Monet tutkimukset ovat vahvistaneet, että allergiset sairaudet eivät ole seurausta vain synnynnäisestä immuunijärjestelmän aktivoinnista

Ota yhteyttäoscar.xiao@wecistanche.comLisätietoja

Abstrakti:Syötösoluilla on erittäin tärkeä rooli ihoallergioissa ja tulehduksissa, mukaan lukien atooppinen ihottuma ja psoriaasi. Aiemmin on todettu, että referenssillä on tulehdusta ja ikääntymistä estäviä vaikutuksia iholla, mutta sen vaikutusta syöttösoluihin ei ole vielä tutkittu yksityiskohtaisesti. Tässä tutkimuksessa käytimme syöttösoluja (RBL-2H3-soluja) ja hiirimalleja tutkiaksemme viiteallergiaa ja tulehdusta ehkäiseviä vaikutuksia. Ensinnäkin havaitsimme, että viite estää syöttösolujen degranulaatiota ja sytokiinien ilmentymistä. Lisäksi havaitsimme, että kun syöttösoluja stimuloitiin A23187/forboli-12-myristaatti-13--asetaatilla (PMA), solunsisäisen kalsiumin nousu estyi referenssinä. MAPK/NF-KB-reitin fosforylaatiota vähentää myös referenssiesikäsittely. In vivo -tutkimusten tulokset osoittavat, että vertailu voi parantaa dinitroklooribentseenin (DNCB) aiheuttaman ihotulehduksen ja syöttösolujen infiltraation ilmenemistä. Lisäksi ihon esteproteiinien ilmentyminen palautuu.vesisäiliöLopuksi havaittiin, että viite voi vähentää yhdisteen 48/80 aiheuttamaa naarmuuntumiskäyttäytymistä. Yhteenvetona tulokset osoittavat, että referenssi on erittäin hyvä antiallerginen ja anti-inflammatorinen luonnontuote. Sen vaikutus syöttösoluihin vaikuttaa sen farmakologiseen mekanismiin.

