OSA 1 Herba Cistanchen vesipitoiset uutteet lisäsivät suoliston liikkuvuutta loperamidin aiheuttamissa ummetusrotissa parantamalla Cajalin interstitiaalisia soluja

Shuai Yan, 1,2 Yin-zi Yue, 1 Xiao-peng Wang, 1 Hong-li Dong, 1 Shu-guang Zhen, 1 Ben-sheng Wu, 1 ja Hai-hua Qian3

1 Suzhoun sairaalaPerinteinen kiinalainen lääke,Suzhou, Jiangsu 215009, Kiina

2Nanjingin yliopistoperinteinen kiinalainen lääke, Nanjing, Jiangsu 210023, Kiina

3 Anorektaalikirurgian osasto, Jiangsun maakunnan sairaalaperinteinen kiinalainen lääke, Nanjing, Jiangsu 210029, Kiina

Correspondence should be addressed to Hai-Hua Qian; haihuaqian@126.com

Vastaanotettu 24. toukokuuta 2017; Tarkistettu 5. lokakuuta 2017; Hyväksytty 25. lokakuuta 2017; Julkaistu 28. joulukuuta 2017

Akateeminen toimittaja: Samra Bashir

Copyright © 2017 Shuai Yan et al. Tämä on Creative Commons Attribution License -lisenssin alaisena jaettu avoimen pääsyn artikkeli, joka sallii rajoittamattoman käytön, jakelun ja jäljentämisen missä tahansa välineessä edellyttäen, että alkuperäiseen teokseen viitataan asianmukaisesti.

Perinteinen kiinalainen lääkeon raportoitu olevan hyviä vaikutuksia toiminnallisen ummetuksen hoidossa. Tässä työssä yritettiin todistaa Herba Cistanchen (AEHC) vesiuutteiden vaikutukset STC-käsittelyyn ja määrittää mahdolliset mekanismit loperamidin aiheuttaman hidas transit -ummetusmallin (STC) avulla. HPLC suoritettiin bioaktiivisten komponenttien tunnistamiseksi ja vahvistamiseksi AEHC:ssä. Todettiin, että AEHC heikensi STC-vasteita, jotka perustuivat lisääntyneeseen ulosteen määrään, kosteuspitoisuuteen ja suoliston läpikulkunopeuteen sekä seerumi GAS-, MTL-, SS- ja CGRP-tasoihin. Cajalin (ICC) interstitiaalisten solujen leimauksen, c-kit:n proteiini- ja mRNA-tasot nousivat myös. Samaan aikaan vain SCF:n, ligandin ofc-kit, proteiinitaso nousi. Tietojemme analyysi viittasi siihen, että AEHC voisi ilmeisesti parantaa ICC:n toimintaa PI3K:n, SCF:n ja c-kit:n sisältävän signalointireitin kautta ja parantaa paksusuolen motiliteettiindeksejä, kuten GAS, MTL, SS ja CGRP. On mielenkiintoista huomata, että AEHC näytti olevan tehokas ummetukseen, joten lisäkokeita tarvitaan tarkkojen mekanismien selvittämiseksi.

Lisätietoja saat ottamalla yhteyttä:Joanna.jia@wecistanche.com

Cistanche deserticolalla on monia vaikutuksia, napsauta tästä saadaksesi lisätietoja

1. Esittely

Ummetus on yleinen toiminnallinen maha-suolikanavan sairaus ja kansanterveysongelma, jolle on ominaista jatkuvasti vaikea, harvinainen tai epätäydellinen ulostaminen [1]. Ummetuksen esiintyvyys vaihtelee 0,7 prosentista 81 prosenttiin ympäri maailmaa, erityisesti vanhuksilla [2, 3]. Hidas kulku ummetus (STC) on yleinen maha-suolikanavan vaiva 13–37 prosentilla potilaista, joilla on krooninen hoitoresistentti ummetus [4, 5]. Epidemiologiset tiedot osoittavat suuremman ilmaantuvuudenSTCnuorten naisten keskuudessa kuin miesten [6].STCaiheuttaa vaikeasti hoidettavaa ummetusta, mikä osoittaa vain vähän vastetta konservatiiviseen hoitoon ja taipumusta hermostoa rappeutuviin häiriöihin. Ei niin yksinkertaista kuin toiminnallinen sairaus, se vaatii invasiivista ja aggressiivista hoitoa [7].

