Makrofagien ehtyminen vähentää sairauspatologiaa tekijä H:sta riippuvaisessa immuunikompleksivälitteisessä glomerulonefriitissä Ⅱ

3. Tulokset

Indusoimme CSS:ää hiirillä toistuvalla immunisaatiolla hevospernan apoferritiinillä. Eläimet tuottavat aktiivisen antiapoferritiini-IgG-humoraalisen immuunijärjestelmänvaste ja tallentaa IgG:tä glomeruluksiin. Aiemmat tutkimuksemme paljastivat, että Mϕ on lisääntynytinfiltraatio munuaisiintässä asetuksessa.

3.1. Makrofagigeenien ilmentyminen lisääntyy FH-riippuvaisissa ICGN-munuaisissa. Mϕs:n läsnäolon arvioimiseksi FH-riippuvaisissa ICGN-munuaisissa qRT-PCR suoritettiin M2-makrofagimarkkereilla CD204 (Mϕ scavenger reseptori 1) ja CD206 (Mϕ mannoosireseptori 1) [21–24]. Molempien geenien ilmentyminen munuaisissa lisääntyi merkittävästi apoferritiinihoidon jälkeen FHKO-hiirillä (kuva 1), mikä viittaalisääntynyt makrofagien esiintyminen munuaisissa.

NAPSAUTA TÄSTÄ SAADAksesi LUONNOLLISTA ORGAANIISTA CISTANKSIUUTEtta, JOKA SISÄLTÄ 25 % KINAKOOSIDEA JA 9 % AKTEOSIDIA MUUNAISTEN TOIMINTAAN

Wecistanchen tukipalvelu - Kiinan suurin vesisäiliön viejä:

Sähköposti:wallence.suen@wecistanche.com

Whatsapp/Puhelin:+86 15292862950

Osta lisätietoja teknisistä tiedoista:

https://www.xjcistanche.com/cistanche-shop

3.2. Klodronaattihoidon muutokset munuaisten makrofagien infiltraatiossa apoferritiinikäsitellyissä FHKO-hiirissä. Tehokkaan menetelmän määrittämiseksi Mϕs:n vähentämiseksi FH-riippuvaisessa ICGN:ssä tyhjensimme Mϕs:n fh-/- hiiristä

Kuva 3: Lisätiedot. Annetaan F4/80+-monosyyttien virtaussytometriaprofiilit kontrolli- ja klodronaattikäsitellyistä hiiristä. F4/ 80+ -solut vähenevät merkittävästi alle 10 prosenttiin klodronaattikäsittelyllä. Jokainen aikapiste n=6.

3.4. Makrofagien ehtyminen vähentää glomerulusta

Patologia FH-välitteisessä ICGN:ssä. Immuunikompleksikertymät munuaisissa ja ICGN:n histopatologiset ominaisuudet arvioitiin kokeen lopussa. Immunofluoresenssivärjäys C3:lle ja IgG:lle paljasti, että Mϕ:n ehtyminen ei moduloinut immuunikomplekseja tässä ympäristössä. Edustava immunofluoresenssivärjäytyminen ja histopatologia on esitetty kuvassa 5. Ensisijainen histopatologinen piirre oli glomerulaaristen kimppujen diffuusi hypersellulaarisuus fh-/- hiirillä, joilla oli CSS, mikä väheni merkittävästi Mϕs:n ehtyessä.

3.5. Makrofagit moduloivat sytokiinejä FH-riippuvaisessa ICGN:ssä.

Kerran Mϕstunkeutua munuaiseenja joutuvat alttiiksi tulehduksellisille ärsykkeille, ne vapauttavat sytokiinejä. Arvioimme ELISA:lla TNF:n ja IL{0}}:n ja munuaisten mCSF:n plasman pitoisuudet FHKO-hiirissä, joita hoidettiin suolaliuoksella, apoferritiinillä tai apoferritiinillä ja klodronaatilla. Verenkierrossa olevat IL-6:n tasot olivat erittäin alhaiset villityypin hiirillä ja lisääntyivät FHKO-hiirillä ja vähenivät klodronaatilla käsitellyillä FHKO-hiirillä (kuva 6). Kolme sytokiinia, TNF, IL-6 ja mCSF, lisääntyivät merkittävästi apoferritiinillä hoidetuissa hiirissä verrattuna suolaliuoksella käsiteltyihin kontrolleihin. Klodronaatin aiheuttama Mϕ-vaje rajoitti merkittävästi sytokiinien nousua tässä ympäristössä

