OSA 2: Cistanche Deserticola -polysakkaridi estää OVX: n aiheuttamaa luukatoa hiirillä ja RANKL: n aiheuttamaa osteoklastogeneesiä

Kontakti:joanna.jia@wecistanche.com

Osteoporoosi on vakava luusairaus, joka vaikuttaa ikääntyvään väestöön. Cistanche deserticola (CD), Kiinassa laajalti käytetty tonic- ja lääkeruoka, on osoittautunut tarjoavan tehokasta hoitoa osteoporoosille.Cistanche deserticola -polysakkaridiCD: stä uutetulla (CDP) on erilaisia farmakologisia ominaisuuksia, mutta sen rooli osteoklastisessa muodostumisessa ja toiminnassa sekä osteoporoosissa on edelleen tuntematon, Tämän tutkimuksen tarkoituksena oli uuttaa ja puhdistaa CDP(Cistanche deserticola -polysakkaridi)tutkia edelleen sen mahdollista osteoporoosin vaikutusmekanismia. Tulokset osoittivat, että CDP(Cistanche deserticola -polysakkaridi) hoito esti OVX:n aiheuttaman osteoporoosin ja verisuonten aiheuttaman luukadon tukahduttamalla osteoklastin aktiivisuutta ja toimintaa. Lisäksi CDP(Cistanche deserticola -polysakkaridi)hoito esti merkittävästi RANKL:n aiheuttamaa osteoklastogeneesiä. luun resorptio ja osteoklastispesifinen geeniekspressio. Mekanistisesti, CDP(Cistanche deserticola -polysakkaridi)esti RANKL:n indusoiman NF-xB: n ja MAPK: n signalointireittien aktivoitumisen ja vaikutti siten neatc1-aktivaation loppupään aktivaatioon. Tämän tutkimuksen tulokset viittaavat siihen, että CDP(Cistanche deserticola -polysakkaridi)on mahdollisesti turvallinen lääke osteoporoosin hoitoon.

Osteoporoosin hoito: Cistanche Deserticola Polysakkaridi

KLIKKAA TÄSTÄ HAUKKUAKSESI PRAT 1:TÄ

3. Tulokset

3.1 CDP(Cistanche deserticola -polysakkaridi)estää OVX:n aiheuttaman luukadon in vivo

Käytimme OVX: n aiheuttamaa osteoporoosin hiirimallia CDP: n vaikutusten tutkimiseen(Cistanche deserticola -polysakkaridi)osteoporoosin hoito in vivo. Sham-ryhmään verrattuna OVX-hiirien paino kasvoi merkittävästi, kun taas kohdun indeksi laski, mikä osoittaa, että osteoporoosimalli rakennettiin onnistuneesti (kuvat 1B ja D). OVX-ryhmän sääriluun mikro-CT-analyysi osoitti laajaa luukatoa. OVX-ryhmään verrattuna luun trabekoruloiden määrä kasvoi CDP-L-ryhmässä, kun taas CDP-H- ja E2-ryhmien lisääntyminen oli merkittävämpää, ja kahden jälkimmäisen ryhmän trabekolat muuttuivat karkeammiksi ja aukko pieneni. Kvantitatiivinen analyysi vahvisti, että useilla luun histomorfometrisillä parametreilla, mukaan lukien BMD, BV/TV, BS/TV ja Tb. N, oli merkittävästi kohonnut arvoja, kun taas Tb. Sp:n arvot laskivat CDP-H-ryhmässä (kuvat 1E ja F). Histopatologinen tutkimus, jossa käytettiin H&E-värjäystä, paljasti, että luun trabekoruloiden määrä CDP-H- ja E2-ryhmissä oli huomattavasti suurempi kuin OVX-ryhmässä, kun taas CDP-L-ryhmässä ei tapahtunut merkittävää parannusta (kuva 1G). Lisäksi TRAcP-värjäys osoitti, että osteoklastien määrä kasvoi huomattavasti OVX-ryhmässä, mutta väheni CDP-H- ja E2-ryhmissä (kuva 1H). CDP-L-, CDP-H- ja E2-ryhmät osoittivat estäneensä OVX:n aiheuttamaa P-pitoisuuden nousua, mutta lisäsivät veren seerumin Ca-pitoisuutta. Luun absorptiomarkkerit, RANKL ja TRAcP-5b, osoittivat laskevaa suuntausta CDP-L: ssä.

