OSA 2 Akteosidin ja sen johdannaisten antioksidantti ja sytosuojaus: vertailu ja mekaaninen kemia

Osa 2 Kuinka Cistanche Acteoside antioksidantti suojaa soluja?

Napsauta tästä päästäksesi osaan 1

Lisätietoja saat ottamalla yhteyttä:Joanna.jia@wecistanche.com

Cistanche deserticolalla on monia vaikutuksia, napsauta tästä saadaksesi lisätietoja

3. Keskustelu

Luonnollisten fenoliyhdisteiden hapettumisenestovaikutuksen tiedetään osallistuvan elektroninsiirtoon (ET) [18,19]. Siten joitakin ET-pohjaisia ​​metallia pelkistäviä määrityksiä on käytetty laajalti fenolien antioksidanttitasojen arvioimiseen, kuten FRAP- ja CUPRAC-määrityksiä. FRAP-määrityksen ohjeet on täytettävä, kun pH on alle 3,6. Tällainen hapan ympäristö on onnistuneesti tukahduttanut fenolien H plus ionisaation; näin ollen FRAP-määritystä pidetään pelkkänä ET-prosessina [20,21]. Tehokkuusakteosidija sen johdannaiset FRAP-määrityksessä viittaavat siihen, että kun akteosidi ja sen johdannaiset toimivat antioksidantteina, ne voivat käyttää ET-reittiä antioksidanttivaikutuksensa toteuttamiseen.

Lisäksi suoritimme myös CUPRAC-määrityksen pH 7,4 -puskurissa. Kuten näkyy Suppl. 1,akteosidija sen johdannaiset lisäsivät annosriippuvaisesti Cu-arvoaan^{2 plus}-vähentävät tehoprosentteja, mikä osoittaa, että ne voivat pysyä ET-potentiaalina fysiologisessa pH:ssa. Niiden ET-potentiaalit kuitenkin laskivat seuraavassa järjestyksessä:akteosidi> forsytosidi B > poliumosidi (taulukko 1). Tämä dynamiikka viittaa selvästi siihen, että apiosyyliosa forsytosidissa B ja ramnosyyliosa poliumosidissa alensivat ET-potentiaalia.

Tutkimukseen otettiin käyttöön happikeskeinen vapaa radikaali PTIO・ sen mahdollisuuden testaamiseksi, että ET:tä tapahtuu niiden radikaaleja poistavien prosessien aikana. Syklisen voltammetrian todisteet paljastivat, että PTIO・-puhdistus alle pH 5:n.0 on yksi elektroni-pelkistysreaktio. Havainto, ettäakteosidija sen johdannaiset voisivat tehokkaasti puhdistaa PTIO・ -radikaalin pH:ssa 4,5, viittaa ET:n mahdollisuuteen niiden radikaaleja poistavien prosessien aikana. Ilmeisesti tämä havainto tukee edelleen edellä mainittuja tuloksia FRAP- ja CUPRAC-määrityksistä ja aikaisempia tuloksia, joiden mukaan luovuttava elektroni (e) on fenolisten antioksidanttien ominaisuus [23].

Fysiologisessa pH:ssa 7,4 PTIO・-puhdistusessee ei kuitenkaan ole vain ET-reitti, vaan sisältää myös protoni- (H plus ) -siirtoreitin. Prosessin aikana PTIO・ on ehdotettu hyväksyvän H^plusfenoleista tuotehuipun tuottamiseksi ([PTIO-H]^plus). Koska H^plus-siirtoon liittyy aina ET:tä vaiheittain tai synkronisina mekanismeina [24], realistinen (tai lopullinen) tuote on [PTIO-H]-molekyyli [22]. PTIO・-puhdistus pH:ssa 7,4 (tarvike 1) tarkoittaa, ettäakteosidija sen johdannaisilla on myös H plus -siirtopotentiaali. IC50-arvot (taulukko 1) osoittivat, että suhteellinen H^plus-siirtopotentiaalit olivat laskevassa järjestyksessäakteosidi>forsytosidi B > poliumosidi. On selvää, että apiosyyli- ja ramnosyyliosat heikensivät myös H^plus-siirtopotentiaali antioksidanttiprosessin aikana.

Kuten aiemmin keskusteltiin, fenolien antioksidanttiprosessin aikana ET:hen liittyy yleensä protoni (H^plus) siirtyminen muodostaen useita antioksidanttimekanismeja [24], kuten vetyatomin siirto (HAT) [23,25-27], peräkkäinen elektroni-protonisiirto (SEPT) [26,27], peräkkäinen protonihäviö yksielektroni siirto (SPLET) [26] ja protonikytkentäinen elektronisiirto (PCET) [24-26,28]. Esimerkiksi ABTS plus • -scavenging, reaktio, jota hallitsee yhden elektronin siirto (SET) [29], on myös todistettu viime aikoina vaikuttavan H plus -tasojen [30]. ABTS plus • -scavenging on siksi monitiepohjainen antioksidanttimääritys [21,31]. Se, ettäakteosidija sen johdannaiset voivat syrjäyttää ABTS plus ・ -radikaaleja, mikä osoittaa, että niiden antioksidanttivaikutus voi myös välittyä monien eri reittien kautta. Tätä hypoteesia vahvistavat edelleen todisteet DPPH・-puhdistusmäärityksestä, reaktiosta, joka sisältää useita HAT-, ET-, SEPT- ja PCET-reittejä [26,32]. Kuitenkin kvantitatiiviseen analyysiin perustuva IC₅₀arvot (taulukko 1) paljastivat, että monireittipohjaisissa ABTS- ja --- ja DPPH*-puhdistusaspekteissa,akteosidioli parempi kuin sen sopiva forsytosidi B ja ramnosidipoliumosidi. Siten voidaan päätellä, että apioli- ja ramnosyyliosat lopulta estävät monireittipotentiaalia (erityisesti ET ja H^plus-siirto) vapaiden radikaalien poistamisprosessin aikana.

