Monikomponenttinen Prime-boost Chlamydia Trachomatis -rokotusohjelmat indusoivat vasta-aine- ja T-soluvasteita ja nopeuttavat infektion puhdistumista kädellismallissa, joka ei ole ihminen

Kansainvälisesti prioriteettina on kehittää rokote sukupuoliteitse tarttuvia tauteja vastaanChlamydia trachomatis -infektiottorjuakseen tartunnan jatkuvaa maailmanlaajuista leviämistä. Theoptimaalinen immunisaatiostrategia on vielä täysin selvittämättä. Tämän tutkimuksen tavoitteena oli arvioidaimmunisointistrategiatkädellismallissa (NHP). Cynomolgus-makakit (Macaqua fascicularis) immunisoitiin erilaisten monikomponenttien perusteellaprime-boost immunisaatioaikataulut ja sen jälkeen altistettiin C. trachomatis SvD:lle alemmassa sukupuolielimessä. Immunisaatioantigeenit sisälsivät rekombinanttiproteiiniantigeenin CTH522, joka oli adjuvantoitu CAF01:llä tai alumiinihydroksidilla, MOMP DNA -antigeeni ja MOMP-vektoriantigeenit (HuAd5 MOMP ja MVA MOMP).

Napsauta tästä saadaksesi yrttisistanchea ehkäisyynChlamydia trachomatis -infektiot

Kaikki antigeenikonstruktit olivat erittäin immunogeenisiä, mikä nosti merkittäviä systeemisiä C. trachomatis -spesifisiä IgG-vasteita. Erityisesti CTH522-proteiinilla rokotetut ryhmät nostivat seerumin nopean ja vahvan pesifikaalisen IgG:n. Spesifisten B-soluepitooppien kartoitus MOMP:ssä osoitti, että kaikki rokotetut ryhmät tunnistivat epitooppeja lähellä MOMP:n vaihtelevia domeeneja (VD) tai niiden sisällä, ja niillä oli johdonmukainen VD4-vaste kaikissa eläimissä. Lisäksi kaikkien rokotettujen ryhmien seerumi pystyi in vitro neutraloimaan sekä SvD:n, SvE:n että SvF:n. Vasta-ainevasteet heijastuvat emättimen ja silmän limakalvoille, jotka osoittivat havaittavissa olevia IgG-tasoja. Rokotteet indusoivat myös C. trachomatis -spesifisiä soluvälitteisiä vasteita, kuten perifeerisen veren mononukleaaristen solujen (PBMC) in vitro -stimulaatio ja solunsisäinen sytokiinivärjäys osoittavat. Yleensä proteiinilla (CTH522) rokotetut ryhmät saivat aikaan monitoimisen CD4 T-soluvasteen, kun taas DNA:lla ja vektorilla rokotetut ryhmät loivat myös CD8 T-soluvasteen. Emättimen C. trachomatis SvD:llä altistuksen jälkeen useat rokotetuista ryhmistä osoittivatnopeutettu infektion poistuminen, mutta erityisesti DNA-ryhmä, jota tehostettiin CAF01-adjuvantilla CTH522:lla saavuttamaantasapainotettu CD4/CD8T-soluvaste yhdistettynä anIgG vaste, osoittinopeutettu infektion poistuminen.

AVAINSANAT rokote, infektio,immunologia, bakteerit, CD4/CD8-lymfosyytit,Klamydia trachomatis

Johdanto

Sukuelinten Chlamydia trachomatis -infektiot aiheuttavat vuosittain arviolta 131 miljoonaa uutta tapausta maailmanlaajuisesti (1) ja muodostavat merkittävän maailmanlaajuisen terveysongelman, koska ne voivat aiheuttaavakavia komplikaatioitakuten lantiotulehduksellinen sairaus, kohdunulkoiset raskaudet, jahedelmättömyys(2, 3). Antibiootit tarjoavat edelleen tehokkaan hoidon C. trachomatis -infektioille. Koska infektio on kuitenkin oireeton jopa 75 prosentissa tapauksista,Suurin osa infektioista jää hoitamatta, ja lähetys ei keskeydy (3). Yleisesti ollaan yhtä mieltä siitä, että tehokkain ase klamydia-infektioiden jatkuvaa leviämistä vastaan ​​on profylaktinen rokote (4).

