Yleiskatsaus Florotaniinien aineosista Fucalesissa, osa 3

Cistanchen glykosidi voi myös lisätä SOD:n aktiivisuutta sydämen ja maksan kudoksissa ja vähentää merkittävästi lipofussiinin ja MDA:n pitoisuutta kussakin kudoksessa, poistaen tehokkaasti erilaisia ​​reaktiivisia happiradikaaleja (OH-, H₂O₂ jne.) ja suojaamalla DNA-vaurioilta. OH-radikaalien toimesta. Cistanche-fenyylietanoidiglykosideilla on vahva vapaita radikaaleja poistava kyky, suurempi pelkistyskyky kuin C-vitamiini, ne parantavat SOD:n aktiivisuutta siittiösuspensiossa, vähentävät MDA-pitoisuutta ja niillä on tietty suojaava vaikutus siittiöiden kalvon toimintaan. Cistanche-polysakkaridit voivat lisätä SOD:n ja GSH-Px:n aktiivisuutta D-galaktoosin aiheuttamien kokeellisesti vanhenevien hiirten punasoluissa ja keuhkokudoksissa sekä vähentää MDA- ja kollageenipitoisuutta keuhkoissa ja plasmassa sekä lisätä elastiinipitoisuutta. hyvä huuhteluvaikutus DPPH:lle, pidentää hypoksian aikaa vanhenevilla hiirillä, parantaa SOD:n aktiivisuutta seerumissa ja viivyttää keuhkojen fysiologista rappeutumista kokeellisesti vanhenevilla hiirillä Solumorfologisen rappeutumisen yhteydessä kokeet ovat osoittaneet, että Cistanchella on hyvä antioksidanttikyky ja sillä on potentiaalia olla lääke ihon ikääntymisen sairauksien ehkäisyyn ja hoitoon. Samaan aikaan Cistanchen ekinakosidilla on merkittävä kyky poistaa DPPH-vapaita radikaaleja ja se voi poistaa reaktiivisia happilajeja ja estää vapaiden radikaalien aiheuttaman kollageenin hajoamisen, ja sillä on myös hyvä korjaava vaikutus tymiinin vapaiden radikaalien anionivaurioihin.

Napsauta Mistä voin ostaa Cistanchea

【Lisätietoja:george.deng@wecistanche.com / WhatApp:86 13632399501】

Mitä tulee Eckoleihin, dibentsodioksiinirakenteiden läsnäolon vuoksi ne voidaan erottaa muista ryhmistä niiden deprotonoituneiden molekyyli-ionien perusteella, jotka ovat yleensä 2 Da pienempiä kuin muut PT:t, joilla on sama DP, jokaiselle rakenteessa olevalle dibentsodioksiinimotiiville (kuva 5D). Esimerkiksi eckol esittää [MH]− arvolla m/z 371, kun taas trifokaalinen, trifluoretoli ja fukofloretoli ovat kaikki [MH]− arvolla m/z 373. Se puolestaan ​​kutsuu, jonka rungossa on kaksi dibentsodioksiinirakennetta, esittävät [MH]−:n m/z:ssä 741, kun taas niiden heksameeriekvivalentit ovat [MH]−:ssa m/z:ssä 745. Sama koskee karmaloleja, jotka ovat olennaisesti halleja, jotka sisältävät dibentsodioksiinirakenteita [120]. Lopuksi, joillekin furaanirenkaita sisältäville PT:ille, kuten fukofuroekkolille ja phlorofucofuroeckolille, on ominaista dehydratoitu-deprotonoitu molekyyli-ioni, eli [MH]−, joka on 18 Da pienempi verrattuna niiden ei-furaania sisältäviin ekvivalentteihin, joilla on samat DP:t. (esim. fucofuroeckol vs. phloroeckol -rakenteet eroavat vain furaanirenkaan läsnäolon/puuttumisen suhteen ja osoittavat [MH]− m/z:ssä 496 ja 478, vastaavasti) [120]. Taulukossa 3 esitetään MS-tiedot, jotka on kerätty erilaisista tutkimuksista, jotka keskittyivät PT:iden tunnistamiseen Fucalesissa.

