Osa yksi DsbA-L on vuorovaikutuksessa VDAC1:n kanssa mitokondriovälitteisessä tubulussolujen apoptoosissa ja edistää akuutin munuaissairauden etenemistä

Yhteenveto

1. Tausta

osoitimme, että disulfidisidos A oksidoreduktaasin kaltainen proteiini (DsbA-L) osallistui munuaisfibroosin etenemiseen. DsbA-L:n tarkkaa toimintaa akuutissa munuaisvauriossa (AKI) ja siihen liittyviä mekanismeja ei kuitenkaan ole vielä selvitetty.

2. Menetelmät

Havainnollistamme DsbA-L:n vuorovaikutuksessa VDAC1:n kanssa co-IP:llä (co-immunoprecipitation) in vitro ja Viv:llä ja löysimme niiden vuorovaikutusosat mutaatiokokeella. Yllä olevat havainnot varmistettiin niiden rinnakkaislokalisoinnilla. Lisäksi rakensimme kaksi mallia PT-DsbA-L- ja VDAC1 KO -hiiristä varmistaaksemme DsbAL:n ja VDAC1:n toiminnan VAN-, CL-, P- ja I/R-indusoiduissa AKI-malleissa.

3. Havainnot

PT-DsbA-L-KO-hiiret osoittivat I/R-, VAN- ja CLP-indusoidun AKI:n etenemisen paranemista VDAC1:n alasäätelyn kautta. Lopuksi vahvistimme nämä muutokset signaalimolekyyleissä tutkimalla HK-2-soluja ja munuaisbiopsioita, jotka oli otettu potilailta, joilla oli iskeeminen tai akuutti interstitiaalinen nefriitti (AIN) aiheuttama AKI. Mekaanisesti DsbA-L oli vuorovaikutuksessa VDAC1:n aminohappojen 9-13 ja 22-27 kanssa BUMPT-solujen mitokondrioissa indusoiden munuaissolujen apoptoosia ja mitokondriovaurioita.

4. Tulkinta

Tämä työ ehdotti, että DsbA-L, joka sijaitsee proksimaalisissa tubulussoluissa, ohjaa AKI:n etenemistä säätelemällä suoraan VDAC1:n tasoja. Running Title: The Role of DsbA-L in AKI.

5. Rahoitus

Kiinan kansallinen luonnontieteellinen säätiö, apuraha Hunanin maakunnan tiede- ja teknologiainnovaatioiden avainprojektilta, Hunanin maakunnan tiede- ja teknologiaosastolta, kansainvälisen yhteistyön ja vaihdon projektilta, Changshan tiede- ja teknologiatoimistoprojektilta, Hunanin maakunnan luonnontieteellinen säätiö, Fundamental Tutkimusrahastot Keski-Eteläyliopiston keskusyliopistoille, Hunanin maakunnan innovaatiosäätiö jatkotutkinnon suorittaneelle Kiinalle Hunanin maakunnan tiede- ja teknologiaosastolle.

Avainsanat

DsbA-L; VDAC_I; Bax; Cyt-c; AKI

Napsauta tästä saadaksesi Cistanche-edut ja ostaaksesi Cistanche-pillereitä

Johdanto

Akuutti munuaisvaurio (AKI), tuhoisa kliininen komplikaatio, johon liittyy korkea sairastuvuus ja kuolleisuus, vaikuttaa miljooniin potilaisiin kaikkialla maailmassa(1). AKI:n indusoi yleensä sepsis, nefrotoksiset aineet ja iskemia-reperfuusiovaurio (IRI) (2). Toistaiseksi AKI:n taustalla olevia molekyylimekanismeja ei ole vielä täysin selvitetty. Näin ollen AKI:lle ei ole saatavilla tehokkaita hoitostrategioita.

Tubulussoluvaurio on tunnustettu jo vuosikymmeniä tärkeäksi AKI:n tekijäksi.3 Tutkimuksen edetessä yhä useammat tutkijat ovat havainneet, että mitokondriovaurioilla on keskeinen rooli tubulussoluvauriossa ja että tämä alkuperäinen vaurio johtuu solujen kertymisestä ROS, sytokiinien tuotanto ja solukuolema (mukaan lukien sekä nekroosi että apoptoosi); Kaikki nämä prosessit yhdessä edistävät AKI:ta.4-6 Vaikka kasvava määrä tutkimusta on keskittynyt AKI:n mitokondriovaurioiden taustalla oleviin mekanismeihin,7- 12 mitokondrioiden vaurioita aiheuttavaa tarkkaa mekanismia ei ole vielä tunnistettu.