Useiden vuosien tutkimuksesta huolimatta rokotetta ei ole vielä markkinoilla. Tämä johtuu osittain C. trachomatisin monimutkaisesta kaksivaiheisesta elämäntavasta. C. trachomatisin ainutlaatuinen kaksivaiheinen elinkaari, jossa on sekä solunsisäinen että ekstrasellulaarinen vaihe, haastaa immuunijärjestelmän. Uskotaan, että suojaavan immuniteetin tulisi koostua soluvälitteisistä immuunivasteista (CMI) serotyyppispesifisten vasta-aineiden lisäksi (5–13). Lisäksi limakalvon immuniteetin luominen sukuelinten alueella asettaa lisähaasteen rokotteelle.

Tässä tutkimuksessa testasimme erilaisia ​​rokotestrategioita NHP-klamydia-infektiomallissa. Strategioiden tarkoituksena oli indusoida vasta-aineita, CD4 T-soluja ja/tai CD8 T-soluvastetta. Lisäksi joidenkin rokotteiden tarkoituksena oli saada aikaan limakalvovaste. Tähän tutkimukseen valitut antigeenit perustuivat pääulkokalvon proteiiniin. Ensinnäkin luotiin konsensus-MOMP-antigeeni (Con E), joka perustui noin 1500 serovar E ompA -sekvenssiin, jotta saatiin korkea epitooppipeitto yleisimpiä C. trachomatis -kantoja vastaan ​​(14). Toiseksi käytettiin synteettistä fuusioproteiinia, CTH522:ta. CTH522 on yhdistelmä-DNA-tekniikalla valmistettu versio MOMP:stä, joka sisältää heterologiset immunotoistot VD4-alueista neljästä sukuelinten Ct-serovarista (D, E, F ja G) (11). Rekombinanttifuusioproteiinin taustalla oleva strategia on indusoida monistettuja vasteita suojaaville epitoopeille ja indusoida serovarioiden välinen suoja (11).

Toinen tämänhetkisen kokeen keskeinen piirre oli CTH522:n rinnakkaisarviointi kahdessa selvästi erilaisessa adjuvanttijärjestelmässä (AlOH ja CAF01) yhdistettynä intranasaaliseen tehostean. Tätä yhdistelmää on testattu hiirillä ja minisioilla, joissa sen on osoitettu olevan erittäin immunogeeninen indusoimalla korkeita tiittereitä neutraloivia vasta-aineita, IFN-g:tä tuottavia CD4 plus T-soluja ja nopeutettua sukupuolielinten C. trachomatis -infektion puhdistumaa (11–13). , 15). Lisäksi tämä vertailu heijasti äskettäistä ensimmäistä ihmisellä tehtyä kliinistä tutkimusta, jossa molemmat formulaatiot osoittautuivat immunogeenisiksi ja joissa CAF01 oli ylivoimainen neutraloivien seerumin vasta-aineiden ja Th1-soluvälitteisten immuunivasteiden indusoinnissa (16). Voimakkaiden solujen immuunivasteiden ja erityisesti CD8 T-soluvasteiden ja CD4 T-soluvasteiden yhdistettyjen indusoimiseksi osa eläimistä sai tehoste CT522/CAF01-immunogeenillä sen jälkeen, kun ne oli esivalmistettu adenovektorilla pAL1112 (HuAd{19}}MOMP), MVA pox -vektori tai plasmidi-DNA pcDNA3.1, joka kuljettaa MOMP Con E -antigeenin (14, 17). Kaikki kolme vektoria ovat osoittautuneet immunogeenisiksi NHP:issä, ja äskettäin osoitettiin, että immunisaatiostrategia, jossa yhdistettiin nämä kolme rokotetta ja lopullinen tehosterokotus adjuvanttiproteiiniantigeenin indusoimalla immuunivasteella ja lisäsi jatkuvasti intravaginaalisen C. trachomatis -bakteerin puhdistumaa hiiren C. trachomatis-infektiomalli (14).