Kuten kirjoittajat ja muut ovat huomauttaneet [14,26], antioksidanttiprosessin aikana voi tapahtua myös RAF-reaktio. RAF-mahdollisuuden tarkistamiseksi tutkittiin kuitenkin kolmea fenyylipropanoidiglykosidia ja kahvihappoa käyttämällä UPLC-ESI-Q-TOF-MS/MS-analyysiä. Kofeiinihapon havaittiin tuottavan dimeerituotetta, kun taas kolme fenyylipropanoidiglykosidia ei tuottanut RAF-tuotteen huippua. Tämä havainto viittaa selvästi siihen, että kolme fenyylipropanoidiglykosidia ei voi käydä läpi RAF-reittiä antioksidanttivaikutuksensa toteuttamiseksi. Koska kolmea fenyylipropanoidiglykosidia voidaan pitää kofeiinihapon estereinä (kuva 1), tällainen ero kofeiinihapon ja kofeiinihappoesterien välillä osoittaa myös, että valtava osa voi estää RAF:n muodostumisen.

Yhdessä, vapaita radikaaleja poistavasta näkökulmasta,akteosidija sen johdannaiset voivat käydä läpi useita reittejä antioksidanttivaikutuksensa toteuttamiseksi. Nämä antioksidanttireitit ovat ainakin mukana ET:n ja H plus -siirrossa (mutta eivät RAF:ssa). Havaintojamme tukee osittain teoreettinen tutkimus, jokaakteosidivoi vaikuttaa antioksidanttisesti SPLET-reitin kautta. Prosessissa akteosidi saattaa ensin deprotonoitua (H^plus-siirto) anionin tuottamiseksi. Deprotonaation uskotaan tapahtuvan katekoliosissa, joissa on heikko happamuus. Myöhemmin anioni luovutti elektroneja synnyttäen fenoksiradikaalin [33]. Fenoksiradikaalit, joissa on pn-konjugaatio, ovat kuitenkin jossain määrin stabiileja. Tältä osin tarvitaan tietysti lisää kokeellista työtä tulevaisuudessa.

On syytä mainita, että solujen oksidatiivinen stressi voi olla peräisin myös siirtymämetalleista (erityisesti Fe^{2 plus}). The Fe^{2 plus}ioni voi kuitenkin muuttaa H₂O₂molekyyli haitallisimmiksi •OH-radikaaleiksi Fenton-reaktion kautta (Fe²plus plus H2O2 T Fe³plus plus ・OH plus OH^-). Siksi Fe:n vaimennus²plus-tasot voivat tehokkaasti estää ・OH-radikaaleja vapauttaen solujen oksidatiivista stressiä. Itse asiassa luonnollisten fenolisten antioksidanttien raudan kelatointi on nyt kehitetty tehokkaaksi terapiaksi joihinkin oksidatiivisiin stressisairauksiin [34,35].

Tässä tutkimuksessa akteosidia ja sen johdannaisia ​​ehdotettiin tehokkaaksi Fe:ksi^{2 plus}-kelaattoreita spektroskopian ja liuosvärien muutoksilla (kuva 2). Siitä huolimatta akteosidi on huonompi kuin kaksi glukosidia kelatoivassa Fe:ssä^{2 plus}ja forsytosidi B, jossa on apiosyyliosa, on huonompi kuin poliumosidi, jossa on ramnosyyliosa. Niiden ensisijaisten konformaatioiden vertailun perusteella (kuvio 1, oikealla) ehdotetaan, että apiosyyli- (tai ramnosyyli)-osa voi auttaa pääligandia (fenyylipropanoidiryhmää) kelatoimaan Fe:tä.^{2 plus}. Tällainen synergistinen vaikutus epäilemättä vahvistaa Fe:tä^{2 plus}-kelatointikyky ja suurentaa UV-vis-piikkejä. Ramnosyyli on kuitenkin tehokkaampi kuin apiosyyli sen Fe:ssä^{2 plus}-kelatointikyky. Ero johtuu siitä, että ramnosyyli esiintyy eksosyklisessä muodossa (eli aL-ramnopyranosyyli), kun taas apiosyyli on pentasyklisessä muodossa (eli pD-apiofuransyyli). Eksosyklisen muodon tiedetään olevan suurempi ja vakaampi. Näin ollen eksosyklinen ramnosyyli on tehokkaampi verrattuna pentasykliseen apiosyyliin sen Fe:ssä^{2 plus}-kelatointikyky.

Testaaksemme, voivatko akteosidi ja sen johdannaiset poistaa ROS:n, suoritimme pyrogallolin autohapetusmäärityksen. Kuten näkyy Suppl. 1, kaikki voisivat tehokkaasti poistaa - radikaalin, tyypillisen soluissa esiintyvän ROS:n. Suhteellinen bioaktiivisuus kuitenkin laski järjestyksessä poliumosidi > forsytosidi B >akteosidi. Tämä järjestys on myös yhdensuuntainen sytoprotektiivisten vaikutusten järjestyksen kanssa (taulukko 2). Tämä havainto osoittaa, että ramnosyyliosan tai apiosyyliosan yleinen vaikutus on ROS-puhdistus- tai sytoprotektiivisten vaikutusten tehostaminen.