3.6. Makrofagit moduloivat Profibroottista

Molekyylit ja laminiini FH-riippuvaisessa ICGN:ssä. Kerranmunuaiset kehittävät sairauden, niillä on taipumus tulla fibroottisiksi. Mϕ:t osallistuvat fibroottiseen prosessiin ylituottamalla profibroottisia molekyylejä. Reaaliaikainen PCR paljasti 75 % kasvun transformoivan kasvutekijä-beeta1:n (TGFbeta1) mRNA:n ilmentymisessä, 100 % lisäyksen metalloproteinaasin-9 (MMP9) ilmentymisessä ja 230 % kasvun laminiinin mRNA:ssa. Yhdenmukaisesti mRNA:n ilmentymisen kanssa laminiiniproteiinin ilmentyminen lisääntyy merkittävästi fh-/- hiirissä, joilla oli CSS, mikä väheni Mϕs:n puuttuessa (kuvio 7).

4. Keskustelu

Viimeaikaiset tutkimuksemme ovat osoittaneet, että FH:n puuttuessa hiiret kehittyvät diffuusiksiproliferatiivinen glomerulonefriitti(GN), jossa F4/80+ Mϕs IC:iden paikkojen ympärillä [10]. Lisäksi tutkimuksemme osoittavat, että Cd11b−/− fh−/− hiirillä on pahentuneet glomerulonefriitin piirteet [26]. Koska lisääntyneiden tulehduksellisten M1-makrofagien läsnäolo ja niiden jatkuva aktivaatio voisi aiheuttaa kudospatologiaa ja niiden uudelleenpolarisoituminen anti-inflammatoriseksi fenotyypiksi auttaisi taudin patologian ratkaisemisessa, nykyinen tutkimus tehtiin Mϕs:n roolin ymmärtämiseksi paremmin fh:ssä. -/- hiiret, joissa on ICGN. Mϕs:n lisääntynyt esiintyminen munuaisissa ja sairauden patologian ratkaiseminen makrofagien ehtymisellä FH-välitteisen ICGN:n aikana osoittavat Mϕs:n kriittisen roolin tässä ympäristössä, ja siksi ne voivat toimia tärkeinä terapeuttisina kohteina tässä ympäristössä.

Kuva 5: Mϕs:n väheneminen vähentää glomerulaarista patologiaa FH-riippuvaisessa ICGN:ssä. Annetaan edustavia kuvia glomerulusista suolaliuoksella käsitellyistä (a), apoferritiinikäsitellyistä (b) ja apoferritiini+klodronaattikäsitellyistä FH-puutteellisista hiiristä. Kohdassa (A) leikkeet on värjätty C3:lla (vihreä) ja IgG:llä (punainen), kun taas (B) näyttää leikkeet, jotka on värjätty PAS:lla. IgG-kertymät, jotka lisääntyivät apoferritiinihoidolla, pysyivät ennallaan, kun taas glomerulukset näyttivät lähempänä normaaleja makrofagien ehtyessä.

FH:n puuttuminen johtaa lisääntyneeseen C5a-tuotantoon. C5a sitoutuu C5aR1:een välittäen Mos:n munuaisiin, missä ne lisäävät tulehduksellista ympäristöä. Lisäksi tutkimuksemme osoittivat myös, että tässä liiallisessa C5a:n muodostumisessa C5a:n inaktivointi näyttää rajoittavan sairautta [10]. Mos:n aktivointi saa ne polarisoitumaan, mutta ne pysyvät jatkuvassa tilassa [27]. Tuloksemme tässä tutkimuksessa osoittavat, että glomerulaariset sairaudet CSS:ssä vähenivät fh-/--hiirillä, joissa Mϕ:t olivat ehtyneet, verrattuna fh-/- hiiriin, joissa ei ollut makrofagien ehtymistä. Siten Mϕs:n aiheuttaman ICGN:n poistaminen fh-/--hiiristä vähentää sairauden patologiaa. Mϕ:t ovat kuitenkin välttämättömiä myös korjausprosessille, ja koska Mϕ:t muuttavat tiloja pro-inflammatorisista tiloista anti-inflammatorisiin tiloihin ja päinvastoin, on tulevaisuuden pyrkimyksemme ymmärtää, voisiko Mϕs-maiseman muuttaminen ilman niitä köyhdyttää muuttaa sairauden patologiaa.