Tässä tutkimuksessa osoitamme, että monikomponenttisten immunisaatiostrategioiden erilaiset yhdistelmät sekä proteiinirokotteiden, DNA-rokotteiden että rekombinanttivirusvektorirokotteiden kanssa non-human-kädellisen (NHP) mallissa johtavat erilaisiin immuunivasteisiin. Lisäksi havaitsemme, että DNA-pohjustusta ja proteiinia (CTH522/CAF01) käyttävä hoito-ohjelma kiihdytti bakteerien puhdistumaa Chlamydia trachomatis -altistuksen jälkeen.

Tulokset

Kaikki rokotusohjelmat osoittautuivat turvallisiksi ja aiheuttivat merkittäviä systeemisiä vasta-ainevasteita

Yhteensä 30 cynomolgus-makakia rokotettiin erilaisten prime-boost-rokotusohjelmien jälkeen, mukaan lukien sekä proteiini-, DNA- että vektorirokotteet ja erilaiset antoreitit, kuten kuvassa 1 ja lisäkuvissa 6-10 esitetään). Kaikki eläimet pysyivät terveinä tutkimuksen aikana, eikä niille kehittynyt mitattavissa olevia haitallisia vaikutuksia immunisaatioihin. Lisäksi emme havainneet merkittäviä vaihteluita eläinten painossa tai lämpötilassa (lisäkuvat 1, 2).

Kiinteinä ajankohtina immunisaatioiden jälkeen seerumi kerättiin ja seerumin CTH522-spesifisen IgG:n tasot arvioitiin ELISA:lla. Kaikki 5 rokotettua ryhmää saivat aikaan merkittävän seerumin CTH522 IgG -vasteen (kuvio 2). Kinetiikka oli kuitenkin hieman erilainen viidessä rokotetussa ryhmässä. Kaikki eläimet ryhmissä CTH522/AlOH plus IN, CTH522/CAF01 ja CTH522/CAF01 plus IN nostivat merkittävän IgG-tiitterin vain yhden lihaksensisäisen (IM) immunisoinnin jälkeen, ja IgG-tiitteri pysyi merkitsevänä viimeiseen näytteenottopisteeseen asti (kuvat 2A- C). Seerumin IgG-tasot nousivat hieman hitaammin DNA plus CTH522 ja vektorit plus CTH522 ryhmissä, joissa kaikki eläimet serokonvertoituivat viikolla 8 ja viikolla 4, vastaavasti (kuviot 2D, E).

Ryhmät CTH522/AlOH plus IN, CTH522/CAF01 plus IN ja CTH522/CAF01 lisäsivät merkittävästi seerumin IgG:tä kolmannen IM-tehosterokotteen jälkeen viikolla 16 (kuviot 2A C). DNA plus CTH522 ja vektorit plus CTH522 -ryhmät lisäsivät seerumin IgG-tasoja merkittävästi proteiini/CTH522/CAF01 IM-tehosteannoksen jälkeen viikolla 20 (kuviot 2D, E). Merkittäviä eroja ei havaittu seerumin vasta-ainevasteissa kolminkertaisten im-rokotusten jälkeen CTH522:lla, joka oli formuloitu joko CAF01- tai AlOH-adjuvantilla (kuvat 2A, B), ja intranasaalisten (IN) adjuvanttia sisältämättömien tehosteimmunisaatioiden jälkeen CTH522/AlOH plus IN ja CTH522/CAF01 plus IN-ryhmät eivät indusoineet mitään merkittävää nousua seerumin IgG-vasta-ainetiittereissä (kuviot 2A, B).

Seerumin IgG-vasteen kinetiikka heijasti emättimen nesteiden kinetiikkaa/tasoja, mikä osoittaa, että emättimen pinnalla havaitut vasta-aineet olivat todennäköisesti peräisin verenkierrosta. Samoin silmän IgG-tasot seurasivat myös seerumin IgG-tasoja ja, kuten seerumissa havaittiin, osoittivat, että IM-tehoste DNA/vektoriryhmissä lisäsi silmän IgG-tiitteriä (täydentävä kuva 3).

