Elaeagnus Umbellata -fraktioiden estävä vaikutus melanogeneesiin -MSH-stimuloiduissa B16-F10-melanoomasoluissa

Abstrakti:

Kun iho altistuu UV-säteilylle, melanosyytit tuottavat melaniinia. Melaniinin liiallinen tuotanto johtaa ihon pigmentaatioon, joka aiheuttaa erilaisia ​​kosmeettisia ja terveysongelmia. Siksi on välttämätöntä kehittää turvallisia, luonnollisia lääkkeitä, jotka estävät melaniinin tuotantoa. Elaeagnus umbellata (EU) on pitkään käytetty laajalti kansanlääkekasvina sen farmakologisten ominaisuuksien vuoksi, joihin kuuluu haavaumia ehkäiseviä, antioksidantteja ja tulehdusta ehkäiseviä ominaisuuksia.

Tässä tutkimuksessa tutkimme EU-fraktioiden antioksidanttiaktiivisuutta ja melanogeneesiä estäviä vaikutuksia B16-F10-melanoomasoluissa. EU-fraktiot osoittivat annoksesta riippuvaa lisäystä antioksidanttiaktiivisuudessa radikaaleja poistavassa aktiivisuudessa. Lisäksi arvioimme EU-fraktioiden vaikutusta tyrosinaasiaktiivisuuteen ja melanogeneesiin -melanosyyttejä stimuloivan hormonin indusoimissa B16-F10-melanoomasoluissa. EU oli ei-sytotoksinen pitoisuudella 12,5–50 µg/ml. EU-fraktiot estivät tehokkaasti tyrosinaasin aktiivisuutta ja melanogeneesiä, tukahduttivat melanogeneesireittiin osallistuvien CREB:n ja ERK:n fosforylaatiota ja vähensivät melanogeneesiin liittyvien proteiinien ekspressiota. Mielenkiintoista on, että melanogeneesiä estävä vaikutus oli tehokkain pitoisuudella 50 µg/ml EU, ja fraktioiden vaikutukset olivat parempia kuin uutteen. Siksi tutkimuksemme viittaa siihen, että EU:lla on potentiaalia turvallisena hoitona liialliselle pigmentaatiolle tai luonnollisena ainesosana kosmetiikassa.

Ihmisen ihon ja uusien solujen kasvu elimistössämme hidastuu, ihon aineenvaihdunta hidastuu, ikääntyvien solujen aineenvaihdunta ei onnistu ajoissa ja sujuvasti ja melaniinin on vaikea hävitä. Yhdessä ihon pinnalta olevien luonnollisten kosteustekijöiden asteittaisen häviämisen kanssa marraskeden paksuuntuminen ja kerääntyminen, melaniini lisääntyy ja iholle ilmestyy vähitellen himmeitä tummia täpliä. Riippumatta siitä, kuinka monta valkaisevaa ihonhoitotuotteita käytetään, ihoon on vaikea imeytyä. Siksi tutkimuksemme aikana havaitsimme, että Cistanche deserticolan, Cistanche tubulosan funktionaalisen ainesosan, kokonaisglykosidit voivat tehokkaasti poistaa erilaisia ​​aktiivisia happivapaita radikaaleja (O2·-, OH·, H2O2, 1O2) ja suojata hapen aiheuttamilta DNA-vaurioilta. OH·vapaat radikaalit ja Cistanche deserticola -polysakkaridit voivat viivyttää elinten fysiologista rappeutumista ja solujen morfologista muutosta. Yllä mainituilla ainesosilla voi olla antioksidanttinen ja ikääntymistä estävä vaikutus. Samaan aikaan Cistanche deserticola voi myös estää tyrosinaasin toimintaa valkaisuvaikutuksen saavuttamiseksi.

Click cistanche tubulosa -uutejauhetuote

Avainsanat:

Elaeagnus umbellata; ihon valkaisuun; antioksidantti; melanogeneesi; -MSH.