Useita nykyisiä kemiallisia lääkkeitä, kuten osmoottisia tai erittäviä laksatiiveja ja täyteaineita käytetään yleisesti

ummetuksen hoitoon [8], vaikka niiden käyttö on rajoitettua korkeiden kulujen ja vatsan sivuvaikutusten, kuten kivun, kouristuksen ja turvotuksen, vuoksi [9]. Tällä hetkellä maha-suolikanavan säätely on ummetushoitojen pääpaino. Sisapridi luotiin ensin edistävänä aineena mahalaukun sairauksien hoitoon, mutta myöhemmin se poistettiin käytöstä sydämen rytmihäiriöiden riskin vuoksi [10].

Tegaserod on selektiivinen 5-hydroksitryptamiinireseptorin antagonisti, joka voi stimuloida suoliston peristaltiaa ja eritystä [11, 12]. Prukalopridi on uusi dihydrobentsofuraanikarboksamidijohdannainen ja 5-HT-reseptoriagonisti, jolla on korkea selektiivisyys ja spesifisyys ja joka voi tehostaa mahalaukun, ohutsuolen ja paksusuolen motiliteettia ja toimii nopeammin dynamiikassa [13–15]. Prostaglandiini E1 -johdannaisena lubiprostoni voi selektiivisesti aktivoida CIC-kanavaa edistääkseen maha-suolikanavan eritystä ja lisätäkseen suoliston leviämisen vaikutuksia [16].

Cistanchesillä on tonisoiva vaikutusmunuainenja voi myös parantaaummetus

Ummetuksen liikkuvuus on laajalle levinnyt ongelma, mutta sen etiologia ei ole vielä selvä. Vakuuttava näyttö on kuitenkin osoittanut Cajalin (ICC) interstitiaalisten solujen osuuden ummetuksen patogeneesissä [17]. ICC:tä löytyy ruuansulatuskanavan hermopäätteiden ja sileän lihassolun väliltä. ICC tunnetaan yleisesti tahdistimen soluina ruoansulatuskanavan toiminnan kannalta ja hermo-lihasvälittäjänä [18]. Tutkimukset ovat osoittaneet, että ICC-tiheys paksusuolessa potilailla, joilla on hidas ummetus, on huomattavasti pienempi verrattuna normaaleihin potilaisiin [19]. Vastaavasti ICC:n määrän väheneminen voi johtaa hitaan aallon aktiivisuuden puutteeseen, mikä vaikuttaa supistumisvasteeseen ja indusoi hidaskulkua sairastavilla ummetuspotilailla. Tässä vaiheessa ICC:n parantaminen lääkkeiden avulla voi olla ratkaisevan tärkeää hitaan kulkeutumisen ummetuksen parantamiseksi.

Useat kasviperäiset lääkkeet ja perinteiset kiinalaiset lääkkeet ovat viime aikoina kiinnittäneet huomiota uusina terapeuttisina lääkkeinä kroonisen ummetuksen hoitoon parantuneen ulosteen tuotannon seurauksena [20, 21]. Herba Cistanche on perinteinen kasviperäinen lääke, jota käytetään kroonisen munuaissairauden, naisten hedelmättömyyden, runsaan menorragian ja impotenssin hoitoon [22, 23]. Herba Cistanche estää aivojen hermosolujen apoptoosia ilmentämällä apoptoosiin liittyviä tekijöitä ja neurotrofisia tekijöitä MES23.5-soluissa [24]. Herba Cistanche on myös osoittanut farmaseuttista potentiaalia Yang-Qi-munuais-Yang-puutosoireyhtymän hoidossa. Tuore tutkimus on osoittanut, että Herba Cistanche lisää mitokondrioiden hengitystä ja glutationin antioksidanttitasoa H9c2-kardiomyosyyteissä [25].

TCM uskoo, että ummetus liittyy läheisesti munuaisiin. Munuaiset, jotka avautuvat ulkoisiin sukuelimiin ja peräaukkoon, säätelevät virtsaamista ja ulostamista. Jätteiden kuljetus perustuu munuaisten qin edistämiseen ja munuaisten yinin ravintoon. Jos munuaisten yang on puutteellinen tai elämän portin tuli sammuu, paksusuolen kylmä tukkeutuminen johtaa jätteen pysähtymiseen. Ummetusta aiheuttaa myös kuiva suoli, koska munuaisesanssin puute ei tuota tarpeeksi nestettä [26].

HerbaCistancheon yleinen yhdistävä yrtti, joka on maultaan makea ja suolainen ja luonteeltaan lämmin. Paksusuolen ja munuaisten meridiaanin ansiosta se voi vahvistaa munuaisten yangia ja kostuttaa suolistoa ummetuksen lievittämiseksi. Tämä yksittäinen yrtti ja senKiinalainenfarmaseuttisia valmisteita on käytetty laajalti ummetuksen hoitoon huomattavan tehokkaasti [27].