Seerumin vasta-ainevasteet on suunnattu MOMP-sekvenssin vaihtelevia domeeneja 1, 3 ja 4 vastaan

Seuraavaksi arvioitiin spesifisen epitoopintunnistuksen lisäselvitys seerumin vasta-aineilla eri rokotusohjelmien jälkeen. Seerumi analysoitiin viikolla 24 eli intranasaalisten tehosterokotteiden jälkeen ryhmissä 1 ja 2 sekä IM-tehosterokotteiden jälkeen DNA- ja vektoriryhmissä (ryhmät 4 ja 5). Nämä analyysit suoritettiin peptidisarjalla, joka katti CTH522:n, joka koostui 15 meeripeptidistä 14 aminohapon päällekkäisyydellä

KUVA 1 Tutkimussuunnitelma. Kuvassa näkyvät käytetyt ryhmät, rokotteet ja antoreitit (lihaksensisäinen, IM tai intranasaalinen, IN)

KUVIO 2 (A–F) Seerumin CTH522 IgG -vasta-ainevasteet. Cynomolgus-makakit immunisoitiin seuraamalla erilaisia ​​ensisijaisia ​​tehostusohjelmia (n=5 ryhmää kohti) ja seerumi kerättiin joka toinen viikko. Spesifiset CTH522 IgG-vasta-aineet seerumissa arvioitiin ELISA:lla ja ilmaistiin tässä tiitterinä log10-asteikolla. Harmaat nuolenpäät osoittavat rokotuksia. Jokainen rivi edustaa yhtä eläintä. Tilastollinen merkitsevyys on merkitty tähdillä *p < 0,05 ja **p < 0,01.

Yleensä tunnistetut peptidit sijaitsivat MOMP:n vaihtelevien domeenien (VD:t 1,3,4) lähellä ja sisällä. CTH522/AlOH-ryhmä osoitti jopa jonkin verran tunnistamista VD2-alueesta. Kaikki eläimet saivat voimakkaan vasteen VD4-aluetta vastaan, joka sisältää konservoituneen neutraloivan VD4-epitoopin (11). DNA-ryhmä osoitti kapeimman tunnistamisen VD:iden sisällä (kuva 3), kun taas vektoriryhmä osoitti hieman laajempaa tunnistuskuviota. CTH522/CAF01- ja CTH522/AlOH-ryhmät osoittivat laajimman tunnistuksen, erityisesti SvF:ää ja SvG:tä vastaan.

Seerumin vasta-aineet pystyivät neutraloimaan SvD:n, SvE:n ja SvF:n in vitro

Arvioidakseen rokotteella indusoitujen vasta-aineiden kykyä estää C. trachomatis -infektiota kohdesoluissaan suoritettiin in vitro -neutralointimääritys. Tällä määrityksellä tutkimme sekä SvD:n, SvE:n että SvF:n neutraloitumista. Määritykseen käytettiin seerumia viikolta 24, ja kontrollina käytettiin seerumia naiivista ryhmästä. Kaikki viisi rokotettua ryhmää osoittivat kykyä neutraloida kaikki kolme serotyyppiä (kuvio 4). SvD:tä vastaan ​​CTH522/AlOH plus IN -ryhmä osoitti korkeimman 50 prosentin neutralointitiitterin, kun taas SvE:tä vastaan ​​DNA/CTH522-ryhmä, jota seurasi läheisesti CTH522/AlOH plus IN -ryhmä, osoitti korkeimmat neutralointitiitterit. Vaikka kaikki ryhmät pystyivät neutraloimaan SvF:n, 50 prosentin neutralointitiitterit olivat hieman alhaisemmat kaikille ryhmille tätä serovariaa vastaan ​​verrattuna SvD:hen ja SvE:hen. Vektorit plus CTH522-ryhmä osoittivat alhaisimmat 50 prosentin neutralointitiitterit kaikista rokotetuista ryhmistä.

