Melatoniini estää T-lymfosyyttien tunkeutumisen hypertensiivisten rottien munuaisiin runsaan suolaisen ruokavalion aiheuttamana estämällä CXCR3-ligandikemokiinien ilmentymisen

Lisätietoja:ali.ma@wecistanche.com

Ariel Bier¹, Rawan Khashab², Yehonatan Sharabi^1,2,3, Ehud Grossman^1,2,3ja Avshalom Leibowitz^1,2,3,*

¹Medicine D, The Chaim Sheba Medical Center, Tel-Hashomer 5262000, Israel; arielbier@gmail.com (AB);Yehonatan.Sharabi@sheba.health.gov.il (YS); Ehud.Grossman@sheba.health.gov.il (EG)² Hypertension Unit, the Chaim Sheba Medical Center, Tel-Hashomer 5262000, Israel;rawankhasbab@gmail.com³Sacklerin lääketieteellinen tiedekunta, Tel-Avivin yliopisto, Tel-Aviv 6997801, Israel*

Tiivistelmä: Aiemmassa tutkimuksessa osoitimme senmelatoniiniestäämunuainenvaurio suolan aiheuttamassa hypertensiomallissa vähentämällä oksidatiivista stressiä. Oletimme, että tämä vaikutus liittyy melatoniinin immunomoduloiviin ominaisuuksiin. In vivo Study-Dahl -suolaherkille (DSS) rotille syötettiin normaalia ruokaa, runsaasti suolaa sisältävää ruokavaliota (HSD) tai HSD- jamelatoniini(30 mg/kg/vrk) vedessä neljän viikon ajan.Munuaisetkerättiin lymfosyyttien välitöntä eristämistä ja karakterisointia varten virtaussytometrialla (CD3 plus CD4 plus ja CD3 plus CD8 plus) ja lymfosyyttien kemoattraktantilla (pääasiassa CXCLkemokiinit) geeniekspressiotutkimukset. In vitro -tutkimuksessa rotalla mesangiaalisoluja (RMC) viljeltiin runsaasti suolaa sisältävässä alustassa ilman jamelatoniini. HSD liittyi merkittävään CD4 plus- ja CD8 plus T-lymfosyyttien munuaisfiltraatioon verrattuna kontrolliin. Melatoniini vähensi merkittävästi munuaislymfosyyttien infiltraatiota. HSD lisäsi merkittävästi CXCL:n mRNA-ilmentymistäkemokiinitMelatoniinin lisääminen HSD:hen poisti tämän vaikutuksen. RMC-solujen käsittely suolalla lisäsi CXCL10:n ja CXCL11:n, mutta ei CXCL9:n, ilmentymistä. Lisätäänmelatoniiniviljelyalustaan ​​esti tämän kasvun. HSD-ruokittujen rottien hoito melatoniinilla vähensi munuaisten lymfosyyttien kemoattraktantti-RNA:n ilmentymistä ja liittyy merkittävästi munuaisten T-lymfosyyttien infiltraation vähenemiseen. Suolalla voi olla suora vaikutus kemokiinia tuottaviin munuaissoluihin, minkä melatoniinihoito heikentää.

Avainsanat:melatoniini; suola; T-lymfosyytit; verenpainetauti;munuainen; CXCL 9; CXCL 10; CXCL 11

1. Esittely

Hypertensio (HTN) on johtava muunnettavissa oleva kardiovaskulaarinen riskitekijä. Väestön ikääntymisestä johtuen HTN:n esiintyvyys kasvaa tasaisesti ja saavuttaa jopa 30 prosenttia iäkkäillä [1]. Huolimatta erilaisista lääketieteellisistä terapeuttisista vaihtoehdoista, HTN:n maailmanlaajuinen hallinta on heikko. Hallitsemattoman HTN:n seuraukset ovat tuhoisia, ja niillä on valtava kielteinen vaikutus kansanterveyteen [2].

HTN:n patogeneesiin liittyy useita käyttäytymiseen, ympäristöön ja geneettisiin tekijöihin liittyviä tekijöitä. Länsimaisen ruokavalion korkean suolapitoisuuden on katsottu vaikuttavan merkittävästi HTN:ään, ja se liittyy lisääntyneeseen sairastumiseen ja kuolleisuuteen. Ohjeissa ja julkisuudessa suositellaan suolan käytön vähentämistä väestölle. Kaikki eivät kuitenkaan voi hyötyä tästä rajoituksesta, koska suolaherkkyyden HTN:ään yhdistävää patofysiologiaa ei täysin ymmärretä ja se tarvitsee parempaa mekaanista ymmärrystä [3]. Siksi uudet strategiat ovat ratkaisevan tärkeitä paremman HTN-ymmärryksen ja -hallinnan kannalta, mikä tekee uusista tutkimusparadigmoista välittömän tarpeen.

Tulehduksen ja oksidatiivisen stressin on havaittu olevan osallisena välttämättömän HTN:n patogeneesissä. Samalla kun tutkitaan näitä prosesseja käynnistäviä ja jatkavia laukaisimia, monet kokeelliset HTN-mallit viittaavat adaptiiviseen immuunivasteeseen [4].

NapsautaCistanchen edut ja sivuvaikutukset munuaisten toiminnalle

Vihjeitä, jotka yhdistävät adaptiivisen immuniteetin HTN:ään, on ollut olemassa jo 1960-luvulta lähtien. Kuitenkin vasta viime aikoina, immuunijärjestelmän paremman ymmärryksen myötä, edistystä on voitu saavuttaa tähän suuntaan. Uraauurtava tutkimus Guzik et al. osoitti, että angiotensiini (Ang) II tai deoksikortikosteroni (DOC) suola HTN tylsistettiin rag1-/-hiirissä, joista puuttuu T- ja B-lymfosyyttejä, ja T-, mutta ei B-solujen adoptiivinen siirto voisi palauttaa verenpainevasteen [5]. Tämän artikkelin jälkeen useiden adoptiivisten immuniteettikomponenttien havaittiin olevan merkityksellisiä HTN:n patogeneesille useimmissa yleisissä eläinmalleissa. T-solujen roolia suola-indusoidussa HTN-mallissa on myös tutkittu laajasti. In vitro -tutkimukset osoittavat, että suola voi työntää naiivia T-solujen erilaistumista TH17-soluiksi [6]. Lukuisat in vivo -työt korkeasuolaisella ruokavaliolla (HSD) indusoiduilla HTN-malleilla, kuten Dhal-suolaherkillä (DSS) rotilla, osoittavat laajaa munuaisten T-solujen infiltraatiota [7–9].