Kiinassa Herban vaikutuksetCistancheummetuksen juuret on kirjattu [28, 29], ja Shen Nongin kiinalaisessa Materia Medicassa niitä kutsutaan "Cistanche-lajin kuivatuiksi meheväksi varreksi" [30]; tieteellistä näyttöä Herba Cistanchen juurten vaikutuksesta ummetukseen ei kuitenkaan ole toistaiseksi ollut olemassa, kliinisesti tehokas annos on 20 g päivässäKiinan farmakopea, ja kliininen vaikutus ei lisäänny annoksen myötä.

Koska Herba Cistanchea on niin vähän [31], sen kliinisen annoksen standardoiminen hoitoonSTCkokeellisella tutkimuksella ei ainoastaan ​​estä riittämättömästä annostuksesta johtuvaa epäonnistunutta hoitoa, vaan myös pitää potilaat loitolla taloudelliselta menetykseltä ja jopa lääkkeiden väärinkäytöltä. Toivomme

tulokset voisivat luoda tieteellisen perustan uusille ummetuslääkkeille. Siksi on tärkeää tutkia vesipitoisen Herba Cistanchen suoliston edistämistoimintoa ja sen vaikutusta ICC:hen tässä tutkimuksessa.

Cistanchevoi parantaaummetus

2. Materiaalit ja metodit

2.1. Herba Cistanchen vesiuutteen valmistus.

Kaikki Herba Cistanchet ostettiin Nanjing Haichang Chinese Medicine Group Co., Ltd:ltä (Nanjing, Kiina), jotka korjattiin, kerättiin ja prosessoitiin standardinmukaisten etnobotanisten käytäntöjen mukaisesti Kiinan Sinkiangin alueen viljelmiltä. Kasvin identiteetin varmisti morfologisesti professori Tu Lin Lu Nanjingin kiinalaisen lääketieteen yliopistosta Nanjingista Kiinasta. Lahjakorttinäyte (NUCMCHS-2015628) talletettiin terveystieteiden korkeakouluun, Nanjingin kiinalaisen lääketieteen yliopistoon, Nanjingiin, Kiinaan.

Herba Cistanchen viipaleet, painoivat 500 g, jauhettiin sähkösekoittimella ja uutettiin 5000 ml:aan tislattua vettä, minkä jälkeen vesipitoista uutetta puhdistettiin 100 C:ssa 2 tuntia kierrätysuuttolaitteistolla.

kalvohuokos (Millipore, Billerica, MA, USA), ja uutteista saatu jäännös liuotettiin 4000 ml:aan vettä. Refluksoinnin jälkeen uutteet kerättiin ja haihdutettiin lopullisen näytetuotteen saamiseksi. Vesipitoiset uutteet konsentroitiin kuiviksi pelleteiksi (1 g/ml) käyttämällä a

myöhempää käyttöä varten. Kiinteät näytteet rekonstituoitiin tislattuun veteen, jotta saatiin kokeeseen tarvittavat annokset 10, 20 ja 40 mg/kg ruumiinpainoa.

2.2. Eläimet.

Suzhoun sairaala tarkasteli ja hyväksyi tässä tutkimuksessa käytetyn kokeellisen protokollan eettisten menettelytapojen ja tieteellisen hoidon perusteella.perinteinen kiinalainen lääke-Institutional Animal Care and Use Committee, Suzhou, Kiina (SHTCM-IACUC; hyväksyntänumero: PNU- 2016-0003). Kaikki urosrotat (Sprague Dawley -kanta), joissa oli ag, ostettiin Shanghai Laboratory Animal Research Centeristä National Institutes of Healthin ohjeiden mukaisesti. Eläimillä oli vapaa pääsy tavanomaiseen ruokavalioon (AIN-93 M) ja vesijohtoveteen ad libitum, ja niitä pidettiin yksitellen ruostumattoman teräksen suhteellisessa kosteudessa ja altistettiin 12 h luonnonvalolle ja 12 h pimeydelle päivittäin.

