N-sukkinyyli-S-farnesyyli-L-kysteiini (SFC): uusi isoprenyylikysteiinianalogi, jolla on in vitro tulehdusta estävä vaikutus ja kliinisiä ihoa suojaavia ominaisuuksia

Ota yhteyttäoscar.xiao@wecistanche.comLisätietoja

Abstrakti:Viimeisten 15 vuoden aikana pienimolekyyliset isoprenyylikysteiinianalogit (IPC) on tunnistettu mahdolliseksi uudeksi paikallisten tulehduskipulääkkeiden luokkaksi. Kliiniset tutkimukset ovat osoittaneet, että IPC:t ovat sekä turvallisia että tehokkaita terveen ihon edistämisessä, kun niitä käytetään paikallisesti. Tämän työn tarkoituksena on osoittaa N-sukkinyyli-S-farnesyyli-L-kysteiini (SFC) uutena IPC-molekyylinä, joka tarjoaa laajan kirjon etuja iholle. Ihmisen promyelosyyttisolulinja HL-60, ihmisen ihon mikrovaskulaariset endoteelisolut (HDMEC:t), ihmisen ihon fibroblastit (HDF:t) ja normaalit ihmisen epidermaaliset keratinosyytit (NHEK) altistettiin viljelmässä erilaisille indusoijille, jotka laukaisivat reaktiivisia happilajeja, sytokiineja, tai kollagenaasin tuotantoa. 49-Kohteelle suoritettiin satunnaistettu kaksoissokkoutettu, vehikkeleillä kontrolloitu, jaettu kasvokoe 1 prosentilla SFC-geelillä tai 5 prosentilla niasiiniamidia, ja vehikkeliä käytettiin 12 viikon ajan ryppyjen ja ikääntymisen ehkäisemiseksi. päätepisteitä. Osoitimme, että SFC esti GPCR:n ja TLR:n aiheuttamaa proinflammatorista sytokiinin vapautumista NHEK:issä ja HDMEC:issä useista tulehduksen indusoijista, kuten UVB:stä, kemikaaleista, katelisidiinista ja bakteereista. SFC vähensi onnistuneesti GPCR:n aiheuttamaa hapettumista erilaistuneissa neutrofiileissä. Lisäksi valovanhenemistutkimukset osoittivat, että SFC vähensi UVA-indusoitua kollagenaasin (pro-MMP{22}}) tuotantoa HDF:issä. Yhden prosentin SFC-geelin kliininen arvio osoitti ryppyjen vähentämisen, kosteutuksen, koostumuksen ja ihon yleisilmeen parannusta ajoneuvoa paremmin. N-sukkinyyli-S-farnesyyli-L-kysteiini (SFC) on uusi anti-inflammatorinen pieni molekyyli, ja se on ensimmäinen farnesyyli-kysteiini-IPC, jonka on osoitettu kliinisesti parantavan ulkonäköä ja ikääntymisen merkkejä, samalla kun sillä on potentiaalia parantaa tulehduksellisia ihosairauksia. .

Napsauta tätä saadaksesi lisätietoja

Avainsanat:isoprenyylikysteiini; ikääntymistä vastaan; kosmetiikka; G-proteiiniin kytketty reseptori; maksun kaltainen reseptori

1. Esittely

Pienimolekyyliset isoprenyylikysteiinianalogit (IPC) on tunnistettu mahdolliseksi uudeksi paikallisten tulehduskipulääkkeiden luokkaksi. IPC-analogit sisältävät 15-tai 20-hiilisivuketjun, joka on kiinnittynyt aminohappokysteiiniin, mikä jäljittelee prosessoitujen CAAX-proteiinien C-päätä, mikä on välttämätöntä välittävien heterotrimeeristen ja pienten G-proteiinien kalvokohdistukselle. reseptorisignalointi eukaryoottisoluissa. IPC-analogit estävät signaloinnin aktivaatiota kalvoosastossa kilpailemalla isoprenoidiryhmien kanssa prenyyliä sitovista kohdista [1,2] ja häiritsemällä signaalin transduktiota estämällä heterotrimeerisen G-proteiinin muodostusta ja/tai oletettavasti estämällä alavirran G-proteiini-efektorivuorovaikutuksia[1,2]. 3-5].

