Abstrakti

Cistanche tubulosaon arvokas tonic yrtti, jota käytetään laajasti perinteisessä kiinalaisessa lääketieteessä. Fenyylietanoidiglykosidit, joita edustavat ekinakosidi ja akteosidi, ovat sen bioaktiivisia ydinaineita. Tämän tutkimuksen tavoitteena on optimoida nykyaikaiset prosessointiparametritCistanche tubulosakeittopalat parantamaan ekinakosidin ja akteosidin saantoa ja tutkimaan edelleen sen antioksidanttista stressiä ja tulehdusta ehkäisevää mekanismia solutasolla.

Suoritettiin yhden tekijän kokeita, mitä seurasi Box-Behnken-vasteen pinnan optimointi, jossa viipaleen paksuus, höyrytysaika ja kuivauslämpötila olivat vaikuttavia tekijöitä. Korkean suorituskyvyn nestekromatografia (HPLC) otettiin käyttöön kahden markkeriyhdisteen pitoisuuden havaitsemiseksi. LPS-indusoitu RAW264.7-makrofagivauriomalli rakennettiin farmakologisten aktiivisuuksien arvioimiseksi. Reaktiiviset happilajit (ROS), typpioksidi (NO), malondialdehydi (MDA), antioksidanttientsyymien aktiivisuudet, mukaan lukien SOD, CAT, LDH ja glutationi (GSH) määritettiin. ELISA-testillä testattiin proinflammatoristen sytokiinien TNF-, IL-1 ja IL-6 eritystaso. Western blot -määritys suoritettiin avainproteiinien fosforylaatiotilan analysoimiseksi p38/AKT/JNK/NF-κB-signalointireitillä.

Optimaaliset käsittelyolosuhteet olivat viipaleen paksuus 0,6 cm, höyrytysaika 6 minuuttia ja kuivauslämpötila 57 astetta. Tässä tilanteessa akteosidipitoisuus oli 7,25 % ja ekinakosidi 31,62 %. Optimoiduista keittopaloista saadut uutteet voivat vähentää merkittävästi solunsisäisten ROS-, NO- ja MDA-solujen ylituotantoa LPS-stimuloiduissa RAW264.7-soluissa. Se tehosti SOD:n, CAT:n, LDH:n aktiivisuutta ja nosti solunsisäistä GSH-tasoa, samalla kun se esti merkittävästi TNF-, IL-1- ja IL-6:n vapautumista. Western blot -tulokset osoittivat, että uutteen p-p38/p38, p-AKT/AKT, p-JNK/JNK ja p-NF-κB/NF-κB fosforylaatiosuhde väheni.

Optimoitu höyrytys-kuivauskäsittelytekniikka voi tehokkaasti lisätä tärkeimpien fenyylietanoidiglykosidien talteenottonopeutta.Cistanche tubulosa. Keittopaloilla on antioksidanttisia ja anti-inflammatorisia vaikutuksia LPS:n laukaisemaa soluvauriota vastaan ​​estämällä p38/AKT/JNK/NF-κB-signalointireittiä. Tämä tutkimus tarjoaa käytännön tekniset parametrit standardoituun teolliseen käsittelyynCistanche tubulosaja tarjoaa kokeellisia todisteita tästä kasviperäisestä resurssista johdettujen funktionaalisten elintarvikkeiden ja ravitsemustuotteiden kehittämisestä.

Avainsanat: Cistanche tubulosa; keittäminen kappaleen käsittelytekniikka; akteosidi; ekinakosidi; antioksidanttinen stressi; RAW264.7-makrofagi; p38/AKT/JNK/NF-κB-reitti

1. Johdanto

Cistanche tubulosa(Schenk) Wight kuuluu Orobanchaceae-heimoon, ja sen lääkinnällinen osa on kuivattu, mehevä varsi, jossa on suomulehtiä. Kiinassa tämä kasvi istutetaan pääasiassa luoteisosan kuiville alueille, ja suurin istutusalue on Etelä-Xinjiangissa. Tunnetun tonisoivana yrttilääkkeenä se vahvistaa munuais-yangia, täydentää esanssia ja verta sekä kostuttaa suolistoa ummetuksen lievittämiseksi. Kliinisesti sitä käytetään munuais-yang-puutoksen, esanssi-veren puutteen, hedelmättömyyden, vyötärön ja polvien arkuuden ja heikkouden sekä suoliston kuivumisen ummetuksen hoitoon.