2.3 Kokeellinen suunnittelu.

Loperamidia käytettiin ummetuksen aiheuttamiseen rotilla aikaisempien tutkimusten mukaisesti [32, 33]. Yhteensä 60 rottaa jaettiin satunnaisesti 5 ryhmään (ryhmää kohden): A: normaali ryhmä (NG), B: malliryhmä (Lop plus vehikkelillä käsitelty ryhmä), C: ryhmä ummetusrottia, joita käsiteltiin alhaisella vesipitoisella uutteella Herba Cistanche (Lop plus LAEHC-käsitelty ryhmä), D: ryhmä ummetusrottia, joita on käsitelty Herba Cistanchen keskimääräisellä vesipitoisella uutteella (Lop plus MAEHC-käsitelty ryhmä), ja E: ryhmä ummetusrottia, joita on käsitelty korkealla vesipitoisella Herba-uutteella Cistanche (Lop plus HAEHC-käsitelty ryhmä). Ryhmää A käsiteltiin normaalilla suolaliuoksella (10 ml/kg); Ryhmää B käsiteltiin loperamidilla

(4 mg/kg); Ryhmää C käsiteltiin loperamidilla (4 mg/kg) ja vähävesipitoisella Herba Cistanchen uutteella (1 g/kg); Ryhmää D käsiteltiin loperamidilla (4 mg/kg) ja Herba Cistanchen keskimääräisellä vesiuutteella (2 g/kg) ja ryhmää E käsiteltiin loperamidilla (4 mg/kg) ja Herba Cistanchen runsasvesiuutteella (4 g/kg) kg). Kaikille normaaliryhmän rotille injektoitiin 0,9-prosenttista natriumkloridia, kun taas muille injektoitiin loperamidia 0,9-prosenttisessa natriumkloridissa kahdesti päivässä kolmena peräkkäisenä päivänä ummetuksen aiheuttamiseksi. Herba Cistanchen vesiuute suspendoitiin veteen ja annettiin suun kautta kerran päivässä päivästä 4 päivään 18 ryhmässä C, ryhmässä D ja ryhmässä E, kun taas ryhmät A ja B saivat johdonmukaisen määrän vettä letkun kautta.

2.4. Kromatografinen kunto.

HPLC-profilointi suoritettiin Shimadzu Liquid Chromatographic Systemissä (Tokio, Japani), joka koostui LC-20AT-pumpusta ja

tarkkailtiin aallonpituudella 330 nm 30 C:ssa. Isokraattinen liikkuva faasi koostui metanolista 0,1 % muurahaishaposta (80 : 20, v/v) ja juoksi virtausnopeudella 1,0 ml/min . Kromatografinen erotus oli

hiukkaskoko 5 m, Beijing Dikma Science and Technology Co., Ltd., Peking, Kiina).

2.5. Harjoittelun, ruoan saannin, veden saannin ja kehon analyysi

Peltokumia (vesipitoinen suspensio, jossa oli 20 prosenttia puuhiiltä ja 10 prosenttia peltokumia) annettiin suun kautta 25 ml/kg kullekin eläimelle. 30 minuutin kuluttua eläimet lopetettiin inhimillisesti siirtämällä kaula dislokaatioon ja leikattiin. Ohutsuolet pyloruksesta umpisuoleen ajettiin läpi ja hiilijauhon kulkema etäisyys ja ohutsuolen kokonaispituus mitattiin. Yksittäiselle rotalle suoliston läpikulkuprosentti laskettiin hiilijauhon kulkeman matkan prosenttiosuutena suhteessa ohutsuolen kokonaispituuteen. Seuraava yhtälö laskee suolen läpikulkunopeuden (prosentti): hiilen kulkema matka / etäisyys pyloruksesta umpisuoleen 100 prosenttia.

2.6. Verinäytteen ja kudosten kerääminen. Koejakson lopussa rotille annettiin 12 tunnin paasto, mutta niille annettiin vapaa pääsy veteen. Kaikki rotat nukutettiin sitten 30 minuuttia myöhemmin natriumpentobarbitaalin (50 mg/kg) intraperitoneaalisella injektiolla ja asetettiin lämpötilasäädellylle pöydälle. Verinäytteet kerättiin ja sentrifugoitiin nopeudella 3500 rpm 15 minuuttia seerumin saamiseksi. Paksusuoli jaettiin välittömästi ja huuhdeltiin normaalilla suolaliuoksella 4 °C:ssa ja jaettiin sitten kahteen osaan. Yksi fragmentti kiinnitettiin 10-prosenttisessa formaliinissa ja prosessoitiin jaetussa parafiinissa myöhempää immunohistokemiallista (IHC) analyysiä varten, kun taas toinen fragmentti oli paino ja hiukset. Muutokset liikunnassa, ravinnonsaanti, vesi