4. Materiaalit ja menetelmät

4.1. Kemikaalit ja eläimet

Akteosidi (CAS-numero: 61276-17-3, 97 prosenttia), forsytosidi B (CAS-numero: 81525-13-5,97 prosenttia) hankittiin BioBioPhasta (Kunming, Kiina, liite 3). Tiimimme eristi poliumosidin (CAS-numero: 94079-81-9, 97 prosenttia) perinteisestä kiinalaisesta yrtistäCallicarpa periHT Chang (lisäosa 3). DPPH・,(±)-6-hydroksyyli-2,5,7,8-tetrametyylikromaani-2-karboksyylihappo (Trolox), 2,9-dimetyyli{{ 9}},10-fenantroliini (neokuproiini), 2,4,6-tripyridyylitriatsiini (TPTZ) ja pyrogalloli ostettiin Sigma-Aldrich Shanghai Trading Co.:lta (Shanghai, Kiina). (NHq'ABTS [2,2'-atsino-bis (3-etyylibentseeni-tiatsoliini-6-sulfonihapon diammoniumsuola)] saatiin Amresco Chemical Co.:lta (Solon, OH, USA). PTIO・radikaali ostettiin TCI Development Co., Ltd:ltä (Shanghai, Kiina).Kahvihappo ostettiin National Institute for the Control of Pharmaceutical and Biological Products -instituutilta (Peking, Kiina) Dulbeccon modifioitu Eagle's medium (DMEM), fetaalinen naudan seerumi (FBS) ja trypsiini ostettiin Gibcolta (Grand Island, NY, USA) AnnexinV/propidium jodidi (PI) -määrityspakkaus ostettiin Invitrogenilta (Carlsbad, CA, USA) Kaikki muut reagenssit olivat analyyttistä laatua.

4 viikon ikäiset Sprague-Dawley-rotat (SD) saatiin Guangzhoun kiinalaisen lääketieteen yliopiston eläinkeskuksesta. Tämän kokeen protokolla suoritettiin Kiinan Guangzhoun yliopiston (hyväksyntänumero 20170306A) Institutional Animal Ethics Committeen valvonnassa.

4.2. Metallia vähentävät määritykset (FRAP& CUPRAC)

Metallia pelkistävät määritykset sisältävät Fe^{3 plus}-vähentävä tehomääritys ja Cu^{2 plus}-vähentävä tehomääritys. The Fe^{3 plus}-pelkistävän määrityksen perustivat Benzie ja Strain, ja se on virallisesti nimeltään FRAP [20]. Tämän määrityksen kokeellinen protokolla kuvattiin edellisessä raportissa [9]. Lyhyesti sanottuna FRAP-reagenssi valmistettiin juuri sekoittamalla 10 mM TPTZ, 20 mM FeCl_3,ja {{0}},25 M asetaattipuskuria suhteessa 1:1:10 pH:ssa 3,6. Testinäyte (x=4-20 L, 0,05 mg/ml) lisättiin (20 - x) 95-prosenttiseen etanoliin ja sen jälkeen 80 RL:aan FRAP-reagenssia. 30-minuutin ympäristön lämpötilassa inkuboinnin jälkeen absorbanssi mitattiin aallonpituudella 595 nm käyttämällä mikrolevylukijaa (Multiskan FC, Thermo Scientific, Shanghai, Kiina). Näytteen suhteellinen pelkistysteho laskettiin seuraavalla kaavalla:

missä_maxoli reaktioseoksen suurin absorbanssi näytteen kanssa, ja A_minon testin pienin absorbanssi. A on näytteen absorbanssi.

Cu^{2 plus}-pelkistävä teho voi myös luonnehtia antioksidanttitasoa ja siksi sitä kutsutaan nimellä CUPRAC. Tämä määritys suoritettiin aiemmin julkaistun menetelmän mukaisesti [36]. Lyhyesti, 12 RL CuSOq:n vesiliuosta (10 mmol/L), 12 RL neokuproiinin etanoliliuosta (7,5 mmol/L) ja (75 - x) RL CH:ta₃COONH₄puskuriliuosta ({{0}},1 mol/L, pH 7,5) lisättiin kuoppiin, joissa oli eri näytettä (0,05 mg/ml, 4-20 |^L). Absorbanssi 450 nm:ssä 30 minuutin kuluttua mitattiin käyttämällä edellä mainittua mikrolevylukijaa. Suhteellinen CUPRAC-teho laskettiin käyttämällä FRAP-kaavaa. A_maxoli reaktioseoksen suurin absorbanssi näytteen kanssa, ja A_minon testin pienin absorbanssi. A on näytteen absorbanssi.