Monien fysiologisten prosessien joukossamelatoniiniaosallistuminen verenpaineen säätelyyn on jokseenkin intuitiivista. Verenpaineen vuorokausirytmi rohkaisee tutkimaan melatoniinia ja HTN:ää. Monet menneisyydessä ihmisissä ja kokeellisissa malleissa tehdyt työt liittivät alhaiset melatoniinitasot HTN:ään [10]. Jotkut kliiniset tiedot viittaavat siihen, että melatoniinilisä voi hoitaa HTN:ää, pääasiassa potilailla, joilla on yöllinen HTN [11]. Näiden tietojen epäjohdonmukaisuus herättää kuitenkin kysymyksiä siitä, ovatko ei-vuorokausivaihtelut melatoniinin ominaisuudet mukana myös verenpaineen säätelyssä.

Melatoniinin anti-inflammatoriset ja hapettumista estävät ominaisuudet ovat ehdottaneet, että melatoniini on vuorovaikutuksessa immuunijärjestelmän kanssa. Esiin tulevat tiedot ovat vaikuttaneet melatoniinin signaloinnin rooliin T-solujen kehityksessä, aktivaatiossa, erilaistumisessa ja muistissa. Siitä on todisteitamelatoniiniT-soluissa on kalvo- ja tumareseptoreita [12,13].Melatoniinivaikuttaa monien immuunivasteeseen osallistuvien sytokiinien, kuten asinterferonin (IFN) tuotantoon, joka on Th1-vasteen pääsäätelijä [14].

Joidenkin tutkijoiden mukaan oksidatiivinen stressi ja T-soluvaste edistävät yhdessä HTN:n ja elinten hypertensiivisten vaurioiden kehittymistä [15]. Aiemmassa työssämme osoitimme senmelatoniinivähentää paikallista (munuaisten) oksidatiivista stressiä ja ehkäisee suolan aiheuttamaa munuaisfibroosia ja proteinuriaa suolaherkässä HTN-rottamallissa (DSS-malli) [16]. Koska oksidatiivisella stressillä on keskeinen rooli HTN:ään liittyvässä adaptiivisessa immuunivasteessa, oletimme, että melatoniinin immunomoduloivat ominaisuudet ovat vastuussa sen suojaavasta roolista HSD-indusoidussa HTN:ssä.

Tämän tutkimuksen tavoitteena on arvioida, onkomelatoniinivähentää suolan aiheuttamaa T-soluvastetta ja selvittää tästä vaikutuksesta vastuussa olevia mekanismeja.

2. Materiaalit ja metodit

2.1. Eläimet ja tutkimuspöytäkirja

Tutkimusprotokollan hyväksyi Israelissa sijaitsevan Sheban lääketieteellisen keskuksen institutionaalinen eläinten etiikkakomitea. Heidän terveydentilaa seurattiin mittaamalla ruumiinpaino ja päivittäisellä yleishavainnolla kunkin eläimen liikkeistä ja terveydentilasta. Dahl-suolaherkkiä urosrottia, neljä viikkoa vanhoja (RGD Cat# 1582190, RRID: RGD_1582190), olivat pidetty eläinlaitoksessa tavallisissa häkeissä (kaksi rottaa häkissä) 22 ◦C:ssa 14 h valo/10 h pimeysjaksolla. Rotat pidettiin normaalilla suolaruokavaliolla, ja niille annettiin vesijohtovettä juoda ad libitum viiden päivän ajan. Rotat jaettiin sitten kolmeen ryhmään (n=8) ruokavalion mukaan 8 viikon aikana. Eettisen komitean mukaan eläimet, joissa oli merkkejä sairaudesta ja kärsimyksestä, oli lopetettava.

Kontrolliryhmälle annettiin tavanomaista rotan ruokaa (2018 SC; Teklad Envigo, Madison, WI, USA) ja vesijohtovettä; runsaasti suolaa sisältävän ruokavalion (HSD) ryhmälle annettiin sopivaa rikastettua suolaruokaa (4 prosenttia) (TD.120485; Teklad Envigo, Madison, WI, USA) ja vesijohtovettä, jamelatoniiniryhmälle annettiin samaa rikastettua suolaruokavaliota (4 prosenttia) melatoniinilla (M5250; Sigma, Rehovot, Israel) (30 mg/kg/vrk) juomavedessä. Painoa ja vedenkulutusta mitattiin säännöllisesti. Oikea määrä melatoniinia liuotettiin tulitikkujen vedentarpeisiin jokaista häkkiä kohden, jotta kullekin eläimelle saatiin oikea annos. Päivä nolla määritellään HSD:n ja melatoniinin kulutuksen alkamispäiväksi. Tutkimuksen lopussa rotat tapettiin syväanestesioimalla 3-prosenttisella isofluraanilla (puudutuksen syvyys vahvistettiin takajalan puristamalla) jamunuaisetkorjattiin. Molemmat munuaiset poistettiin ja puolileikkattiin. Munuaiset otettiin virtaussytometria-analyysiä varten lukuun ottamatta useita osia, jotka poistettiin nopeasti ja pakastettiin nestemäiseen N2:een ja säilytettiin -80 ◦C:ssa. Jäädytteitä käytettiin RNA:n uuttamiseen.

Cistanche-munuaistaudin oireet

2.2. Reaaliaikainen kvantitatiivinen käänteistranskriptio-PCR

Geenien mRNA-ilmentymistasot varmistettiinmunuainenkudos reaaliaikaisella kvantitatiivisella käänteistranskriptaasi-PCR:llä (qRT-PCR). Kokonais-RNA uutettiin munuaiskudoksesta käyttämällä NucleoSpin RNA -kittiä (MACHERY-NAGEL, Düren, Saksa). Käänteistranskriptio suoritettiin käyttämällä Applied Biosystems High-Capacity cDNAReverse Transcription Kit -sarjaa (Applied Biosystems, Foster City, CA, USA). qRT-PCR-reaktiot suoritettiin käyttämällä Power SYBR Green PCR Master Mixiä (Applied Biosystems, Warrington, UK) ja Applied Biosystems 7500 reaaliaikaista PCR-järjestelmää. Jaksoolosuhteet olivat: ensimmäinen yksittäinen vaihe 95 ◦C 0.20 min ja sitten 40 sykliä sulatusvaihetta 3 s 95 ◦C:ssa ja pidennetty vaihe 30 s 60 ◦C. 40 syklin lopussa suoritettiin sulakäyrä. Ribosomaalisen proteiinin lateraalisen varren alayksikön P0 (Rplp0) mRNA:ta käytettiin sisäisenä kontrollina. Alukkeet on lueteltu taulukossa 1.

Taulukko 1. Luettelo tässä tutkimuksessa käytetyistä rotan alukkeista.

