Cistanche Deserticola -polysakkaridiuutteen deserticola -polysakkaridiuutteen dekolorointiprosessin ja antioksidanttisen aktiivisuuden optimointi vastepintamenetelmällä

ABSTRAKTI:

 

Tavoite:Cistanche Deserticola -polysakkaridien purkamisprosessin optimoimiseksi ja niiden antioksidanttisen aktiivisuuden tutkimiseksi.

Menetelmiä, joissa käytettiin aktivoitua hiiltä pureutumisaineena, tutkittiin 4 tekijän vaikutuksia, mukaan lukien aktivoidun hiiliannostuksen, purkautumislämpötilan, puristumisajan ja pH: n pH: n puristusnopeuden ja polysakkaridien talteenottoasteen pH: n vaikutukset. Yhden tekijän kokeiden perusteella Cistanche Deserticola -polysakkaridiuutteen puristusprosessi optimoitiin vasteen pintamenetelmällä. Käyttämällä in vitro antioksidanttisen aktiivisuuden arviointimenetelmää, 1, 1- difenyyli -2- pikryylihydratsiini (DPPH), kokonaisvähennyskyky, hydroksyyliradikaalin poistokyky ja 2,2'-satsino, 1- ja 2,2'-satsino, Bis (3- etyylibentsotiatsoli - 6- sulfonihappo) Diammoniumsuola (ABTS) Kationin polysakkaridien vapaamuotoinen radikaali poistokyky määritettiin. Tulokset Optimaaliset deserticola -polysakkaridien poistumisprosessiolosuhteet olivat seuraavat: aktiivinen hiiliannos 20%, dekolorointilämpötila 37 astetta, puristumisaika 49 min, pH 5,03. Näissä optimaalisissa olosuhteissa dekoloizraationopeus ja polysakkaridien talteenottoaste olivat vastaavasti 62,66% ja 96,16%. Päätösten jälkeen DPPH -radikaalin ja hydroksyylivapaa radikaalin kyvyn kyvyn jälkeen lisääntyi merkittävästi, kun taas ABTS -anioniradikaalin kyvyn kyvyt vähenivät merkittävästi. PÄÄTELMÄT PÄÄTÖKSI PÄÄTÖKSI PÄÄTÖS PÄIVÄT, JOTKA PALUSTAVAT ERITTÄMINEN JA POLYSAKKARIDIEN PALAUTUSPÄIVÄ. Sillä on tärkeä sovellusarvo ja se tarjoaa perustan Cistanche Deserticola -polysakkaridin myöhemmälle tutkimukselle ja kehittämiselle.

Avainsanat: Cistanche Deserticolapolysakkaridi; purkautuminen; vasteen pintamenetelmä; antioksidanttiaktiivisuus

Karsintaautiomaata

 

1.2.3 Polysakkaridien palautumisnopeuden mittaus

Vakiokäyrän valmistelu:
Käytettiin fenoliruulihapon menetelmää. Noin 0. 0 5 0 0 g glukoositandardia (kuivattu vakiopainoon 105 asteessa) punnittiin tarkasti ja laimennettiin 50 ml: n tilavuuspulloon varastoliuoksen valmistamiseksi. Sitten 1,0 ml varastoliuosta mitattiin tarkasti ja laimennettiin 10 ml: ksi tilavuuspullossa 0,1 mg/ml standardiliuoksen saamiseksi. Standardiliuokset 10, 20, 30, 40, 50, 60, 70, 80, 90 ja 100 μl glukoosi mitattiin tarkasti 1,5 ml: n sentrifugiputkiksi. Jokaiseen putkeen lisättiin tislattua vettä kokonaistilavuuden olevan 100 μl. Toista 1,5 ml: n sentrifugiputkea, joka sisälsi 100 μl tislattua vettä, käytettiin tyhjänä ohjausliuoksena. Jokaiseen putkeen lisättiin 100 μl 5 -prosenttista fenoliliuosta, sekoitettiin huolellisesti ja sitten lisättiin nopeasti 500 μl konsentroitua rikkihappoa. Putket pyörrettiin 3 minuutin ajan ja jätettiin seisomaan 35 minuuttia. Sitten 200 μl reaktioliuosta siirrettiin 96- kaivolevylle ja absorbanssi mitattiin nopeudella 490 nm automaattisen mikrolevylukijan avulla. Vakiokäyrä piirrettiin absorbanssilla (Y) pystysuorana akselina ja glukoosipitoisuutena (x, ug/ml) vaaka -akselina. Saatu vakiokäyräyhtälö oli:

Y = 5.507X – 0.01,
r² = 0.992.