Erilaiset rokotusohjelmat indusoivat erilaisia ​​T-soluprofiileja

Rokotuksen aiheuttamien T-soluvasteiden arvioimiseksi PBMC:t kerättiin tutkimusjakson aikana ja kylmäsäilytettiin. PBMC:t viikolta 0/perusviiva ja viikolta 22 stimuloitiin uudelleen peptidipoolilla (MOMP) ja arvioitiin solunsisäisten sytokiinien suhteen solunsisäisellä sytokiinivärjäyksellä (ICS) ja muiden sytometrialla. PBMC:t värjättiin seuraavien solumarkkerien suhteen: CD3, CD4, CD8, CD154, CD137 ja sytokiinit: IFN-g, IL-2, TNF-a, IL-22, IL{{14} }A. Avainnusstrategia on esitetty täydentävissä kuvissa 4, 5. PBMC:iden stimulointi MOMP-peptidipoolilla indusoi merkittävän vasteen. IL2:n, IFN-g:n ja TNF-a:n yhdistelmiä ilmentävien antigeenispesifisten CD154 plus CD4 plus T-solujen prosenttiosuus kasvoi 2 viikkoa viimeisen immunisaation (W22) jälkeen kaikissa rokotetuissa ryhmissä (kuvio 5). Suurin osa näistä T-soluista oli monitoimisia siinä mielessä, että ne ilmensivät useita sytokiinejä. Sytokiineja tuottavien antigeenispesifisten CD137 plus CD8 T-solujen prosenttiosuus kasvoi vain DNA- ja vektoriryhmässä (W22) (kuvio 6, joka osoittaa CD137 plus CD8 plus T-solujen monitoiminnallisuuden). Sisään

KUVIO 3 Seerumin epitooppikartoitus viikolla 24. Cynomolgus-makakit immunisoitiin seuraamalla erilaisia ​​prime-boost-ohjelmia (n=5 per ryhmä) ja seerumi kerättiin viikolla 24. Peptidirivi IgG-vasteet CTH522 15mer-päällekkäisyydelle peptidit esitetään mediaanisignaalina kullekin ryhmälle VD1-peptidien (oranssi), VD2:n (vihreä), VD3:n (sininen) ja VD4:n kanssa SvD:stä, E, F ja G (punainen) korostettuina väreillä.

KUVIO 4 C. trachomatis SvD:n, SvE:n ja SvF:n seerumin neutralointi in vitro. Cynomolgus-makakit immunisoitiin seuraamalla erilaisia ​​ensisijaisia ​​tehostusohjelmia (n=5 ryhmää kohti) ja seerumi kerättiin immunisointiohjelman päätyttyä (viikko 24). C. trachomatis SvD:tä, SvE:tä ja SvF:ää inkuboitiin kunkin eläimen seerumin kanssa ja seerumin vasta-aineiden kyky estää infektiota arvioitiin inkuboimalla vasta-aine-bakteeriseosta HaK-solujen päällä ja värjäämällä sulkeumia varten. Musta viiva näyttää SvD:n, harmaa viiva SvE ja tummanharmaa katkoviiva SvF. Punainen katkoviiva osoittaa kunkin serovarren vastavuoroisen 50 prosentin neutralointitiitterin.

Kuvio 5 CD4 T-soluvasteet. Monitoimiset analyysit viikko 22. CD4 plus T-solujen sytokiinituotanto ICS:llä analysoituna. Multifunktionaaliset vasteet stimulaation jälkeen päällekkäisten peptidien ryhmillä MOMP:stä on esitetty. Kunkin piirakan koko on verrannollinen CD154 plus CD4 plus T-solujen prosenttiosuuteen, jotka ilmentävät vähintään yhtä sytokiinia, mukaan lukien IFN-g, TNF-a ja IL-2, sekä IFN-g:tä ja IL:tä ilmentävien solujen osuuksiin. /tai TNF-a- ja/tai IL-2-sytokiinit näkyvät jokaisessa piiraassa.