Sen jälkeen kun N-asetyyli-S-farnesyyli-L-kysteiini (AFC) löydettiin ensimmäisenä IPC-analogina, joka tehokkaasti vaimentaa tulehdusvasteita verihiutaleissa, makrofageissa ja neutrofiileissä[6-8], useita erilaisia ​​IPC-analogeja on kehitetty. on löydetty ja raportoitu tarjoavan useita erilaisia ​​aktiivisuuksia iholla, mukaan lukien G-proteiinikytkentäisen reseptorin (GPCR) aiheuttaman tulehdusta edistävän sytokiinin vapautumisen, turvotuksen ja neutrofiilien infiltraation inhiboiminen paikallisesti käytettynä [9]. Esimerkiksi N-asetyyliglutaminoyyli-S-farnesyyli-L-kysteiinillä (SIG-1191) on anti-inflammatorisia ja kosteuttavia ominaisuuksia ihmisen keratinosyyteissä ja ihmisen 3D-ihossa [10]. Uusimmat tutkimukset osoittavat, että IPC-analogit myös suorastaan ​​aiheuttavat ei-G-proteiinivälitteisen tulehduksen ihmisen epidermaalisissa keratinosyyteissä, ihmisen ihon fibroblasteissa, ihmisen ihon endoteelisoluissa ja perifeerisen veren mononukleaarisoluissa kumoamalla maksun kaltaiset reseptorit 2,4 ja 6( TLR2, TLR4, TLR6) ja T-solureseptorin (TCR) signalointi[11,12]. Lisäksi fytyyli-kysteiinin IPC-analogien on osoitettu olevan kliinisesti tehokkaita aknea [13] ja ihon ikääntymistä [14] vastaan, mikä korostaa tämän luokan yhdisteiden tehokkuutta ihotulehduksen estämisessä ja erilaisten ihosairauksien parantamisessa, kun niitä käytetään paikallisesti.

Cistanche voi estää ikääntymistä

Tässä todettiin, että uudella IPCanalogN-sukkinyyli-S-farnesyyli-L-kysteiinillä (SFC) (kuva S1) on laaja valikoima anti-inflammatorisia ja ihoa suojaavia ominaisuuksia, jotka auttavat hidastamaan tulehdusta ja ikääntymistä aiemmin tuntemattoman vaikutusmekanismin avulla. Ihon endoteelisoluja käyttävät tutkimukset osoittavat, että SFC estää katelisidiinin (L-37) GPCR:n aiheuttamaa tulehdusta. Lisäksi in vitro -tutkimukset epidermaalisilla keratinosyyteillä osoittavat, että SFC estää menestyksekkäästi tulehdusta edistävien sytokiinien vapautumista useista ympäristön stressitekijöistä, kuten UVB:stä, kemikaaleista ja bakteereista.cistanche tubulosa annostus redditValovanhenemistutkimukset osoittavat, että SFC voi onnistuneesti vähentää UVA-indusoitua kollagenaasin (pro-MMP-1) tuotantoa ihon fibroblasteissa. Koska tämä ihon monifunktionaalinen aktiivisuusprofiili otetaan huomioon, testasimme sitten SFC:tä kliinisesti halkaistun kasvojen kaksoissokkoutetussa, vehikkeleillä kontrolloidussa tutkimuksessa ja osoitimme, että 1-prosenttinen SFC-geeli on hyvin siedetty ja huomattavasti parempi kuin vehikkeli, mikä osoittaa merkittävää parannusta kaikissa kliinisissä päätepisteissä. , mukaan lukien ryppyjen vähentäminen, kosteutus ja ihon yleinen ulkonäkö.

2. Materiaalit ja metodit

2.1. Kemikaalit ja reagenssit

All reagents were purchased from Sigma Chemical Co. (St. Louis,MO, USA).Organic solvents were purchased from Fisher Scientific (Hampton, NH, USA). SFC was synthesized according to methods as described in US patent US10314802B2. All chemicals were ana-lyzed by LC/MS (Agilent 1100), H,and l3CNMR (500 MHz and 125 MHz, Bruker) for structural identity,and confirmed to be >95-prosenttinen puhdas analyyttisellä HPLC:llä (Agilent 1200). 2.2. Solukäsittelyt