Mϕ:llä on tärkeä rooli fibroosin alkamisessa ja ylläpidossa, ja ne ovat myös osallisena fibroosin tukahduttamisessa, ratkaisemisessa ja kumoamisessa [28]. Tuloksemme osoittavat CD204+- ja CD206+ Mϕ -merkkien lisääntyneen ilmentymisen, mikä viittaa niiden lisääntyneeseen esiintymiseen tässä asetuksessa. Koska nämä Mϕ:t ovat suuri profibroottisten molekyylien lähde, tuloksemme, jotka osoittavat TGF:n -1 sekä MMP9:n lisääntymisen, viittaavat siihen, että nämä Mϕ:t voivat vaikuttaa sekä suoraan että epäsuorasti fibroottisiin prosesseihin FH-välitteisessä ICGN:ssä erilaisten mekanismien kautta ( 1,3,8,44). TGF -1 voi muuttaa fibroosia sytokiinisäätelyn avulla. Lisäksi TGF -1 moduloi C3:n ja tekijä B:n biosynteesiä ja ilmentymistä monosyyteissä [29], ja komplementin muuttuminen immuunisoluissa ja munuaissoluissa voi helpottaa kudosfibroosia [30]. Makrofagien ja komplementin väliset tarkat vuorovaikutukset, asiaan liittyvät mekanismit, niiden roolit ja kudosten jakautuminen on kuitenkin selvitettävä [31]. Tutkimuksemme osoittivat laminiinin vähentyneen ilmentymisen Mϕs-vajautuneilla hiirillä verrattuna Mϕ-riittävästi hiiriin. Ymmärtääksemme paremmin, kuinka FH säätelee fibroottista prosessia, meidän on tunnistettava tietyt Mϕ-alajoukot, jotka ovat läsnä FH-välitteisessä ICGN:ssä, ja selvitettävä kunkin alaryhmän populaation panokset. Nämä tutkimukset ovat tärkeitä, koska täydentävistä terapioista on tullut kliinistä todellisuutta. Inhibiittoreita on kehitetty ja kehitetään edelleen komplementtikaskadin eri kohteita vastaan, jotka estävät aktivaatioreitin (-reittien) alavirran vaiheet. Tällä hetkellä yksi kliinisessä käytössä olevista komplementin estäjistä on anti-C5-vasta-aine, ekulitsumabi [32]. Siksi taudin patogeenisten komplementtikomponenttien tunnistaminen ja sen täydentäminen Mϕs-populaation säätelyllä ei ole vähäpätöinen asia.

Kuva 7: Laminiinin laskeutuminen sisäänFH-puutteiset munuaisetICGN:n kanssa vähennetään Mϕs:n ehtymisen vuoksi. (a) qRT-PCR TGFB:lle, MMP9:lle ja laminiinillemunuaisten mRNAeristetty hiiristä 5 viikon suolaliuoksen ja apoferritiinin ja 3 viikon klodronaatin jälkeen. Lauseke normalisoidaan muotoon GAPDH (n=6/ryhmä). (b) Edustavia IF-mikrovalokuvia laminiinivärjäytykselle samojen hiiriryhmien munuaisissa. ∗P < 0:01.