Disulfidisidos A oksidoreduktaasin kaltainen proteiini (DsbAL) tunnistettiin ensin mitokondrioproteiiniksi rotan maksasoluissa.13 Aiemmat tutkimukset ovat osoittaneet, että DsbA-L esti ruokavalion tai diabeettisen nefropatian (DN) aiheuttaman liikalihavuuden, tulehduksen, insuliiniresistenssin tai munuaisvaurio.{5}} Mielenkiintoista on, että äskettäinen tutkimuksemme havaitsi, että DsbA-L-välitteinen yksipuolinen virtsanjohtimen tukos (UUO) aiheuttaa munuaisfibroosia. Putkimaisen DsbA-L:n rooli ja mekanismi AKI:ssa ovat kuitenkin edelleen täysin tuntemattomia.

Tässä tutkimuksessa DsbA-L:n (PT-DsbA-L-KO) proksimaalinen tubulaarinen deleetio hiirimallissa johti I/R:n huomattavaan heikkenemiseen sekä vankomysiinin (VAN) ja umpisuolen ligaatioon ja pistokseen (CLP). )-indusoitu AKI. Johdonmukaisesti DsbA-L välitti myös I/R-, VAN- ja LPS-indusoitua apoptoosia hiiren munuaisten proksimaalisissa tubulaarisissa epiteelisoluissa (BUMPT). Mielenkiintoista on, että havaitsimme, että DsbA-L oli vuorovaikutuksessa jännitteestä riippuvan anionikanavan 1 (VDAC1) alueiden 9-13 ja 22 27 kanssa, joka on VDAC-proteiiniperheen avainjäsen19 21; nämä vaikutukset havaittiin sekä in vivo että in vitro mitokondrionäytteissä ja ihmisen AKI-näytteissä. Lisäksi osoitimme, että PTVDAC1-KO paransi myös munuaissolujen apoptoosia sekä AKI:n in vitro- että in vivo -malleissa. Yhdessä osoitimme, että DsbA-L oli vuorovaikutuksessa VDAC1: n kanssa mitokondriovälitteisessä tubulussoluapoptoosissa ja aiheutti siksi AKI:n etenemisen.

Cistanche tubulosa

Materiaalit ja menetelmät

1. Eettinen lausunto

Tutkimuksen hyväksyi Kiinan kansantasavallan toisen Xiangyan sairaalan arviointilautakunta (NO 2018065), ja tähän tutkimukseen osallistui 18 potilasta. Kaikki osallistujat ennen tutkimukseen osallistumista rekrytoitiin kirjallisella suostumuksella. Kaikki eläinkokeet vastasivat Kiinan kansantasavallan toisen Xiangyan sairaalan eläinhoidon eettisen komitean (NO. 2020310) hyväksymiä periaatteita.

2. Vasta-aineet ja reagenssit

Anti-COXIV (ab33985, RRID: AB_879754), VDAC1 (ab14734, RRID: AB_443084), and PGC-1a (ab191838, RRID: AB_2721267) antibodies were obtained from Abcam (Cambridge Science Park, Cambridge, UK). Anti-Caspase3 (9662, RRID: AB_331439) and cleavedcapase3 (9664, RRID: AB_2070042) antibodies were purchased from Cell Signaling Technology (Danvers, MA, USA). Anti-Bax (50599-2-Ig, RRID: AB_2061561), Cyt-c (10993-1-AP, RRID: AB_2090467), NRF1 (12482- 1-AP, RRID: AB_2282876), GAPDH (60004-1-Ig, RRID: AB_2107436), and b-tubulin (10094-1-AP, RRID: AB_2210695) antibodies were obtained from Proteintech (Rosemont, IL, USA). The anti-DsbA-L antibody was provided by Dr. Feng Liu(14). All secondary antibodies (MitoTracker Green FM and MitoTracker Red CMXRos) were obtained from Thermo Fisher Scientific (Waltham, MA, USA). The calcium ionophore was purchased from Sigma-Aldrich (Shanghai, China). Antimycin A (>95-prosenttisesti puhdas, ab141904) ja mitokondrioiden/sytosolifraktiointipakkaus (ab65320) ostettiin Abcamilta (Cambridge Science Park, Cambridge, UK). Hiiren DsbAL:n kohdesekvenssi on kuvattu aiemmin.22