Vaikka nämä perusteet voivat olla hyödyllisiä pienimolekyylipainoisten PT:iden kohtuullisen rakenteellisen tunnistamisen saavuttamiseksi, suuria vaikeuksia syntyy, kun on kyse oligomeereista ja polymeereistä, joilla on suuri molekyylipaino, koska niiden isomeroituminen lisääntyy eksponentiaalisesti, ja floroglusinolijärjestelyjen ja -yhdistelmien lukuisia mahdollisuuksia voidaan tuskin hyödyntää. selvitetään MS:llä tai MS/MS:llä. Silti tällaisissa tapauksissa MS voi silti tarjota arvokasta tietoa florotaniiniseoksessa olevien yhdisteiden DP:stä. Tässä suhteessa matriisiavusteinen laserdesorptio/ionisaatioaika lennon MS (MALDI-TOF-MS) on sopivampi lähestymistapa suurempien oligomeerien analysointiin, koska se pystyy havaitsemaan molekyylejä, joiden m/z ylittää ESI-ylärajan. NEITI. Tätä tekniikkaa on käytetty Sargassum wightii -lajin florotanniinifraktion tutkimiseen, mikä mahdollistaa phloroglusinolin dimeerien, trimeerien ja heksameerien läsnäolon [125]. Korkearesoluutioinen MS (HRMS) on vaihtoehtoinen lähestymistapa, jota voidaan käyttää myös sellaisten PT:iden analysointiin, joilla on suuri molekyylipaino ja jotka perustuvat moninkertaisesti varautuneisiin ioneihin ja plus-1 13C-isotooppikuvion muutoksiin. Toisin sanoen, kun yhdiste on kaksin- tai kolminkertaisesti varautunut, se näyttää plus-1 13C-isotooppikuvion m/z-eroilla 0,5 ja 0,33, vastaavasti . Tällä periaatteella Steevensz et ai. [78] pystyivät profiloimaan P. canaliculatan, F. spiralisin, F. vesiculosuksen ja A. nodosumin PT-koostumuksen DP:n suhteen ja havaitsivat yhdisteitä, joiden molekyylipaino on enintään 6000 Da ja jotka muuten ylittäisivät massaalueen ESI-MS:stä.

Kaiken kaikkiaan vaikka massaspektrometria voi olla kekseliäs tekniikka PT:iden kvalitatiiviseen analyysiin ja jopa riittävän tehokas pienimolekyylisten yhdisteiden kohtuullisen hyvän karakterisoinnin saavuttamiseksi, se ei pysty hakemaan riittävästi yksityiskohtia yhdisteiden isomeeristen muotojen tyypistä ja sidosasennosta. korkeammalla DPS:llä. Siksi, kun tavoitteena on PTs-rakenteen ominaisuuksien täydellinen selvittäminen, NMR on ainoa tehokas menetelmä, joka voi tarjota riittävän resoluution tällaiseen syvälliseen analyysiin.

5.2.3. NMR

NMR-spektroskopia käsittää suoran ja tuhoamattoman analyysin, joka voi olla hyödyllinen paitsi PT:iden sisällön saamiseksi myös PT:iden rakenteellisten piirteiden täydellisessä selvittämisessä. Kvantitatiivisia tietoja käytettäessä kaikkien leväuutteiden sisältämien fenoliyhdisteiden 1H NMR-resonanssisignaalit integroidaan ja niitä verrataan sopivan sisäisen standardin vastaaviin; näiden yhdisteiden on oltava stabiileja, kemiallisesti inerttejä, saatavilla erittäin puhtaassa muodossa ja täysin liukoisia samaan deuteroituun liuottimeen (samoihin liuottimiin) kuin näyte. Kaiken kaikkiaan kirjoittajat ovat käyttäneet erilaisia ​​lähestymistapoja ja menetelmiä fenoliyhdisteiden ja/tai PT:iden kvantifiointiin tämän tekniikan avulla, mukaan lukien Fucale-peräisissä näytteissä.

Kirjassa 2009, Parys et al. kuvasivat ensimmäistä kertaa kvantitatiivisen 1H NMR:n (NMR) käytön määrittämään A. nodosumin florotaniinipitoisuuden vaihtelua vuoden aikana. Heidän työssään sisäisenä standardina käytettiin trimesiinihappoa (2.0 mg trimesiinihappoa 0,8 ml:ssa deuteroitua metanolia ja 0,2 ml:ssa deuteriumoksidia), ja kalibrointikäyrä tuotettiin käyttämällä floroglusinolia. Huolimatta korkeammasta PTs-pitoisuudesta, joka havaittiin qHNMR:llä verrattuna FC-kolorimetrisellä menetelmällä saatuihin, molemmat menetelmät seurasivat samaa kausivaihtelutrendiä [126]. On tärkeää huomata, että toisin kuin kolorimetrisessä määrityksessä, joka ei ole spesifinen PT:ille tai edes fenoliyhdisteille, 1H NMR -spektrien resonanssisignaalien integrointia qHNMR:ssä verrataan sisäisen standardin vastaaviin. Näistä pääeroista johtuen suoraa vertailua ei voida tehdä tarkasti molempien metodologioiden välillä [127,128].