säilytettiin 80 C:ssa, kunnes ne määritettiin. saantia, ruumiinpainoa ja hiuksia tarkkailtiin ja kirjattiin päivittäin koko koejakson ajan. Havaitsimme "harjoituksen muutoksia" seuraamalla tiettyjä vaiheita: itse tehtyä laatikkoa (60 cm korkea, 50 cm pitkä ja 80 cm leveä tummalla reunaseinällä) käytetään avoimessa kentässä; valkoinen maa oli jaettu timanteiksi (12 cm) mustalla viivalla pimeässä ja hiljaisessa huoneessa; 100 W:n polttimo riippui 1 m laatikon keskikohdan yläpuolella; rotat sijoitettiin laatikon keskelle mallinnuksen 4., 6., 12. ja 18. päivänä. Neliöiden lukumäärää, jonka rotat kulkivat 5 minuutin sisällä, käytettiin vaakasuuntaisena liikepisteenä ja rottien pystysuuntaista aikaa 5 minuutin sisällä käytettiin pystysuuntaisena liikepisteenä. Vaaka- ja liikepisteet sekä pystysuuntaiset liikepisteet osoittavat rottien harjoittelun määrän. Jokainen rotta mitattiin kerran [34, 35].

Cistanchevoi lievittääummetus

2.7. Ulosteen parametrien mittaus.

Oraalisen annon viimeisenä päivänä kunkin SD-rotan tuoreet ulostepelletit kerättiin pyöreäpohjaisiin tulpallisiin putkiin 6 tunnin ajaksi, ja kunkin ryhmän kokonaispainot kirjattiin. Ulosteen kosteuspitoisuuden määrittämiseksi kuivasimme sähkövaa'alla ulostepellettejä, kunnes saavutettiin vakiopaino, ja mittasimme kuivapainon. Kosteuspitoisuus

2.8. GAS:n, MTL:n, SS:n ja CGRP:n arviointi.

Gastriinin (GAS), motiliinin (MTL), somatostatiinin (SS) ja kalsitoniinigeeniin liittyvän peptidin (CGRP) pitoisuudet seerumissa arvioitiin ELISA:lla käyttäen kaupallisesti saatavia sarjoja.

2.9. Histologinen analyysi.

SD-rotista kerätyt poikittaiskoolonit kiinnitettiin 10-prosenttisella formaliinilla 12 tunnin ajan, upotettuina

m paksuisia viipaleita, jotka värjättiin hematoksyliinilla ja eosiinilla (H&E, Sigma-Aldrich, MO, USA). Näiden leikkeiden morfologisia piirteitä tarkkailtiin valomikroskopialla, minkä jälkeen villun pituus, kryptan paksuus ja lihaksen paksuus mitattiin käyttämällä Leica Application Suitea (Leica Microsystems, Sveitsi).

2.10. Immunohistokemiallinen analyysi.

Noudatimme Zhun et al. (2016) [36]; oli värjäämättömiä 5 m:n leikkeitä

värjättiin kanin anti-c-kitillä (1:100) 4 C:ssa yön yli. Sekundaarivasta-aine- ja avidiini-biotiini-peroksidaasi-kompleksimenetelmää käytettiin valmistajan ohjeiden mukaisesti. Immunoglobuliininegatiivista kontrollia käytettiin epäspesifisen sitoutumisen eliminoimiseksi. c-kit:n ilmentymistasot

2.11. Suoliston läpikulkunopeuden analyysi.

Suoliston läpikulkusuhde suoritettiin aiemmin raportoitujen protokollien mukaisesti [36]; lyhyesti, 14 päivän hoidon jälkeen, kaikki SD-rotat paastottiin 12 tuntia, mutta niille annettiin vapaa pääsy veteen.

Reaaliaikainen polymeraasiketjureaktio. c-kit-, SCF- ja PI3K-mRNA:iden geeniekspressiotasot paksusuolessa määritettiin käyttämällä kokonais-RNA:n uuttopakkausta (TIANGEN Biotech,

Peking, Kiina) valmistajan pöytäkirjojen mukaan. Reaaliaikainen PCR suoritettiin ABI StepOnePlus Real-Time PCR Systemillä (ABI). SYBR Green I Real-Time PCR Master Mixiä (QPK201, Toyobo, Japani) käytettiin PCR-tuotteiden havaitsemiseen. Reaktiot suoritettiin kolminkertaisina ajoina. Tämän jälkeen tuore rotan paksusuolen kudos, joka painoi 0,5 g, oli homologinen.

l) uutettiin valmistajan ohjeiden mukaisesti käyttämällä TRIzol-reagenssia (Invitrogen, USA). Käänteistranskriptio-PCR-pakkausta (Takara Biotechnology Co., Inc.) käytettiin cDNA:n ensimmäisen juosteen syntetisoimiseen valmistajan protokollan mukaisesti. Kaikki kohdistetut parametrit on esitetty taulukossa 1. Kierrätysprotokolla oli seuraavissa olosuhteissa: 95 C 5 minuuttia (DNA-denaturaatio), jota seurasi 40 sykliä 95 C 15 s, 60 C 20 s ja 72 C 40 s. Sulamiskäyräanalyysi suoritettiin monistussyklien lopussa.