Fenyylietanoidiglykosidit, pääasiassa ekinakosidi ja akteosidi, ovat pääasiallisia aktiivisia komponentteja.Cistanche tubulosa. Kiinan farmakopean vaatimusten mukaan ekinakosidin ja akteosidin kokonaispitoisuus hyväksytyissä lääkeraaka-aineissa ei saa olla pienempi kuin 1,50 %, mikä toimii kriittisenä laadun arvioinnin indikaattorina. Perinteiset käsittelymenetelmätCistanche tubulosauseimmiten ottavat käyttöön liotus-kostutus-, viipalointi-kuivaus- tai viinin höyrytysmenetelmiä. Useat tutkimukset keskittyvät aktiivisten komponenttien tuoton parantamiseen, kun taas tutkimukset, joissa prosessointiteknologian optimointi yhdistetään biologisen aktiivisuuden todentamiseen, ovat riittämättömiä.

Oksidatiivinen stressi toimii yleisenä patologisena perustana useille aineenvaihdunta- ja tulehdussairauksille. Nykyiset tutkimukset ovat osoittaneet, että glykosidien kokonaismäärä on uutettuCistanche tubulosavoi tukahduttaa tulehdusvasteen ja aktivoida Nrf2/HO-1-reitin maksavaurion lievittämiseksi sepsiseläimissä. Tämän yrtin lignaaniglykosidifraktiot voivat lieventää makrofagien tulehdusta säätelemällä PI3K/AKT-signalointia. Siitä huolimatta nykyaikaisten prosessoitujen keittopalojen farmakologiset ominaisuudet ja niiden taustalla oleva molekyylimekanismi vaativat edelleen tutkimista.

Tässä tutkimuksessa Box-Behnken-vastepinnan suunnittelua sovellettiin yksitekijätesteillä, joissa siivujen paksuus, höyrytysaika ja kuivauslämpötila otettiin muuttujiksi prosessoinnin työnkulun optimoimiseksi. Optimaalisten teknisten parametrien saamisen jälkeen luotiin LPS-indusoitu RAW264.7 oksidatiivisia vaurioita aiheuttava solumalli arvioimaan antioksidatiivista stressiä ja anti-inflammatorista kapasiteettia ja analysoimaan asiaankuuluvaa signalointimekanismia. Tämän työn tarkoituksena on tarjota vakaat ja toimivat prosessointiparametrit pilottimittakaavaiseen tuotantoon sekä luoda kokeellinen perusta kokonaisvaltaiselle hyödyntämiselle.Cistanche tubulosaresursseja.

2. Materiaalit ja menetelmät

2.1 Kasvimateriaalit, reagenssit ja instrumentit

Tuoreet mehevät varretCistanche tubulosakorjattiin syksyllä Hotanista Xinjiangista. RAW264.7 hiiren monosyytti-makrofaagileukemiasolut ostettiin yhtiöltä Procell Life Science & Technology Co., Ltd (Wuhan, Kiina).

HPLC-luokan asetonitriili ja metanoli hankittiin Merck-yhtiöltä. Ekinakosidin (suurempi tai yhtä suuri kuin 98 %) ja akteosidin (suurempi tai yhtä suuri kuin 98 %) vertailustandardit toimitti Beijing North Weiye Metrology Institute. Dimetyylisulfoksidi (DMSO) ostettiin Sigma-Aldrichilta. Korkean glukoosin DMEM-elatusaine, sikiön naudan seerumi (FBS), penisilliini-streptomysiini-kaksoisvasta-aineliuos, BCA-proteiinin kvantifiointipakkaus, NO:n, MDA:n, SOD:n, CAT:n, GSH:n ja LDH:n määrityssarjat, lipopolysakkaridi (LPS), MTT-reagenssi ja ELISA-sarjat olivat kaikki kaupalliset tulehdussytokiinit.

Kokeellisiin instrumentteihin kuuluivat Shimadzun korkean suorituskyvyn nestekromatografi, pyöröhaihdutin, kiinalaisen yrtin pulverisaattori, termostaattinen suihkukuivausuuni, höyrykeitin, täysaallonpituinen mikrolevylukija, elektroninen analyyttinen vaaka, jäähdytetty sentrifugi, bioturvallisuuskaappi ja käänteinen optinen mikroskooppi.