Käyttämällä erillistä lähestymistapaa Stiger-Pouvreau ja työtoverit käyttivät korkearesoluutioista maaginen kulmapyöritystä (HR-MAS) määrittääkseen PT:t ruskealevässä, Cystoseira tamariscifoliassa. Tässä tutkimuksessa kiinteän olomuodon NMR:ää käytettiin havaitsemaan floroglusinolia (monomeeriä) in vivo ja 1H qNMR:ää käytettiin arvioimaan monomeerin kvantifiointi (käyttäen trimetyylisilyylipropionaatti-d4:ää (TSP) sisäisenä standardina). Floroglusinoli-singletti δ 6,02 ppm:ssä, integroituna kolmeen protoniin, vahvisti sen läsnäolon näytteessä. Tämän menetelmän tarkkuus arvioitiin käyttämällä fluoroglusinolin standardiliuosta ja tulokset validoitiin vertaamalla FC-määrityksen vastaaviin. Lopulta kirjoittajat väittivät, että esitetty metodologia koostuu innovatiivisesta ja nopeasta menetelmästä floroglusinolin kvantifiointiin, jota voidaan soveltaa kaikkiin levälajeihin. Ainoa qNMR-menetelmän rajoitus on se, että vähintään yksi spektrisignaaleista (singletti, dupletti jne.) on liitettävä yksiselitteisesti yhdelle ja vain yhdelle yhdisteelle [129].

Aiemmin vuonna 2010 samat kirjoittajat osoittivat jo massaspektrometriaan (LC/ESI–MSn) liittyvän in vivo 1H HR-MAS NMR:n potentiaalin tarkkailla viiden rannikoilla esiintyvän Cystoseira-suvun lajin globaalia kemiallista profiilia. Bretagnen Ranskassa: C. baccata, C. foeniculacea, C. humilis, C. nodi caulis ja C. tamariscifolia [130]. The

heidän työnsä päätavoitteena oli tunnistaa Cystoseira-näytteitä ja keskustella niiden taksonomiasta. Tulokset osoittivat esitetyn lähestymistavan tehokkuuden erottaa pääasiassa C. nodicaulis ja C. tamariscifolia, koska niiden spektrit osoittivat tunnusomaisten signaalien läsnäolon, mikä mahdollistaa niiden yksiselitteisen tunnistamisen. Kun kyseessä oli singletti 2,91 ppm ensimmäiselle ja jälkimmäiselle, huippu täsmälleen 6.00 ppm luonnehti lajia ja osoitti yksinkertaisen florotaniinin mahdollista esiintymistä. Foeniculacealle ja C. humilikselle oli yleisesti tunnusomaista kahden saman intensiteetin dupletin esiintyminen 7,90 ja 7,36 ppm:ssä. Absoluuttinen ero näiden kahden signaalin välillä oli kuitenkin mahdotonta. In vivo NMR-signaalien samankaltaisuus yhdessä molempien lajien vähäisen spesifisen kemiallisen monimuotoisuuden kanssa oikeutti nämä tulokset. Lopuksi, C. baccatan tapauksessa monet signaalit mahdollistivat jatkuvan erottelun muista lajeista huolimatta siitä, että kemiallinen monimuotoisuus oli tärkein.

Vuonna 2020 Walsh ja työtoverit [131] osoittivat kahden puhdistetun florotaniiniuutteen antimikrobisen potentiaalin A. nodosumista ja F. serratusista, kahdesta vuorovesiruskeasta merilevästä. Tässä työssä 1H- ja 13C NMR -analyysi mahdollisti fenoliyhdisteiden kokonaismäärän kvantitatiivisen ja kvalitatiivisen arvioinnin, mutta myös pääsyn eroihin sidosprofiilissa molempien lajien puhdistettujen fenoliuutteiden välillä. Mitä tulee FC-määritykseen, A. nodosumissa havaittiin huomattavasti korkeampi taso kokonaisfenolisia yhdisteitä kuin F. serratusissa, ja tulokset validoitiin FC-määrityksellä. Lisäksi sekä qNMR- että FC-määrityksellä saavutetut tulokset osoittivat vaihtelujen olemassaolon kuukausittain kerättyjen näytteiden välillä ja molempien menetelmien välillä.

PT:n rakenteen selvittämiseksi Glombitza ja hänen ryhmänsä käyttivät ensimmäisen kerran 1H- ja 13C-NMR-analyysiä 70-luvulla, kun he tunnistivat floroglusinolin eri ruskealevälajeista. Näihin johdannaisiin liittyvien spektrien monimutkaisuus mahdollisti vain pienempien polyfenolirakenteiden tunnistamisen. Siten vuonna 1974 se oli ensimmäinen kerta, kun bifuhalolin ja difloretolin kemialliset rakenteet selvitettiin C. tamariscifolian 80-prosenttisesta etanoliuutteesta [132].