3.2 CDP(Cistanche deserticola -polysakkaridi) tukahduttaa RANKL:n aiheuttaman osteoklastogeneesin in vitro

Seurasimme solujen lisääntymistäCDP-käsitellyt BBM:t käyttäen pitkäaikaista reaaliaikaista reaaliaikaista dynaamista elävien solujen kuvantamisanalysaattoria. Kontrolliryhmään verrattuna solun yhtymäkohtaCDP-hoidetut ryhmät eivät muuttuneet annoksella<10 µg/ml,="" but="" was="" significantly="" reduced="" at="" the="" 20="" and="" 40="" µg/ml="" dosages="" (fig.="" 2a).="" to="" investigate="" the="" effect="" of="">CDP(Cistanche deserticola -polysakkaridi)RANKL:n aiheuttamassa osteoklastogeneesissä BBM:iä stimuloitiin RANKL:llä ja M-CSF:llä läsnä ollessaCDP7 päivän ajan. TRAcP: tä, osteoklastien tyypillistä entsyymiä, pidetään osteoklastin toiminnan indikaattorina (Minkin, 1982). TRAcP-värjäys osoitti, että osteoklastit, joita käsiteltiin>1,25 μg/mlCDP(Cistanche deserticola -polysakkaridi)osoitti merkittävästi pienentynyttä kokoa ja lukumäärää. Nämä tulokset osoittivat, että CDP(Cistanche deserticola -polysakkaridi)esti tehokkaasti odotetun RANKL:n aiheuttaman osteoklastogeneesin vaikuttamatta solujen elinkelpoisuuteen.

3.3 CDP(Cistanche deserticola -polysakkaridi)estää RANKL:n aiheuttamaa osteoklastista resorptioaktiivisuutta ja osteoklastispesifistä geeniekspressiota

Määrittelimme edelleen CDP:n vaikutukset(Cistanche deserticola -polysakkaridi)osteoklastien luun resorptioaktiivisuuden hoito hydroksiapatiittipäällysteisillä levyillä. Luun resorptio on päätoiminto ja standardi osteoklastien aktiivisuuden ja kyvyn mittaamiseksi (Novack & Faccio, 2011). Tulokset osoittivat, että CDP(Cistanche deserticola -polysakkaridi)voi vähentää merkittävästi osteoklastien luun resorptioaluetta annoksesta riippuvalla tavalla, mikä osoittaa, että CDP(Cistanche deserticola -polysakkaridi)esti RANKL:n aiheuttamaa luun resorptioaktiivisuutta (kuvat 3A ja B). Erityisesti osteoklastinen luun resorptioalue pieneni noin 6,3 %:iin 10 μg/ml CDP-hoidon jälkeen(Cistanche deserticola -polysakkaridi). CDP: n esteiden selvittäminen paremmin(Cistanche deserticola -polysakkaridi)osteoklastogeneesistä mittasimme osteoklastiin liittyvien geenien transkriptiotasot. Ilman CDP-hoitoa(Cistanche deserticola -polysakkaridi), rankl-induktio edisti NFATc1-, CTSK-, Acp5-, Atp6v0d2- ja Mmp9-geenien ilmentymistä. Päinvastoin, CDP:n ja RANKL:n samanaikainen käyttö vähensi merkittävästi näitä viittä geeniä.

3.4 CDP(Cistanche deserticola -polysakkaridi)estää RANKL:n aiheuttaman NFATc1-aktivaation

TRAcP-värjäys paljasti, että CDP(Cistanche deserticola -polysakkaridi)hoito vähensi merkittävästi kypsien osteoklastien määrän odotettua kasvua RANKL-stimulaation jälkeen 3–7 päivän ajan (kuvat 4A ja B). Lisäksi tutkimme, voiko CDP-hoito tehokkaasti heikentää osteoklastin erilaistumista estämällä NFATc1:n ilmentymistä. Tulokset osoittivat, että NFATc1 ilmeni voimakkaasti RANKL-stimulaation jälkeen 5 päivän ajan, mikä estyi merkittävästi CDP:n jälkeen(Cistanche deserticola -polysakkaridi)hoito (kuvat 4C ja D). Lisäksi CDP-hoito tukahdutti CTSK: n ilmentymistasot, proteiinin, jota tarvitaan normaaliin osteoklastin muodostumiseen ja toimintaan (Bossard et ai., 1996) (kuvat 4E ja F). Valitsimme RANKL-stimulaation piste-in-time-esityksen 5 päivän ajan tutkiaksemme tarkemmin 10 μg / ml CDP: n vaikutusta(Cistanche deserticola -polysakkaridi)NFATc1-translokaation hoito. Kuten odotettiin, CDP(Cistanche deserticola -polysakkaridi)hoito esti merkittävästi RANKL:n aiheuttamaa NFATc1-ydintranslokaatiota.