2.2 Yhden tekijän käsittelykoe

TuoreCistanche tubulosamehevät varret leikattiin viipaleiksi, joiden paksuus oli 0,2 cm, 0,4 cm, 0,6 cm, 0,8 cm, 1,0 cm ja 1,2 cm. Viipaleita höyrytettiin 3 minuuttia, 6 minuuttia, 9 minuuttia, 12 minuuttia, 15 minuuttia, 18 minuuttia ja 21 minuuttia, ja niitä kuivattiin erilaisissa lämpötilagradienteissa, mukaan lukien huoneenlämpötila (25 astetta), 40 astetta, 50 astetta, 60 astetta, 70 astetta ja 80 astetta. Kuivatut keittopalanäytteet murskattiin ja seulottiin 40 meshin seulan läpi myöhempää havaitsemista varten. Kattavaan arviointiin otettiin käyttöön yhdistelmäpisteytyskaava: Yhdistelmäpistemäärä=ekinakosidipitoisuus × 50 % + akteosidipitoisuus × 50 %.

2.3 Akteosidin ja ekinakosidin HPLC-määritys

Näyteliuoksen valmistus: punnitaan tarkasti 1,0 g jauhenäytettä, lisätään 100 ml 50 % metanoliliuosta. 30 minuutin liotuksen jälkeen suoritettiin ultraääniuutto 40 minuutin ajan. Painonpudotusta täydennettiin jäähdytyksen jälkeen 50 % metanolilla. Supernatantti suodatettiin 0,22 μm:n mikrohuokoisella kalvolla ennen HPLC-injektiota.

Akteosidin ja ekinakosidin sekoitettu vertailustandardiliuos valmistettiin 50 % metanolilla ja laimennettiin sarjapitoisuuksiksi standardikäyrän piirtämistä varten. Kromatografiset olosuhteet: COSMOSIL C18 kromatografiakolonni; liikkuvan faasin järjestelmä koostui 0,1 % fosforihapon vesiliuoksesta (A) ja asetonitriilistä (B); ilmaisuaallonpituus asetettiin 330 nm:ksi; kolonnin lämpötila 35 astetta; virtausnopeus 1 ml/min. Kohdeyhdisteiden kvantitatiiviseen laskemiseen käytettiin ulkoisen standardin menetelmää.

2.4 Box-Behnken-vastepinnan kokeellinen suunnittelu

Yksitekijäisten koetulosten mukaan viipaleen paksuus (X1), höyrytysaika (X2) ja kuivauslämpötila (X3) valittiin riippumattomiksi muuttujiksi. Akteosidipitoisuus (Y1, %) ja ekinakosidipitoisuus (Y2, %) toimivat vastearvoina. Design-Expert 13.0 -ohjelmistoa käytettiin kolmivaiheisen kolmitasoisen Box-Behnken-kokeilujärjestelmän luomiseen, jossa oli yhteensä 17 testiryhmää. Mallin sovitus, varianssianalyysi ja parametrien ennustaminen suoritettiin ohjelmistolla. Käytännön varmistuskokeet suoritettiin kolmena rinnakkaisena sen jälkeen, kun teoreettiset optimaaliset parametrit oli säädetty sopimaan todelliseen tuotantotoimintaan.

2.5 Soluviljelmä ja näytteen valmistus

Optimoiduissa käsittelyolosuhteissa saatu keittopalanäyte valmistettiin uutejauheeksi. Jauhe liuotettiin DMSO:hon ja laimennettiin edelleen täydellisellä DMEM-elatusaineella, joka sisälsi 10 % FBS:ää ja 1 % penisilliini-streptomysiiniä solukokeita varten. RAW264.7-soluja viljeltiin kostutetussa inkubaattorissa 37 asteessa 5 % C02:lla.