HL-60-solut (CCL-240TM) saatiin American Type Culture Collectionista (ATCC; Manassas, VA, USA), kasvatettiin suspensioviljelmässä ja indusoitiin erilaistumaan kypsiin myelooisiin muotoihin (dHL{). {2}}) viljelemällä, kun läsnä on 1,3 % (y/v) dimetyylisulfoksidia (DMSO)[15]. Purskemääritys suoritettiin aiemmin kuvatulla tavalla [16]. Lyhyesti dHL-60 (2 × 10 astetta soluja/ml) inkuboitiin formyyli-Met-Leu-Phe-OH((MLP)) superoksidin vapautumisen indusoimiseksi neutrofiileistä Superoksidianionin havaitseminen mitattiin pelkistämällä ferrisytokromi c:stä ferrosytokromi c:ksi lukemalla absorbanssi aallonpituudella 550 nm. Määritysreaktioseos valmistettiin Hanksin tasapainotettuun suolaliuokseen (HBSS), jossa oli 160 uM sytokromi c:tä, 100 U/ml superoksididismutaasia (SOD) ja 16 uM TPA:ta ({ {18}}O-tetradekanoilforboli13-asetaatti. Absorbanssi mitattiin levynlukijalla 550 nm:ssä päätepisteenä (20 minuutin altistuksen jälkeen).

Vastasyntyneiltä luovuttajilta saadut ihmisen primaarisolut ostettiin Ther-moFisherilta (NHEKs, HDF; Carlsbad, CA, USA) ja ScienCell (HDMECs; Carlsbad, CA, CA, USA). Solut (1 × 10 asteen solut) /ml) kasvatettiin normaaleissa olosuhteissa (5 % C02; 37 astetta) ja esi-inkuboitiin myöhemmin 2 tuntia yhdisteiden (0,1 % tilavuus/tilavuus etanolivehikkeli) kanssa kasvutekijättömissä tuoreissa elatusaineissa kolmena rinnakkaisena. NHEK:t indusoitiin 5 ng/ml TPA:lla, 25 m/cm2 laajakaistaisella 305 ± 12 nm UVB:llä (Daavlin; Bryan, OH, USA) tai 10 ug/ml peptidoglykaanilla. HDMEC:t ja HDF:t indusoitiin vastaavasti 10 ug/ml LL-37:lla (Tocris Bioscience; Bristol, UK) ja 12,5 J/cm2 laajakaistaisella 350±12 nm UVA:lla (Daavlin; Bryan, OH, USA). Soluille tehtiin elinkelpoisuustestit tetratsoliumyhdisteellä [3-(4,5-dimetyylitiatsol-2-yyli)-5-(3-karboksimetoksifenyyli)-2-( 4-sulfofenyyli)-2H-tetratsolium, sisäinen suola; MTS]-määritys (Promega; Madison, WI, USA). Elatusainesupernatantit kerättiin 24 tunnin induktion jälkeen sytokiinien (TNF-,IL-6,IL-8) ja kollagenaasin (pro-MMP-1) mittauksille.

2.3. Entsyymi-immunosorbenttimääritykset (ELISA)

Ihmisen sytokiinien ja kollagenaasin tasot mitattiin kudosviljelyalustan supernatanteista sandwich-ELISA:lla käyttäen asianmukaisia ​​standardeja ja noudattaen valmistajan ohjeita. IL-6- ja IL-8-sarjat ostettiin BD Biosciencesilta (San Jose, CA, USA). Pro-MMP-1- ja TNF-sarjat ostettiin R&D Systems Inc:ltä (Minneapolis, MN, USA).

2.4. Kliininen tutkimus

SGS Stephensissä suoritettiin kliininen tutkimus terveillä vapaaehtoisilla (tutkimus nro C20-J156; Tokio, JP), ja kirjallinen tietoinen suostumus saatiin Kansainvälisen harmonisointineuvoston (ICH) E6(r2) kohdan 4.8.10 mukaisesti. jokaisesta aiheesta. Tämä oli yhden keskuksen, jaetut kasvot, kaksoissokkoutettu ajoneuvokontrolloitu tutkimus, jossa yhteensä 49 japanilaista naista suoritti 12-viikon tutkimuksen. Koehenkilöt määrättiin yhteen kahdesta hoitosolusta ennalta määrätyn satunnaistuksen mukaisesti. Jokaisessa solussa koehenkilöt satunnaistettiin edelleen käyttämään SFC:tä tai niasiiniamidia kasvojen toisella puolella ja vehikkelikontrollia kasvojen toisella puolella (solu 1: 31 koehenkilöä sai 1 prosentin SFC-geeliä ja vehikkeliä, ja solu 2:18 koehenkilöt 5 prosentin niasiiniamidigeeliä ja vehikkeliä) (katso taulukosta S1 täydellinen ainesosaluettelo).kuinka paljon cistanchea ottaaTämä tutkimus tehtiin Japanin kosmetiikan tiedeseuran "Guidelines for Evaluation of Wrinkle Products" perusteella. Koehenkilöt levittivät testimateriaalia varisjalka-alueen määrätylle puolelle ja koko kasvojen puolikkaalle 2 kertaa päivässä. Koehenkilöt suorittivat testimateriaalien ensimmäisen levityksen klinikalla perustason arvioinnin jälkeen. Kliiniset arvioinnit suoritettiin ensimmäisellä käynnillä (perustilanne ja 15 minuuttia hakemuksen jälkeen), käynnillä kaksi (viikko 8) ja vierailulla kolme (viikko 12).cistanche แอ ม เว ย์Varisjalkojen ryppyjen olosuhteet valittiin lievästä kohtalaiseen (pistemäärä {{0}} Japanin kosmetiikkakemistien yhdistyksen (JSCC) asteikon mukaan, jossa0=ei mitään ja 7=merkittävä syvä havaittiin ryppyjä). Tehokkuusparametrien kliininen luokitus arvioitiin erikseen globaalin kasvon oikealla ja vasemmalla puolella käyttäen muokattua Griffithin 10-pisteasteikkoa, ja puolipisteet annettiin tarvittaessa (0 - ei mitään (paras mahdollinen tila),1 - 3= lievä, 4 - 6=kohtalainen, 7 - 9=vakava (pahin mahdollinen tila)). Tehokkuusparametrit luokiteltiin taulukossa 1 lueteltujen asteikkoankkureiden mukaan.