3. AKI-mallien luominen iskeemisen reperfuusion, CLP:n ja VAN:n avulla

C57BL/6J-urospuoliset hiiret (RRID: MGI:5657312), joiden ikä oli 8-10 viikkoa, ostettiin yhtiöltä Hunan SJA Laboratory Animal Co., Ltd. Hiiret, joissa ilmeni proksimaaliselle tubulusspesifinen DsbA-L- tai VDAC1-deleetio, tuotettiin risteyttämällä DsbA-L (flox/flox) -hiiret (toimittaja tohtori Feng Liu) tai VDAC1 (flox/flox) -hiiret (saatu Shanghain malliorganismeista) PEPCK-Cre-hiirillä (toimittaja tohtori Volker Haase (Pennsylvanian yliopisto, Philadelphia, PA) ). 28 minuuttia, jota seurasi reperfuusio 24 h tai 48 h. Hiirien ruumiinlämpö pidettiin noin 37 asteessa. CLP-indusoidun AKI:n tapauksessa umpisuole sidottiin tiukasti kohtaan 1,5 cm kärjestä. Tätä seurasi pistos 18 h. VAN-vaurion varalta hiirille injektoitiin vatsaontelonsisäisesti yksi VAN-annos annoksella 600 mg/kg 7 peräkkäisenä päivänä, kuten aiemmin on kuvattu.28,29 Lisäksi C57BL/6-hiiriin injektoitiin DsbA-L- tai VDAC1-plasmidit tai VDAC1-siRNA (annoksella 15 mg/kg) häntälaskimon kautta kahdesti viikossa22; suolaliuosta käytettiin kontrolliinjektiona. Analysoimme jokaisessa tutkimuksessa näytteet yhdessä välttääksemme harhaa aiempien tutkimusten perusteella ja käytimme PASS-ohjelmistoa otoskoon (n=6) määrittämiseen. Jätimme pois näytteen, joka kuoli tai epäonnistui mallin perustamisessa ennen päätepistettä. Koehiiret ryhmiteltiin satunnaislukutaulukon mukaan. Tutkijat eivät olleet sokeutettuja kokeen aikana, mutta heidät sokaistiin allokoinnin, näytteiden keräämisen ja data-analyysin aikana. Kaikki eläinkokeet olivat Kiinan kansantasavallan toisen Xiangyan sairaalan eläinhoidon eettisen komitean hyväksymiä ohjaavia periaatteita. Hiiret pidettiin 12-h valoisassa/pimeässä ympäristössä, jossa oli vapaa pääsy normaaliin jyrsijäravintoon ja veteen.