2.3. T-solujen eristäminen munuaisista

After removing the renal capsule, the two munuaisetjauhettiin ja kiusattiin 2 ml:n ruiskun männällä 100 µm:n solusiivilä RPMI 1640:ssä, joka sisälsi 2 mML-glutamiinia, 10 prosenttia FBS:ää, 10 ug/ml DNaasi 1:tä (Stem Cells Technology, Cambridge, MA , USA) ja 0,1 prosenttia kollagenaasi tyyppi IV (CLS 4, Worthington Decatur, AL, USA). Liuosta inkuboitiin 25 minuuttia 37 °C:ssa. Pesuliuos (DPBS/2 % FBS/2 mM EDTA) lisättiin sitten munuaishomogenaattiin, jotta saavutettiin 45 ml, ja suodatettiin 70 um solusuodattimen läpi. Liuos sentrifugoitiin nopeudella 400 x g/7 min. ja pelletti suspendoitiin 5 ml:n pesuliuokseen ja suodatettiin 40 um:n solusiivilän läpi ja sentrifugoitiin uudelleen nopeudella 400 x g/7 min. Pelletti suspendoitiin uudelleen 3 ml:aan FBS:ää (10 mM EDTA) ja kerrostettiin Histopaque-1083:n (Sigma, Rehovot, Israel) päälle ja sentrifugoitiin 20 ◦C:ssa nopeudella 400 x g/30 min jarrun ollessa pois päältä. Histopaquen yläpuolella oleva mononukleaarinen solukerros poistettiin, pestiin pesuliuoksella kahdesti ja suspendoitiin 5 ml:n pesuliuokseen virtaussytometristä analyysiä varten.

2.4. Virtaussytometria

Jokaisesta ryhmästä,munuaiset5–7 rotta analysoitiin. Jokaisesta näytteestä otettiin 1 × 106 solua. Eristettyjä mononukleaarisia soluja inkuboitiin solunulkoisten markkerien kanssa: anti-CD3 (Thermo Fisher Scientific Cat# 12-0030-82, RRID:AB_465493) ja sen isotyyppikontrolli (Thermo Fisher Scientific Cat# 12-4742-41, RRID) :AB_10753770), anti-CD4 (Thermo FisherScientific Cat# 17-0040-80, RRID:AB_1210581) ja sen isotyyppikontrolli (Thermo Fisher Scientific Cat# 17-4724-81, RRID: AB_470188), anti-CD8 (Thermo Fisher Scientific Cat# 25-0084-82, RRID:AB_10548361) ja sen isotyyppikontrolli (Thermo Fisher Scientific Cat# 25-4714-80,RRID: AB_657914). Kaikki solut analysoitiin virtaussytometrialla (BD FACSCalibur Flow Cytometry System, RRID: SCR_000401) käyttämällä FlowJo-ohjelmistoa (FlowJo, RRID: SCR-008520).

Cistanche-munuaisten toiminta

2.5. Soluviljely

Mesangiaalinen rotan solulinja, RMC (ATCC Cat# CRL{{0}}, RRID: CVCL_0506), saatiin ATCC®:ltä. Solua viljeltiin Dulbeccon modifioidussa Eagle-elatusaineessa (01-055-1A, biologiset teollisuudenalat, Beit HaEmek, Israel) 4 mM L-glutamiinilla, joka oli säädetty sisältämään 1,5 g/l natriumbikarbonaattia ja 4,5 g/l glukoosia ja täydennettynä 0,4 mg/mlLG418 ja 15 prosenttia naudan sikiön seerumia. Melatoniini saatiin Sigmalta (M5250 Rehovot, Israel). A 250 mMmelatoniinimassa valmistettiin etanolissa. Soluja viljeltiin normaaleissa tai runsaasti suolaa sisältävissä olosuhteissa (lisäten 80 mM NaCl:a elatusaineeseen) ilman melatoniinia (0,5 mM) tai sen kanssa. Melatoniinikäsittely ajoitettiin 45 minuuttia ennen NaCl:n lisäämistä elatusaineeseen. Kaikki kokeet tehtiin 6-kuoppaisilla levyillä, joissa oli 3 x 105 solua kuoppaa kohti, ja ne suoritettiin kuudella riippumattomalla kokeella.

2.6. Tilastollinen analyysi

Tiedot esitetään keskiarvona ± SEM. Tilastoanalyysit suoritettiin käyttämällä IBMSPSS Statisticsia, RRID: SCR_019096. Yksisuuntainen varianssianalyysi (ANOVA) ja posthoc Tukey-menetelmä tutkivat ryhmien välisiä eroja. Reaaliaikaiset qPCR-tiedot analysoitiin käyttämällä DataAssist, RRID: SCR_014969.

3. Tulokset

3.1. Melatoniini suojaa HSD:tä käyttäviä rottia

Rottien ikä tämän tutkimuksen aikana oli 4–13 viikkoa. Tässä iässä rottien hyvinvointia ilmaisee painonnousu, jota kontrolliryhmä osoitti [17]. HSD-ryhmä saavutti kuitenkin tasanteen päivänä 30 ja lisäämällämelatoniiniHSD paransi tätä ilmiötä (kuva 1A). HSD-ryhmällä oli korkea kuolleisuusaste, jossa 50 prosenttia rotista kuoli tai niillä oli kliininen tila, joka vaati eutanasiaa eläinetiikkakomitean sääntöjen mukaan koejakson aikana. Melatoniinilisät estivät rottien kuolleisuutta merkittävästi, jolloin vain yksi kahdeksasta rotista kuoli päivänä 58, koejakson lopussa (kuvio 1B).

Kuvio 1.Melatoniiniparansi verenpainetta ja eloonjäämistä HSD:ssä. DSS-rottia hoidettiin 9 viikon ajan HSD:llä melatoniinin kanssa ja ilman. Runsaasti suolaa sisältävä ruokavalio alensi painoa päivästä 36 ja melatoniini hillitsi tätä vaikutusta (A). HSD lisäsi kuolleisuutta päivästä 4 0. HSD-fedrattien hoitaminen melatoniinilla parantaa niiden selviytymistä. (B). (n=8) *-p Pienempi tai yhtä suuri kuin 0.05 suola ja suola plus melatoniini vs. kontrolli. #-p Vähemmän tai yhtä kuin 0,05 suolaa verrattuna kontrolliin ja suolaan ja melatoniiniin. HSD - runsaasti suolaa sisältävä ruokavalio.