Rokotuksen aiheuttama emättimen C. trachomatis SvD -infektion nopeutunut puhdistuma

Rokotteen aiheuttamien immuunivasteiden suojaavan tehon arvioimiseksi eläimet altistettiin emättimen infektiolle 5x107 IFU:lla C. trachomatis SvD. Rokotuksen jälkeen emättimen klamydiakuorma määritettiin PCR-detektiolla klamydioiden DNA:sta emättimen vanupuikoista (kuvio 7). Infektio poistui kaikista eläimistä viikolla 5 DNA plus CTH522/CAF01 ja Vector plus CTH522 ryhmässä, viikolla 6 CAF01/CTH522 ryhmässä ja viikkoon 8 CTH522/Alum plus ryhmässä. IN-ryhmä (kuva 7). Kontrolliryhmässä viikolla 8 80 prosenttia eläimistä oli selvinnyt infektiosta ja 1 eläin pysyi PCR-positiivisena viikolla 9. IN-tehoste CTH522/CAF01 plus IN -ryhmässä ei lisännyt suojaa (kuvio 7). Log-rank (Mantel-Cox) -testi, jossa verrattiin kaikkia ryhmiä, osoitti P-arvon 0,0994, ja kun kutakin ryhmää verrattiin erikseen kontrolliryhmiin, vain DNA-CTH522-ryhmä osoitti P-arvon alle 0,05 (P). arvo=0.0257).

Keskustelu

Tämä tutkimus suunniteltiin indusoimaan soluimmuniteettia (CD4 ja CD8) yhdistettynä humoraaliseen immuniteettiin ja räätälöimään adaptiivisen immuniteetin fenotyyppiä MOMP-pohjaisilla klamydiarokotteilla. Arvioimme yhdistettyjen monikomponenttisten immunisaatiostrategioiden immunogeenisyyttä ja suojaavaa tehokkuutta sekä proteiinirokotteilla (CTH522, Con E), DNA-rokotteella ja rekombinanttivirusvektorilla (MVA MOMP) että adenovektoriin perustuvilla rokotteilla ei-ihmiskädellisillä ( NHP) malli.

Tiedot osoittivat, että kaikki immunisointiohjelmat olivat immunogeenisiä ja indusoivat sekä sellulaarisen että humoraalisen vasteen, joka koostui neutraloivista vasta-aineista (kuvat 2-4). Proteiinirokote CTH522, joka oli formuloitu joko CAF01:n tai AlOH:n kanssa, osoitti nopean systeemisen antigeenispesifisen IgG:n induktion (kuvio 2). Emme havainneet merkittäviä eroja AlOH- ja CAF01-adjuvanttirokotteiden indusoimien vasteiden välillä, mikä on sopusoinnussa näillä adjuvanteilla ihmisillä havaittujen vasteiden kanssa (16). DNA- ja vektorirokotusohjelmat indusoivat myös merkittäviä antigeenispesifisten systeemisten vasta-aineiden tiittereitä, jotka lisääntyivät merkittävästi proteiinitehosteimmunisaation jälkeen (kuvio 2). Yhdessä tulostemme kanssa aiempi hiirillä tehty tutkimus osoitti myös, että proteiinirokotusohjelmat indusoivat korkeampia antigeenispesifisiä vasta-ainetasoja verrattuna DNA- ja vektorirokoteantigeeneihin ja myös tehostivat tehokkaasti näiden ryhmien tiittereitä (15).

MOMP sisältää neljä VD:tä, jotka paljastuvat Ct:n tarttuvan muodon pinnalla. Nämä alueet ovat vasta-aineriippuvaisen immuniteetin pääkohteita sekä neutraloivien vasta-aineiden että Fc-reseptorivälitteisen immuniteetin kautta (18). Aiemmat tutkimukset ovat osoittaneet, että rokotteen aiheuttaman neutraloivan seerumin adoptiivinen siirto vähensi huomattavasti varhaista bakteerien leviämistä C. trachomatis -infektion jälkeen (6, 11, 19–21). Siten vasta-aineilla näyttää olevan rooli alkuperäisen siirrosteen neutraloinnissa/hallinnassa, luultavasti yhteistyössä soluimmuniteetin kanssa. Yksityiskohtaisella B-soluepitooppikartoituksella havaitsimme VD-alueiden 1, 3, 4 tunnistamisen kaikissa rokoteryhmissä. DNA- ja vektoriryhmät tunnistivat myös VD1-, 3- ja 4-alueet. Nämä ryhmät osoittivat kuitenkin hieman kapeampaa tunnistusta näissä VD:issä verrattuna CAF01- ja AlOH-ryhmiin, mikä todennäköisesti heijastaa sitä, että vektoriryhmissä oleva Con E -antigeeni ei sisällä SvF:n ja G:n VD4-aluetta (kuvio 3). VD4-alueen tunnistaminen korreloi kaikkien rokotestrategioiden kyvyn kanssa indusoida neutraloivia vasta-aineita SvD-, SvE- ja SvF-vasta-aineita vastaan.