2.12. Western Blot -analyysi.

c-kit:n ja SCF:n proteiinipitoisuudet paksusuolennäytehomogenaateissa arvioitiin Western blot -menetelmällä. Lyhyesti sanottuna homogenaattien kokonaisproteiinit määritettiin käyttämällä bikinkoniinihappomääritystä (Pierce Biotechnology, Rockford, IL, USA). Natriumdodekyylisulfaatti-polyakryyliamidigeeliä (SDS-PAGE) käytettiin proteiinien erottamiseen BioRad-elektroforeesijärjestelmässä (BioRad Laboratories, Hercules, CA, USA). Proteiinit siirrettiin sitten polyvinylideenidifluoridi (PVDF) -kalvoille. Kahden tunnin käsittelyn jälkeen TBS:ssä, joka sisälsi 5 prosenttia rasvatonta maitoa huoneenlämpötilassa, PVDF-kalvoja inkuboitiin yön yli suhteessa 1:1000 laimennetulla anti-c-kitillä (Santa Cruz, CA, USA), suhteessa 1:500 laimennettuun anti-c-kittiin. SCF (Sigma, MO,

USA) ja 1:8000 laimennettuja anti-aktiinivasta-aineita (Kangchen, Shanghai, Kiina). Primaarisen vasta-aineen sitoutuminen havaittiin käyttämällä vastaavaa HRP-konjugoitua sekundaarista vasta-ainetta (Beyotime, Jiangsu, Kiina). Parannettua kemiluminesenssipakkausta (Pierce Biotechnology Inc., Rockford, IL, USA) ja Odyssey Infrared Imaging System -järjestelmää (Gene Company Ltd., Hongkong) käytettiin kemiluminesenssin havaitsemiseen. Kotitalousprolaktiinia käytettiin lastauksen kontrollina. Proteiinin ilmentymisen määrä esitetään suhteessa aktiinin tasoihin.

2.13. Tilastollinen analyysi.

Mittaustiedot ilmoitettiin keskiarvon keskivirheenä (SEM) ja analysoitiin SPSS:llä

16.{1}} ohjelmisto (SPSS, Chicago, IL, USA). Yksisuuntaista varianssianalyysiä (ANOVA), jota seurasi Duncanin monialuetestejä, käytettiin kaikkien parametrien merkittävien erojen määrittämiseen. Arvoja pidettiin tilastollisesti merkittävinä klo

Cistanchekeittäminen on hyvä lääke hoitoonummetus

3. Tulokset

3.1. Herba Cistanchen koostumus ja toiminnalliset komponentit.

Kuten kuvasta 1 näkyy, Herba Cistanchen juuret sisältävät suuria pitoisuuksia useita laksatiivisiin vaikutuksiin liittyviä bioaktiivisia komponentteja. Kokoekinakosidin ja verbaskosidin kokonaispitoisuudet olivat vastaavasti 0,64 mg/g ja 0,16 mg/g. Kaksi huippua, jotka osoittavat korkeita ekinakosidi- ja verbaskosiditasoja, havaittiin LP:ssä sopivalla retentioajalla korkean suorituskyvyn nestekromatografialla (HPLC).

3.2. Yleinen huomio.

SP-rotat eivät kuolleet koko kokeen aikana, mikä viittaa eläinmallin parempaan turvallisuuteen ja toimivuuteen. Verrattuna ryhmään A, malliryhmän rotilla oli pörröinen turkki, väsymys, kuiva uloste ja

mallinnusajan pidentyessä.