3.2. Melatoniini ehkäisee HSD:n aiheuttamaa munuaisten T-solujen infiltraatiota

Eristimme solutmunuainenja portti ne T-solumarkkeriin CD3. CD3 plus -solut portittiin CD4:lle ja CD8:lle. Sekä CD3 plus CD4 plus että CD3 plus CD8 plus olivat merkittävästi korkeampia HSD:ssä (5,18 ± 1,62 ja 4,6 ± 0,75 prosenttia) verrattuna kontrolliin (0,16 ± {{18}). }.{{20}}2 ja 0,95 ± 0,15 prosenttia, vastaavasti) jamelatoniiniHSD:n lisäys vähensi sekä CD3 plus CD4 plus että CD3 plus CD8 plus -solut takaisin kontrollitasoille (0.68 ± 0.21 ja 1.37 ± 0.45, vastaavasti) (kuva 2A-D).

Kuva 2. Melatoniini estää T-solujen tunkeutumisen soluihinmunuainen. T-solut eristettiin rottien munuaisista ja niistä tehtiin CD3-portti. CD3-positiiviset solut suojattiin CD4:lle ja CD8:lle. Melatoniini (C) vähensi sekä CD3 plus CD4 plus että CD3 plus CD8 plus verrattuna HSD:hen ilman melatoniinia (B) ilman eroa kontrolliryhmään (A). Kaikkien rottien analyysi on esitetty kohdassa (D) (n=7–8). HSD - runsaasti suolaa sisältävä ruokavalio. *-p Pienempi tai yhtä suuri kuin 0.05 vs. kontrolli. #-p Vähemmän tai yhtä suuri kuin 0,05 vs. suola plus melatoniini.

3.3. Melatoniini vähentää tiettyjä munuaisten kemokiineja, jotka säädeltiin HSD:ssä

T-solujen rekrytoitumista tulehduksellisiin kudoksiin säätelee paikallinen kemokiiniekspressio. Sen vuoksi mittasimme kahden kemokiiniperheen ilmentymisen rotissamunuaiset: kemokiinin (CXC-motiivi) ligandi (CXCL) perhe ja kemokiini (C-Cmotif) ligandi (CCL) perhe.

CXCL-perheen osalta CXCL 9, 10 ja 11, jotka houkuttelevat T-soluja kohdekudokseensa käyttämällä T-soluissa olevaa CXCR3-reseptoria, lisääntyivät merkittävästi HSD-rotissa. TäydennysmelatoniiniHSD:hen vähensivät niiden ilmentymistä takaisin kontrollitasoille. Sama kuvio havaittiin CXCL 1:lle ja 16:lle. CXCL12:lle ei kuitenkaan havaittu HSD:ssä noususäätelyä (kuvio 3A).

CCL-perheen osalta CCL 2, 4, 12, 17, 19 ja CX3CL1 eivät osoittaneet HSD:n noususäätelyä. CCL3 lisääntyi HSD:ssä, mutta mitään merkittävää muutosta ei havaittu melatoniinin lisäämisellä ruokavalioon. CCL7:lle HSD:n merkittävä lisäys ja merkittävä laskusäätely lisäämällämelatoniiniHSD:lle havaittiin (kuva 3B).

Kuva 3. Upregulation ofmunuaisetkemokiinitHSD:ssä melatoniinin kanssa ja ilman. Kemokiinin (CXC-motiivi) ligandin (CXCL) perheen (A), kemokiinin (CC-motiivi) ligandiperheen ja CX3CL1:n (B) ilmentyminen määritettiin rotissa. (n=7–8) *-p Pienempi tai yhtä suuri kuin 0.05 vs. kontrolli. #-p Vähemmän tai yhtä suuri kuin 0,05 vs. suola plus melatonointi. HSD - runsaasti suolaa sisältävä ruokavalio.

3.4. Melatoniinin suora vaikutus RMC-mesangiaaliseen solulinjaan

Keskityimme sitten CXCL9:ään, 10:een ja 11:een, jotka houkuttelevat T-soluja sitoutumalla CXCR3-reseptoriin. Olemme määrittäneet näiden ilmaisunkemokiinitRMC-soluissa, jotka ovat rotan mesangiaalisolulinjaa.

Käsittelimme solut 80 mM NaCl:lla ilman ja 0,5 mM:llamelatoniini. Tämä NaCl-pitoisuus lisäsi merkittävästi CXCR10:n ilmentymistä 2,4 ± 0.26--kertaiseksi kontrolliin verrattuna, ja 0,5 mM melatoniinin lisäys väheni merkittävästi tämä lauseke on 1,4 ± 0.{{10}}-kertaiseksi verrattuna kontrolliin (kuva 4A). CXCL11:n tapauksessa 80 mM NaCl lisäsi ilmentymistä merkitsevästi 3 ± 048--kertaiseksi kontrolliin verrattuna, ja 0,5 mM melatoniinin lisäys vähensi ilmentymistä merkitsevästi 1,8 ± 0:aan.{22 }}taitto verrattuna kontrolliin (kuva 4B). CXCL9:ää ei havaittu RMC-soluissa.

Kuva 4. Suola lisäsi CXCL10- ja CXCL11-ekspressiota mesangiaalisolulinjassa, jossa melatoninhoito vähensi sen ilmentymistä. RMC:tä (rottien mesangiaalinen solulinja) käsiteltiin suolalla 80 mM 0,5 mM melatoniinin kanssa ja ilman sitä. CXCL10 (A) ja CXCL11 (B) säädeltiin lisää suolakäsittelyllä ja lisäämällämelatoniinivähentää tätä lisäsääntelyä. Kaaviot esittävät 6 riippumatonta koetta. *-p Pienempi tai yhtä suuri kuin 0.001 vs. kontrolli #-p Pienempi tai yhtä suuri kuin 0.005 vs. suola 80 mM ja melatoniini 0,5 mM. $-p Pienempi tai yhtä suuri kuin 0,05 verrattuna suolaan 80 mM ja melatoniiniin 0,5 mM.

4. Keskustelu

Edullinen vaikutusmelatoniiniHTN:ssä on osoitettu aiemmissa tutkimuksissa, ja sitä ehdotettiin mahdolliseksi toimenpiteeksi hoitoresistentin HTN:n hoidossa [18]. Ensimmäisessä tutkimuksessamme keskityimme oksidatiiviseen stressiin ja paljastimme, että melatoniini vähentää HSD:n aiheuttamaa oksidatiivista stressiä. Tässä tutkimuksessa keskityimme adaptiiviseen immuunivaikutukseen ja osoitimme, että melatoniini parantaa HSD-ruokittujen rottien selviytymistä. Tämä vaikutus liittyy munuaisiin tunkeutuvien T-solujen vähentymiseen ja munuaisten vähenemiseenmunuainenkemokiinin ilmentyminen.