2.6 MTT-määritys solujen elinkyvylle

Solususpensio inokuloitiin 96-kuoppaisille levyille solutiheydellä 8 x 104 solua/ml. Ryhmät asetettiin liuotinkontrolliryhmäksi (0,1 % DMSO), LPS-malliryhmäksi (1 ug/ml LPS) ja useiksi konsentraatioryhmiksiCistanche tubulosauute (3,125, 6,25, 12,5, 25, 50, 100, 200, 400 ug/ml). 2 tunnin näytteiden esi-inkuboinnin jälkeen lisättiin LPS, jonka lopullinen pitoisuus oli 1 ug/ml, lukuun ottamatta liuotinkontrollikuoppia, ja inkuboitiin vielä 24 tuntia. MTT-liuosta (5 mg/ml) lisättiin 4 tunnin reaktioon. Supernatantin poistamisen jälkeen lisättiin DMSO:ta formatsaanikiteiden liuottamiseksi. Absorbanssiarvo 490 nm:ssä havaittiin mikrolevylukijalla solujen elinkelpoisuuden laskemiseksi. Toiminnallisia seurantatestejä varten valittiin turvallinen pitoisuusalue.

2.7 Solunsisäinen ROS-mittaus

RAW264.7-soluja kylvettiin 6-kuoppaisille levyille tiheydellä 4 × 105 solua per kuoppa. Seinään kiinnittymisen jälkeen solut esikäsiteltiin gradienttikonsentraatiollaCistanche tubulosaUute (12,5, 25, 50, 100 ug/ml) 2 tunnin ajan, sitten stimuloitiin 1 ug/ml LPS:llä 24 tunnin ajan. Solunsisäinen ROS-taso havaittiin fluoresoivalla koetinreagenssipakkauksella. Fluoresenssin intensiteetti rekisteröitiin viritysaallonpituudella 488 nm ja emissioaallonpituudella 525 nm.

2.8 NO:n, MDA:n, SOD:n, CAT:n, LDH:n ja GSH:n havaitseminen

Soluviljelmän supernatantti kerättiin NO-pitoisuuden havaitsemiseksi Griess-menetelmällä. Solut pestiin esijäähdytetyllä PBS:llä ja hajotettiin jäillä. Solulysaattia sentrifugoitiin nopeudella 10 000 rpm alle 4 astetta 5 minuuttia solunsisäisen supernatantin saamiseksi. MDA-pitoisuus, SOD-, CAT-, LDH- ja GSH-tason entsyymiaktiivisuudet mitattiin tiukasti pakkauksen spesifikaatioiden mukaisesti. Kokonaisproteiinin normalisointiin käytettiin BCA-menetelmää.

2.9 ELISA Pro-inflammatoristen sytokiinien havaitseminen

RAW264.7-soluja käsiteltiin näytteellä ja LPS:llä 16 tunnin ajan. Viljelmän supernatantti kerättiin ja sentrifugoitiin 10 000 rpm 10 minuuttia. TNF-, IL-1- ja IL-6-erityspitoisuudet määritettiin ELISA-pakkauksilla.

2.10 Western Blot -analyysi

45 minuutin näytteiden ja LPS:n puuttumisen jälkeen solujen kokonaisproteiini uutettiin RIPA-lyysipuskurilla. Proteiinipitoisuus määritettiin BCA-sarjalla. Sama määrä proteiininäytettä (50 ug kutakin kaistaa kohti) denaturoitiin, erotettiin SDS-PAGE-elektroforeesilla ja siirrettiin PVDF-kalvolle. Kalvo estettiin 5 % rasvattoman maidon TBST-liuoksella 1 tunnin ajan, minkä jälkeen sitä inkuboitiin primääristen vasta-aineiden kanssa yön yli 4 asteessa. Toistuvan pesun jälkeen TBST:llä sekundaarista vasta-ainetta inkuboitiin huoneenlämpötilassa 1 tunti. Kohdeproteiinijuovat visualisoitiin ECL-kemiluminesenssireagenssilla. Bändin harmaasävyanalyysi suoritettiin fosforylaatio-proteiini/kokonaisproteiinisuhteen laskemiseksi.

2.11 Tilastollinen analyysi

GraphPad Prism 8.0.2 -ohjelmistoa käytettiin kuvaajien piirtämiseen ja tilastolliseen analyysiin. Yksisuuntainen ANOVA ja t-testi käytettiin tietojen vertailuun.P < 0.05 represented statistically significant difference; P < 0.01 and P < 0.001 stood for higher significance. All experimental data were expressed as mean ± standard deviation (\(\bar{x}\pm s\)).