3.5 CDP(Cistanche deserticola -polysakkaridi) estää RANKL:n aiheuttamaa NF-κB- ja MAPK-signalointireittien aktivaatiota

CDP:n aiheuttamaan osteoklastin erilaistumisen estoon liittyvien mekanismien selvittämiseksi tutkimme CDP:n vaikutusta(Cistanche deserticola -polysakkaridi)hoito NF-κB- ja MAPK-reiteillä. Tulokset paljastivat, että CDP(Cistanche deserticola -polysakkaridi)hoidolla oli suppressiivisia vaikutuksia IκB-α hajoamiseen ja p65-fosforylaatioon annoksesta riippuvaisella tavalla. Kolmen MAPK-perheenjäsenen fosforylaatio, erityisesti solunulkoinen signaalisäädelty kinaasi (ERK), c-Jun N-terminaalinen kinaasi (JNK) ja p38, säädettiin ylöspäin.

Cistanche Deserticola

4. Keskustelu

Osteoporoosi on yleinen ja rappeuttava luusairaus. Tällä hetkellä on olemassa monia kemiallisia synteesilääkkeitä, joita käytetään osteoporoosin kliinisissä hoidoissa, kuten estrogeeni ja bisfosfonaatti. Näiden lääkkeiden pitkäaikainen käyttö heikentää kuitenkin vähitellen kliinistä tehoa ja aiheuttaa jopa monia vakavia sivuvaikutuksia, mukaan lukien lisääntynyt munasarja-, rinta- ja endometriumin syöpien ja leuan osteonekroosin riski (Beral, 2003; Khan et al., 2009; Lacey et al., 2002). Tässä tutkimuksessa valitsimme CDP:n(Cistanche deserticola -polysakkaridi), joka on tehokas ainesosa, joka on uutettu CD:stä terapeuttisena aineena ja joka on osoittanut, että CDP(Cistanche deserticola -polysakkaridi)oli suojaava vaikutus

luukato OVX-hiirillä ja esti RANKL:n aiheuttaman osteoklastin muodostumisen ja toiminnan. Samaan aikaan "munuaisten hallitsevan luun" perinteisen kiinalaisen lääketieteen teorian mukaan luukato johtuu munuaisten puutteista. Munuaisia sävyttävänä lääketieteellisenä ruokana CD:n on osoitettu tarjoavan tehokasta hoitoa osteoporoosiin (Fan et ai., 2019; Jiang, Wang, Li, & Zhang, 2016). Siten CDP(Cistanche deserticola -polysakkaridi)Tästä luonnollisesta yrtistä uutettu on parempi ja turvallisempi lääkevaihtoehto.

Tällä hetkellä OVX-hiirimalli on klassinen malli vaihdevuosien jälkeisestä luukadosta naisilla, jossa tutkitaan luukadon syitä ja suoritetaan interventioita (Wehrle et ai., 2015). Näin ollen suoritimme kahdenvälisen ooforektomian C57BL/6J naarashiirillä osteoporoosimallin rakentamiseksi. Aiemmissa tutkimuksissa eläimille annetut CDP-annokset olivat 50–200 mg/kg (pieni annos) ja 1800 mg/kg (suuri annos) (Guo et al., 2016; Zhang et ai., 2018). Tässä suuri CDP-annos(Cistanche deserticola -polysakkaridi)hiirillä oli 600 mg/kg, mikä perustui suureen kliiniseen annokseen, 30 g CD:tä keittämisessä; siten se on samanlainen kuin nykyinen kliininen käytäntö. Tässä tutkimuksessa hoito CDP: llä(Cistanche deserticola -polysakkaridi)esti merkittävästi OVX: n aiheuttamaa painonnousua, joka on yleinen ilmiö, jota havaitaan OVX-hiirillä (Davis et ai., 2019). Käyttämällä mikro-CT-skannausta ja 3D-rekonstruktiota havaitsimme, että OVX johti BMD: n, BV / TV: n, BS / TV: n ja Tb. N: n huomattavaan vähenemiseen ja Tb. Sp: n lisääntymiseen, kun taas CDP-hoito kumosi kaikki nämä muutokset. Erityisesti positiiviseen lääkkeeseen verrattuna CDP voisi parantaa merkittävästi OVX-hiirien BMD: tä, joka on tärkeä luun laadun merkki ja jota käytetään heijastamaan osteoporoosin astetta (Fuggle et ai., 2019), mikä osoittaa, että CDP: llä on etu positiiviseen lääkkeeseen verrattuna BMD: n parantamisessa. Lisäksi histologiset tulokset osoittivat, että CDP-hoito voisi vähentää OVX:n aiheuttamien TRAcP-positiivisten osteoklastien lisääntynyttä määrää. Nämä tulokset viittaavat siihen, että CDP:n antaminen lievensi tehokkaasti luukatoa OVX:n aiheuttamassa osteoporoosissa, mahdollisesti estämällä osteoklastin muodostumista. Edellä mainittujen tulosten mukaisesti havaitsimme, että CDP:n annosriippuvaisesti esti RANKL:n aiheuttaman osteoklastisen muodostumisen ja toiminnan, kun taas CDP:llä oli vain vähän vaikutusta M-CSF:n aiheuttamaan osteoklastin esiastesolujen lisääntymiseen in vitro -kokeissamme.