Siitä huolimatta yli sata PTs-rakennetta on selvitetty NMR:n avulla [133]. Tätä varten uutteet saatetaan yleensä esikäsittelyvaiheeseen heksaanilla tai petrolieetterillä suurten PT:iden saostamiseksi. Lisäksi PT:iden epästabiiliuden estämiseksi, NMR-analyysin helpottamiseksi ja näiden yhdisteiden polaarisuuden muuttamiseksi ne asetyloidaan usein käyttämällä etikkahappoanhydridiä ja pyridiiniä, mikä mahdollistaa niiden normaalifaasi-silikakromatografian puhdistamisen [119]. Tämän tyyppisten yhdisteiden 1H-NMR-spektreissä on huomioitava kaksi näkökohtaa: aromaattisten protonien resonanssi näkyy välillä δ 6.0 ja 7,5 ppm, ja asetyyliryhmät esiintyvät singlettihuippuina välillä 8 2 - 3 ppm. . Tämä on hyödyllinen työkalu vapaiden hydroksiryhmien lukumäärän määrittämiseksi alkuperäisissä suojaamattomissa fenoliyhdisteissä. Kaksi aromaattisten rengasjärjestelmien tyyppiä, joita saattaa esiintyä, on esitetty kuvassa 6. Kahden protonityypin (Ha ja Hb) erottuva kemiallinen ympäristö muuttaa havaittujen signaalien moninkertaisuutta 1H NMR:ssä sekä niiden integraatiota.

Yhdessä 1H NMR -spektroskopian kanssa 13C- ja HSQC- sekä HMBC-NMR-spektrejä on käytetty puhdistettujen PT:iden rakenteiden selventämiseen, mukaan lukien Fucalesissa. Heteronukleaarinen korrelaatio-NMR-spektroskooppinen lähestymistapa on hyödyllinen PT:iden luokan tunnistamiseksi näytematriisista (monomeeri, polttoaine, kloorietyyli, täysi, fukofluorietoli jne.) [134]. PT:iden tunnusomaiset 13C-NMR-signaalit on koottu taulukkoon 4. Ominaiskemiallisissa siirtymissä esiintyvien erityyppisten hiilen hiiliresonanssit yhdessä niiden intensiteetin kanssa mahdollistavat joidenkin signaalien liittämisen tiettyihin PT-luokkiin, erityisesti floretoleihin ja halleihin. .

Vuonna 1997 Glombitza et ai. [135] kuvasivat 33 PT:n eristämisen ja karakterisoinnin ruskealevästä Cystophora torulosa. Tunnistettiin erilaisia ​​PT-luokkia, mukaan lukien floretolit ja hallit sekä fukofloretolit ja hydroksifukofloretolit (esimerkit kuvassa 7). Lisäksi jälkimmäisen osalta tunnistettiin ja karakterisoitiin seitsemän uutta hydroksifukofluoretolia, joissa oli lisää hydroksyyliryhmiä (NMR ja MS). Kuten aiemmin mainittiin, hapettumisen estämiseksi ja eristettyjen PT-johdannaisten lipofiilisyyden lisäämiseksi kirjoittajat kuvasivat niiden eristämistä asetaateina [82].

Koch et ai. ovat myös osoittaneet 1H- ja 13C NMR:n soveltamisen suurempien fuhaloliasetaattien karakterisoimiseen B. bifurcatessa [136]. Cérantola et ai. ovat käyttäneet HSQC- ja HMBC (2D) NMR-spektroskooppisia tekniikoita. fukolin ja fukofloretolirakenteiden esiintymisen osoittamiseksi Fucus spiralis -uutteissa [137]. Samaa lähestymistapaa käytettiin Bretagnessa runsaasti esiintyvän Halidrys siliquosan kanssa. 1D- ja 2D-NMR- ja MS-analyysin käyttö mahdollisti neljän fenolijohdannaisen tunnistamisen: trifuhalolit ja tetrafuhalolit sekä ensimmäistä kertaa difluoretolit ja trifluoretolit [125]. Taulukossa 5 on yhteenveto edellä mainituista tutkimuksista, joissa1H- ja13C-NMR auttoivat selvittämään Fucalesiin kuuluvista levistä uutettujen PT:iden rakennetta.

【Lisätietoja:george.deng@wecistanche.com / WhatApp:86 13632399501】