Polysakkaridipitoisuuden mittaus:
100 μl laimennettua eräCistanche DeserticolaPolysakkaridiuute mitattiin tarkasti 1,5 ml: n sentrifugiputkeen. Absorbanssiarvo määritettiin käyttämällä yllä kuvattua menetelmää ja polysakkaridikonsentraatio laskettiin käyttämällä standardikäyrää.

Polysakkaridien palautumisnopeuden mittaus:
Polysakkaridien massaCistanche DeserticolaUute ennen ja jälkeen puristumisen mitattiin yllä olevalla menetelmällä. Polysakkaridin palautumisnopeus laskettiin yhtälöllä (2):

Polysakkaridien talteenottoaste (%)
= (mafermbefore) × 100%\ vasemmisto (\ frac {m _ \ teksti {jälkeen}} {m _ \ teksti {ennen}} \ oikealla) \ kertaa 100 \%(MBefore MAFTER) × 100%
Jossa:

mbeforem _ \ teksti {ennen} mbefore ja mafterm _ \ teksti {jälkeen} mafter ovat massojaCistanche DeserticolaPolysakkaridit ennen ja jälkeen puristumisen ja sen jälkeen (g).

 

 

1.2.4 Yhden tekijän kokeellinen suunnittelu

Neljän tekijän aktivoidun hiiliannostuksen, dekolorointilämpötilan, irtautumisajan vaikutukset ja pH-on-määritysnopeus ja polysakkaridien talteenottotaajuusCistanche DeserticolaPolysakkaridiuutetta tutkittiin.

Aktivoidun hiiliannoksen vaikutus:
Kiinteä dekolorointiaika 30 minuutissa, purkautumislämpötila 50 asteessa ja pH 5,03 (mitattu näytteen arvo). Aktivoidun hiiliannostuksen vaikutusta dekolorisointinopeuteen ja polysakkaridien palautumisnopeuteen tutkittiin.

Purkautumislämpötilan vaikutus:
Kiinteä aktivoitu hiiliannos 20%: lla (m: m), dekolorointiaika 30 minuutissa ja pH 5,03: ssa. Selvityslämpötilan vaikutusta puristusnopeuteen ja polysakkaridien talteenottotaajuuteen tutkittiin.

Pohjaamisajan vaikutus:
Kiinteä aktivoitu hiiliannos 20%: lla, purkautumislämpötila 50 asteessa ja pH 5,03. Selausajan vaikutusta purkamisnopeuteen ja polysakkaridien talteenottoasteen määrään tutkittiin.

PH: n vaikutus:
Kiinteä aktivoitu hiiliannos 20%: lla (M: M), puristuslämpötila 50 asteessa ja värinmuutosaika 30 minuutissa. Tutkittiin pH: n vaikutusta puristusnopeuteen ja polysakkaridien palautumisnopeuteen.

 

1.2.5 Vastauspinnan optimointi Kokeellinen suunnittelu

Yhden tekijän kokeissa tunnistettujen optimaalisten tila-alueiden perusteella box-behunken-kokeellista suunnittelumenetelmää käytettiin nelikerroksen, kolmitasoisen suunnittelun suorittamiseenCistanche Deserticolapolysakkaridiuute. Polunorointinopeutta ja polysakkaridien talteenottoastetta käytettiin arviointiindekseinä. Suunnitteluparametrit on esitetty taulukossa 1.

1.2.6 Antioksidanttisen aktiivisuuden määrittäminenCistanche DeserticolaPolysakkaridit

(1)Cistanche DeserticolaPolysakkaridien DPPH -radikaalin poistokyky

Perustuu Kan Jintao et ai. [21] pienillä modifikaatioilla 0. 5 ml 1. 0 mg/ml polysakkaridi -vesiliuosta sekoitettiin 2,4 ml: n kanssa 0. 1 mmol/l DPPH etanoliliuosliuosta (1, {{1 0}} difenyyli -2- picrylhydrazine) ja 1,1 ml tislattua vettä. Seoksen annettiin reagoida pimeässä 37 asteessa 30 minuutin ajan. Reaktioliuoksen absorbanssi mitattiin nopeudella 517 nm, ja DPPH -radikaalin poistumisnopeus oli 1,0 mg/ml polysakkarideja ennen ja jälkeen purkautumisen ja sen jälkeen laskettiin yhtälöllä (3):

DPPH -radikaalin poistoaste (%)

{{0}} [1− (a1 -a2) a 0] × 100%= \ vasen [1 - \ frac {(a _1 -} {9}})} {a _0} \}}} {{a _0}} \}}) 100 \%= [1 - a0 (a1 −a2)] × 100%

Jossa:

A1a _1 a1 on näytteen koeputken absorbanssi,

A2a _2 a2 on absorbanssi, kun vedetön etanoli korvaa DPPH -liuoksen,

A {{0}} a _0 A0 on absorbanssi, kun tislattu vesi korvaa näytteen.