1. Esittely

Ihmisen ihon väri riippuu geneettisesti läsnä olevien melanosomien määristä ja siitä, missä määrin nämä melanosomit ovat hajaantuneet ihoon, ja siihen vaikuttavat myös auringonvalolle altistuminen ja ympäristön saastuminen [1]. Melaniini on korkean molekyylipainon omaava yhdiste, jota löytyy eläimistä ja kasveista, ja se on tärkeä pigmentti, joka määrittää ihmisten silmien, ihon ja hiusten värin. Melanogeneesi viittaa melaniinin tuotantoprosessiin, joka on suurin syy pigmentaatioon ihmisen ihossa. Melaniini voi suojata ihoa haitalliselta UV-säteilyltä, mutta liiallinen melaniinin tuotanto voi johtaa esteettisiin ongelmiin, kuten melasmaan ja pisamioihin, sekä terveysongelmiin, mukaan lukien tulehduksen jälkeinen hyperpigmentaatio [2].

Melaniinilla on ratkaiseva rooli ihon suojaamisessa erilaisilta ärsykkeiltä, ​​kuten UV:ltä, reaktiivisilta happilajeilta (ROS) ja melanosyyttejä stimuloivalta hormonilta (-MSH) [3]. Kun iho altistuu UV-säteilylle, ROS muodostuu ja ihosolut tuottavat ylimääräistä melaniinia. Tämä synnytetty ROS tuhoaa yksi- ja kaksijuosteisen DNA:n ja hyökkää proteiini- ja lipidimolekyylejä vastaan ​​[4]. Melaniini ja antioksidanttientsyymit, kuten peroksidaasi, glutationi ja katalaasi, neutraloivat syntyneen ROS:n ylläpitääkseen tietyn tason [5,6]. Hallitsematon liiallinen ROS-tuotanto johtaa kuitenkin erilaisiin ongelmiin, kuten syöpään [7]. Melanosyytit sijaitsevat epidermiksen tyvikerroksessa, ja tyrosinaasi moduloi niitä. Nämä solut tuottavat melaniinia melanogeneesin kautta, ja sellaiset tekijät kuin mikroftalmiaan liittyvä transkriptiotekijä (MITF) ja tyrosinaasiin liittyvä proteiini (TRP-1) ovat mukana tässä prosessissa [8]. Tyrosinaasi osallistuu reittiin, jossa L-tyrosiini muuttuu 3,4-dihydroksifenyylialaniiniksi (DOPA), joka sitten muunnetaan dopakinoniksi, josta syntetisoidaan melaniinia. Siksi tyrosinaasi on tärkeä tekijä, joka säätelee melanogeneesiä ihosoluissa.

Viime aikoina monet lääketieteen ja kosmeettiset teollisuudenalat ovat keskittyneet tyrosinaasiaktiivisuuden estäjiin ratkaistakseen pigmentaation ja liiallisen melanogeneesin aiheuttaman pigmenttihäiriön aiheuttamat esteettiset ongelmat [9]. Erilaisia ​​kemikaaleja, kuten arbutiinia, kojiinihappoa, hydrokinonia ja askorbiinihappoa, jotka ovat melaniinin synteesin estäjiä, käytetään ihon valkaisuaineina [10]. Nämä aineet eivät kuitenkaan tunkeudu ihon läpi hyvin, ja pitkällä käyttöajalla voi olla sivuvaikutuksia, kuten ihoärsytystä, tulehdusta, kutinaa ja pigmentaatiota [11]. Siksi on olemassa tarve kehittää tehokkaita valkaisuaineita, joilla voidaan turvallisesti hoitaa ja estää ihmisen ihon hyperpigmentaatiota ilman ärsytystä.

Elaeagnus umbellata (EU) on kasvi, joka on laajalti levinnyt kaikkialle Aasiaan ja jota on pitkään käytetty kansanlääkekasvina siihen liittyvien farmakologisten vaikutusten vuoksi. Perinteisesti EU:n kukkia ja siemeniä on käytetty hengityselinsairauksien, mukaan lukien sydän- ja keuhkosairauksien, hoitoon, kun taas lehtiä on käytetty tonicina ja suolistosairauksien hoitoon [12,13]. Lisäksi EU:ta käytetään lihasrelaksanttina, kipulääkkeenä, haavaumia ehkäisevänä, diabeteslääkkeenä ja kuumetta alentavana aineena [14]. EU:n ainesosilla on syöpää [15], antioksidantteja ja tulehdusta estäviä vaikutuksia [16], ja EU-uute vaikuttaa ihon valkaisuun ja ryppyjen paranemiseen [17]. Tutkimuksia oksien ja lehtien ihon valkaisun vaikutuksesta EU-fraktioissa ei kuitenkaan ole vielä tehty. Siksi tämän tutkimuksen tarkoituksena oli tarkkailla oksien ja lehdistä peräisin olevien EU-fraktioiden in vitro antioksidanttista aktiivisuutta ja melanogeneesin estoa melaniinia tuottavilla hiiren B16-F10-melanoomasoluilla ja vahvistaa oksien ja lehtien potentiaali. johdettu EU kosmeettisena ihonvalkaisuaineena.