Historialliset tiedot osoittavat, että DSS-rotille, jotka syövät HSD:tä, kehittyy vaikea HTN ja niiden kuolleisuus on korkeampi [19]. Dahl itse kertoi mallia laatiessaan, että kun DSS-rotat asetettiin HSD:lle (8 prosenttia NaCl) vieroituksen aikana (21–23 päivän iässä), niille kehittyi nopeasti HTN ja kaikki kuolivat 16. suolaruokintaviikkoon mennessä [20]. Myöhemmin, joidenkin kannan modifikaatioiden jälkeen, Rapp et ai. raportoivat, että kaikki rotat olivat kuolleita kahdeksan viikon kuluessa HSD:stä (8 % NaCl) [21]. Tutkimuksemme rotilla oli korkea kuolleisuus, mutta ne eivät saavuttaneet 100 prosenttia, luultavasti johtuen alhaisemmasta suolaprosentista (4 prosenttia) heidän ruokavaliossaan. Siitä huolimatta on selväämelatoniinilisäravinteet estivät merkittävästi kuolleisuutta.

Painonnousu on merkki rottien hyvinvoinnista 4–13 viikon iässä. DSS-rotta on peräisin Sprague Dawleysta, joka on hyvin karakterisoitu kanta. Kokeissamme käyttämämme rottien iässä rottien oletetaan lihoavan jatkuvasti [22]. Monissa eläintutkimuksissa painonpudotusta pidetään yhtenä kokeiden "päätepisteenä" [23]. Useista tutkimuksista on selvää, että DSS-rottien HSD johtaa alhaisempaan painonnousuun verrattuna kontrolleihin [24,25]. Näiden tutkimusten mukaisesti havaitsimme myös painoerot ryhmien välillä. Täällä rotat eivät lihoneet neljän viikon HSD:n jälkeen. Melatoniini pysäytti myös tämän HSD:n vaikutuksen, koska melatoniinilla hoidetut rotat jatkoivat painon nousua, vaikkakin vähemmän kuin kontrollit.

KykymelatoniiniVerenpaineen alentaminen eläinmalleissa löydettiin 1970-luvun lopulla [26–28]. Sen jälkeen on raportoitu useissa muissa malleissa, kuten että korkea fruktoosipitoinen ruokavalio indusoi metabolista oireyhtymää spontaanisti hypertensiivisillä rotilla [29,30]. Tutkimuksemme tällä alalla ovat ensimmäisiä, jotka osoittavat, että melatoniinilla on rooli suolan aiheuttamassa HTN:ssä estämällä elinvaurioita ja vähentämällä kuolleisuutta.

Tässä tutkimuksessa olemme osoittaneet, että HSD indusoi T-lymfosyyttien infiltraatiotamunuainenprosessi, jonka pääasiassa Mattsonin ryhmä on kuvannut DSS-rotilla [31–33]. Tämän tunkeutumisprosessin keskeinen rooli DSS-mallissa on osoitettu viimeaikaisessa tutkimuksessa, jossa havaittiin, että T-solupuutteiset DSS-rotat ovat suojassa HSD:n ja splenosyyttisiirron aiheuttama HTN pahentaa suolaherkkää HTN:ää [34].

Melatoniini voi vaikuttaa T-soluihin monin tavoin (katso katsaus [35]). Tämä tutkimus on osoittanut sen ensimmäistä kertaamelatoniinivähentää sekä CD4 plus että CD8 plus T-solujen vetovoimaamunuainenHSD:ssä. Tämä melatoniinin vaikutus saattaa olla mekanismi, joka korostaa sen hyödyllistä vaikutusta tässä mallissa.

Melatoniinin kyky vähentää T-solujen infiltraatiota on kuvattu kokeellisessa autoimmuunisen enkefalomyeliitti (EAE) -hiirimallissa. EAE:ssä melatoniinin osoitettiin vähentävän CD4 plus T-solujen ja Th17-solujen tunkeutumista keskushermostoon [36,37].

T-solujen vetovoimaa tiettyyn kudokseen säätelevät pääasiassa paikalliset korkeat pitoisuudetkemokiinitjotka ovat kemotaktisia sytokiineja, jotka säätelevät immuunisolujen vaellusmalleja ja sijoittelua. Kaksi suurta kemokiiniperhettä, jotka indusoivat T-solujen infiltraatiota, ovat CXC-motiiviligandin (CXCL) ja CC-motiiviligandin (CCL) kemokiiniperheet [38].

Cistanche munuaisten vajaatoiminnan parantamiseen

Tutkimuksessamme emme löytäneet jatkuvaa mallia CCL-perheen reaktiossa HSD:hen ja siihenmelatoniini. Yhdeksästäkemokiinittässä perheessä vain CCL7:n ja CLL21:n havaittiin lisäävän ekspressiota HSD:n vuoksi, ja melatoniinin lisäys vähensi sitä. HSD lisäsi CCL3:n ilmentymistä, mutta vähenemistä ei havaittu melatoniinilla käsitellyissä rotissa. Tuore tutkimus samassa mallissa on osoittanut, että HSD lisää CCL2:n säätelyämunuainenkäyttämällä RNA-Seq-menetelmää [39]. Tässä tutkimuksessa testattiin kuitenkin tasot 3. ja 21. päivänä ruokavalion alkamisen jälkeen. Tutkimuksessamme testasimme tasoja kahdeksan viikon kuluttua. On mahdollista, että kemokiinin ilmentyminen muuttuu HSD-jakson aikana.

Sitä vastoin useimpien CXCL-perheen, mukaan lukien CXCL 1, 9, 10, 11 ja 16, tasot nousivat HSD:llä hoidetuissa rotissa jamelatoniinilisäys poisti tämän lisäyksen. Vain CXCL12 ei osoittanut lisääntymistä vasteessa HSD:lle.

CXCL9, CXCL10 ja CXCL11, nimeltään "interferonilla indusoituvat CXC-kemokiinireseptorin 3 ligandit", indusoituvat IFN:llä ja ovat CXC-kemokiinireseptorin 3 (CXCR3) ligandeja. In vivo -tutkimukset ovat osoittaneet niiden merkityksen T-lymfosyyttien aktivoinnissa ja rekrytoinnissa kohde-elimeen [40–42]. Youn et ai. osoitti ihmishypertensiivisillä potilailla sekä T-solujen infiltraatiota munuaisissa että kaikkien kolmen CXCR3:n kohonneita verenkierron tasojakemokiinit, mikä viittaa siihen, että CXCR3 ja sen ligandit ovat tärkeitä ihmisen HTN:ään osallistuville T-soluille [43]. Toinen tutkimus on osoittanut, että CXCL10 on kohonnut hypertensiivisillä potilailla, ja sen tasot korreloivat heidän verenpainearvonsa kanssa [44].