3. Tulokset

3.1 Yhden tekijän koetulokset

Viipaleen paksuudella oli merkittävä vaikutus kohdeglykosidipitoisuuteen. 0,2 cm paksuiset viipaleet oli helppo ylihöyryttää, mikä aiheutti aktiivisten ainesosien lämpöhajoamista. Liian paksut viipaleet estivät sisäisten aktiivisten aineiden vapautumisen. Kun höyrytysajaksi asetettiin 10 minuuttia ja kuivauslämpötilaksi 60 astetta, 0,4 cm oli optimaalinen viipaleen paksuusparametri yksitekijäseulonnassa.

Riittämätön höyrytysaika ei voinut täysin tuhota kasvisolurakennetta ja johti alhaiseen glykosidisaatoon. Kun höyrytysaika ylitti 6 minuuttia, tapahtui kudosten hajoaminen ja ekinakosidi sekä akteosidi hajosivat. Kiinteällä 0,4 cm:n viipalepaksuudella ja 60 asteen kuivauslämpötilalla 6 min oli paras höyrytysaika.

Tietyllä alueella fenyylietanoidiglykosidien pitoisuus nousi kuivauslämpötilan nousun myötä, mutta hajoamista tapahtui, kun lämpötila ylitti 60 astetta. Viipaleen paksuus 0,4 cm ja höyrytysaika 6 minuuttia, 60 astetta osoitti parasta kokonaisvaltaista suorituskykyä yksitekijäseulonnassa.

3.2 Vastauspinnan optimointi- ja vahvistustesti

Varianssianalyysi osoitti, että akteosidi- ja ekinakosidipitoisuuden regressiomallit olivat merkittäviä (P < 0.05, P < 0.01). The lack‑of‑fit term was non‑significant (P >0,05), mikä osoittaa hyvää mallisovitusastetta. Determinaatiokerroin R² oli lähellä 1:tä, mikä osoitti korkean korrelaation ennustetun arvon ja todellisen kokeellisen tiedon välillä.

Akteosidipitoisuuteen vaikuttavien tekijöiden järjestys oli viipaleen paksuus > kuivauslämpötila > höyrytysaika. Ekinakosidipitoisuuden osalta järjestys oli höyrytysaika > kuivauslämpötila > viipaleen paksuus.

Ohjelmistolla lasketut teoreettiset optimaaliset parametrit olivat viipaleen paksuus 0,600 cm, höyrytysaika 5,685 min ja kuivauslämpötila 57,009 astetta. Käytännön tuotantoolosuhteet huomioon ottaen parametrit säädettiin viipaleen paksuuteen 0,6 cm, höyrytysajaksi 6 min ja kuivauslämpötilaan 57 astetta. Kolme rinnakkaisten todentamiskokeiden ryhmää sai akteosidipitoisuuden 7,25 % ja ekinakosidipitoisuuden 31,62 %. Käytännön arvon ja teoreettisen ennustetun arvon välinen poikkeama oli 3,89 % ja 4,92 %, mikä osoitti tämän vastepintamallin luotettavuuden.

3.3 Solujen elinkelpoisuuden seulonnan tulos

0–100 ug/ml konsentraatioalueella,Cistanche tubulosakeittopalauutteella ei ollut ilmeistä sytotoksisuutta RAW264.7-soluille ja sillä oli lievä proliferaatiota edistävä vaikutus. Kun pitoisuus saavutti 200 ug/ml tai enemmän, solujen elinkelpoisuus laski merkittävästi. Siksi 12,5 ug/ml, 25 ug/ml, 50 ug/ml ja 100 ug/ml valittiin työpitoisuuksiksi myöhempiä solukokeita varten.

3.4 Vaikutus solunsisäiseen ROS-tasoon

Verrattuna liuotinkontrolliryhmään, LPS-malliryhmä osoitti merkittävästi kohonnutta solunsisäistä ROS-fluoresenssi-intensiteettiä (P < 0.001), proving the successful establishment of oxidative‑stress injury model. Pretreatment of Cistanche tubulosauute vähensi liiallista ROS:n kertymistä annoksesta riippuvalla tavalla (P < 0.001 versus model group).