Herba Cistanche

4. Soluviljely ja iskemia-reperfuusiomalli

Tohtori Wilfred Lieberthalilta (Boston University School of Medicine) saatuja BUMPT-soluja tai Shanghai Zhongqiaoxinzhou Biotechilta saatuja HK{{0}}-soluja viljeltiin DMEM:llä (Gibco, 11965092), johon oli lisätty 10 prosenttia FBS:ää (Gibco, 10100147). ja 1 prosentti penisilliini-streptomysiiniä (Gibco, 15140163) 37 asteessa 5 prosentin CO2:ssa. Iskeemistä solumallia varten BUMPTs-soluja käsiteltiin 10 mM antimysiini A:lla (mitokondriaalisen kompleksin III estäjä, Abcam, ab141904) ja 1,5 mM kalsiumionoforilla (Sigma, A23187) Hanksin tasapainoisessa suolaliuoksessa (Hyclone, SH30030). 2 h.30 Sitten korvasimme HBSS:n DMEM-väliaineella 0, 2 ja 4 tunnin ajaksi reperfuusiovaiheessa. Solujen apoptoosi havaittiin morfologialla ja immunoblottauksella apoptoottisille indikaattoreille, mukaan lukien pilkottu kaspaasi3, Bax ja Cyt-c. Useita plasmideja luotiin ja transfektoitiin soluihin lipofektiolla: DsbA-L, HA-VDAC1-1-25, HA-VDAC1-26-366, HA-VDAC1-täyspitkä, HA-VDAC{{33 }}D9-13,22-27, HAVDAC1-D39-45,55-57 ja HA-VDAC1-D9-13, 22-27 D39-45,55-57 ja siRNA DsbA-L:lle ja VDAC1:lle. Kuudesta kahdeksaan tuntia transfektion jälkeen elatusaine korvattiin DMEM:llä. DsbA-L siRNA:n ja VDAC1 siRNA:n sekvenssit hiirille olivat vastaavasti 50 - GCAUGGAGCAACCAGAGAUTT -30 ja 50 - CCAGAGCAACTTCGCAGTT -30; salatun NC-siRNA:n sekvenssit olivat 50 -UUCUCCGAACGUGUCACGUTT-30. Ihmisten DsbA-L siRNA:n ja VDAC1 siRNA:n sekvenssit olivat 50 - UCAUUUGCCAUGUAUAGUCCU-30 ja 50 -UAUUAAGCCAAAUCCAUAGCC -30; sekoitetun NC-siRNA:n sekvenssit olivat 50 -AACCACUCAACUUUUUCC CAA -30. IR-malli indusoitiin sitten, kun solutiheys saavutti 90 prosenttia.

5. Virtaussytometria

Virtaussytometriaa käytettiin FITC Annexin V Apoptosis Detection Kitin (BD, 556547) ohjeiden mukaisesti. BUMPT tai HK-2 Solut, joilla oli erilaisia ​​käsittelyjä, kerättiin käyttämällä trypsiiniä ilman EDTA:ta ja pestiin kolme kertaa PBS:llä, mitä seurasi FITC 15 minuutin ajan ja PI 5 minuutin ajan huoneenlämpötilassa, ja lopuksi tutkittiin virtaussytometrillä.

6. AKI-potilaat ja näytteenotto

Protokollan hyväksyi Kiinan kansantasavallan toisen Xiangyan sairaalan tarkastuslautakunta. Tähän tutkimukseen osallistui 18 potilasta, joista 12 oli miestä ja 6 naista. Rekrytointiperiaate perustui munuaisbiopsiaan. Potilastietoja on täydennetty taulukossa 1. Munuaisbiopsianäytteet otettiin potilailta, joilla oli minimaalisen muutoksen sairaudet (MCD) (n=6) ja iskeeminen tai akuutti interstitiaalinen nefriitti (AIN) aiheuttama AKI (n{{6}). }). Vakuutamme, että kaikki tutkimus noudattaa kaikkia asiaankuuluvia ihmisillä tehdyn tutkimuksen eettisiä määräyksiä ja että se on suoritettu Helsingin julistuksen periaatteiden mukaisesti ja että tutkimus on tiede- ja teknologiaministeriön ohjeistuksen mukainen. Ihmisen geneettiset resurssit. MCD:n sisällyttämis- ja poissulkemiskriteerit kuvattiin aiemmassa tutkimuksessamme.23 IR: Sisällyskriteerit:1 Biopsia iskemia-reperfuusiopotilaille,2 Ikä alle 75 vuotta; Poissulkemiskriteerit1: sulje pois potilaat, joilla on kasvaimia leikkauksen jälkeisissä lääketieteellisissä tutkimuksissa,2 sulje pois potilaat, joilla on ollut diabetes, kihti, verenpainetauti, virtsan tuberkuloosi tai infektio. AIN: Sisällyskriteerit1: Kliinisesti diagnosoitu akuutti interstitiaalinen nefriitti2 Biopsialla varmistetut AIN-potilaat,3 Ikä alle 75 vuotta; Poissulkemiskriteerit1: Sulje pois potilaat, joilla on epänormaali veren kreatiniini ennen vastaanottoa,2 sulje pois potilaat, joilla on ollut diabetes, kihti, verenpainetauti, virtsan tuberkuloosi tai infektio. Näitä näytteitä käytettiin sitten HE-, TUNEL- ja immunohistokemian värjäykseen sekä immunosaostukseen (IP) ja immunoblottaukseen.