Näiden tutkimusten ansiosta keskityimme CXCL9:ään, CXCL1:een0 ja CXCL11:een. Viljelimme mesangiaalirotan solulinjaa ja käsittelimme niitä 80 mM NaCl:lla ja 0,5 mM melatoniinilla. Havaitsimme, että CXCL 10 ja 11 ovat lisääntyneet soluissa ja melatoniini poistaa tämän nousun. Tuloksemme osoittavat, että suolan vaikutus CXCL 10:n ja 11:n kohoamiseen ja päinvastainen vaikutusmelatoniini, havaittiin molemmat suoraan mesangiaalisoluista. Sitä vastoin CXCL9:ää ei havaittu näissä soluissa.

Tutkimuksillamme on rajoituksia. FACS-tuloksissamme monet CD3 plus:sta olivat kaksoisnegatiivisia sekä CD4:lle että CD8:lle. Samat tulokset nähtiin Mattsonin tutkimuksessa vuodelta 2010 [31]. Kuitenkin uudemmissa Mattsonin ryhmän tutkimuksissa CD3 plus CD4-CD8-soluja oli hyvin vähän [32,33,45,46]. Merkittävä väheneminen kaksoisnegatiivisissa CD3-soluissa saattoi johtua CD45-markkerin lisäämisestä ja vain CD45-positiivisten solujen analysoinnista, mikä tehtiin Mattsonin myöhemmissä tutkimuksissa. On mahdollista, että CD3 plus CD4-CD8- suuri joukko on artefakti. CD3 plus CD4 plus ja CD3 plus CD8 plus solupopulaatiosta ei kuitenkaan tiedetä artefakteja.

5. Johtopäätökset

Yhteenvetona voidaan todeta, että runsassuolainen ruokavalio liittyy T-solujen tunkeutumiseenmunuaisetDSS-rotista. Suola lisäsi myös spesifisten T-solukemoattraktanttien ilmentymistä munuaisissa. Hoito kanssamelatoniini(30 mg/kg/vrk) poisti nämä vaikutukset (melatoniinivähentää HSD:n aiheuttamaa T-solujen infiltraatiota munuaisiin samalla kun CXCL3-ligandin kemokiinin ilmentyminen vähenee).

In vitro -tutkimuksemme osoittaa, että suola ja melatoniini voivat säädellä kemoattraktanttien ilmentymistä vaikuttamalla suoraanmunuainensoluja.

Tekijän panokset: Conceptualization, AL; muodollinen analyysi, AB ja RK; tutkimus, RK;metodologia, AB ja AL; kirjoitus – alkuperäinen luonnos, AB ja AL; kirjoittaminen – arvostelu ja editointi, YSja EG Kaikki kirjoittajat ovat lukeneet käsikirjoituksen julkaistun version ja hyväksyneet sen.

Rahoitus: Tämä tutkimus ei saanut ulkopuolista rahoitusta.

Institutionaalisen arviointilautakunnan lausunto: Tutkimusprotokollan hyväksyivät Sheban lääketieteellisen keskuksen eläinetiikkakomitea, protokolla nro 1219/19/ANIM ja terveysministeriön pöytäkirja nro 16418.

Ilmoitettu suostumus: Ei sovelleta.

Tietojen saatavuusilmoitus: Tässä tutkimuksessa esitetyt tiedot ovat saatavilla pyynnöstä vastaavalta kirjoittajalta.

Kiitokset: Kirjoittajat kiittävät Zehava Shabtaita erinomaisesta teknisestä tuesta ja Michael Kanovskia toimituksellisista palveluistaan.

Eturistiriidat: Kirjoittajat eivät julista eturistiriitoja.

Viitteet

1. Olsen, MH; Angell, SY; Asma, S.; Boutouyrie, P.; Burger, D.; Chirinos, JA; Damasceno, A.; Delles, C.; Gimenez-Roqueplo, AP; Hering, D.; et ai. Toimintakehotus ja elämänkaaren strategia nykyisten ja tulevien sukupolvien kohonneen verenpaineen aiheuttaman maailmanlaajuisen taakan käsittelemiseksi: Lancet-komissio verenpaineesta. Lancet 2016, 388, 2665–2712. [CrossRef]

2. O'Brien, E. Lancet-komissio verenpaineesta: kohonneen verenpaineen aiheuttaman maailmanlaajuisen taakan käsitteleminen nykyisille ja tuleville sukupolville. J. Clin. Hypertens 2017, 19, 564–568. [CrossRef]

3. O'Donnell, M.; Mente, A.; Yusuf, S. Natriumin saanti ja sydän- ja verisuoniterveys. Circ. Res. 2015, 116, 1046–1057. [CrossRef]

4. Schiffrin, EL Pienten valtimoiden uudelleenmuodostumisen mekanismit, verenpainetta alentava hoito ja immuunijärjestelmä hypertensiossa. Clin. Tutki. Med. 2015, 38, E394–E402. [CrossRef]

5. Guzik, TJ; Hoch, NE; Brown, KA; McCann, LA; Rahman, A.; Dikalov, S.; Goronzy, J.; Weyand, C.; Harrison, DG: T-solun rooli angiotensiini II:n aiheuttaman verenpainetaudin ja verisuonten toimintahäiriön synnyssä. J. Exp. Med. 2007, 204, 2449–2460. [CrossRef][PubMed]

6. Kleinewietfeld, M.; Manzel, A.; Titze, J.; Kvakan, H.; Yosef, N.; Linkkeri, RA; Muller, DN; Hafler, DA Natriumkloridi ajaa autoimmuunitautia indusoimalla patogeenisiä TH17-soluja. Luonto 2013, 496, 518–522. [CrossRef]

7. Mattson, DL; Lund, H.; Guo, C.; Rudemiller, N.; Geurts, AM; Jacob, H. Geneettinen mutaatio rekombinaatiota aktivoivan geenin 1 Dahl-suolaherkissä rotissa heikentää verenpainetautia ja munuaisvaurioita. Olen. J. Physiol. Regul. Kokonaisluku. Comp. Physiol. 2013, 304, 407–414.[CrossRef]

8. Mattson, DL Immuunisolujen tunkeutuminenmunuainensuolaherkän verenpainetaudin ja munuaisvaurion hoidossa. Olen. J. Physiol. Ren. Physiol.2014, 307. [CrossRef] [PubMed]

9. Lu, X.; Crowley, SD Tulehdus suolalle herkässä verenpaineessa ja munuaisvauriossa. Curr. Hypertens Rep. 2018, 20. [CrossRef][PubMed]