2. Materiaalit ja metodit

2.1. Materiaalit ja reagenssit

2.2. EU-uutteen ja -fraktioiden sekä näytteen valmistus

EU:n oksat ja lehdet (1:1) toimitti Jeonbuk Institute for Food Bioindustry (Jeonju, Jeonbuk, Korea). EU (50 g) jauhettiin sekoittimella ja EU-jauheita uutettiin 70-prosenttisella etanolilla 24 tunnin ajan huoneenlämpötilassa. Liuotin steriilisuodatettiin standardiseulan läpi (Advantec MFS, Taipei, Taiwan) ja haihdutettiin alipaineessa käyttämällä pyöröhaihdutinta (EYELA, N-1110, Tokio, Japani). Uute lyofilisoitiin käyttämällä pakastekuivaajaa (OPERON, FDU-8606, Gimpo, Korea) etanolin jäännöksen poistamiseksi ja 2,4 g (saanto, 4,8 %) EU 70 % etanoliuute (EUEE) -jauheen saamiseksi. EUEE (2,4 g) suspendoitiin tislattuun veteen ja jaettiin etyyliasetaatti (EUEA, 0,19 g) tai butanoli (EUBu, 0,91 g) fraktioiden kanssa. Kaikki uutteet ja fraktiot säilytettiin 4 ◦C:ssa käyttöön asti.

2.3. Korkean suorituskyvyn nestekromatografia (HPLC) -analyysi

Kromatografiset analyysit suoritettiin käyttämällä Elite Lachrom HPLC-DAD -järjestelmää, joka oli varustettu UV-detektorilla (Hitachi HighTechnologies Co., Tokio, Japani). 260 nm:n UV-detektoria ja analyyttistä YMC ODS-AM (5 mM, 4,6 × 250 mM) -kolonnia (Kioto, Japani) käytettiin kvantifiointiin sisäiseen standardimenetelmään perustuen. Kolonnin lämpötila oli 35 ◦C ja liikkuvan faasin virtausnopeus oli 1 ml/min. Eluentti oli liuottimen (A)=0,1 % etikkahappo vedessä ja liuottimen (B)=0,1 % etikkahappo asetonitriilissä gradientti. Ajoaika oli 35 minuuttia ja gradientti oli seuraava: (A)/(B)=88/12 (0 min) → (A)/(B)=78/22 (0–) 18 min) → (A)/(B)=72/28 (18–28 min) → (A)/(B)=62/38 (28–35 min). HPLC-analyysi on esitetty kuvassa 1.

2.4. Soluviljely

Hiiren melanooma B16-F10-solulinja (CRL-6475) ostettiin American Type Culture Collectionilta (ATCC, VA, USA). Soluja viljeltiin DMEM:ssä, johon oli lisätty 10 prosenttia lämpöaktivoitua FBS:ää ja 1 prosenttia streptomysiiniä (100 ug/ml)/penisilliiniä (100 yksikköä/ml). B16-F10-soluja inkuboitiin kostutetussa 5-prosenttisessa CO2:ssa 37 ◦C:ssa.