Avainsanat:viite; luonnontuote; syöttösolu; dermatiitti; kutina

Napsauta tätä saadaksesi lisätietoja

1. Esittely

Monet tutkimukset ovat vahvistaneet, että allergiset sairaudet eivät ole seurausta vain synnynnäisestä immuuniaktivaatiosta, vaan myös adaptiivisesta aktivaatiosta. Näistä syöttösoluilla on erittäin tärkeä rooli useissa allergisissa sairauksissa, kuten allergisessa nuhassa, astmassa ja allergisessa ihottumassa. Syötösolut ekspressoivat IgE-reseptoreita (FceRI) solukalvoissaan, ja FceRI-reseptoreilla on korkea affiniteetti IgE-vasta-aineisiin [1,2]. Kun antigeenispesifinen IgE sitoutuu FceRI:hen, tapahtuu vuorovaikutusta ja allerginen reaktio. FceRI:n aggregaatio voi aktivoida reseptorityrosiinikinaaseja, käynnistää alavirran reaktioita ja edistää useiden avainproteiinien (kuten mitogeenin aktivoiman proteiinikinaasin; MAPK:t) fosforylaatiota, mikä lopulta johtaa kalsiumionien (Ca2 plus) sisäänvirtaukseen, joka on avaintapahtuma syöttösolujen degranulaatiossa [3].cistanche AustraliaAktivoidut syöttösolut degranuloituvat ja vapauttavat kemiallisia välittäjäaineita. Nämä allergisissa reaktioissa käytetyt kemialliset välittäjät voivat aiheuttaa tulehdusta [4], joten allergisten oireiden hoitoon liittyy syöttösolujen degranulaation estäjiä. Siksi IgE-välitteisen syöttösolujen degranulaation estämistä käytetään usein uusien yhdisteiden tunnistamiseen allergisten sairauksien ehkäisyyn ja hoitoon. On osoitettu, että anti-dinitrofenyyli (DNP)IgE-vasta-aineet ja antigeenit voivat aiheuttaa passiivisia ihon yliherkkyysreaktioita (PCA) tyypillisenä välittömän yliherkkyyden in vivo -mallina ja antigeenisten allergioiden mahdollisia tutkimuslääkkeitä varten [5,6 ]. Lisäksi syöttösolujen degranulaatiota voivat aiheuttaa myös ei-immuunistimulantit, kuten yhdisteet 48/80 ja A23187. Kalsiumionoforin A23187 on pitkään tiedetty stimuloivan syöttösolujen eritystä vapauttamalla esimuotoiltuja välittäjäaineita, kuten histamiinia rakeistaan, toimien esimerkkinä [4]Yhdiste 48/80 on p-metoksi-N-metyylifenetyyliamiinin sekapolymeeri. silloitettu formaldehydillä, jota käytetään laajalti syöttösolujen riippumattomaan stimulointiin [7,8]Siksi sopivia määriä yhdistettä 48/80 ja A23187 on yleisesti käytetty reagensseina allergisten reaktioiden mekanismin tutkimiseen. Tilastollisten arvioiden mukaan noin 15-20 prosenttia väestöstä kärsii atooppisesta ihottumasta. Kärsivätpä tästä sairaudesta lapset tai aikuiset, ilman asianmukaista hoitoa atooppinen ihottuma voi aiheuttaa psyykkistä kärsimystä potilaille ja rasittaa heidän perhe- ja sosiaalikulujaan [9]. Valitettavasti ei ole olemassa sopivaa hoitomenetelmää allergisen ihotulehduksen parantamiseksi. Nykyisillä hoitovaihtoehdoilla vältetään edelleen sairauksia aiheuttavia allergeeneja, ja jatkuva steroidien käyttö on hoidon kultainen standardi. Välttämättömät allergeenit ja lääkkeiden sivuvaikutukset ovat johtaneet uusien terapeuttisten lääkkeiden nopeaan kehittämiseen. Lääkeyrteistä ja kasveista eristetyt luonnonyhdisteet ovat mahdollisia terapeuttisten aineiden lähteitä tulehdussairauksien ehkäisyyn ja hoitoon sekä allergisista sairauksista kärsivien potilaiden elämänlaadun parantamiseen.

Cistanche voi estää ikääntymistä

Viite tulee Nelumbo nucifera -kasvin lootusytimestä (siemenen alkiosta) ja on tärkeä bisbentsyyli-isokinoliinialkaloidi. On näyttöä siitä, että viitteellä on laaja valikoima farmakologisia ominaisuuksia, kuten syöpää estäviä, antioksidantteja, tulehdusta ehkäiseviä ja hermoja suojaavia vaikutuksia [10-15].cistanchen edutKhan et ai. havaitsi, että viite tuottaa ikääntymistä estäviä vaikutuksia estämällä UV-välitteisen ROS- ja malondialdehydi(MDA)-tason nousun ihmisen keratinosyyteissä ja fibroblasteissa[16,17]Äskettäin havaitsimme, että viitteellä on potentiaalia vaihtoehtoisena lääkkeenä atooppisten sairauksien hoitoon. dermatiitti tai muut ihoon liittyvät tulehdukselliset sairaudet[18]. On kuitenkin edelleen epävarmaa, onko viitteellä ihoallergiaa syöttösoluissa. Tässä tutkimuksessa pyrimme tutkimaan referenssin vaikutuksia syöttösoluvälitteisiin allergisiin sairauksiin käyttämällä ihmisen syöttösolulinjoja (RBL-2H3 soluja) ja yhdistettä 48/80- ja DNCB:n aiheuttamaa anafylaksiaa. hiiren malli.