10. Baker, J.; Kempinski, K. Role ofmelatoniiniverenpaineen säätelyssä: Ylimääräinen verenpainetta alentava aine. Clin. Exp. Pharm.Physiol. 2018, 45, 755–766. [CrossRef] [PubMed]

11. Grossman, E.; Laudon, M.; Zisapel, N. Melatoniinin vaikutus yön verenpaineeseen: satunnaistettujen kontrolloitujen tutkimusten meta-analyysi. Vasc. Terveysriskien hallinta. 2011, 7, 577–584. [CrossRef] [PubMed]

12. Pozo, D.; Delgado, M.; Fernandez-Santos, JM; Calvo, JR; Gomariz, RP; Martin-Lacave, I.; Ortiz, GG; Guerrero, JM. Mel1a-melatoniinireseptorin mRNA:n ilmentyminen rotan kateenkorvasta ja pernasta peräisin olevien lymfosyyttien T- ja B-alaryhmissä. Faseb J. Off. Publ. Fed.Am. Soc. Exp. Biol. 1997, 11, 466–473. [CrossRef]

13. Guerrero, JM; Pozo, D.; García-Mauriño, S.; Osuna, C.; Molinero, P.; Calvo, JR Tumareseptorien osallistuminen melatoniinin tehostettuun IL-2-tuotantoon Jurkat-soluissa. Ann. NY Acad. Sci. 2000, 917, 397–403. [CrossRef] [PubMed]

14. Farez, MF; Mascanfroni, ID; Méndez-Huergo, SP; Yeste, A.; Murugaiyan, G.; Garo, LP; Balbuena Aguirre, ME; Patel, B.;Ysrraelit, MC; Zhu, C.; et ai.MelatoniiniVaikuttaa multippeliskleroosin uusiutumisten kausiluonteisuuteen. Cell 2015, 162, 1338–1352.[CrossRef] [PubMed]

15. Kirabo, A.; Fontana, V.; de Faria, APC; Loperena, R.; Galindo, CL; Wu, J.; Bikineeva, AT; Dikalov, S.; Xiao, L.; Chen, W. et ai. DC-isoketaalimodifioidut proteiinit aktivoivat T-soluja ja edistävät verenpainetta. J. Clin. Tutki. 2014, 124, 4642–4656. [CrossRef][PubMed]

16. Leibowitz, A.; Volkov, A.; Voloshin, K.; Shemesh, C.; Barshack, I.; Grossman, E. Melatoniini estäämunuainenvaurio korkean suolan ruokavalion aiheuttamassa verenpainemallissa vähentämällä oksidatiivista stressiä. J. Pineal Res. 2016, 60, 48–54. [CrossRef] [PubMed]

17. Hawkins, P.; Morton, DB; Burman, O.; Dennison, N.; Honess, P.; Jennings, M.; Lane, S.; Middleton, V.; Roughan, JV; Wells, S. et ai. Opas laboratorio-eläinten hyvinvoinnin arviointia koskevien protokollien määrittelyyn ja täytäntöönpanoon: BVAAWF/FRAME/RSPCA/UFAW-yhteistyöryhmän yhdestoista raportti. Lab. Anim. 2011, 45, 1–13. [CrossRef]

18. Simko, F.; Reiter, RJ; Paulis, L.Melatoniinijärkevä vaihtoehto resistentin hypertension konservatiivisessa hoidossa.Hypertens Res. 2019, 42, 1828–1831. [CrossRef] [PubMed]

19. Rapp, JP Dahl suolalle herkät ja suolankestävät rotat. Hypertension 1982, 4, 753-763. [CrossRef]

20. Dahl, LK; Knudsen, KD; Heine, MA; Leitl, GJ Kroonisen liiallisen suolan nauttimisen vaikutukset. Kokeellisen verenpaineen muuttaminen rotilla ruokavalion vaihteluilla. Circ. Res. 1968, 22, 11–18. [CrossRef] [PubMed]

21. Rapp, JP; Dene, H. Dahl-suolaherkkien ja suolaresistenttien rottien sisäsiittoisten kantojen kehitys ja ominaisuudet. Hypertens 1985, 7, 340-349. [CrossRef]

22. Brower, M.; Grace, M.; Kotz, CM; Koya, V. Eri lähteistä saatujen Sprague Dawley -rottien kasvuominaisuuksien vertaileva analyysi. Lab. Anim Res. 2015, 31, 166–173. [CrossRef]

23. Talbot, SR; Biernat, S.; Bleich, A.; van Dijk, RM; Ernst, L.; Häger, C.; Hilgers, SOA; Koegel, B.; Koska, I.; Kuhla, A.; et al.Kehon painon vähentäminen inhimillisenä päätepisteenä: kriittinen arviointi. Lab. Anim 2020, 54, 99–110. [CrossRef] [PubMed]

24. Geschka, S.; Kretschmer, A.; Sharkovska, Y.; Jevgenov, OV; Lawrenz, B.; Hucke, A.; Hocher, B.; Stasch, J.-P. Liukoisen guanylaattisyklaasin stimulaatio estää fibroottisen kudoksen uudelleenmuodostumista ja parantaa suolaherkkien Dahl-rottien selviytymistä. PLoS ONE 2011, 6, e21853. [CrossRef] [PubMed]

25. Wang, Y.; Mu, JJ; Liu, FQ; Ren, KY; Xiao, HY; Yang, Z.; Yuan, ZY Suolan aiheuttama epiteelin ja mesenkymaalisen siirtyminen dahlsuolaherkissä rotissa on riippuvainen kohonneesta verenpaineesta. Braz. J. Med. Biol. Res. Rev. Bras. Pesquisa Med. E Biol. 2014, 47, 223–230.[CrossRef]

26. Holmes, SW; Sugden, D. Proceedings: The vaikutus melatoniinin on pinealectomy induced hypertensio rotalla. Br. J. Pharm. 1976, 56, 360P-361P.