RANKL: n ja RANK: n sitominen voi johtaa TRAF6: n rekrytointiin ja sen jälkeiseen useiden loppupään signalointireittien, kuten NF-κB: n ja MAPK: n, aktivoitumiseen (Boyle et ai., 2003; Huang et al., 2006). NF-κB-signalointireitillä on tärkeä rooli osteoklastin erilaistumisen säätelyssä, ja tämän reitin keskeisiä proteiineja koodaavien geenien hiljentäminen voi johtaa epänormaaliin luun kehitykseen (Leibbrandt &Penninger, 2008). On vakiintunutta, että NF-κB on läsnä stimuloimattomien solujen sytoplasmassa kompleksissa, jossa on IκB, mutta se tulee nopeasti ytimeen RANKL-stimulaation jälkeen (Boyle et ai., 2003). Vapautunut IκB hajoaa sitten nopeasti, kun taas NF-κB aktivoi spesifisen geenitranskription, mikä edistää osteoklastin erilaistumista, kypsymistä ja apoptoosia (Abdelmagid et ai., 2015). Tässä tutkimuksessa tulokset osoittivat, että CDP(Cistanche deserticola -polysakkaridi)hoito tukahdutti RANKL:n aiheuttaman NF-κB-signalointireitin aktivaation, mikä käy ilmi IκBα:n hajoamisen estämisestä ja p65:n fosforylaatiosta annoksesta riippuvalla tavalla, mikä voi liittyä sen anti-osteoklastogeeniseen vaikutukseen. Lisäksi MAPK-signalointireitti, mukaan lukien ERK, JNK ja p38, ovat tiiviisti mukana RANKL:n aiheuttamassa osteoklastomeesissä (Li et ai., 2002). Lisäksi p38: n ja JNK: n hallitsevat estäjät voivat estää RANKL: n aiheuttaman osteoklastogeneesin (Chang et ai., 2008; Kim et ai., 2019), kun taas ERK: lla on merkittävä rooli osteoklastin selviytymisessä (Miyazaki et ai., 2000). On vakiintunutta, että RANKL aktivoi MAPK-signalointireitin lisäämällä ERK:n, JNK:n ja p38:n fosforylaatiota (Mizukami et ai., 2002). Tutkimuksessamme osoitimme, että CDP tukahdutti RANKL: n aiheuttaman tärkeimpien proteiinien fosforylaation MAPK-signalointireitissä. Yhdessä nämä tulokset osoittavat, että NF-κB- ja MAPK-signalointireittien aktivoitumisen estäminen edistää CDP:n estävää vaikutusta osteoklastogeneesiä vastaan.