4.3. PTI0・-Scavenging Assay

PTIO*-scavenging -määritykset (pH 4,5 tai pH 7,4) suoritettiin menetelmämme [16] perusteella. Lyhyesti sanottuna testinäyteliuos (x=0-20 ^L, 1 mg/ml pH-arvolle 4,5 ja {{10}},5 mg/ml pH-arvolle 7,4) lisättiin (20 — x) rl 95-prosenttista etanolia, jonka jälkeen 80 RL PTIO*-vesiliuosta. Vesipitoinen PTIO*-liuos valmistettiin käyttämällä fosfaatti-voiliuosta (0,1 mM, pH 4,5 tai pH 7,4). Seosta pidettiin 37 asteessa 2 tuntia, ja sitten absorbanssi mitattiin 560 nm:ssä käyttämällä edellä mainittua mikrolevylukijaa. PTIO*-inhibitioprosentti laskettiin seuraavasti:

jossa A aste on kontrollin absorbanssi ilman näytettä ja A on reaktioseoksen absorbanssi näytteen kanssa.

4.4. ABTSplus*- Huuhtelu ja DPPH*- Huuhtelumääritykset

ABTS*^plus-poistoaktiivisuus arvioitiin menetelmän [37] mukaisesti. ABTS plus * valmistettiin sekoittamalla 0,2 ml ABTS-diammoniumsuolaa (7,4 mmol/L) 0,2 ml:n kanssa kaliumpersulfaattia (2,6 mmol/L). Seosta pidettiin pimeässä huoneenlämmössä 12 tuntia, jotta radikaalien muodostuminen saatiin päätökseen, ennen kuin se laimennettiin tislatulla vedellä (suhteessa noin 1:20) siten, että sen absorbanssi 734 nm:ssä oli { {16}}.35 土 0.01 käyttämällä edellä mainittua mikrolevylukijaa. Huuhteluaktiivisuuden määrittämiseksi testinäyte (x=4-20 RL, 0,05 mg/ml) lisättiin (20 - x) RL:ään tislattua vettä ja sen jälkeen 80 RL:aan ABTS plus * -reagenssia ja absorbanssi 734 °C:ssa. nm mitattiin 3 minuuttia alkusekoittamisen jälkeen käyttämällä tislattua vettä nollanäytteenä.

DPPH*-radikaaleja poistava aktiivisuus määritettiin aiemmin kuvatulla tavalla [18]. Lyhyesti sanottuna 75 RL DPPH*-liuosta (0,1 rM) sekoitettiin metanoliin liuotetun näytteen ilmoitettujen pitoisuuksien kanssa (0,025 mg/ml, 5-25 RL). Seosta pidettiin huoneenlämpötilassa 30 minuuttia ja absorbanssi mitattiin aallonpituudella 519 nm käyttämällä edellä mainittua mikrolevylukijaa.

ABTS plus •-puhdistusaktiivisuuden ja DPPH*-puhdistusaktiivisuuden prosenttiosuudet laskettiin luvussa 4.3 esitetyn kaavan perusteella.

4.5. UPLC—ESI-Q-TOF—PPH:n MS/MS-analyysi* Reaktiotuotteet

Tämä menetelmä perustui aikaisempaan tutkimukseemme [25]. Akteosidin metanoliliuos sekoitettiin DPPH*-radikaalien liuokseen metanolissa moolisuhteessa 1:2, ja saatua seosta inkuboitiin 24 tuntia huoneenlämpötilassa. Tuoteseos suodatettiin sitten 0.22-Rm-suodattimen läpi ja analysoitiin käyttämällä UPLC-järjestelmää, joka oli varustettu C18-kolonnilla (2.0 mm id x 100). mm, 1,6 Rm, Phenomenex, Torrance, CA, USA). Liikkuvaa faasia käytettiin järjestelmän eluointiin ja se koostui metanolin (faasi A) ja veden (faasi B) seoksesta. Kolonni eluoitiin virtausnopeudella 0,3 ml/min seuraavalla gradienttieluointiohjelmalla: 0-10 min, 60-100 prosenttia A; 10-15 min, 100 prosenttia A. Näytteen injektiotilavuus asetettiin arvoon 1 RL eri komponenttien erottamiseksi. ESI-Q-TOF-MS/MS-analyysi suoritettiin käyttämällä Triple TOF 5600 -laitettaplusMassaspektrometri (AB SCIEX, Framingham, MA, USA) varustettu ESI-lähteellä, joka ajettiin negatiivisessa ionisaatiotilassa. Skannausalueeksi asetettiin 100-2000 Da. Järjestelmää ajettiin seuraavilla parametreilla: ionisuihkujännite, -4500 V; ionilähdelämmitin, 550 astetta C; verhokaasu (CUR, N2), 30 psi; sumutuskaasu (GS1, ilma), 50 psi; Ti kaasu (GS2, ilma), 50 psi. Eroamispotentiaaliksi (DP) asetettiin -100 V, kun taas törmäysenergiaksi (CE) asetettiin -40 V törmäysenergian leviämisen (CES) ollessa 20 V. RAF-tuotteet

kvantifioitiin uuttamalla vastaava molekyylikaava kokonaisionikromatogrammista (lisäosa 2).

Edellä mainittu koe toistettiin käyttämällä forsytosidi B:tä, podium-puolta ja kahvihappoa. Vastaavam/zpiikit uutettiin vastaavasta molekyylikaavasta kokonaisionikromatogrammista (lisäosa 2).

4.6. UV-Vis-Spectra Analysis of Fe^{2 plus}- Kelatointituotteet

The Fe^{2 plus}- akteosidi-Fe:n kelatoivat reaktiotuotteet^{2 plus}arvioitiin käyttämällä UV-Vis-spektroskopiaa [13]. Koetta varten 300 ui akteosidin metanoliliuosta (0,24 mM) lisättiin 700 rl:aan FeCl?:n vesiliuosta. 4H20 (168 mM). Liuosta sekoitettiin sitten voimakkaasti. Sen jälkeen saatu seos skannattiin UV-Vis-spektrofotometrillä tunnin kuluttua (Unico 2600A, Shanghai, Kiina) 200-850 nm:stä.