2.5. Tilastollinen analyysi

Tilastollinen merkitsevyys määritettiin ANOVA:lla, jota seurasi Dunnettin useiden vertailujen testi käyttämällä p-arvoja, jotka olivat pienempiä kuin 0,05 merkitsevänä erona. Kaikille antibakteerisille mittauksille ja sytokiinitasoille näytteet määritettiin kolmena rinnakkaisena. Sytokiiniannos-vastekäyrät muodostettiin sovittamalla tiedot Hillin kolmen parametrin yhtälöön käyttämällä Sigma Plot -ohjelmistoa (Systat Software Inc., Chicago, IL, USA), josta määritettiin IC50 ja maksimiinhibiitio.

3. Tulokset

3.1. SFCInhibiti GPCR:n aiheuttamaa oksidatiivista stressiä ja tulehdusta

Formyylipeptidireseptori-1(FPRL1) on neutrofiilien ja endoteelisolujen pinnalla sijaitseva GPCR, jolla on kriittinen rooli vasteena useisiin tulehdusärsykkeisiin[17]. Esimerkiksi N-formyylimetionyylileusyylifenyylialaniini (fMLP) on kemotaktinen peptidi, joka sitoutuu FPRL1:tä värvääviin neutrofiileihin, ja niiden saapuessa laukaisee reaktiivisten happilajien (ROS) nopean vapautumisen ja erilaisia ​​antimikrobisia toimintoja [18] . Jos neutrofiilien lisääntyminen kuitenkin jatkuu, tulehduskaskadissa tapahtuu merkittävää säätelyhäiriötä, mikä on vaikuttanut neutrofiilien infiltraatioon ruusufinnien ja useiden muiden ihosairauksien patogeneesiin[19]. Katelisidiini (LL-37) on toinen FPRL1-ligandi, jolla on pleiotrooppista aktiivisuutta, mukaan lukien antimikrobisia ominaisuuksia, rekrytointia ja tulehdusta, joka on yhdistetty atooppiseen ihottumaan, psoriaasiin ja ruusufinniin [20].mikä on cistancheSiksi pyrimme tutkimaan, voisiko SFC onnistuneesti moduloida FPRL{0}}välitteistä oksidatiivista purskeutta ja tulehdusta. Käyttämällä erilaistettuja neutrofiilejä (DHL-60)[21], fMLP lisättiin käynnistämään ROS, ja tulokset osoittavat, että SFC estää tehokkaasti superoksidin muodostumisen annoksesta riippuvalla tavalla (IC50=25 μM）) (Kuva 1A). ei-toksisilla vaikutuksilla (Kuva S2). Lisäksi ihmisen ihon mikrovaskulaariset endoteelisolut (HDMEC:t), joita on käsitelty 10 ug/ml LL-37:lla, indusoivat tulehdusta edistävän sytokiinin IL-6 ylituotantoa. Hoidot SFC:llä estivät IL-6:n vapautumisen annosriippuvaisesti 100 prosentilla (kuva 1B) myrkyttömällä vaikutuksella (kuva S2) ja samalla teholla (IC50=2 uM) kuin ekseemalääkkeellä FK{{ 19}} (IC50=1 uM) ja huomattavasti parempi kuin ruusufinnihoidot metronidatsoli (IC50=14 uM) ja atselaiinihappo (IC50 =100 uM). Paikallinen glukokortikoidi klobetasoli osoitti voimakkainta anti-inflammatorista aktiivisuutta odotetusti (IC50=0,08 μM; tietoja ei näytetä).