La referenssiproviene del núcleo de loto (el embrión de la semilla) de la planta Nelumbo nucifera y es un svare alcaloide de bisbencilisoquinolina. Existe evidencia de que la referencia tiene una amplia gama de propiedades farmacológicas, como efectos anticancerígenos, antioksidantes, anti-inflamatorios y neuroprotectores, en muchas enfermedades [10-15]. Beneficios de la cistanche Khan et ai. encontró que la reference product efectos anti-fotoenvejecimiento al inhibir el aumento de los niveles de ROS y malondialdehído (MDA) mediado por UV en queratinocitos y fibroblastos referencia humanos [16,17] Recientemente, descubrimos que la tiemedicina potential de atópica dermatitis u otras enfermedades inflamatorias relacionadas con la piel[18]. Sin embargo, sigue siendo incierto si la referencia tiene un efecto contra la alergia cutánea en los mastocitos. En este estudio, nuestro objetivo fue investigar los efectos de referencia en las enfermedades alérgicas mediadas por mastocitos, utilizando líneas de mastocitos humanos (células RBL-2H3) y un modelo de ratones con anafilaxia/NCuestoy 4NCuestoy 4NCuestoy 4NCuestoy .

2. Tulokset

2.1. Neferiinin sytotoksisuustesti rotan syöttösoluilla (RBL-2H3)

Koska rotan basofiilinen leukemia (RBL)-2H3-solut, histamiinia vapauttava syöttösoluanalogi, ovat sopivia soluja tutkimaan syöttösoluvälitteisen tulehduksen vaikutuksia [19], käytimme näitä soluja antiallergisen aineen tutkimiseen. viittauksen vaikutukset. Ensin testasimme, voiko viite tuottaa sytotoksisuutta syöttösoluissa. Kun soluja esikäsitellään 1 - 30 µM viitearvolla 24 tunnin ajan, vertailukäsittely ei vaikuta solujen elinkelpoisuuteen (kuva 1).

2.2. Neferiini vähentää eri aktivaattorien stimuloimaa RBL-2H3:n degranulaatiovaikutusta

RBL-2H3-soluja käytetään yleisesti degranulaation in vitro -tutkimuksiin [20-22]RBL-2H3-solujen stimulaatio anti-dinitrofenoli (DNP)IgE:llä ja DNP-konjugoidulla ihmisen seerumin albumiinilla (HSA) laukaisee degranulaation. Lisäksi syöttösolujen tiedetään degranuloituvan vasteena synteettisille yhdisteille, kuten yhdisteelle 48/80 ja kalsiumionoforille A23187, ja näitä yhdisteitä on käytetty sopivina reagensseina suorissa tutkimuksissa in vitro -allergisten vasteiden mekanismeista [23, 24]. Tulokset osoittivat, että RBL-2H3:n sytoplasma, jota aktivaattori ei aktivoinut, sisälsi rajallisesti erittäviä rakeita.cistanche-kolesteroliViitearvon (10 μM) käsittely yksinään ei vaikuttanut RBL-2H3:n aktiivisuuteen (kuvio 2A, B). Erilaisten aktivaattorien, mukaan lukien yhdiste 48/80, A23187 ja anti-DNP/IgE plus DNP/HSA, lisäys täytti kuitenkin selvästi sytoplasman erittävillä rakeilla. Elektronimikroskoopilla voidaan nähdä, että sytoplasmassa on suuri määrä erittäviä rakeita, ja jotkut erittävät rakeet jopa fuusioituvat solukalvon kanssa, mikä johtaa degranulaatioon (kuva 2C-E). Esikäsittelyn jälkeen 10 uM:lla eritysrakeet sytoplasmassa vähenivät merkittävästi (kuvio 2F-H). Nämä tulokset osoittavat, että referenssi voi tehokkaasti estää aktivaattorin stimuloiman RBL-2H3:n aktivoitumisen ja degranulaatiota.