Parenteraalinen immunisaatio CTH522:lla CAF01:ssä ja AlOH:ssa indusoi merkittäviä limakalvovasta-aineiden (IgG) tasoja sukuelinten alueella ja silmässä, ja tasot korreloivat seerumin tiittereiden kanssa (täydentävä kuva 3, viikko 18). DNA- ja vektorirokotteet eivät yksinään indusoineet limakalvon IgG:tä, mikä heijastaa alhaisempia seerumitiittereitä verrattuna pelkkään proteiiniin. Kuitenkin CTH522/CAF01 IM-tehosteannoksen jälkeen näissä ryhmissä seerumin Ab-arvo lisääntyi merkittävästi. tasot ja sekä emättimen että silmän IgG, samalla tasolla kuin pelkkä proteiini (lisäkuva 3, viikko 18). CTH522:n rinnakkaisella arvioinnilla eri pohjustusadjuvanttijärjestelmissä (AlOH ja CAF01), jota seurasi kaksinkertainen intranasaalinen tehoste antigeenillä, ei ollut tehostavaa vaikutusta limakalvojen vasta-ainetasoihin (lisäkuva 3, viikko 22). Siten seerumin IgG-tasot näkyvät kaikkien ryhmien limakalvolla. Äskettäisessä ihmisen faasin I kokeessa arvioitiin myös CTH522:n rinnakkaisarviointi AlOH:ssa ja CAF01:ssä, mitä seurasi kaksinkertainen intranasaalinen tehoste. Tässä myös limakalvon IgG-tiitterit korreloivat hyvin seerumin IgG-pitoisuuksien kanssa (16). Kuitenkin, toisin kuin NHP-mallissa, ihmiskoe osoitti IN-tehostuksen vaikutuksen CAF01-ryhmässä, mikä johti sekä IgG- että IgA-tasojen kohonneisiin. Valitettavasti IgA-arviointi ei ollut mahdollista nykyisessä tutkimuksessa rajoitetun materiaalin ja väärien positiivisten signaalien vuoksi, jotka johtuivat määrityksessä käytetystä ristiin reagoivasta sekundaarisesta vasta-aineesta. Molemmissa tutkimuksissa käytettiin VaxINator-laitetta, joka on suunniteltu sumuttamaan nenälääkkeitä limakalvon adsorptiota varten. Ihmisen nenäontelo on kuitenkin paljon tilavampi kuin NHP:n ja voidaan olettaa, että tämä voisi vaikuttaa tasaiseen antigeenin jakautumiseen ja ottoon.

Useat tutkimukset sekä ihmisillä että jyrsijöillä ovat osoittaneet Th1 T-soluimmuniteetin ja efektorisytokiinin IFN-g:n merkityksen (8, 22–27). Sitä vastoin CD8 T-solujen suojaavasta roolista tiedetään vähemmän (28–33). Kaikki rokoteryhmät indusoivat CD4-T-soluja, mutta vain DNA- ja vektoriryhmät osoittivat CD8-T-soluvasteen (kuviot 6 ja 7). Mitattujen sytokiinien perusteella CD8 T-solut koostuivat rajoitetusta määrästä alaryhmiä verrattuna CD4 T-soluihin, jotka voitiin jakaa kuuteen tai useampaan alaryhmään, joista suurin osa tuotti useita sytokiinejä (kuvio 7). CD4 T-solut osoittivat enemmän IL-2-ilmentäviä alajoukkoja kuin CD8 T-solut, jotka sisälsivät pääasiassa vain yhden IL-2-ilmentyvän alajoukon, joka ilmensi IL-2-proteiinia yhdessä IFN-g:n ja TNF- a (Kuva 6). CD8 T-soluja hallitsi suuri populaatio, joka tuotti vain IFN-g:tä, kun taas toinen hallitseva CD8 T-solualaryhmä tuotti sekä IFN-g:tä että TNF-a:ta. Tämä CD4-T-solujen ja CD8-T-solujen sytokiinikuvio ei ole erilainen kuin se, mitä on havaittu hiirillä testattaessa rokotestrategioita, jotka pystyvät indusoimaan sekä CD4- että CD8-T-soluja (34).