3.5 Säännös NO-, MDA- ja antioksidantteihin liittyvistä indikaattoreista

LPS-stimulaatio aiheutti NO- ja MDA-pitoisuuden voimakkaan kasvun RAW264.7-soluissa. Verrattuna LPS-malliryhmään, uutteen interventio alensi merkittävästi NO-tasoa annoksesta riippuvaisella taipumuksella . 12.5 ug/mL uutetta ei tuottanut selvää vaikutusta MDA-pitoisuuteen, kun taas 25-100 ug/ml uute vähensi havaittavasti MDA-pitoisuutta (P < 0.001).

LPS-hoidon jälkeen SOD:n, CAT:n, LDH:n ja solunsisäisen GSH:n pitoisuudet vähenivät huomattavasti . 12.5 ug/mL uute saattaa lisätä SOD-aktiivisuutta parantamatta CAT- ja LDH-aktiivisuutta. Uute konsentraatiolla 25–100 ug/ml nosti merkittävästi SOD-, CAT-, LDH-entsyymiaktiivisuutta ja GSH-pitoisuutta pitoisuudesta riippuvaisella tavalla.

3.6 Inhiboiva vaikutus tulehdusta edistävään sytokiinien eritykseen

LPS-stimulaatio laukaisi massiivisen TNF-, IL-1- ja IL-6- vapautumisen RAW264.7-makrofageissa.Cistanche tubulosakeitepalauutteen esikäsittely tukahdutti huomattavasti edellä mainitun kolmen tulehdusta edistävän sytokiinin eritystä (P < 0.001), presenting prominent dose‑dependent anti‑inflammatory property.

3.7 Modulaatio p38/AKT/JNK/NF-κB-signalointireitillä

Liuotinkontrolliryhmään verrattuna LPS-interventio lisäsi p-p38/p38-, p-AKT/AKT-, p-JNK/JNK- ja p-NF-κB/NF-κB-fosforylaatiosuhdetta. Keskipitkän ja suuren annoksen uuteryhmät vähensivät merkittävästi p-p38/p38- ja p-JNK/JNK-suhdetta. Kaikki pitoisuusryhmät alensivat p-AKT/AKT- ja p-NF-κB/NF-κB-tasoa (P < 0.05 or P < 0.001). Results illustrated that optimized Cistanche tubulosakeitepalauute hillitsi p38/AKT/JNK/NF-κB-signalointireitin aktivoitumista estämällä proteiinin fosforylaatiota.

4. Keskustelu

Nykyiset käsittelyvaatimukset kohteelleCistanche tubulosaKiinan farmakopeaan tallennetut kuvaavat vain kvalitatiivisia toimintavaiheita ilman tarkkoja kvantitatiivisia parametreja. Aiemmat tutkimukset ovat osoittaneet, että erilaiset prosessointimenetelmät aiheuttaisivat suuria eroja kemiallisessa koostumuksessa ja farmakologisessa aktiivisuudessa raa'an ja prosessoidun välillä.Cistanche tubulosanäytteitä. Jalostetuilla tuotteilla on parempi antioksidantti- ja immuunijärjestelmää säätelevä suorituskyky verrattuna raaka-aineisiin.

Tässä tutkimuksessa nykyaikainen höyrytys-kuivauskäsittely, joka on optimoitu vastepinnan menetelmällä, sai paljon suuremman ekinakosidin ja akteosidin saannon kuin monet perinteiset käsittelytekniikat. Se viittaa siihen, että viipaleen paksuuden, höyrytyksen keston ja kuivauslämpötilan tarkka hallinta voi tehokkaasti säilyttää ja parantaa fenyylietanoidiglykosidipitoisuuttaCistanche tubulosa.

Oksidatiivinen stressi ja tulehdus ovat läheisesti yhteydessä toisiinsa patologisia prosesseja. Liiallinen ROS aiheuttaa lipidien peroksidaatiota ja MDA:n kertymistä; sillä välin se aktivoi alavirran tulehduskaskadeja ja edistää NO:n ja useiden tulehdusta edistävien sytokiinien muodostumista. Tulehduksen välittäjät kiihdyttävät edelleen ROS-tuotantoa ja muodostavat noidan patologisen kierteen. Meidän solukokeet osoittivat, että optimoituCistanche tubulosakeittopalauute voisi poistaa ylimääräisen ROS:n, vähentää oksidatiivisia vauriomarkkereita NO ja MDA, palauttaa SOD:n, CAT:n, LDH:n edustaman antioksidanttientsyymijärjestelmän toiminnan ja täydentää solunsisäistä GSH:ta sekä estää tulehdusta edistävien sytokiinien vapautumista, joilla on selvä annos-vaikutussuhde.