3.2. SFC Suojaa UVA- ja UVB-indusoitua valovanhenemista vastaan

Ultraviolettivalo (UV) on yleinen ympäristöstressi, joka hyökkää ihoamme päivittäin. Pidempi aallonpituus UVA (320-400 nm) tunkeutuu syvälle dermikseen, kun taas lyhyempi aallonpituus, korkeampi energia, UVB (290-320 nm) vaikuttaa ensisijaisesti orvaskemme.

Erityisesti UVA indusoi matriisin metalloproteinaasien (MMP:iden) erittymistä, joilla on tärkeä rooli ihon valovanhenemisessa [22]. MMP-1, joka tunnetaan myös nimellä interstitiaalinen kollagenaasi, hajottaa kollageenin (tyyppi I, II ja III) ja myötävaikuttaa hienojen juonteiden ja ryppyjen muodostumiseen. SFC:n ryppyjä ehkäisevän potentiaalin määrittämiseksi tutkimme sen kykyä vähentää UVA-indusoitua pro-MMP{5}}- vapautumista ihmisen ihon fibroblasteista (HDF). SFC estää annosriippuvaisesti pro-MMP{8}}-tuotantoa osoittaen poikkeuksellista tehoa ICso=10 pM:llä (taulukko 2) ja myrkyttömällä vaikutuksella (kuva S2), kun taas kosmeettiset ikääntymistä estävät aineet, kuten askorbiinihappo ja a-tokoferoli eivät vähentäneet pro-MMP{16}}:n vapautumista korkeimmalla testatulla pitoisuustasolla (taulukko 2). Kuten UVA, pitkäaikainen altistuminen UVB:lle laukaisee tulehduskaskadin ja pro-inflammatoristen sytokiinien tuotannon, joilla on keskeinen rooli auringon aiheuttamassa ihon ikääntymisessä[23]. Tarkemmin sanottuna normaalit ihmisen epidermaaliset keratinosyytit, jotka altistuvat UVB:lle, laukaisevat interleukiinin -6 (IL-6) ja tuumorinekroositekijän a (TNF-a) vapautumisen, jotka on myös liitetty kuivaan ihoon [24] . Tuloksemme osoittavat, että SFC estää sekä IL-6:n että TNF-x:n vapautumisen annosriippuvaisella tavalla ICso=10 pM:llä ja 100 pM:lla, vastaavasti, myrkyttömällä vaikutuksella (kuva S2).bioflavonoiditLisäksi tämä vahva teho oli 4-5 suuruusluokkaa suurempi kuin askorbiinihapolla ja -tokoferolilla havaittu, joilla oli myös anti-inflammatorisia ominaisuuksia (taulukko 2).

3.3.SFC Suojaa kemikaalien ja bakteerien aiheuttamalta tulehdukselta

Auringonvalon UV-säteiden lisäksi monet muut ulkoiset ympäristön stressitekijät laukaisevat ihon tulehduksen ja voivat nopeuttaa ihon luonnollista ikääntymisprosessia, jos ne jätetään suojaamatta. Kaksi tällaista syyllistä ovat kemikaalit ja bakteerit. 12-O-tetradekanoyyli--forboli-13-asetaatti (TPA) on yleinen kemiallinen ärsyttävä aine, jota käytetään paikallisen in vivo anti-inflammatorisen vaikutuksen testaamiseen [9]. Lisäksi aiemmat tutkimukset osoittavat, että TPA:lla käsitellyt normaalit ihmisen epidermaaliset keratinosyytit (NHEK) lisäävät useiden tulehdusta edistävien välittäjien tuotantoa [25,26]. Solupohjainen NHEK-määritysmme osoittaa johdonmukaisen merkittävän TNF-a:n TPA-induktion ja että SFC estää sen vapautumista annoksesta riippuvaisella tavalla IC50=0,75 uM:lla (enimmäisesto 70 prosenttia) (Kuva 2A) myrkyttömät vaikutukset (kuva S2). Samaan aikaan anti-inflammatorinen glukokortikoidi klobetasoli, joka testattiin pitoisuudella 3 uM, osoittaa vain 58 prosentin eston, mikä viittaa siihen, että SFC on tehokkaampi tässä spesifisessä määrityksessä.