Edellä mainittu koe toistettiin käyttämällä forsytosidi B:tä tai podium-puolta akteosidin sijasta.

4.7. Pyrogallolin itsehapetusmääritys superoksidianionille (•O2~) Huuhtelu

Superoksidianionin (・.{0}}) puhdistusaktiivisuuden mittaus perustui menetelmäämme [17]. Lyhyesti sanottuna näyte liuotettiin etanoliin pitoisuudella 1 mg/ml. Näyteliuos (x rL) sekoitettiin Tris-HCl-puskurin (980 - x rL, 0,05 M, pH 7,4) kanssa, joka sisälsi EDTA:ta (1 mM). Kun 20 RL pyrogallolia (60 mM 1 mM HCl:ssa) lisättiin, seosta ravisteltiin välittömästi huoneenlämpötilassa. Seoksen absorbanssi aallonpituudella 325 nm mitattiin (Unico 2100, Shanghai, Kiina) Tris-HCl-puskuria vastaan ​​nollanäytteenä 30 sekunnin välein 5 minuutin ajan. - Huuhtelukyky laskettiin seuraavasti:

4.8. Sytoprotektiivinen vaikutus oksidatiivisesti stressaantuneisiin bmMSC:ihin (MTT-määritys)

BmMSC:itä viljeltiin aiempien raporttiemme mukaisesti [38] pienin muutoksin. Lyhyesti sanottuna luuydin saatiin rotan reisi- ja sääriluusta. Ydinnäytteet laimennettiin DMEM:llä (low glucose), joka sisälsi 1 0 prosenttia FBS:ää. BmMSC:t valmistettiin gradienttisentrifugoinnilla 900 g:ssä 30 minuutin ajan 1,073 g/ml Percoll:lla. Valmistetut solut irrotettiin käsittelemällä 0,25-prosenttisella trypsiinillä ja siirrettiin viljelypulloihin 1 x 104/cm². BmMSC:t siirrostuksessa 3 arvioitiin viljeltyjen solujen homogeenisuuden suhteen käyttämällä CD44:n havaitsemista MTT-määrityksellä [39].

MTT-määritystä käytettiin arvioimaan akteosidin ja sen johdannaisten sytoprotektiivista vaikutusta bmMSC:itä kohtaan [40]. Vahinkomalli perustettiin edellisen tutkimuksen [41] perusteella. Kokeellinen protokolla on kuvattu lyhyesti kuvassa 3.

4.9. Tilastollinen analyysi

Jokainen koe osioissa 4.2-4.4 ja 4.7 suoritettiin kolmena rinnakkaisena ja MTT-määrityskoe suoritettiin viisinäytteenä. Tiedot kirjattiin keskiarvona土SD (standardipoikkeama). Annos-vastekäyrät piirrettiin käyttämällä Origin 6.0 ammattiohjelmistoa (OriginLab, Northampton, MA, USA). IC50-arvo määriteltiin 50 prosentin radikaalin eston lopulliseksi konsentraatioksi (suhteellinen pelkistysvoima) [42]. Tilastolliset vertailut tehtiin yksisuuntaisella ANOVAlla merkittävien erojen havaitsemiseksi käyttämällä SPSS 13.0:aa (SPSS Inc., Chicago, IL, USA) Windowsille.p< 0,05 katsottiin tilastollisesti merkitseväksi.

5. Johtopäätökset

Kolme luonnollista fenyylipropanoidiglykosidia, nimittäin akteosidi, forsytosidi B ja podiumpuoli, voivat olla mukana useissa reiteissä antioksidanttivaikutuksen aikaansaamiseksi, mukaan lukien ET, H plus -siirto; ja Fe^{2 plus}-kelatointi, mutta ei RAF. ET ja H^plus- ramnosyyliosa tai apiosyyliosa voi estää siirtoreittejä; kuitenkin Fe^{2 plus}-kelatointireittiä voidaan tehostaa sokeritähteillä (erityisesti ramnosyyliryhmällä). Ramnosyyliosan tai apiosyyliosan yleinen vaikutus on tehostaa useisiin reitteihin liittyvää ROS-poistokykyä. Siten forsytosidi B ja poliumosidi ovat parempia kuin akteosidi sytoprotektiivisissa vaikutuksissa.

Täydentävät materiaalit:Täydentävät materiaalit ovat saatavilla verkossa. 1. Annos-vastekäyrät; 2. HPLC-MS-spektrit; 3. Akteosidin, forsytosidi B:n ja poliumosidin analyysitodistukset.

Kiitokset:Tätä työtä ovat tukeneet Kiinan kansallinen tiedesäätiö (81573558, 81603269), Guangdongin tiede- ja teknologiaprojekti (2017A050506043) ja Guangdongin maakunnan luonnontieteellinen säätiö (2 017A030312009, 2015A0303104).