3.3. AEHC:n vaikutus ulosteiden määrään ja kosteuspitoisuuteen loperamidin aiheuttamilla ummetusrotilla.

Verrattuna normaaleihin ulosteisiin ryhmien B, C, D ja E ulosteet olivat kuivia, pieniä ja kovia, eikä niissä ollut kiillotusta ennen käsittelyä.

sen jälkeen, kun rotille ruiskutettiin loperamidia (lääkkeellä hoidetut ovat lieventäneet oireita kehona ja 3(b)).

paino ei eronnut merkittävästi kaikkien koeryhmien välillä, vaikka ryhmä E osoitti hieman alhaisempaa painoa kuin muut ryhmät (kuva 2(a)). Lisäksi SD-rotat, joilla oli ummetusta, söivät merkittävästi vähemmän ruokaa kuin ryhmä A ( ), kun taas erot ryhmien B, C, D ja E välillä (kuvio 2(b)) eivät olleet merkittäviä. Vedenkulutus ei myöskään muuttunut ryhmän A ja ryhmän B välillä. Lisäksi vedenkulutuksessa ei havaittu merkittävää lisäystä

että AEHC-hoito ei aiheuttanut muutoksia. Vaikka suoliston kauttakulkunopeus ryhmissä C, D, ja oli myös huomattavasti korkeampiRyhmien C, D ja E suhdeluvut olivat huomattavasti pienemmät kuin ryhmissä A.

3.4. AEHC:n vaikutus ohutsuolen läpikulkunopeuteen loperamidin aiheuttamissa ummetusrotissa.

Kuten kuviosta 4 nähdään, eroja ei havaittu lähtötason ohutsuolen läpikulkuajassa viiden ryhmän välillä. Ryhmällä B on selvästi pienempi hiilijauheen työntösuhde A-ryhmään verrattuna (𝑃 < 0.01).="" vaikka="" suoliston="" läpikulkunopeus="" ryhmissä="" c,="" d="" ja="" e="" oli="" myös="" merkittävästi="" korkeampi="" kuin="" ryhmän="" b="" (👃="">< 0,05),="" ryhmien="" c,="" d="" ja="" e="" suhdeluvut="" olivat="" merkittävästi="" alhaisemmat="" kuin="" ryhmissä="">

3.5. Interventio AEHC:n kanssa parantaa osittain paksusuolen motiliteettiindeksin toimintaa.

Ryhmän B rotista saadut GAS- ja MTL-pitoisuudet seerumissa laskivat merkittävästi verrattuna ryhmän A tasoihin (𝑃 < {0}}.01,="" vast.).="" toisaalta="" ryhmissä="" c,="" d="" ja="" e="" (𝑃="">< 0.05,="" vast.)="" on="" huomattavasti="" korkeammat="" gas-="" ja="" mtl-pitoisuudet="" herba="" cistanche="" -uutteiden="" antamisen="" seurauksena="" ryhmään="" b="" verrattuna.="" ss-arvot="" ryhmän="" b="" rotilla="" olivat="" korkeammat="" verrattuna="" ryhmään="" a="" (𝑃="">< 0,01);="" ryhmillä="" c,="" d="" ja="" e="" on="" heikentynyt="" ss-taso="" (𝑃="">< 0,05)="" (kuva="" 5).="" verrattuna="" ummetusta="" sairastaviin="" rottiin="" cgrp-tasot="" a-ryhmän="" normaaleissa="" rotissa="" (𝑃="">< 0,01)="" ja="" herba="" cistanchea="" saaneissa="" ryhmissä="" c,="" d="" ja="" e="" olivat="" vakiot="" (𝑃=""> 0,05).

3.6. Paksusuolen histologinen muutos.

Sen tutkimiseksi, voiko AEHC-hoito aiheuttaa rakenteellisia muutoksia paksusuolen kudoksessa, villun pituus, kryptakerroksen paksuus ja lihaspaksuus mitattiin rottien poikittaisista paksusuoleista viidessä ryhmässä H&E-värjäyksen jälkeen. Verrattaessa rottien paksusuolen patologiaa kussakin ryhmässä paksusuolen limakalvo oli sileä ja sisältää pieniä valtimoita ja pieniä laskimoita submukoosissa sekä suuren määrän rasvasoluja. Lisäksi lihaskerros koostui sileistä lihassoluista ja subserosa oli täydellinen. Villun keskipituus oli merkittävästi lyhyempi ryhmässä B kuin ryhmässä A (𝑃 < {0}}.01).="" kuitenkin="" ryhmän="" c="" villun="" keskipituus="" kasvoi="" huomattavasti,="" yli="" 30="" prosenttia="" verrattuna="" ryhmään="" b="" (kuvat="" 6="" ja="" 7)="" (𝑃="">< 0,05).="" samaan="" aikaan="" villun="" keskipituus="" kasvaa="" huomattavasti="" ryhmissä="" d="" ja="" e="" verrattuna="" ryhmään="" b="" (kuvat="" 6(a)="" ja="" 6(b))="" (𝑃="">< 0,01).="" lisäksi="" lihaksen="" paksuuden="" muutos="" oli="" hyvin="" samanlainen="" kuin="" villun="" pituus.="" ryhmässä="" b="" lihaksen="">

oli dramaattisesti ohuempi verrattuna ryhmään A. Kuitenkin lihaspaksuus ryhmissä C, D ja E kasvoi 30–35 prosenttia verrattuna ryhmään B (kuvat 6 ja 7). Kaiken kaikkiaan nämä havainnot osoittavat, että AEHC voi lisätä villun pituutta ja lihaksen paksuutta ummetettujen rottien paksusuolessa.