NF-κB- ja MAPK-signalointireittien aktivointi edistää useiden keskeisten transkriptiotekijöiden, kuten solujen onkogeenifossien, aktivaattoriproteiinin 1 ja NFATc1: n, ilmentymistä (Huang et ai., 2006; Wagner &Matsuo, 2003). NFATc1, tärkeä NFAT-perheen jäsen, on mukana terminaalisessa osteoklastin erilaistumisessa transkription pääsäätelijänä (Asagiri et ai., 2005). On raportoitu, että NFATc1-puutteelliset alkion kantasolut eivät pysty erilaistumaan osteoklastiksi RANKL:n stimulaation aikana ja NFATc1:n kohdunulkoinen ilmentyminen aiheuttaa esiastesolujen erilaistumisen ohittaen RANKL-signaloinnin, mikä viittaa siihen, että NFATc1:llä on kriittinen rooli osteoklastin erilaistumisessa (Takayanagi et ai., 2002). Tutkimuksemme tulokset osoittivat CDP: n tukahduttavan vaikutuksen(Cistanche deserticola -polysakkaridi)NFATc1:n ilmentymisestä ja sen seuraavasta proteiinista CTSK. Mielenkiintoista on, että havaitsimme, että NFATc1: n proteiinin ilmentymistaso nousi ensin ja laski sitten saavuttaen korkeimman tason 5. päivänä RANKL-stimulaation jälkeen. (2014), jotka havaitsivat M-CSF:n aiheuttaman NFATc1:n hajoamisen myöhäisvaiheen osteoklastogeneesin aikana NFATc1:n Cbl:n aiheuttaman ubikitinaation kautta Src-kinaasiriippuvaisella tavalla. Immunofluoresenssimääritysten tulokset tukivat johdonmukaisesti CDP:n estävää vaikutusta(Cistanche deserticola -polysakkaridi)NFATc1-transkription aktivoinnissa. Lisäksi CDP tukahdutti osteoklastispesifiset geenit, mukaan lukien CTSK, Acp5, Mmp9 ja Atp6v0d2, joita kaikkia säätelee NFATc1 suoraan (Y. Kim et ai., 2005). Nämä havainnot osoittavat, että NFATc1 on CDP:n estävän vaikutuksen kohde(Cistanche deserticola -polysakkaridi)NF-κB- ja MAPK-signalointireiteillä.

Cistanche deserticola -polysakkaridi

5. Päätelmät

Yhteenvetona voidaan todeta, että uutimme ja puhdistimme aktiivisen polysakkaridin CD:stä ja osoitimme, että CDP(Cistanche deserticola -polysakkaridi)sillä oli suojaava vaikutus OVX: n aiheuttamaan osteoporoosiin ja amelioroituun luukatoon tukahduttamalla osteoklastin aktiivisuutta ja toimintaa. Lisäksi CDP(Cistanche deserticola -polysakkaridi)voi estää RANKL:n aiheuttamaa osteoklastin erilaistumista ja toimintaa häiritsemällä NF-κB- ja MAPK-signalointireittejä ja siten vaikuttamalla alavirran NFATc1-aktivaatioon. Yhteenvetona voidaan todeta, että tuloksemme tarjoavat perustan CDP: n laajentamiselle ja soveltamiselle osteoporoosin hoidossa.

Viittaukset

1. Abdelmagid, S. M., Sondag, G. R., Moussa, F. M., Belcher, J. Y., Yu, B., Stinnett, H., ... Safadi, F. F. (2015). Osteoaktiivisen mutaatio edistää NFkappaB-ligandin (RANKL) välittämän osteoklastin erilaistumisen ja eloonjäämisen reseptoriaktivaattoria, mutta estää osteoklastin toimintaa. Biologisen kemian lehti, 290(33), 20128–20146. https://doi.org/10.1074/jbc.M114.624270.

2. Baek, J. M., Kim, J. Y., Cheon, Y. H., Park, S. H., Ahn, S. J., Yoon, K. H., ... Lee, M. S.(2014). erectum estää ydintekijän kappa-B-ligandin aiheuttaman osteoklastogeneesin reseptorin aktivaattoria aktivoitujen T-solujen c-Fos/ydintekijän, sytoplasmisen 1-signalointireitin kautta ja estääpolysakkaridi-aiheuttama luukato hiirillä. Molekyylit, 19(8), 11628–11644. https://doi.org/ 10,3390/molekyylejä190811628.

3. Black, D. M., Bauer, D. C., Schwartz, A. V., Cummings, S. R., &Rosen, C. J. (2012). Bisfosfonaattihoidon jatkaminenosteoporoosikenelle ja kuinka kauan? New England Journal of Medicine, 366(22), 2051–2053. https://doi.org/10.1056/ NEJMp1202623.

4. De Martinis, M., Di Benedetto, M. C., Mengoli, L. P., &Ginaldi, L. (2006). Seniiliosteoporoosi: Onko se immuunivälitteinen sairaus? Tulehdustutkimus, 55(10),399–404. https://doi.org/10.1007/s00011-006-6034-x.