p38, MAPK-perheeseen kuuluva JNK ja AKT-NF-κB-akseli ovat ydinsignaalinsiirtokeskittymiä, jotka välittävät makrofagien oksidatiivista ja tulehdusreaktiota. LPS-stimulaatio edistää p38:n, JNK:n ja AKT:n fosforylaatiota, aktivoi edelleen NF-κB:tä ja indusoi lukuisten tulehdusta edistävien geenien transkriptiota. Western blot -tiedot paljastivat senCistanche tubulosakeitepalauute esti p38:n, JNK:n, AKT:n ja NF-κB:n fosforylaation aktivoitumisen. On päätelty, että optimoidusta prosessoinnista saadut korkean pitoisuuden ekinakosidi ja akteosidi edistävät yhdessä p38/AKT/JNK/NF-κB-signalointisarjan tukahduttamista LPS:n aiheuttaman oksidatiivisen stressin ja tulehdusvaurion lievittämiseksi RAW264.7-makrofageissa.

Tässä tutkimuksessa on edelleen rajoituksia. Kaikki farmakologiset arvioinnit suoritettiin in vitro -solumallilla. Lisää eläintason kokeita tarvitaan prosessoitujen tuotteiden in vivo -tehon ja metabolisten ominaisuuksien varmistamiseksi.Cistanche tubulosakeitepalasia.

Yhteenvetona voidaan todeta, että tämä tutkimus loi kvantitatiivisen ja skaalautuvan nykyaikaisen käsittelytekniikanCistanche tubulosakeitepalasia. Prosessointiparametreilla, joiden paksuus on 0,6 cm, höyrytysaika 6 minuuttia ja kuivauslämpötila 57 astetta, tärkeimpien fenyylietanoidiglykosidien pitoisuus paranee huomattavasti. Käsitellyt keittopalat voivat lievittää oksidatiivista stressiä ja tulehdusvaurioita LPS-stimuloiduissa RAW264.7-makrofageissa estämällä p38/AKT/JNK/NF-κB-signalointireittiä. Tämä tutkimus tarjoaa käytännön teknistä referenssiä teollistuneelle tuotannolle ja tarjoaa kokeellisen perustan Xinjiangista peräisin olevien funktionaalisten ravinto- ja ravintolisätuotteiden kehittämiseen.Cistanche tubulosa.

Kiitokset

Tätä työtä tuki Xinjiangin maataloustieteiden akatemian Youth Science and Technology Backbone Innovation Capacity Cultivation Project (xjnkq-2022022) ja Xinjiangin "Tianchi Doctor Program" (2021).

Viitteet

[1] Lin J, Yu H, Zhao Y, et ai. Ekinakosidin uuttaminenCistanche tubulosaja sen suojaavan vaikutuksen tutkiminen maksavaurioon sepsisrotilla.Elintarviketiede ja teknologia. 2023;43:e010523.

[2] Guo J, Tang S, Miao Y, et ai. Lignaaniglykosidien tulehdusta estävät vaikutuksetCistanche tubulosajuontaa juurensa LPS/IFN-indusoiduista RAW264.7-makrofagisoluista PI3K/AKT-reitin kautta.Nykyinen farmaseuttinen biotekniikka. 2021;22(10):1380‑1391.

[3] Rani V, Deep G, Singh RK, et ai. Oksidatiivinen stressi ja aineenvaihduntahäiriöt: Patogeneesi ja terapeuttiset strategiat.Biotieteet. 2016;148:183‑193.

[4] Martínez-de-Toda I, Ceprián N, Díaz-de-Castro E. Happitulehduksen ikääntymisen rooli ihmisen patofysiologiassa.Solut. 2021;10(11):2974.

[5] Chung YC, Song SJ, Lee A, et al. Isobavachin lievittää lipopolysakkaridien aiheuttamia tulehdusvasteita makrofageissa ja seeprakaloissa tukahduttamalla MAPK- ja NF-KB-signalointireittejä.Journal of Ethnopharmacology. 2024;321:117501.