7. Immunosaostus

Sytoplasma ja mitokondriot BUMPT-soluista ja munuaiskudos hiiristä ja AKI-potilaista erotettiin käyttämällä Mitochondria/Cytosol Fractionation Kit -sarjaa (Abcam, ab65320); sarjaa käytettiin valmistajan ohjeiden mukaan. Vasta-aineet (DsbA-L, VDAC1, HA tai IgG) sidottiin magneettihelmiin. Seuraavaksi lisäsimme mitokondrio-/sytoplasma-lysaatin ja inkuboimme sitä kolme tuntia. Seuraavaksi seos eluoitiin ja siihen liittyvien markkerien ilmentymistä tutkittiin immunoblottauksella.

8. Suhteellinen kvantitatiivinen PCR (qPCR)

RNA uutettiin BUMPT-soluista tai munuaiskudoksesta Trizol-reagenssilla (Invitrogen, Carlsbad, CA, USA). Sitten RNA käänteistranskriptoitiin ensimmäisen juosteen cDNA:ksi käyttämällä Prime Script RT -reagenssipakkausta ja gDNA Eraseria (TaKaRa, RR037A), kuten aiemmin on kuvattu.31'34 Seuraavaksi käytimme cDNA:ta mallina, jossa oli TB green (TaKaRa, RR820A) ja Light cycler 96 (Roche) seuraavilla alukepareilla: DsbA-L: 5 - AAATATGGGGCCTT TGGGCT-3'(eteenpäin) ja 5'- TAGCAACTCCAAGCGGTCA G-3'(käänteinen); ja GAPDH: 5'-GGTTCTCCTCTGACTTCCACA-3'(eteenpäin) ja 5'-GTGAGGGTC TCTCTCTTCCT-3'(käänteinen); PGC- 1a: 5'-ATGTGTCGCCTTCTTGCTCTTCC-3 (eteenpäin) ja 5'-CTCCCGCTTCTCGTGCTCTTTG-3'(käänteinen); NrF1:5'-TCTGCTGTGGCTGATGGAGA GG-3'(eteenpäin) ja NrF1:5'-GATGCTTGCGTCGTCTGGATGG-3 (käänteinen);

9. BUN- ja kreatiniinitunnistus

BUN:n ja kreatiniinin havaitseminen suoritettiin BUN:n (Urea Nitrogen Content Assay Kit Beijing Boxbio Science & Technology Co, Ltd.) ja Creatinine Assay Kitin (Nanjing Jiancheng Bioengineering Institute, Nanjing, Kiina) protokollan mukaisesti.

10. HE-värjäys, TUNEL-värjäys, immunokemia, immunofluoresenssi ja immunoblottaus

Munuaiskudos upotettiin parafiiniin ja leikattiin sitten leikkeiksi erityyppistä värjäystä varten, kuten aiemmin on kuvattu.26,35 Histologia arvioitiin hematoksyliini- ja eosiinivärjäyksellä. Kriteerit, joita käytettiin munuaisten tubulusvaurion arvioimiseen, kuvattiin aiemmin.23 TUNEL-värjäystä käytettiin arvioimaan apoptoosia munuaissoluissa. TUNEL-positiivisten solujen osuutta (prosenttia) 10-20 mikroskooppisissa kentissä kudosleikkaa kohti käytettiin apoptoosin kvantitatiivisena indikaattorina.26 Immunokemiallista värjäystä varten kudosleikkeitä inkuboitiin yön yli 4 °C:ssa spesifisen primaarisen vasta-aineen kanssa ( DsbA-L 1:200 tai VDAC1 1:100). Seuraavana aamuna leikkeitä inkuboitiin sekundaarisen vasta-aineen kanssa 30 minuuttia 37 asteessa ja sitten annettiin reagoida DAB:n kanssa 5-10 min. Immunofluoresenssivärjäystä varten leikkeitä inkuboitiin spesifisen primaarisen vasta-aineen (DsbA-L 1:200, VDAC1 1:100) kanssa yön yli 4 asteessa, mitä seurasi sekundäärinen fluoresoiva vasta-aine 1 tunnin ajan 37 asteessa pimeässä. Sitten lisättiin DAPI:tä 3-5 minuutiksi ja leikkeitä tarkkailtiin fluoresenssimikroskopialla. Mitokondrioiden värjäys suoritettiin standardiprotokollalla. Proteiinilysaatit BUMPT-soluista tai munuaisista otettiin talteen ja sentrifugoitiin sitten proteiinit sisältävän supernatantin keräämiseksi. Supernatantti altistettiin SDS-PAGE:lle ja siirrettiin sitten PVDF-kalvolle. Sitten kalvoja inkuboitiin primaarisen vasta-aineen kanssa yön yli 4 asteessa, mitä seurasi sekundäärinen vasta-aine 1 tunnin ajan huoneenlämpötilassa. AntiCOXIV:n, VDAC1:n, PGC-1a:n, Baxin, Cyt-c:n, NRF1:n, GAPDH:n ja b-tubuliinin pitoisuus on 1:1000. Anti-Caspase3:n ja pilkkoneen kapaasi3:n pitoisuus on 1:2000.