27. Zanoboni, A.; Zanoboni-Muciaccia, W. Experimental hypertensio in pinealectomized rotat. Life Sci. 1967, 6, 2327–2331. [CrossRef]

28. Zanoboni, A.; Forni, A.; Zanoboni-Muciaccia, W.; Zanussi, C. Pinealektomian vaikutus valtimoverenpaineeseen ja ruoan ja veden saantiin rotalla. J. Endocrinol. Tutki. 1978, 1, 125–130. [CrossRef] [PubMed]

29. Pechánová, O.; Zicha, J.; Paulis, L.; Zenebe, W.; Dobesová, Z.; Kojsová, S.; Jendeková, L.; Sládková, M.; Dovinová, I.; Simko, F. et ai. N-asetyylikysteiinin ja melatoniinin vaikutus aikuisilla spontaanisti hypertensiivisillä rotilla, joilla on vakiintunut verenpaine. euroa J. Pharmcol. 2007, 561, 129–136. [CrossRef] [PubMed]

30. Leibowitz, A.; Peleg, E.; Sharabi, Y.; Shabtai, Z.; Shamiss, A.; Grossman, E. Roolimelatoniiniverenpainetaudin patogeneesissä rotilla, joilla on metabolinen oireyhtymä. Olen. J. Hypertens 2008, 21. [CrossRef] [PubMed]

31. De Miguel, C.; Das, S.; Lund, H.; Mattson, DL T-lymfosyytit välittävät verenpainetta jamunuainenDahl-suolaherkkien aineiden vaurioita. Olen. J. Physiol. Regul. Kokonaisluku. Comp. Physiol. 2010, 298, R1136–R1142. [CrossRef] [PubMed]

32. Evans, LC; Petrova, G.; Kurth, T.; Yang, C.; Bukowy, JD; Mattson, DL; Cowley, AW Lisääntynyt perfuusiopaine ajaa munuaisten T-solujen tunkeutumista Dahl-suolaherkkään rotaan. Hypertensio 2017, 70, 543–551. [CrossRef]

33. Abais-Battad, JM; Alsheikh, AJ; Pan, X.; Fehrenbach, DJ; Dasinger, JH; Lund, H.; Roberts, ML; Kriegel, AJ; Cowley, AWJ; Kidambi, S.; et ai. Ruokavalion vaikutukset Dahl-suolaherkkään verenpaineeseen, munuaisvaurioihin ja T-lymfosyyttitranskriptioon. Hypertens 2019, 74, 854–863. [CrossRef] [PubMed]

34. Fehrenbach, DJ; Dasinger, JH; Lund, H.; Zmaj, J.; Mattson, DL Splenosyyttien siirto pahentaa suolaherkkiä verenpainepotilaita. Exp. Physiol. 2020, 105, 864–875. [CrossRef] [PubMed]

35. Ren, W.; Liu, G.; Chen, S.; Yin, J.; Wang, J.; Tan, B.; Wu, G.; Bazer, FW; Peng, Y.; Li, T.; et ai. Melatoniinin signalointi T-soluissa: toiminnot ja sovellukset. J. Pineal Res. 2017, 62. [CrossRef]

36. Álvarez-Sánchez, N.; Cruz-Chamorro, I.; López-González, A.; Utrilla, JC; Fernández-Santos, JM; Martínez-López, A.; Lardone, PJ; Guerrero, JM; Carrillo-Vico, A. Melatoniini kontrolloi kokeellista autoimmuunista enkefalomyeliittiä muuttamalla T-efektori/säätelytasapainoa. Aivojen käyttäytyminen. Immun. 2015, 50, 101–114. [CrossRef]

37. Chen, S.-J.; Huang, S.-H.; Chen, J.-W.; Wang, K.-C.; Yang, Y.-R.; Liu, P.-F.; Lin, G.-J.; Sytwu, H.-K.Melatoniinitehostaa interleukiini 10:n ilmentymistä ja suppressoi kemotaksista in situ tulehduksen estämiseksi ja kokeellisen autoimmuunienkefalomyeliitin vaikeusasteen vähentämiseksi. Int. Immunopharmacol. 2016, 31, 169–177. [CrossRef] [PubMed]

38. Griffith, JW; Sokol, CL; Kiilto, ADKemokiinitja kemokiinireseptorit: solujen asemointi isännän puolustusta ja immuniteettia varten.Annu. Rev. Immunol. 2014, 32, 659–702. [CrossRef] [PubMed]

39. Alsheikh, AJ; Dasinger, JH; Abais-Battad, JM; Fehrenbach, DJ; Yang, C.; Cowley, AWJ; Mattson, DL CCL2 välittää varhaista munuaisten leukosyyttien infiltraatiota suolaherkän verenpaineen aikana. Olen. J. Physiol. Ren. Physiol. 2020, 318, F982–F993. [CrossRef][PubMed]

40. Liu, L.; Callahan, MK; Huang, D.; Ransohoff, RM Kemokiinireseptori CXCR3: Odottamaton arvoitus. Curr. Yläosa. Dev. Biol.2005, 68, 149–181. [CrossRef] [PubMed]

41. Groom, JR; Kiilto, AD CXCR3 ligandit: redundantteja, yhteistoiminnallisia ja antagonistisia toimintoja. Immunol. Cell Biol. 2011, 89 207–215. [CrossRef] [PubMed]

42. Van Raemdonck, K.; Van den Steen, PE; Liekens, S.; Van Damme, J.; Struyf, S. CXCR3-ligandit sairaudessa ja hoidossa. CytokineGrowth Factor Rev. 2015, 26, 311–327. [CrossRef] [PubMed]

43. Youn, J.-C.; Yu, HT; Lim, BJ; Koh, MJ; Lee, J.; Chang, D.-Y.; Choi, YS; Lee, S.-H.; Kang, S.-M.; Jang, Y.; et ai. Immunosoivat CD8 plus T-solut ja CXC-kemokiinireseptori tyyppi 3kemokiinitlisääntyvät ihmisen verenpainetaudissa. Hypertens 2013, 62, 126–133.[CrossRef] [PubMed]

44. Stumpf, C.; Auer, C.; Yilmaz, A.; Lewczuk, P.; Klinghammer, L.; Schneider, M.; Daniel, WG; Schmieder, RE; Valkosipulit, CD Seerumin Th1-kemoattraktantin interferoni-gamma-indusoituvan proteiinin (IP) 10 tasot ovat kohonneet potilailla, joilla on essentiaalinen hypertensio. Hypertens Res. 2011, 34, 484–488. [CrossRef] [PubMed]

45. Rudemiller, NP; Lund, H.; Priestley, JRC; Endres, BT; Prokop, JW; Jacob, HJ; Geurts, AM; Cohen, EP; Mattson, DL SH2B3:n (LNK), genominlaajuisen verenpaineen assosiaatiotutkimuksen ehdokas, mutaatio vaimentaa Dahl-suolaherkkää hypertensiota tulehduksellisen modulaation kautta. Hypertens 2015, 65, 1111–1117. [CrossRef] [PubMed]

46. ​​Wade, B.; Petrova, G.; Mattson, DL Immuunitekijöiden rooli angiotensiini II:n aiheuttamassa verenpaineessa ja munuaisvauriossa dahlsuolaherkillä rotilla. Olen. J. Physiol. Regul. Kokonaisluku. Comp. Physiol. 2018, 314, R323–R333. [CrossRef] [PubMed]