Tekijän panokset:Xian Li ja Dongfeng Chen suunnittelivat ja suunnittelivat kokeet; Aichi Wu valmistettu poliumosidi; Yulu Xie, Qian Guo ja Penghui Xue suorittivat antioksidanttikokeita; Ke Li ja Wei Zhao suorittivat MTT-kokeita; Hong Xie analysoi tiedot; Jiasong Guo suoritti kokeen oi Kuva 2D; Xian Li kirjoitti paperin. Kaikki kirjoittajat lukivat ja hyväksyivät lopullisen käsikirjoituksen.

Eturistiriitoja:Kirjoittajat ilmoittavat, että ne eivät ole eturistiriitoja.

akteosidisisääncistanche

A lyhenteet

ABTS plus • 2,2'-atsinobis (3-etyylibentsotiatsoliini-6-sulfonihappo) -radikaali

bmMSC:n luuytimestä peräisin olevat mesenkymaaliset kantasolut

CUPRAC kuparia vähentävä antioksidanttikapasiteetti

dAMP 2'-deoksiadenosiini-5'-monofosfaattiradikaali

DMEM Dulbeccon muunneltu Eagle's medium

dGMP 2^/-deoksiguanosiini-5'-monofosfaattiradikaali

DPPHe 1,1-difenyyli-2-pikryylihydratsiiniradikaali

ET elektronien siirto; FBS: Naudan sikiön seerumi

FRAP rauta-ioni vähentää hapettumisenestoaine tehoa;

HAT vetyatomin siirto

MTT 3-(4,5-dimetyylitiatsol-2-yyli)-2,5-difenyyli

PCET-protonikytkentäinen elektronien siirto

PTIOe 2-fenyyli-4,4,5,5-tetrametyyli-imidatsoliini-1-oksyyli3-oksidiradikaali

RAF-radikaaliadduktin muodostuminen

ROS-reaktiiviset happilajit

SCNT somaattisten solujen tuman siirto

SEPT peräkkäinen elektroni-protoni siirto

SPLET peräkkäinen protonihäviö yhden elektronin siirto

TPTZ 2,4,6-tripyridyylitriatsiini

Trolox (±)-6-hydroksyyli-2,5,7,8-tetrametyylikromaani-2-karboksyylihappo

Viitteet

1. Kubica, P.; Szopa, A.; Ekiert, H. Verbaskosidin ja fenolihappojen tuotanto eri in vitro -olosuhteissa viljellyn Verbena Officinalis L. (vervain) biomassassa. Nat. Tuot. Res. 2017, 31, 1663-1668.

2. Lee, JH; Chun, JL; Kim, KJ; Kim, EY; Kim, DH; Lee, BM; Han, KW; Park, KS; Lee, KB; Kim, MK Akteosidin vaikutus solusuojana kloonatun koiran tuottamiseen. PLoS ONE 2016,11, e0159330.

3. Wang, pääkonttori; Xu, YX; Yang, J.; Zhao, XY; aurinko, XB; Zhang, YP; Guo, JC; Zhu, CQ Acteoside Suojaa ihmisen neuroblastooma SH-SY5Y -soluja |3-amyloidin aiheuttamalta soluvauriolta. Brain Res. 2009,1283,139-147.

4. Yang, JH; Yan, Y.; Liu, HB; Wang, JH; Hu, JP Acteosidin suojaavat vaikutukset röntgensäteilyn aiheuttamia vaurioita vastaan ​​ihmisen ihon fibroblasteissa. Mol. Med. Tasavalta 2015, 12, 2301-2306.

5. Liu, CH; Liu, TS; Luo, CQ; Zhang, J.; Zeng, XY; Cui, L.; Xie, LJ Forsytiasidi B:n ja poliumosidin määritys eri alkuperästä ja osista Callicarpa kwangtungensis -bakteerista. Zhongguo Zhong Yao Za Zhi 2013, 38, 3324-3326.

6. Jiang, WL; Tian, ​​JW; Fu, FH; Zhu, HB; Hou, J. Forsytosidi B:n neuroprotektiivinen tehokkuus ja terapeuttinen ikkuna: Ina Rat -malli aivoiskemiasta ja reperfuusiovauriosta. euroa J. Pharmacol. 2010, 640, 75-81.

7. Pan, N.; Hori, H. Acteosidin ja sen analogien antioksidanttivaikutus lipidiperoksidaatioon. Redox Rep. 1996, 2, 149-154.

8. Zheng, RL; Shi, YM; Jia, ZJ; Zhao, CY; Zhang, Q.; Tan, XR nopea DNA-radikaalien korjaus. Chem. Soc. Rev. 2010, 39, 2827-2834.

9. Li, XC; Mai, WQ; Chen, DF:n kemiallinen tutkimus myrisitriinin hydroksyyli-indusoitua DNA-vauriota ja antioksidanttimekanismia vastaan ​​suojaavasta vaikutuksesta. J. Chin. Chem. Soc. 2014, 61, 383-390.

10. Shi, YM; Wang, WF; Huang, CY; Jia, ZJ; Yao, S.; Zheng, RL Fenyylipropanoidiglykosidien ja niiden analogien aiheuttaman oksidatiivisen DNA-vaurion nopea korjaaminen. Mutagenesis 2008, 23, 19-26.

11. Jiang, Q.; Li, XC; Tian, ​​YG; Lin, QQ; Xie, H.; Lu, WB; Chi, YG; Chen, DF:n Mori Fructusin ja Mori Ramuluksen lyofilisoidut vesiuutteet suojaavat mesenkymaalisia kantasoluja eOH-käsitellyltä vauriolta: Biomääritys ja antioksidanttimekanismi. BMC-täydennys. Altern. Med. 2017, 17, 242.