Cistanche-lisä

11. Tilastot

Kaikki tiedot esitettiin keinoina § SD. Kaksisuuntaisia ​​Studentin t-testejä käytettiin kahdessa ryhmävertailussa. Yksisuuntaista ANOVAa ja sen jälkeen Tukeyn post hoc -analyysiä käytettiin useisiin vertailuihin. Kruskal Walls -testiä käytettiin tiedoille, joilla oli epänormaali jakautuminen. Graph Pad -ohjelmistoa 8.0 käytettiin analysoimaan tiedot ja P<0.05 was considered statistically significant.

12. Rahoituslähteen rooli

Rahoittajat eivät olleet mukana tutkimuksen suunnittelussa, tiedonkeruussa, analysoinnissa, tulkinnassa tai käsikirjoituksen kirjoittamisessa.

Viitteet

1 Zuk A, Bonventre JV. Akuutti munuaisvaurio. Annu Rev Med. 2016; 67:293–307.

2 Zhou D, Tan RJ, Lin L, Zhou L, Liu Y. Maksasolujen kasvutekijäreseptorin, c-met, aktivointi munuaistiehyissä on tarpeen renoprotektioon akuutin munuaisvaurion jälkeen. Kidney Int. 2013;84(3):509–520.

3 O'Neal JB, Shaw AD, Billings FT. Akuutti munuaisvaurio sydänleikkauksen jälkeen: nykyinen ymmärrys ja tulevaisuuden suunnat. Crit Care. 2016; 20(1):187.

4 Ishimoto Y, Inagi R. Mitokondriot: terapeuttinen kohde akuutissa munuaisvauriossa. Nephrol Dial -siirto. 2016;31(7):1062–1069. European Dialysis and Transplant Association - European Renal Associationin virallinen julkaisu.

5 Linkermann A, Chen G, Dong G, Kunzendorf U, Krautwald S, Dong Z. Säädelty solukuolema AKI:ssa. J Am Soc Nephrol. 2014;25(12):2689–2701.

6 Agarwal A, Dong Z, Harris R, et ai. AKI:n solu- ja molekyylimekanismit. J Am Soc Nephrol. 2016;27(5):1288–1299.

7 Morigi M, Perico L, Rota C, et ai. Sirtuiinista 3-riippuvaiset mitokondrioiden dynaamiset parannukset suojaavat akuutilta munuaisvauriolta. J Clin Investig. 2015;125(2):715–726.

8 Yu X, Xu M, Meng X, et ai. Ydinreseptori PXR kohdistuu AKR1B7:ään suojelemaan mitokondrioiden aineenvaihduntaa ja munuaisten toimintaa AKI:ssa. Sci Transl Med. 2020;12(543):7591–7605.

9 Stoppe C, Averdunk L, Goetzenich A, et ai. Makrofagien migraatiota estävän tekijän suojaava rooli akuutissa munuaisvauriossa sydänleikkauksen jälkeen. Sci Transl Med. 2018;10(441):4886–4898.