Samanlainen strategia, johon sisältyi DNA-rokotus, jota seurasi MOMP-proteiinin (35) immuunijärjestelmää stimuloivien kompleksien (ISCOM) tehostaminen, indusoi vahvan suojan Chlamydia muridarum -keuhkoinfektiota vastaan. Tuossa tutkimuksessa DNA MOMP (tai MOMP/ISCOMS) indusoi merkittävästi vähemmän suojaa (35). Toinen tutkimus osoitti, että hiirten rokottaminen DNA MOMP -plasmideilla ilman alayksikkörokotetta ei onnistunut suojaamaan sukupuolielinten C. trachomatis -altistusta vastaan ​​(36), mikä osoittaa, että DNA-strategia hyötyy siitä, että sitä täydennetään alayksikkörokotteella, joka indusoi CD4 T-soluja ja -vasta-aineita. . On huomattava, että DNA-rokotteet ovat osoittaneet suhteellisen alhaisia ​​immunogeenisyysprofiileja ihmisillä tehdyissä kliinisissä kokeissa, mikä saattaa olla tarpeen tulevissa tutkimuksissa (37).

Vaikka tässä tutkimuksessa käytetty Ct-infektioannos on suurempi kuin ihmisten luonnollisen infektion kokema annos, se valittiin siten, että varmistettiin, että kaikki eläimet ovat saaneet tartunnan, mikä on tärkeää ottaen huomioon kunkin ryhmän pienen eläinmäärän. Annos on linjassa aiemmissa tutkimuksissa käytetyn annoksen kanssa, joka vaihteli välillä 106-108 (38, 39). Annoksen pienentäminen mallissamme johti lisääntyneeseen vaihteluun tartuntataudin suhteen (tietoja ei näytetä). Myös pienempiä annoksia toistuvasti on käytetty (40, 41). Tämä ei kuitenkaan ole optimaalinen protokolla, kun tavoitteena on testata rokotteiden suojatehokkuutta, varsinkin jos luonnollinen immuniteetti välittää suojaa ennen infektioprotokollan valmistumista. Voidaan olettaa, että suuren annoksen käyttäminen saattaa vaatia immuunivasteen, joka sisältää kaikki immuunijärjestelmän käsivarret, kuten antigeenispesifiset CD4 T-solut, CD8 T-solut sekä neutraloivia vasta-aineita, jotta voidaan vähentää bakteerien määrää. tasot. Tämä selittäisi myös sen, miksi kaikissa ryhmissä indusoidut neutraloivat vasta-aineet eivät johtaneet merkittävään suojaukseen kaikissa ryhmissä [vaikka havaitsimme suuntauksen varhaiseen suojaukseen useimmissa ryhmissä, joissa vasta-aineilla uskotaan olevan rooli (kuva 7)] . Yritämme parhaillaan kehittää fyysisesti merkityksellisempää mallia.

Yhdessä tietomme osoittivat, että adjuvanttiin CAF01 tai AlOH formuloitu CTH522-antigeeni voi indusoida sekä monitoimisia T-soluja että neutraloivia vasta-aineita NHP:issä. Lisäksi tuloksemme viittasivat siihen, että DNA-rokotteesta ja CTH522/CAF01-alayksikkörokotteesta koostuva heterologinen rokotestrategia edustaa lupaavaa rokotestrategiaa monitahoisen immuunivasteen indusoimiseksi, jossa on korkea neutraloivien Abs-taso yhdistettynä vahvoihin CD4- ja CD8-T-soluvasteisiin. voi merkittävästi nopeuttaa C. trachomatis -infektion poistumista.

Kysy lisää:

Sähköposti:wallence.suen@wecistanche.com

Whatsapp/Puh.: plus 86 15292862950

Wecistanche kauppa

https://www.xjcistanche.com/cistanche-shop