12. Wang, TT; Zeng, GC; Li, XC; Zeng, HP In vitro -tutkimukset 2-substituoitujen-8-hydroksikinoliinijohdannaisten antioksidanttisesta ja suojaavasta vaikutuksesta H2O2--indusoitua oksidatiivista stressiä vastaan ​​BMSC:issä. Chem. Biol. Drug Des. 2010, 75, 214-222.

13. Liu, JJ; Li, XC; Lin, J.; Li, YR; Wang, TT; Jiang, Q.; Chen, DF Sarcandra Glabra (Caoshanhu) Suojaa mesenkymaalisia kantasoluja oksidatiiviselta stressiltä: Bioevaluation and Mechanistic Chemistry. BMC-täydennys. Altern. Med. 2016, 16, 423.

14. Li, XC; Han, L.; Li, YR; Zhang, J.; Chen, JM; Lu, WB; Zhao, XJ; Lai, YT; Chen, DF; Wei, G. Sinapiinin suojaava vaikutus hydroksyyliradikaalin aiheuttamaa mesenkymaalisten kantasolujen vaurioita vastaan ​​ja mahdolliset mekanismit. Chem. Pharm. Sonni. 2016, 64, 319-325.

15. Bertolo, A.; Capossela, S.; Frankl, G.; Baur, M.; Potzel, T.; Stoyanov, J. Oksidatiivisuus ennustaa ihmisen mesenkymaalisten kantasolujen laatua. Stem Cell Res. Siellä. 2017, 8, 3.

16. Li, XC 2-Fenyyli-4,4,5,5-Tetrametyyli-imidatsoliini-1-oksyyli3-oksidi (PTIOe) Radikaalien poisto: uusi ja yksinkertainen antioksidantti Määritys In vitro. J. Agric. Food Chem. 2017, 65, 6288-6297.

17. Li, X. Parannettu pyrogallolin itsehapetusmenetelmä: Luotettava ja halpa superoksidia poistava määritys, joka sopii kaikille antioksidanteille. J. Agric. Food Chem. 2012, 60, 6418-6424.

18. Li, XC; Jiang, Q.; Wang, TT; Liu, JJ; Chen, DF. Kversitriinin ja isokersitriinin antioksidanttisten vaikutusten vertailu: 6〃-OH-ryhmän roolin ymmärtäminen. Molecules 2016, 21,1246.

19. Leopoldini, M.; Marino, T.; Russo, N.; Toscano, M. Fenoliyhdisteiden antioksidanttiominaisuudet: H-atomi vs. elektronien siirtomekanismi. J. Phys. Chem. A 2004,108, 4916^922.

20. Benzie, IFF; Strain, JJ Plasman rautaa vähentävä kyky (FRAP) "antioksidanttivoiman" mittana: FRAP-määritys. Anaali. Biochem. 1996, 239, 70-76.

21. Gulcin, I. Elintarvikkeiden aineosien antioksidanttiaktiivisuus: yleiskatsaus. Kaari. Toxicol. 2012, 86, 345-391.

22. Goldstein, S.; Russo, A.; Samuni, A. PTIO:n ja karboksi-PTIO:n reaktiot ・NO:n, ・NO2:n ja O2:n kanssa. J. Biol. Chem. 2003, 278, 50949-50955.

23. Li, X.; Han, WJ; Mai, WQ; Wang, L. Tetrahydroamentoflavonin antioksidanttiaktiivisuus ja mekanismi in vitro. Nat. Tuot. Commun. 2013, 8, 787-789.

24. Zhang, HY; Wu, W.; Mo, YR Tutkimus protonikytkentäisestä elektroninsiirrosta (PCET), jossa on neljä eksplisiittistä diabaattista tilaa ab initio -tasolla. Comput. Theor. Chem. 2017, 1116, 50-58.

25. Lin, J.; Li, XC; Chen, L.; Lu, WZ; Chen, XW; Han, L.; Chen, DF Suojaava vaikutus hydroksyyliradikaalin aiheuttamaa DNA-vauriota vastaan ​​ja [6]-gingerolin antioksidanttimekanismi: kemiallinen tutkimus. Sonni. Korean Chem. Soc. 2014, 35, 1633-1638.

26. Iuga, C.; Alvarez-Idaboy, JR; Russo, N. Trans-Resveratrolin antioksidanttiaktiivisuus kohti hydroksyyli- ja hydroperoksyyliradikaaleja: kvanttikemiallinen ja laskennallinen kinetiikkatutkimus. J. Org. Chem. 2012, 77, 3868-3877. [CrossRef] [PubMed]

27. Li, XC; Hu, QP; Jiang, SX; Li, F.; Lin, J.; Han, L.; Hong, YL; Lu, WB; Gao, YX; Chen, DF Flos Chrysanthemi Indici Suojaa hydroksyylin aiheuttamilta DNA- ja MSC-vaurioilta antioksidanttimekanismin kautta. J. Saudi Chem. Soc. 2015, 19, 454-460.

28. Amic, A.; Markovic, Z.; Markovic, JMD; Stepanic, V.; Lucic, B.; Amic, D. Kohti flavonoidien vapaiden radikaalien sieppausvoiman parempaa ennustamista: Double PCET -mekanismien merkitys. Food Chem. 2014, 152, 578-585.