2.5. Solujen elinkelpoisuusmääritys

Näytteiden sytotoksisuus arvioitiin käyttämällä MTT-määritystä. B16-F10-melanoomasoluja (1 × 104 solua/kuoppa) viljeltiin 96-kuoppalevyllä ja inkuboitiin eri pitoisuuksilla uutetta ja fraktioita (12,5, 25, 50 ja 100 µg/ml) tai arbutiini (100 ug/ml) 24 tunnin ajan 37 °C:ssa. Inkuboinnin jälkeen kuoppiin lisättiin 500 ug/ml MTT-liuosta ja levyä inkuboitiin edelleen 4 tuntia 37 °C:ssa. Sitten kunkin kuopan väliaine poistettiin ja 200 ui dimetyylisulfoksidia (DMSO) lisättiin formatsaanikiteiden liuottamiseksi. Levyn absorbanssi havaittiin 570 nm:ssä mikrolevylukijalla (Synergy HTX Multi-Mode Reader, BioTek, Winooski, VT, USA).

2.6. DPPH radikaalinpoistotoiminto

EU-uutteen ja -fraktioiden DPPH-radikaaleja poistava aktiivisuus varmistettiin mittaamalla DPPH-radikaalien pelkistyskyky kussakin näytteessä. 2 ml:aan 0,15 mM DPPH-liuosta lisättiin erilaisia ​​pitoisuuksia (12,5, 25 ja 50 µg/ml) EU-uutetta ja fraktioita tai 20 µg/ml askorbiinihappoa (positiivinen kontrolli) 500 µl:na. Liuosta vorteksoitiin 10 sekuntia perusteellisen sekoittumisen varmistamiseksi, ja sitä inkuboitiin 30 minuuttia huoneenlämpötilassa pimeässä. Seoksen absorbanssi mitattiin sitten aallonpituudella 517 nm käyttämällä mikrolevylukijaa (Biotek, Winooski, VT, USA).

2.7. ABTS Radical Scavenging Assay

ABTS-radikaalinpoistoliuos valmistettiin sekoittamalla 7,4 mM ABTS-liuosta ja 2,6 mM kaliumpersulfaattia suhteessa 1:1 (pH 7,4) ja saattamalla liuoksen reagoimaan huoneenlämpötilassa 24 tuntia. Sitten ABTS-liuoksen absorbanssi säädettiin arvoon 0,70 ± 0,03 732 nm:ssä. Jokainen 10 ui:n näyte saatettiin reagoimaan 190 ul:n kanssa ABTS-liuosta 10 minuutin ajan huoneenlämpötilassa, ja absorbanssi mitattiin aallonpituudella 732 nm käyttämällä mikrolevylukijaa (Biotek, Winooski, VT, USA).

2.8. Sienityrosinaasin estoaktiivisuus

Melanogeneesissä ratkaisevan tärkeän tyrosinaasin estoaktiivisuuden analysoimiseksi käytettiin sienityrosinaasia ja L-DOPA-substraattia. Ensin lisättiin peräkkäin 150 µl 0,1 M fosfaattipuskuria (pH 6,8), 20 µl 5 mM L-DOPA-liuosta ja 20 µl eri konsentraatioita EU-uutetta ja fraktioita ja 100 µl 250 U/ml sienityrosinaasia lisättiin käynnistämään reaktio. Seoksia inkuboitiin 37 °C:ssa 10 minuuttia ja absorbanssi mitattiin 475 nm:ssä käyttäen mikrolevylukijaa (Biotek, Winooski, VT, USA). Tyrosinaasin estoaktiivisuus laskettiin käyttämällä seuraavaa kaavaa:

2.9. Solujen tyrosinaasiaktiivisuuden määritys

B16-F10-melanoomasoluja kylvettiin tiheydellä 1 × 105 solua/kuoppa kuusikuoppaisille levyille, jotka sisälsivät 2 ml DMEM:ää. Perustettiin kuusi ryhmää: kontrolliryhmä, hoitamaton; -MSH-ryhmä, vain 100 nM -MSH; arbutiiniryhmä, -MSH ja arbutiini (10 mM); EUEE-ryhmä, -MSH- ja EUEE-uute (12,5, 25 ja 50 ug/ml); EUEA-ryhmä, -MSH- ja EUEA-fraktiot (12,5, 25 ja 50 µg/ml); ja EUBu-ryhmä, -MSH- ja EUBu-fraktiot (12,5, 25 ja 50 ug/ml). Kuusikuoppaisia ​​levyjä inkuboitiin yön yli 37 °C:ssa 5-prosenttisessa CO2-inkubaattorissa. Sitten solut altistettiin -MSH:lle (100 nM) 48 tunnin ajan ja niitä käsiteltiin erilaisilla EUEE-, EUEA- ja EUBu- tai arbutiinipitoisuuksilla (10 mM) 24 tunnin ajan. Solut pestiin fosfaattipuskuroidulla suolaliuoksella (PBS) kolme kertaa ja lysoitiin. Lysaattia sentrifugoitiin 16, 000 × g 20 minuutin ajan.