10 Wei Q, Sun H, Song S, et ai. MikroRNA-668 repressoi MTP18:aa mitokondriodynamiikan säilyttämiseksi iskeemisessä akuutissa munuaisvauriossa. J Clin Investig. 2018;128(12):5448–5464.

11 Tran M, Tam D, Bardia A, et ai. PGC-1alfa edistää toipumista akuutin munuaisvaurion jälkeen hiirillä systeemisen tulehduksen aikana. J Clin Investig. 2011;121(10):4003–4014.

12 Lan R, Geng H, Singha PK, et ai. Mitokondrioiden patologia ja glykolyyttinen siirtymä proksimaalisen tubuluksen atrofian aikana iskeemisen AKI:n jälkeen. J Am Soc Nephrol. 2016;27(11):3356–3367.

13 Harris JM, Meyer DJ, Coles B, Ketterer B. Uudella glutationitransferaasilla (13-13), joka on eristetty rotan maksan mitokondrioiden matriisista, on rakenteellista samankaltaisuutta luokan theta-entsyymien kanssa. Biochem J. 1991; 278 (Pt 1): 137-141.

14 Bai J, Cervantes C, Liu J, et ai. DsbA-L estää liikalihavuuden aiheuttamaa tulehdusta ja insuliiniresistenssiä tukahduttamalla mtDNA:n vapautumisen aktivoiman cGAS-cGAMP-STING-reitin. Proc Natl Acad Sci USA. 2017;114(46):12196–12201.

15 Chen H, Bai J, Dong F, et ai. Maksan DsbA-L suojaa hiiriä ruokavalion aiheuttamalta hepatosteatoosilta ja insuliiniresistenssiltä. FASEB J. 2017;31(6):2314–2326.

16 Liu M, Xiang R, Wilk SA, et ai. Rasvaspesifinen DsbA-L-yli-ilmentyminen edistää adiponektiinin multimerisaatiota ja suojaa hiiriä ruokavalion aiheuttamalta liikalihavuudelle ja insuliiniresistenssiltä. Diabetes. 2012;61(11):2776–2786.

17 Chen X, Han Y, Gao P, et ai. Disulfidisidos Oksidoreduktaasin kaltainen proteiini suojaa kohdunulkoisen rasvan kertymiseltä ja lipideihin liittyviltä munuaisvaurioilta diabeettisessa nefropatiassa. Kidney Int. 2019;95(4):880–895.

18 Dai XG, Xu W, Li T, et ai. Fosfataasin ja tensiinihomologin aiheuttaman oletetun kinaasin 1-Parkin-välitteinen mitofagian osallisuus septisessä akuutissa munuaisvauriossa. Chin Med J (englanti). 2019;132(19):2340–2347.

19 Shoshan-Barmatz V, Nahon-Crystal E, Shteinfer-Kuzmine A, Gupta R. VDAC1, mitokondrioiden toimintahäiriö ja Alzheimerin tauti. Pharmacol Res. 2018; 131:87–101.

20 Geisler S, Holmstrom KM, Skujat D, et ai. PINK1/Parkin-välitteinen mitofagia on riippuvainen VDAC1:stä ja p62/SQSTM1:stä. Nat Cell Biol. 2010;12(2):119–131.

21 Lipper CH, Stofleth JT, Bai F, et ai. VDAC:n redox-riippuvainen portti mitoNEET:n toimesta. Proc Natl Acad Sci USA. 2019;116(40):19924–19929.

22 Li X, Pan J, Li H, et ai. DsbA-L-välitteinen munuaisten tubulointerstitiaalinen fibroosi UUO-hiirillä. Nat Commun. 2020;11(1):4467.

23 Zhang D, Liu Y, Wei Q, et ai. Tubulaarinen p53 säätelee useita geenejä AKI:n välittämiseksi. J Am Soc Nephrol. 2014;25(10):2278–2289.

24 Xu X, Wang J, Yang R, Dong Z, Zhang D. EGFR:n geneettinen tai farmakologinen esto parantaa sepsiksen aiheuttamaa AKI:ta. Oncotarget. 2017;8(53):91577–91592.