2.3. Neferiini estää PMA/A23187-indusoitua solunsisäistä kalsiumin nousua RBL-2H3:ssa

Kalsiumionit näyttelevät toissijaisen sanansaattajan roolia solujen aktivaatioprosessissa. A23187 on tehokkain tapa lisätä kalsiumionien tunkeutumista solukalvojen läpi ja stimuloida syöttösolujen aktivaatiota. Forbolmyristaattiasetaatti (PMA) voi aktivoida Cand-proteiinikinaasin ja lisätä solunsisäisiä kalsiumioneja tehostaen A23187:n vaikutusta. Kalsiumionien lisääntymistä syöttösoluissa on myös pidetty tärkeänä tekijänä syöttösolujen aktivoitumisen indusoinnissa, jolloin se vaikuttaa syöttösolujen degranulaatioon ja vapauttaa enemmän tulehduksellisia sytokiinejä ja kemokiineja.cistanche deserticola sivuvaikutukset,Siksi tässä tutkimuksessa pyrittiin selvittämään, voiko viite estää kalsiumionipitoisuutta RBL-2H3:ssa, kun se estää tulehdusta. Koeryhmä jaettiin referenssiesikäsittelyn kanssa tai ilman sitä 20 minuutin ajaksi, ja 1 mM CaClz ja PMA/A23187 lisättiin stimuloimaan ja aktivoimaan RBL-2H3:a. Koetulokset osoittivat, että RBL-2H3:n käsittely erilaisilla referenssipitoisuuksilla ei vaikuttanut solunsisäisen kalsiumionipitoisuuden nousuun. PMA/A23187--indusoidun Ca2t-virtauksen ryhmässä solunsisäinen kalsiumionipitoisuus nousi merkittävästi. RBL-2H3-soluja esikäsiteltiin 20 minuutin ajan vertailuarvoilla (3 µM ja 10 µM), ja kalsiumionikonsentraatio pieneni merkittävästi (kuva 3).

2.4. Neferiini vähensi pro-inflammatoristen sytokiinien mRNA-ilmentymistä PMA/A23187:ssä, jota RBL-2H3 stimuloi

Ihon immuunivaste lisää syöttösolujen määrää kehossa ja syöttösolut tuottavat sitten tulehdusta edistäviä sytokiinejä ja nopeuttavat taudin etenemistä. Tulehdusta edistävät sytokiinit, erityisesti TNF-a, IL-6, IL-1 ja IL-8, eivät ainoastaan ​​aiheuta tulehdusta, vaan myös aiheuttavat leukosyyttien infiltraatiota, granulooman muodostumista ja kudosfibroosia. PMA/A23187 vaikuttaa syöttösoluihin ja saa ne tuottamaan IL-16, IL-6, TSLP ja TNF-, mikä aiheuttaa allergiaan liittyvää tulehdusta. Siksi esikäsittelimme RBL-2H3:a referenssillä 20 minuuttia ja stimuloimme PMA/A23187:llä 6 tuntia havaitaksemme, voiko viite vaimentaa IL-1, IL{{ mRNA:n ilmentymistä. 19}}, TSLP ja TNF-a. Tulokset osoittivat, että ryhmässä, jota käsiteltiin pelkällä referenssillä, sytokiini-mRNA:n ilmentyminen ei vaikuttanut, ja mRNA:n ilmentyminen ryhmässä, joka aiheutti tulehduksen PMA/A23187:llä, lisääntyi merkittävästi. Vertailulla hoidetussa ryhmässä havaittiin, että IL-1:n, IL-6:n, TSLP:n ja TNF-a:n mRNA:n ilmentymistasot vaimenivat merkittävästi (kuvio 4).