Seuraavaksi määritettiin kunkin lysaatin proteiinipitoisuus käyttämällä BCA Protein Assay Kit -sarjaa (Thermo Scientific, Vantaa, Suomi). Proteiinitasot säädettiin sitten arvoon 20 µg kaikissa näytteissä. Lysaatit (100 µl), jotka sisälsivät 2,5 mM L-DOPA:ta 0,1 M fosfaattipuskurissa, siirrettiin 96-kuoppalevyn kuoppiin ja inkuboitiin 1 tunti 37 ◦C:ssa. Lysaattien absorbanssi mitattiin 475 nm:ssä käyttäen mikrolevylukijaa (Biotek, Winooski, VT, USA). Solujenvälinen tyrosinaasiaktiivisuus laskettiin käyttämällä seuraavaa kaavaa:

OD:t edustavat näytteen absorbanssia ja ODb edustavat kontrollin absorbanssia. Arbutiinia käytettiin standardina.

2.10. Melaniinipitoisuuden mittaus

Melaniinin määrän määrittämiseksi B16-F10-soluissa ne kylvettiin 24-kuoppalevylle tiheydellä 2 × 104 solua/kuoppa ja inkuboitiin 24 tuntia DMEM:ssä, jossa oli 10 prosenttia FBS:ää. B16-F10-soluja esikäsiteltiin erilaisilla EUEE-, EUEA- ja EUBu-pitoisuuksilla (12,5, 25 ja 50 µg/ml) ja positiivisella kontrolliarbutiinilla (10 mM) 1 tunnin ajan, minkä jälkeen annettiin reagoida 100 nM:n kanssa - MSH vielä 72 tuntia. Sen jälkeen solut kerättiin PBS:llä pesun jälkeen. Sentrifugoimalla saatu pelletti (12,000 × g, 10 min) hajotettiin 1 N NaOH:ssa, joka sisälsi 10 % DMSO:ta, 90 ◦C:ssa 30 minuuttia. Jokaisen kuopan melaniinipitoisuus mitattiin aallonpituudella 405 nm käyttämällä mikrolevylukijaa (Biotek, Winooski, VT, USA). Melaniinin määrän määrittämiseksi kokeen aikana tuotettuja kokonaismääriä pidettiin standardina (100 prosenttia), ja kunkin uutteen ja fraktiokäsittelyryhmän estonopeus määritettiin suhteessa tähän standardiin.

2.11. Western Blot -analyysi

B{{0}}F10 hiiren melanoomasoluja (1 × 106 solua/kuoppa) viljeltiin 6 cm:n maljoissa ja inkuboitiin yön yli 37 ◦C:ssa, ja soluja esikäsiteltiin -MSH:lla (10 µM) 24 h. Sitten soluja käsiteltiin eri pitoisuuksilla (12,5, 25 ja 50 ug/ml) EU-uutetta ja fraktioita tai 100 ug/ml arbutiinia 24 tunnin ajan. Solut kerättiin PBS:llä ja sentrifugoitiin sitten 12,000× g 15 minuuttia 4 ◦C:ssa. Supernatantin poistamisen jälkeen solut lyysattiin käyttämällä jääkylmää Pro-prep-proteiinin lyysipuskuria, johon oli lisätty 1 % proteaasi- ja fosfataasi-inhibiittoreita, ja pidettiin jäissä 40 minuuttia. Fraktioitujen proteiinien määrä määritettiin käyttämällä Bradford-proteiinimääritystä. Samat määrät proteiineja (25 ug) ladattiin ja erotettiin 8 % tai 10 % natriumdodekyylisulfaatti-polyakryyliamidigeelielektroforeesilla ja siirrettiin polyvinylideenifluoridi (PVDF) -kalvolle. PVDF-kalvot estettiin 5-prosenttisella rasvattomalla maidolla Tris-puskuroidussa suolaliuoksessa (TBS), jossa oli 0,1-prosenttista Tween 20 (TBS-T) -puskuria 1 tunnin ajan huoneenlämpötilassa ja inkuboitiin spesifisten primääristen vasta-aineiden kanssa p-CREB:tä, CREB:tä, p-p-CREB:tä vastaan. -ERK, ERK, MITF, TRP-1, TRP-2, tyrosinaasi ja -aktiini yön yli 4 ◦C:ssa.