25 Wang J, Li H, Qiu S, Dong Z, Xiang X, Zhang D. MBD2 lisää miR-301a-5p:tä indusoidakseen munuaissolujen apoptoosia vankomysiinin aiheuttaman AKI:n aikana. Cell Death Dis. 2017;8(10):e3120.

26 Xu L, Li X, Zhang F, Wu L, Dong Z, Zhang D. EGFR ajaa AKI:n etenemistä CKD:ksi HIPK2:n yli-ilmentymisen kautta. Theranostics. 2019;9(9):2712–2726.

27 Zhang P, Yi L, Qu S, et ai. Biomarker TCONS_00016233 ohjaa septistä AKI:tä kohdistamalla miR-22-3p/AIFM1-signalointiakseliin. Mol Ther Nucleic Acids. 2020; 19:1027–1042.

28 Chen J, Wang J, Li H, Wang S, Xiang X, Zhang D. p53 aktivoi miR-192-5p:n välittämään vankomysiinin aiheuttamaa AKI:tä. Sci Rep. 2016; 6:38868.

29 Xu X, Pan J, Li H, et ai. Atg7 välittää munuaistiehyiden solujen apoptoosia vankomysiinin nefrotoksisuudessa aktivoimalla PKC-deltaa. FASEB J. 2019;33(3):4513–4524.

30 Lee HT, Emala CW. Esikäsittely ja adenosiini suojaavat ihmisen proksimaalisia tubulussoluja iskeemisen vaurion in vitro -mallissa. J Am Soc Nephrol. 2002;13(11):2753–2761.

31 Ge Y, Wang J, Wu D, et ai. lncRNA NR_038323 Estää munuaisfibroosia diabeettisessa nefropatiassa kohdistamalla miR-324-3p/DUSP1-akseliin. Mol Ther Nucleic Acids. 2019;17:741–753.

32 Wang J, Pan J, Li H, et ai. p53 suppressoi lncRNA ZEB1-AS1:tä munuaisfibroosin vuoksi diabeettisessa nefropatiassa. Mol Ther Nucleic Acids. 2018; 12:741–750.

33 Song YX, Sun JX, Zhao JH ym. Koodaamattomat RNA:t osallistuvat CLDN4:n säätelyverkostoon ceRNA-välitteisen miRNA-evaasion kautta. Nat Commun. 2017;8(1):289.

34 Zhu M, Liu J, Xiao J et ai. Lnc-mg on pitkä ei-koodaava RNA, joka edistää myogeneesiä. Nat Commun. 2017;8:14718.

35 Kishi S, Brooks CR, Taguchi K, et ai. Proksimaalinen tubulus ATR säätelee DNA:n korjausta estämään epämukavia munuaisvauriovasteita. J Clin Investig. 2019;129(11):4797–4816.

Xiaozhou Li,a,b,1 Jian Pan,a,b,1 Huiling Li,c Guangdi Li,g Bohao Liu,a,b Xianming Tang,a,b Xiangfeng Liu,f Zhibiao He,a,b Zhenyu Peng,a ,b Hongliang Zhang,a,b Luxiang Wang,a,b Yijian Li,d Xudong Xiang,a,b Xiangping Chai,a,b Yunchang Yuan,e Peilin Zheng,h ja Dongshan Zhang a,b *

hätälääketieteen osasto, Kiinan kansantasavalta

b Emergency Medicine and Difficult Diseases Institute, Toinen Xiangyan sairaala, Central South University, Changsha, Hunan 410011, Kiinan kansantasavalta

c Oftalmologian laitos, Kiinan kansantasavalta

d Virtsakirurgian osasto, Kiinan kansantasavalta

e Rintakirurgian laitos, Kiinan kansantasavalta

f Yleiskirurgian osasto, toinen Xiangyan sairaala, Kiinan kansantasavalta

g Kansanterveyden laitos, Central South University, Changsha, Hunan, Kiinan kansantasavalta

h Endokrinologian laitos, Shenzhenin kansansairaala, Jinanin yliopiston toinen kliininen lääketieteellinen korkeakoulu, Eteläisen tiede- ja teknologiayliopiston ensimmäinen osasairaala, Shenzhen, Kiinan kansantasavalta

1 Xiaozhou Li ja Jian Pan osallistuivat yhtä paljon tähän tutkimukseen