29. Lee, CH; Yoon, JY 2,2'-ja-bis(3-etyylibentsotiatsoliini-6-sulfonaatin) (ABTS) suora UV-fotolyysi vesiliuoksessa: kinetiikka ja mekanismi. J. Photochem. Photobiol. A 2008, 197, 232-238.

30. Aliaga, C.; Lissi, EA 2,2'-atsinobis(3-etyylibentsotiatsoliini-6-sulfonihaposta (ABTS) johdettujen radikaalien reaktio hydroperoksideilla. Kinetics and Mechanism. Int. J. Chem. Kinet. 1998, 30, { {8}}.

31. Osman, AM; Wong, KKY; Fernyhough, A. ABTS Polyfenolien radikaaliohjattu hapetus: Kovalenttisten additioiden eristäminen ja rakenteellinen selvitys. Biochem. Biophys. Res. Commun. 2006, 346, 321-329.

32. Osman, AM Useita 2,2-difenyyli-1--pikryylihydratsyyliradikaalin (DPPHe) reaktiopolkuja (plus )-katekiinin kanssa: todiste kovalenttisen adduktin muodostumisesta DPPHe:n ja hapettuneen muodon välillä polyfenolista. Biochem. Biophys. Res. Commun. 2011, 412, 473-478.

33. Lopez-Munguia, A.; Hernandez-Romero, Y.; Pedraza-Chaverri, J.; Miranda-Molina, A.; Regla, I.; Martinez, A.; Castillo, E. Fenyylipropanoidiglykosidianalogit: entsymaattinen synteesi, antioksidanttiaktiivisuus ja teoreettinen tutkimus niiden vapaiden radikaalien poistajamekanismista. PLoS ONE 2011, 6, e20115.

34. Perron, NR; Brumaghim, JL Katsaus raudan sitoutumiseen liittyvien polyfenoliyhdisteiden antioksidanttimekanismeihin. Cell Biochem. Biophys. 2009, 53, 75-100.

35. Devos, D.; Moreau, C.; Devedjian, JC; Kluza, J.; Perrault, M.; Laloux, C.; Jonneaux, A.; Ryckewaert, G.; Garcon, G.; Rouaix, N.; et ai. Kelatoituvan raudan kohdistaminen terapeuttisena menetelmänä Parkinsonin taudissa. Antioksidi. Redox-signaali. 2014, 21, 195-210.

36. Cekic, SD; Baskan, KS; Totem, E.; Apak, R. Modified Cupric Reducing Antioxidant Capacity (CUPRAC) -määritys tiolia sisältävien proteiinien antioksidanttikapasiteetin mittaamiseksi polyfenolien kanssa. Talanta 2009, 79, 344-351.

37. Li, XC; Chen, DF; Mai, Y.; Wen, B.; Wang, XZ In vitro antioksidanttiaktiivisuuden ja Radix Astragalin (Huangqi) kemiallisten komponenttien välinen vastaavuus. Nat. Tuot. Res. 2012, 26, 1050-1053.

38. Chen, DF; Li, XC; Xu, ZW; Liu, XB; Du, SH; Li, H.; Zhou, JH; Zeng, HP; Hua, ZC Heksadekaanihappo Buzhong Yiqi Decoctionin aiheuttamasta luuytimen mesenkymaalisten kantasolujen lisääntymisestä. J. Med. Ruoka 2010, 13, 967-975.

39. Li, X.; Liu, JJ; Lin, J.; Wang, TT; Huang, JY; Lin, YQ; Chen, DF Dihydromyrisetiinin suojaavat vaikutukset »OH:n aiheuttamaa mesenkymaalisten kantasolujen vaurioita ja mekaanista kemiaa vastaan. Molekyylit 2016, 21, 604.

40. Wang, GR; Li, XC; Zeng, HP Synthesis, (E)-9-p-tolyyli-3-2-(8-hydroksikinol- 2-yyli)vinyylikarbatsolin ja (E){{8:n antioksidanttiaktiivisuus }}(p-anisyyli)-3-2-(8-hydroksikinol-2-yyli)vinyylikarbatsoli ja niiden mesenkymaalisten kantasolujen lisääntyminen. Acta Chim. Synti. 2009, 67, 974-982.

41. Li, X.; Wei, G.; Wang, X.; Liu, D.; Deng, R.; Li, H.; Zhou, J.; Li, Y.; Zeng, H.; Chen, D. Shh-polun kohdentaminen atractylenolidien avulla edistää mesenkymaalisten kantasolujen kondrogeenista erilaistumista. Biol. Pharm. Sonni. 2012, 35, 1328-1335.

42. Li, XC; Gao, YX; Li, F.; Liang, AF; Xu, ZM; Bai, Y.; Mai, WQ; Han, L.; Chen, DF Maclurin suojaa hydroksyyliradikaalin aiheuttamilta mesenkymaalisten kantasolujen vaurioilta: Antioksidanttien arviointi ja mekanistinen näkemys. Chem. Biol. Ole vuorovaikutuksessa. 2014, 219, 221-228.

Näytteen saatavuus: Näyte polyumosidiyhdisteestä on saatavilla kirjoittajilta.

© 2018 tekijöiltä. Lisenssin haltija MDPI, Basel, Sveitsi. Tämä artikkeli on avoimen pääsyn artikkeli, jota jaetaan Creative Commons Attribution (CC BY) -lisenssin (http:ZZcreativecommons.org/licenses/byZ4.0Z) ehtojen ja ehtojen mukaisesti.