 

(2) kokonaisvähennysvoiman määrittäminenCistanche DeserticolaPolysakkaridit

Viitaten menetelmään, kirjoittanut Lu Xue et ai. [22], 1. 0 mg/ml polysakkaridit ennen ja jälkeen disolorisointia valmistettiin. 5 μl: n näyte ja 180 μl FRAP: tä (ferri -ionin vähentävä antioksidanttiteho) työliuosta lisättiin 96- kaivolevylle, sekoitettiin huolellisesti ja annettiin reagoida 37 asteessa 5 minuutin ajan. Absorbanssi mitattiin aallonpituudella 593 nm, ja polysakkaridien kokonaisvähennysteho ilmaistiin FESO4 -standardiliuoksen konsentraationa.

(3) Hydroksyyliradikaalin poistokyvyn määrittäminenCistanche DeserticolaPolysakkaridit

Kirjallisuudessa [23] kuvattu menetelmä ja hydroksyyliradikaalin poistomäärityspakkauksen ohjeet, 1. 0 mg/ml polysakkaridit ennen ja jälkeen puristumisen. Tislattua vettä käytettiin vetyperoksidin korvaamiseen kontrolliryhmän absorbanssille (acontrola _ \ teksti {control} acontrol), ja tislattua vettä käytettiin tyhjän ryhmän absorbanssin (ablanka _ \ teksti {tyhjä} ablank) näytteen korvaamiseen. Absorbanssiarvot mitattiin aallonpituudella 550 nm, ja hydroksyyliradikaalin poistonopeus laskettiin käyttämällä yhtälöä (4):

Hydroksyyliradikaalin poistoaste (%)

= [(acontrol -aSample) (acontrol - uhannank)] × 100%= \ vasemmisto [\ frac {(a _ \ teksti {control} - a _ \ teksti {näyte}) {(a _ \ teksti {control} - - (a _ \ teksti {control} - - {_ \ teksti {control} -} {(a _ \ teksti {control} - {(a _ \ teksti {control} - - {_ \ teksti {control} -} {(a _ \ text {control} -} A _ \ teksti {tyhjä})} \ oikea] \ kertaa 100 \%= [(acontrol −Babank) (acontrol −asamett)] × 100%

Jossa:

Asamplea _ \ teksti {näyte} ASAMPAY on näytteen ryhmän absorbanssi,

Acontrola _ \ teksti {control} acontrol on kontrolliryhmän absorbanssi,

Ablanka _ \ teksti {tyhjä} ablank on tyhjä ryhmän absorbanssi.

 

(4) Abts -kationin radikaalin poistokyvyn määrittäminenCistanche DeserticolaPolysakkaridit

Kirjallisuudessa [24] kuvatun menetelmän ja radikaalin poistomäärityssarjan ohjeiden mukaan 1. 0 mg/ml polysakkaridit ennen ja jälkeen puristumisen ja sen jälkeen. 10 μl: n näyte sekoitettiin 20 μl: n reagenssityöliuosta neljä ja 170 μl ABTS -työliuosta, sekoitettu perusteellisesti ja annettiin reagoida pimeässä huoneenlämpötilassa 6 minuutin ajan. Deionisoitua vettä käytettiin tyhjänä kontrollina. Absorbanssi mitattiin nopeudella 405 nm, ja radikaalin poistumisnopeus laskettiin yhtälöllä (5):

Abts -kationin radikaalin poistoaste (%)

=. 100 \%=.

Jossa:

Bblankb _ \ teksti {tyhjä} bblank on tislatun veden ja ABTS -liuoksen välisen reaktion absorbanssi,

Bsampleb _ \ teksti {näyte} bsample on näytteen ja ABTS -liuoksen välisen reaktion absorbanssi.

 

1.3 Tietojenkäsittely

Sigmaplot 12.5 -ohjelmistoa käytettiin piirtämiseen, ja suunnittelun asiantuntija 8. 0. 6 Ohjelmistoa käytettiin tietoanalyysiin.