TLR:illä on kriittinen rooli ihon synnynnäisen immuunivasteen säätelyssä taudinaiheuttajia vastaan, ja erityisesti TLR2-signaloinnin on osoitettu olevan avainrooli useiden dermatologisten sairauksien patogeneesissä [27]. Peptidoglykaani (PGN) on bakteerin soluseinämätuote ja toll-tyyppinen reseptori-2(TLR2) ligandi. Tuloksemme osoittavat, että SFC vähentää annosriippuvaisesti PGN:n aiheuttamaa interleukiini-8 (IL-8) ​​vapautumista NHEK-soluissa ICso=0,8 uM:lla, mikä on verrattavissa klobetasoliin, jonka IC{11 }} μM （Kuva 2B）.

3.4. SFC vähentää ryppyjä ja parantaa useita muita ihoparametreja ihmisillä. Kasvojen ihon valovanheneminen on yksi useista tekijöistä, jotka myötävaikuttavat ikääntymisen visuaalisiin merkkeihin, ja sille on ominaista hienojen juonteiden, ryppyjen ja pigmenttimuutosten esiintyminen. Tässä raportoidut tiedot viittaavat siihen, että SFC:n in vitro anti-inflammatoriset, ikääntymistä estävät ja hapettumista estävät vaikutukset voivat hidastaa tehokkaasti ihon ennenaikaista ikääntymistä ja tulehdusta, kun niitä käytetään paikallisesti ihmisiin. Siten pyrimme arvioimaan SFC:tä kliinisesti arvioidaksemme sen aktiivisuutta paikallisessa käytössä. SFC formuloitiin 1 prosentin pitoisuudella geelissä, ja se arvioitiin jaetuissa kasvoissa, kaksoissokkoutetussa, vehikkelillä kontrolloidussa tutkimuksessa, jossa sitä levitettiin kahdesti päivässä 12 viikon ajan. Ennen tätä tutkimusta SFC-geeliä testattiin 100 henkilön ihmisen toistuvan loukkauksen patch testissä, ja sen todettiin olevan turvallinen iholle (tietoja ei esitetty).

Yhteensä 49 naista suoritti tutkimuksen päätökseen, kun kaikki koehenkilöt käyttivät vehikkeliä toisella puolella kasvojaan, ja toisella puolella 31 koehenkilöistä käytti 1 prosentin SFC-geeliä; Loput 18 koehenkilöä käyttivät 5 prosenttia niasiiniamidia vertailuaineena, koska sen on aiemmin osoitettu parantavan kasvojen ihon ulkonäköä [28]. Varisjalkojen alueen ryppyjen kliinisen luokituksen tulokset osoittavat tilastollisesti merkitsevää parannusta lähtötilanteesta ja vehikkelistä viikoilla 8 ja 12 1 prosentin SFC-geelillä, kun taas 5 prosentin niasiiniamidi parantaa merkittävästi vain viikolla 12 (kuva 3). Viikolla 8,1 prosentin SFC-geelin parannus on noin 32 prosenttia, kun taas 5 prosentin niasiiniamidi ja vehikkeli vain noin 11 prosenttia ja 6 prosenttia (kuva 3). Ryppyjen vähentämisen lisäksi 1 prosentin SFC-geeli on huomattavasti parempi kuin kantaja useissa muissa päätepisteissä, mukaan lukien tekstuuri (tuntuva) ja kosteutus (visuaalinen) viikoilla 8 ja 12 kirkkaus/kirkkaus/kirkkaus sekä rakenne (visuaalinen) viikolla 12 ja yleisesti. ihon kunto (terve) kasvoilla levityksen jälkeen (taulukko 3). Lisäksi useissa päätepisteissä 1 prosentti SFC-geeliä ei ainoastaan ​​suorita vehikkeliä vaan myös niasiiniamidia. Esimerkiksi kirkkaus/kirkkaus/kirkkaus-parametrin analyysi viikolla 12 paljastaa, että 1 % SFC-geeliä käyttävillä koehenkilöillä on tilastollisesti merkittävä ~52 % parannus verrattuna vain ~22 %:iin niillä, jotka käyttivät 5 % niasiiniamidia (taulukko 3). 1 prosentin SFC-geeli on myös huomattavasti parempi kuin 5 prosentin niasiiniamidi viikolla 8 kosteutuksen suhteen (~42 prosenttia vs. ~3 prosenttia) (Taulukko 3). Lopuksi ihon kiinteyden (taktiilin) ​​päätepisteen osalta, vaikka se ei ole merkittävästi parempi kuin vehikkeli, 1 prosentin SFC-geeli osoittaa. tilastollisesti merkitsevä 19 prosentin parannus lähtötasosta (p-arvo {{40}}.031), kun taas pelkällä ajoneuvolla käsitelty iho parani ~10 prosenttia (p-arvo 0,063), ja 5 prosentin niasiiniamidilla hoidetussa ryhmässä parannus oli 0 prosenttia. Kaiken kaikkiaan nämä tulokset osoittavat, että SFC paikallisesti käytettynä parantaa kliinisesti ikääntymisen merkkejä ja edistää ihon terveyttä.