2.5. Neferiini estää PMA/A23187-MAPK-reitin aiheuttamaa fosforylaatiota RBL-2H3:ssa

Aiemmat tutkimukset ovat osoittaneet, että syöttösolujen täytyy vapauttaa solunsisäisiä kalsiumioneja aktivoidakseen MAPK:n. Lisäksi MAPK-signalointireitti säätelee monosyyttien, T-lymfosyyttien, B-lymfosyyttien, sytokiinien ja kemokiinien ekspressiota ja indusoi autoimmuniteettia. Tämä mekanismi on samanlainen kuin PMA/A23187:n aktivaatioreitti. Tässä tutkimuksessa selvitimme, voiko viite osallistua MAPK-reittien säätelyyn. Käsittelimme erilaisia ​​vertailupitoisuuksia (1, 3 ja 10 uM) RBL-2H3:lle 20 minuutin ajan ja sitten stimuloimme PMA/A23187:llä 30 minuutin ajan tulehduksen indusoimiseksi. Tulokset osoittivat, että kun RBL-2H3:a käsiteltiin erilaisilla referenssipitoisuuksilla, p38-, JNK- ja ERK-proteiinien aktivaatio ei vaikuttanut. Pelkästään PMA/A23187:llä hoidetussa ryhmässä havaitsimme, että p38-, JNK- ja ERK-proteiinit olivat aktivoituneita ja niillä on merkittävää fosforylaatiota. Ryhmässä, jota esikäsiteltiin referenssillä, havaittiin, että korkeammilla vertailupitoisuuksilla p38-, JNK- ja ERK-proteiinien fosforylaatio väheni merkittävästi (kuvio 5A-C).

2.6. Neferiini estää PMA/A23187-indusoitua NF-B-reitin fosforylaatiota RBL-2H3:ssa

Pro-inflammatoristen sytokiinien ilmentyminen riippuu transkriptiotekijän NF-kB aktivaatiosta syöttösoluissa. Kun IKB-proteiini fosforyloitui ja hajotettiin, NF-kB vapautui ja vaelsi tumaan, sitoutuen vastaaviin DNA-responsiivisiin elementteihinsä ja edistäen proinflammatoristen välittäjien transkriptiota. Tuotettiin monia sytokiineja ja kemokiineja, jotka säätelevät immuunivastetta, erilaistumista ja tulehdusta. Siksi tutkimme, vaikuttaako esikäsittely PMA/A23187:n indusoimaan proteiinin fosforylaatioon. Käsittelimme erilaisia ​​vertailupitoisuuksia (1, 3 ja 10 μM) RBL-2H3:ksi. 20 minuutin kuluttua PMA/A23187 stimuloi RBL-2H3:a 1 tunnin tai 2 tunnin ajan indusoidakseen tulehduksen. Tulokset osoittivat, että RBL-2H3:n käsittely erilaisilla referenssipitoisuuksilla ei vaikuttanut IKBa:n ja NF-KB:n fosforylaatioon. Kun PMA/A23187:ää käytettiin stimulaatioon, havaittiin merkittävä lisääntyminen IkBo:n ja NF-KB:n fosforylaatiossa. Ryhmässä, jota esikäsiteltiin referenssillä, havaittiin, että IkBa:n (kuvio 6A) ja NF-KB:n (kuvio 6B) fosforylaatio väheni merkittävästi.

