptorin toiminnallinen, rakenteellinen ja jakautumisanalyysi käyttämällä hiiren monoklonaalisia vasta-aineita.J. Clin. Endokrinol. Metab.2003, 88, 5537–5546.

4. Rivero-Müller, A.; Chou, Y.-Y.; Ji, I.; Lajic, S.; Hanyaloglu, AC; Jonas, K.; Rahman, N.; Ji, TH; Huhtaniemi, I. Viallisen G-proteiinikytketyn reseptorin toiminnan pelastusin vivomolekyylien välisellä yhteistyöllä.Proc. Natl. Acad. Sci. USA2010, 107, 2319–2324.

5. Dickinson, RE; Stewart, AJ; Myers, M.; Millar, RP; Duncan, WC Luteinisoivan hormonin reseptorin silmukointivarianttien differentiaalinen ilmentyminen ja toiminnallinen karakterisointi ihmisen luteaalisoluissa: Vaikutukset luteolyysiin.Endokrinologia2009, 150, 2873–2881.

6. Yamashita, S.; Nakamura, K.; Omori, Y.; Tsunekawa, K.; Murakami, M.; Minegishi, T. Ihmisen follitropiinireseptorin (FSH) yhdistäminen ihmisen lutropiini/koriogonadotropiinireseptorin silmukointivariantin kanssa säätelee negatiivisesti ihmisen FSH-reseptorin ilmentymistä.Mol. Endokrinol.2005, 19, 2099–2111.

7. Korol, P.; Jaranowska, M.; Pawlikowski, M. LH/CG-reseptorien immunohistokemiallinen osoitus ei-neoplastisessa ihmisen lisämunuaiskuoressa ja lisämunuaiskuoren kasvaimissa.Folia Histochem. Cytobiol.2019, 57, 23–27.

8. Dunkel, L.; Raivio, T.; Laine, J.; Holmberg, C. Verenkierron luteinisoivan hormonin reseptorin estäjä(t) pojilla, joilla on krooninen munuaisten vajaatoiminta.Kidney Int.1997, 51, 777–784.

9. Rao, CV; Lei, ZM Ei-gonadaalisen LH/hCG-toiminnan menneisyys, nykyisyys ja tulevaisuus lisääntymisbiologiassa ja lääketieteessä.Mol. Cell. Endokrinol.2007, 269, 2–8.

10. Abdallah, MA; Lei, ZM; Li, X.; Greenwold, N.; Nakajima, ST; Jauniaux, E.; Rao, CV Ihmisen sikiön ei-gonadaaliset kudokset sisältävät ihmisen koriongonadotropiini/luteinisoivan hormonin reseptoreita.J. Clin. Endokrinol. Metab.2004, 89, 952–956.

Li Juel Mortensen¹, Mette Lorenzen¹, Anne Jørgensen², Jakob Albrethsen², Niels Jørgensen²,Søren Møller^3,4, Anna-Maria Andersson², Anders Juul^2,4ja Martin Blomberg Jensen^1,5

1. Ryhmä luuston, mineraalien ja sukupuolirauhasten endokrinologiaa, yliopiston kasvun ja lisääntymisen laitos, Rigshospitalet, 2100 Kööpenhamina, Tanska; li.juel.mortensen@regionh.dk (LJM); mette.lorenzen.01@regionh.dk (ML)

2. Kasvun ja lisääntymisen laitos ja Kansainvälinen tutkimus- ja tutkimuskoulutuskeskus miesten lisääntymisen ja lasten terveyden endokriinisten häiriöiden alalla (EDMaRC), Rigshospitalet, Kööpenhaminan yliopisto, Blegdamsvej 9, 2100 Kööpenhamina, Tanska; Anne.Joergensen.02@regionh.dk (AJ); Jakob.Christian.Albrethsen@regionh.dk (JA); Niels.Joergensen@regionh.dk (NJ); Anna-Maria.Andersson@regionh.dk (A.-MA); Anders.Juul@regionh.dk (AJ)

3. Funktionaalisen ja diagnostisen kuvantamisen ja tutkimuksen keskus, Kliinisen fysiologian ja isotooppilääketieteen laitos 260, Hvidovre Hospital, 2650 Kööpenhamina, Tanska; Soeren.Moeller@regionh.dk

4. Kliinisen lääketieteen laitos, Terveystieteellinen tiedekunta, Kööpenhaminan yliopisto, 2200 Kööpenhamina, Tanska

5. Division of Bone and Mineral Research, Harvard School of Dental Medicine/Harvard Medical School, Boston, MA 02115, USA