4. Keskustelu

Ensimmäinen IPC-molekyyli, N-asetyyli-S-farnesyyli-L-kysteiini (AFC) löydettiin yli 30 vuotta sitten [6,29], ja sen osoitettiin myöhemmin vähentävän tehokkaasti turvotusta ja neutrofiilien infiltraatiota, kun sitä käytetään paikallisesti in vivo. eläinmallit tulehduksesta ja kosketusyliherkkyydestä [9]. Useiden muiden farlnesyyli-kysteiinijohdannaisten on raportoitu estävän menestyksekkäästi tulehdusta ja oksidatiivisen stressin vapautumista [21]. Lisäksi toisella kaukonesyloidulla IPC-molekyylillä, SIG-1191, on osoitettu olevan tulehdusta estävää vaikutusta NHEK:issä ja potentiaalista kosteuttavaa vaikutusta, kun sitä levitetään paikallisesti 3D-ihmisen iholle [10]Kaiken kaikkiaan nämä tulokset korostavat potentiaalia tämän luokan yhdisteitä käytettäväksi ihosairauksien parantamiseen ja/tai ihosairauksien hoitoon. Lupaavasta in vitro ja in vivo -aktiivisuusprofiilista huolimatta minkään farnesyloidun IPC-yhdisteen aktiivisuutta ei ole testattu kliinisesti. Näin ollen pyrimme ensimmäistä kertaa määrittämään farnesyloidun IPC N-sukkinyyli-S-farnesyyli-L-kysteiinin (SFC) aktiivisuuden kliinisessä tutkimuksessa ja alkamaan selvittää sen vaikutusmekanismia näiden etujen selittämiseksi.

IPC-molekyylien on raportoitu moduloivan GPCR:itä, maksun kaltaisia ​​reseptoreita (TLR) ja peroksisomiproliferaattorin aktivoiman reseptorin gamma- (PAR-y) signalointia [30]; näiden anti-inflammatoristen vaikutusten mekanismia ei kuitenkaan tunneta hyvin. Ihon mikrovaskulaarisia endoteelisoluja hyödyntäen AFC:n osoitettiin aiemmin estävän purinergistä GPCR:n tulehdussignalointia (ATP-P2Y-reseptorin indusoima sytokiinin vapautuminen) [31]. Lisäksi SIG-1191:n osoitettiin säätelevän ihon hydraatiomarkkerin akvaporiini 3:n (AQP3) ilmentymistä mitogeeniaktivoidun proteiinikinaasin / solunulkoisen signaalin säätelemän kinaasireitin (MEK) kautta [10]. Lisäksi IPC-yhdisteet SIG-1273 ja SIG-1459 säätelevät TLR- ja T-solureseptorisignaaleja (TCR), joilla on tärkeä rooli aknen ja atooppisen dermatiitin patogeneesissä [11,12]. Tässä näytämme, että SFC moduloi GPCR-FPRL1-signalointia estämällä onnistuneesti katelisidiinin (LL-37) indusoiman FPRL1:n pro-inflammatorisen vapautumisen HDMEC:issä. Kohdistamalla erityisesti HDMEC:ien vapauttamia tulehdusvälittäjiä SFC voi olla tehokas kroonisen tulehduksen estäjä, koska IL-6 on merkittävässä roolissa useissa ihomekanismeissa ja sairauksissa, mukaan lukien haavan paraneminen [32]. Lisäksi LL-37 [33,34], joka on tärkeä efektorimolekyyli näissä ihosairauksissa sekä atooppisessa dermatiitissa, on ehdottanut epiteelisoluista peräisin olevien tulehdusvälittäjien vaikuttavan ruusufinniin ja psoriasikseen[20]. ]. Kuten täällä on raportoitu, sekä anti-inflammatoriset ruusufinnilääkkeet metronidatsoli (IC=o=14 uM) ja atselaiinihappo (IC50 =100 uM) sekä atooppisen ihottuman hoito FK{{37} } (IC50 =1 uM), vähentää LL-37-FPRL1--indusoitua sytokiinin vapautumista eri tehoilla. SFC:llä on samanlainen teho kuin FK-506:lla, se ylittää molemmat ruusufinnilääkeyhdisteet ja estää FPRL-1--indusoidun ROS:n vapautumisen (kuva 1A) neutrofiileistä. Kaiken kaikkiaan nämä tiedot osoittavat IPC-molekyylien kyvyn olla vuorovaikutuksessa useilla eri signalointireiteillä ja solutyypeillä, jotka ovat kriittisiä ihotulehdukselle. Tätä tarkoitusta varten TLR2 on viimeisten noin 20 vuoden aikana noussut kriittiseksi reseptoriksi tulehduksellisissa ihosairauksissa, kuten aknen, ruusufinnin, atooppisen dermatiitin ja muiden sairauksien hoidossa [27,35-37]. Ihossamme ilmentyvä TLR2 on osa ensimmäistä isännän immuunipuolustuslinjaamme vasteena tunkeutuville patogeeneille. TLR2-signalointi toimii ylävirtaan GPCR:istä, TCR:stä ja PPAR:ista, joiden on aiemmin osoitettu olevan IPC-analogien moduloimia. Tässä esitetyt tulokset osoittavat, että SFC estää tehokkaasti PGN-TLR2-indusoidun IL-8:n vapautumisen NHEK:istä (kuva 2B) ja vähentää onnistuneesti TPA:n aiheuttamaa TNF-a:n vapautumista keratinosyyteissä (kuvio 2A). TPA on tunnettu proteiinikinaasiC:n (PKC) aktivaattori, jolla on myös kriittinen rooli GPCR-signalointissa. Siten SFC voi myös estää tulehduksellista signalointivastetta alavirtaan PKC:n indusoimasta sytokiinin vapautumisesta NHEK:issä.