Yhteenvetona, tässä tutkimme Mϕs:n roolia FH-riippuvaisessa ICGN-mallissa. Tuloksia voidaan soveltaa myös säätelemättömän komplementin aktivoitumiseen immuunikompleksien kanssa, kuten erilaisissa sairauksissa, mukaan lukien lupus-nefriitti, IgA-nefropatia ja kalvonefropatia. Osoitamme sekä FH:n komplementin säätelyn että Mϕs-statuksen merkityksen taudissa. Täten komplementtikaskadin ja Mϕs-statuksen farmakologisella kohdistamisella IC-välitteisessä GN:ssä on mahdollista kliinistä merkitystä.

Viitteet

[1] T. Mijovic, A. Zeitouni ja I. Colmegna,"Autoimmuuninen sensorineuraalinen kuulonmenetys: otologian ja reumatologian rajapinta," Reumatologia, voi. 52, nro. 5, s. 780–789, 2013. [2] M. Abongwa, KE Baber, RJ Martin ja AP Robertson,"Kolinomimeettinen moranteli Ascaris suum ACR-16 nAChR:n avoimen kanavan estäjänä," Selkärangattomien neurotiede, voi. 16, ei. 4, 2016.

[3] AS De Vriese, S. Sethi, J. Van Praet, KA Nath ja FC Fer venza,"Munuaissairaus, jonka aiheuttaa komplementin vaihtoehtoisen reitin säätelyhäiriö: etiologinen lähestymistapa," American Society of Nephrology -lehti, voi. 26, nro. 12, s. 2917– 2929, 2015. [4] RJ Quigg,"Komplementti- ja autoimmuunisairaudet," Autoimmunityn nykyiset ohjeet, voi. 7, s. 165– 180, 2003. 

[5] MC Carroll,"Komplementtijärjestelmä adaptiivisen immuniteetin säätelyssä," Luonto immunologia, voi. 5, ei. 10, s. 981– 986, 2004. [6] MV Carroll ja RB Sim,"Täydennys terveyteen ja sairauksiin," Advanced Drug Delivery Arvostelut, voi. 63, nro. 12, s. 965–975, 2011. 

[7] M. Noris ja G. Remuzzi,"Yleiskatsaus komplementin aktivaatioon ja säätelyyn," Nefrologian seminaarit, voi. 33, ei. 6, s. 479–492, 2013. 

[8] VP Ferreira, AP Herbert, C. Cortes et ai.,"Tekijän H sitoutuminen solujen fysiologisten polyanionien ja C3b:n kompleksiin on heikentynyt epätyypillisessä hemolyyttisessä ureemisessa oireyhtymässä," Journal of Immunology, voi. 182, nro. 11, s. 7009–7018, 2009.

[9] JJ Alexander, MC Pickering, M. Haas, I. Osawe ja RJ Quigg,"Komplementtitekijä h rajoittaa immuunikompleksin kertymistä ja estää sisäänpääsynFLammaatio ja arpeutuminen kroonista seerumitautia sairastavien hiirten glomeruluksissa," American Society of Nephrology -lehti, voi. 16, ei. 1, s. 52–57, 2005.

[10] JJ Alexander, L. Chaves, A. Chang ja RJ Quigg,"C5a-reseptorilla on keskeinen rooli immuunikompleksin glomerulonefriitissä komplementtitekijä H-de:ssäFivanhat hiiret," Munuainen kansainvälinen, voi. 82, nro. 9, s. 961–968, 2012. 

[11] CV Jakubzick, GJ Randolph ja PM Henson,"Monocyte differentiaatio- ja antigeenin esittelytoiminnot," Luontoarvostelut. Immunologia, voi. 17, ei. 6, s. 349–362, 2017. 

[12] Q. Cao, Y. Wang ja DC Harris,"Makrofagien heterogeenisyys, fenotyypit ja roolit munuaisissaFibrosis," Kidney International. Täydentää, voi. 4, ei. 1, s. 16–19, 2014.

[13] Q. Cao, Y. Wang, XM Wang et al.,"Munuaisten F4/80+ CD11c+ mononukleaariset fagosyytit osoittavat makrofagien fenotyyppisiä ja toiminnallisia ominaisuuksia terveydessä ja adriamysiininefropatiassa," American Society of Nephrology -lehti, voi. 26, nro. 2, s. 349–363, 2015.