2.7. Neferiinin vaikutus 2,4-dinitroklooribentseenin (DNCB) aiheuttamaan atooppiseen ihottumaan

DNCB on sairaustutkimuksen eläinmalli, joka on edustava ärsyttävä aine, joka aiheuttaa atooppista ihotulehdusta[25]. Kokeessamme käytetään 1 % dinitroklooribentseeniä (DNCB) liuotettuna 75 % alkoholiin herkistysvasteen ensimmäisen vaiheen indusoimiseksi. Vertailua (3 mg/kg ja 10 mg/kg) ja deksametasonia (Dexa, {{10}},2 mg/kg) DMSO:hon liuotettuna annettiin intraperitoneaalisesti viidentenä päivänä kymmenen päivän ajan. . 8., 1. ja 14. päivänä 0,5-prosenttista DNCB:tä käytettiin tulehduksen aiheuttamisen toisena vaiheena. Hiiret jaettiin neljään ryhmään - kontrolliryhmä, DNCB-ryhmä, referenssikäsitelty ryhmä ja deksametasonilla hoidettu ryhmä - ja sitten ryhmien välisen vertailun jälkeen erot havaittiin. Havaitsimme, että DNCB aiheutti atooppisen ihotulehdusreaktion hiirten iholla. DNCB:n levittämisen jälkeen havaittiin, että hiirten iho lisäsi punoitusta ja hilseilyä. Nämä kaikki johtuvat epänormaalista keratinosyyttien lisääntymisestä, infiltraatiosta ja immuunisolujen aggregaatiosta. Ryhmässä, jota hoidettiin vertailuannoksella 3 mg/kg ja deksametasonilla 0,2 mg/kg neljän päivän ajan, punoitus oli lieventynyt. Jatkoimme hiirten selän ihon kunnon tarkkailua päivään 15 asti. Verrokkiryhmään verrattuna DNCB-ryhmällä oli voimakasta punoitusta ja turvotusta sekä hilsettä ja haavoja, jotka näyttivät johtuvan kutinasta ja kivusta. . Voimme havaita laskevan suuntauksen vertailu- ja deksametasonihoitojen jälkeen (kuva 7A). Toluidiinisinistä värjäystä käytettiin aggregoituneiden syöttösolujen lukumäärän tarkkailuun. Syötösolut näyttivät violetilta mikroskoopilla tarkasteltuna. Voidaan kvantitatiivisesti osoittaa, että monet syöttösolut, jotka tunkeutuivat ja kerääntyivät dermiin DNCB-koeryhmässä, lisääntyivät merkittävästi verrattuna kontrolliryhmään. Vertailu- ja deksametasonilla käsitellyssä ryhmässä infiltraatio, aggregaatio ja syöttösolujen lukumäärä vähenivät (kuvio 7B, C).

2.8. Neferiini parantaa esteisiin liittyvien molekyylien mRNA:n ilmentymistä DNCB:n käsittelyn jälkeen

AD:n aiheuttama ihoon liittyvä tulehdus voi aiheuttaa epänormaalia ihosuojatoimintoa. Jos ihosuoja on viallinen, antigeenien tai ärsyttävien aineiden on helpompi tunkeutua ihon epidermikseen ja päästä elimistöön aiheuttamaan immuunijärjestelmään liittyviä reaktioita. Samaan aikaan erilaistumisproteiinien, mukaan lukien filaggriinin, lorikriinin ja involukriinin, tuotanto tukahdutetaan. Siksi vaurioituneen ihosuojan palauttaminen on erittäin tärkeää AD:n ehkäisyssä ja hoidossa [26]. Tutkimuksessamme käytimme viitteitä puuttuaksemme DNCB:n aiheuttaman atooppisen ihottuman eläinmalliin. Hiirten uhrauksen jälkeen dorsaalinen ihokudos maadoitettiin RI-qPCR-analyysiä varten sen arvioimiseksi, voiko viite parantaa mRNA:n ilmentymisen vähenemistä filaggriinissa, lorikriinissa ja involukriinissa DNCB-hoidon jälkeen. Tulokset osoittivat, että DNCB-koeryhmä oli vähentänyt merkittävästi filaggriinin, lorikriinin ja involukriinin mRNA-ilmentymistä kontrolliryhmään verrattuna. Filaggriinin, lorikriinin ja involukriinin mRNA:n ilmentyminen lisääntyi merkittävästi vertailu- ja deksametasonilla hoidetussa ryhmässä verrattuna DNCB-ryhmään (kuvio 8).

Todistimme lisäksi, että referenssillä on allergiaa ehkäisevä naarmuuntumisvaikutus. Käytimme syöttösolujen degranulaatioainetta, yhdistettä 48/80, indusoimaan naarmuuntumiskäyttäytymistä BALB/c-hiirissä. Kuten kuvassa 9 on esitetty, havaitsimme, että vertailukäsittely esti yhdisteen 48/80 (50 ug/kohta) aiheuttamaa naarmuuntumiskäyttäytymistä. Pienempien ja suurempien vertailuannosten (3 ja 10 mg/kg) toistuva anto 5 peräkkäisenä päivänä vähensi merkittävästi yhdisteen 48/80 aiheuttamien naarmujen määrää.