Krooninen tulehdus on avaintekijä sekä ihosairauksien että ikääntymisen edistämisessä. Kuten täällä on raportoitu, sen lisäksi, että SFC estää GPCR:n ja TLR:n aiheuttaman tulehduksellisen signaloinnin, se estää myös UVB- ja UVA-indusoidun tulehduksen sekä MMP-1-tuotannon fibroblasteissa, mikä hajottaa kollageenia ja nopeuttaa ihon ikääntymistä [22]. MP-1-tuotantoa säätelee lisäämällä MAP-kinaasi/AP-1-aktiivisuutta [38]. Ottaen huomioon SFC:n kyvyn tarjota anti-inflammatorista aktiivisuutta keratinosyyteissä ja endoteelisoluissa ja hidastaa oksidatiivista stressiä ja valovanhenemista neutrofiileissä ja ihon fibroblasteissa, oletimme, että SFC:n laaja aktiivisuuskirjo olisi hyödyllinen ihmisen iholle, kun sitä käytetään paikallisesti. Tässä esitetyt kliiniset tiedot osoittavat, että 1 prosentti SFC-geeliä vähentää merkittävästi ryppyjä, parantaa kosteutta, ihon rakennetta, ihon kirkastamista ja yleistä tervettä ihon ulkonäköä paremmin kuin ajoneuvo. Nämä tulokset ovat erityisen jännittäviä, koska useimmat kosmeettiset kliiniset tutkimukset suoritetaan ilman vehikkelikontrollia. Lisäksi SFC:n ihon terveyttä edistävät ominaisuudet osoittavat joissakin tapauksissa merkittävää parannusta yli 5 prosentin niasiiniamidilla, joka on kosmeettinen ikääntymistä estävä ja tulehdusta ehkäisevä vertailuaine (taulukko 3). Vaikka lisätutkimuksia on vielä suoritettava SFC:n vaikutusmekanismin selvittämiseksi edelleen, koska se liittyy ihon tulehdukseen ja ikääntymiseen, ehdotamme tässä työhypoteesia siitä, kuinka SFC antaa ihon terveyttä edistäviä toimintoja säätelemällä useita kohteita, mukaan lukien TLR- ja GPCR-signalointi. kuva 4). Kaiken kaikkiaan nämä tulokset osoittavat, että SFC parantaa kliinisesti ikääntymisen merkkejä ja voi olla tehokas parantamaan ihon terveyttä ja torjumaan useita tulehduksellisia ihosairauksia.

Tämä artikkeli on poimittu julkaisusta Cosmetics 2021, 8, 110. https://doi.org/10.3390/cosmetics8040110 https://www.mdpi.com/journal/cosmetics