3.7. AHEC-hoidon antaminen lisäsi c-Kitin ja SCF:n proteiiniekspressiota.

Sen immunoreaktiivisuus havaittiin paksusuolessa, koska kaikkien ryhmien solut testasivat c-kit-positiivisia. Kuten kuvasta 8 näkyy, c-kit:n ilmentymistaso ryhmässä B oli alhaisempi kuin ryhmän A (𝑃 < 0.05).="" c-kit:n="" ilmentymistaso="" ryhmässä="" c="" oli="" korkeampi="" kuin="" ryhmän="" b="" (𝑃="">< 0.{{20}}5),="" kun="" taas="" c-kit="" oli="" enemmän="" ryhmissä="" d="" ja="" d="" ja="" e="" kuin="" ryhmässä="" b="" (𝑃="">< 0.05).="" kun="" oli="" käsitelty="" eri="" pitoisuuksilla="" herba="" cistanchen="" vesiuutteella="" 2="" viikon="" ajan,="" c-kit:n="" ja="" scf:n="" proteiiniekspressiotasot="" havaittiin="" western="" blot="" -analyysillä.="" western="" blot="" -analyysi="" osoitti,="" että="" c-kit-="" ja="" scf-ilmentymistasot="" olivat="" huomattavasti="" alhaisemmat="" loperamidikäsittelyn="" jälkeen="" rottien="" paksusuoleissa="" (kuvio="" 9).="" kuva="" 8(e)="" osoittaa,="" että="" vähentynyt="" c-kit="" ummetusrotilla="" kasvoi="" merkittävästi="" 31,2="" prosenttia="" sen="" jälkeen,="" kun="" rottia="" oli="" käsitelty="" 500="" µg/ml="" aehc:llä="" (𝑃="">< 0,05).="" lisäksi="" käsittely="" 100="" ja="" 200="" g/ml="" aehc:llä="" nosti="" c-kit-proteiinin="" ilmentymistasoja.="" scf-proteiinin="" ilmentyminen="" lisääntyi="" merkittävästi="" 20,1,="" 24,7="" ja="" 8,4="" prosenttia="" hoidettaessa="" 100,="" 200="" ja="" 500="" µg/ml="" aehc:tä,="" vastaavasti="" (kuva="" 9).="" 3.8.="" aehc:n="" vaikutus="" c-kitin,="" scf:n="" ja="" pi3k:n="" mrna-ilmentymiseen.="" sen="" tutkimiseksi,="" voiko="" aehc-hoito="" vaikuttaa="" lihasten="" supistukseen="" liittyvän="" mrna:n="" säätelyyn,="" muutoksia="" c-kit-,="" scf-="" ja="" pi3k-ilmentymistasoissa="" havaittiin="" ummetusta="" kärsivien="" rottien="" paksusuoleissa="" käyttämällä="" spesifisiä="" alukkeita.="" tulokset="" osoittivat,="" että="" c-kit:n="" mrna-tasot="" ryhmässä="" b="" olivat="" merkittävästi="" alhaisemmat="" verrattuna="" ryhmään="" a="" (𝑃="">< 0,05),="" kun="" taas="" mrna-tasot="" ryhmissä="" c,="" d="" ja="" e="" olivat="" korkeammat="" kuin="" ryhmässä="" b="" (𝑃="">< 0,05).="" (kuva="" 10).="" tutkimme="" myös="">

Kitin ligandin, SCF:n ilmentyminen. SCF:n mRNA:n ilmentyminen ryhmän B rotissa oli merkittävästi alhaisempi kuin ryhmässä A, kun taas AEHC-käsittely ryhmissä C, D ja E lisäsi SCF-mRNA:n ilmentymistä (kuvio 10). Lisäksi tutkimme AEHC:n vaikutusta PI3K-geenin ilmentymiseen. Päivänä 14 PI3K-geenin ilmentymistaso oli merkitsevästi korkeampi ryhmissä C, D ja E kuin ryhmässä B (𝑃 <>