5. Fuggle, N. R., Curtis, E. M., Ward, K. A., Harvey, N. C., Dennison, E. M., &Cooper, C.(2019). Murtumien ennustaminen, kuvantaminen ja seulontaosteoporoosi. Luonto tarkastelee endokrinologiaa, 15(9), 535–547. https://doi.org/10.1038/s41574-019-0220-8.

6. Hu, Y., Huang, J., Li, Y., Jiang, L., Ouyang, Y., Li, Y., ... Zeng, Q. (2020).Cistanche deserticola -polysakkaridiindusoi melanogeneesiä melanosyyteissä ja vähentää oksidatiivista stressiä aktivoimalla NRF2/HO-1-reitin. Solu- ja molekyylilääketieteen lehti, 24(7), 4023–4035. https://doi.org/10.1111/jcmm.15038.

7. Huang, H., Ryu, J., Ha, J., Chang, E. J., Kim, H. J., Kim, H. M., ... Kim, H. H. (2006). Osteoklastin erilaistuminen vaatii TAK1: n ja MKK6: n NFATc1-induktioon ja NF- kappaB-transaktivointiin RANKL: n toimesta. Solukuolema ja erilaistuminen, 13(11), 1879–1891.

8. Liu, Y., Wang, C., Wang, G., Sun, Y., Deng, Z., Chen, L., ... Xu, J. (2019). Loureirin B tukahduttaa RANKL:n aiheuttaman osteoklastogeneesin ja munasarjatosteoporoosilieventävien NFATc1- ja ROS-toimintojen kautta. Teranostiikka, 9(16), 4648–4662. https://doi. org/10.7150/thno.35414.

9. Rachner, T. D., Khosla, S., & Hofbauer, L. C. (2011).Osteoporoosi: Nyt ja tulevaisuudessa. Lansetti, 377(9773), 1276–1287. https://doi.org/10.1016/S0140-6736(10)62349-5.

10. Strom, O., Borgstrom, F., Kanis, J. A., Compston, J., Cooper, C., McCloskey, E. V., &Amp. Jonsson, B. (2011).Osteoporoosi: Taakka, terveydenhuolto ja mahdollisuudet EU:ssa: Raportti, joka on laadittu yhteistyössä Internationalin kanssaOsteoporoosiSäätiö (IOF) ja Euroopan lääketeollisuuden yhdistysten liitto (EFPIA). ArkistotOsteoporoosi, 6, 59–155. https://doi.org/10.1007/ s11657-011-0060-1.

11. A:n tunnistaminen ja karakterisointipolysakkaridiMorinda officinalisin juurista luunmuodostuksen indusoijana säätelemällä kohdegeenin ilmentymistä. Kansainvälinen biologisten makromolekyylien lehti, 133, 446–456.

12. Zhang, A., Yang, X., Li, Q., Yang, Y., Zhao, G., Wang, B., &Wu, D. (2018). Vettä uuttavan immunostimulatorisen aktiivisuuden immunostimuloiva vaikutuspolysakkariditCistanche deserticolasta kasvien adjuvanttina in vitro ja in vivo. PLoS One, 13 (1), e0191356 artikla. https://doi.org/10.1371/journal.pone.0191356.

13. Zhang, K., Ma, X., Hän, W., Li, H., Han, S., Jiang, Y., ... Tu, P. (2014). Cistanche deserticolan uutteet voivat antagonisoida immunosenesenssia ja pidentää elinikää vanhenemiskiihdytetyllä hiiren altis 8 (SAM-P8) -hiirillä. Näyttöön perustuva täydentävä ja vaihtoehtoinen lääketiede, 2014(2), 601383 artikla. https://doi.org/10.1155/2014/601383.

14. Zhang, S., Zhang, Q., Zhang, D., Wang, C., &Yan, C. (2018).Anti-osteoporoosi aromaanin ctivity Achyranthes Biden tatapolysakkaridistimuloimalla luun muodostumista. Hiilihydraattipolymeerit, 184, 288–298. https://doi.org/10.1016/j.

15. Zheng, H., He, B., Wu, T., Cai, J., &Wei, J. (2020). A:n uuttaminen, puhdistaminen ja osteoporoottinen vaikutuspolysakkaridiEpimedium Maximista. koeputkessa. Kansainvälinen biologisten makromolekyylien lehti, 156, 1135–1145. https://doi. org/10.1016/j.ijbiomac.2019.11.145.

Cistanche deserticola -lisäravinteet