Sen jälkeen kalvot huuhdeltiin TBS-T-puskurilla kolme kertaa 10 minuutin ajan ja saatettiin reagoimaan 2 tuntia piparjuuriperoksidaasilla konjugoidun sekundaarisen vasta-aineen kanssa huoneenlämpötilassa. Kalvot huuhdeltiin TBS-T-puskurilla viisi kertaa ja proteiinit havaittiin tehostetulla kemiluminesenssiliuoksella. Bändikuvat saatiin käyttämällä Davinch-In vivo ja länsimaista kuvantamisjärjestelmää (Davinch-K, Soul, Korea).

2.12. Tilastollinen analyysi

Kaikki arvot on esitetty keskiarvoina ± SEM (keskiarvon standardivirhe) vähintään kolmesta riippumattomasta kokeesta, ja tilastolliseen analyysiin käytettiin GraphPad Prism -ohjelmistoa 5.0 (GraphPad, San Diego, CA, USA). Ryhmien välisten tilastollisten erojen vertaamiseen käytettiin yksisuuntaista varianssianalyysiä, jota seurasi Bonferroni post hoc -analyysi. P-arvoa alle 0.05 (p < 0,05) pidettiin tilastollisesti merkitsevänä.

3. Tulokset

3.1. EU:n HPLC-analyysi

EUEE:n, EUEA:n ja EUBu:n lopulliset tuotot (prosenttia) olivat 4,8 prosenttia, 0,18 prosenttia ja 1,82 prosenttia tuorepainon perusteella. HPLC:llä analysoitiin luteoliinin, EU-uutteen ja fraktioiden indikaattoriyhdisteen, pitoisuus. Verrattuna standardikomponentin huippuun luteoliinin huippu EU-uutteessa ja fraktioissa varmistettiin. Luteoliinipitoisuus EUEE:ssä, EUEA:ssa ja EUBu:ssa oli 499,03, 1948,05 ja 994.{11}} mg/ml (kuva 1).

3.2. EU:n vaikutus antioksidanttiaktiivisuuteen ja tyrosinaasia inhiboivaan aktiivisuuteen

EUEE:n, EUEA:n ja EUBu:n eri pitoisuuksien antioksidanttiaktiivisuus mitattiin käyttämällä DPPH/ABTS-määritystä. EUEE:n, EUEA:n ja EUBu:n DPPH- ja ABTS-radikaaleja poistavat aktiivisuudet lisääntyivät annoksesta riippuvaisella tavalla (kuvio 2A, B), ja askorbiinihappo oli positiivinen kontrolli. DPPH- ja ABTS-radikaaleja poistavat aktiivisuudet pitoisuudella 50 ug/ml EU-uutteella ja fraktioilla olivat molemmat korkeampia, mikä osoitti samanlaisia ​​tuloksia kuin positiivisella kontrollilla, askorbiinihapolla. Melanogeneesivälitteisten entsyymien inhiboivan vaikutuksen mittaamiseksi EU-uutteessa ja fraktioissa suoritettiin sienityrosinaasin estomääritys (kuvio 2C) L-DOPA:lla substraattina soluttomissa olosuhteissa. Tulokset osoittivat, että EU-uute ja -fraktiot estivät tyrosinaasin aktiivisuutta annoksesta riippuvalla tavalla. Erityisesti EU-uutteen ja fraktioiden tyrosinaasia estävä aktiivisuus 50 ug/ml osoitti samanlaisia ​​tuloksia kuin arbutiinilla,

Siksi EU:n tyrosinaasia estävä vaikutus liittyy L-DOPA:n hapettumiseen DOPA-kinoniksi melanogeneesissä Kaiken kaikkiaan EU-fraktioilla oli suurempi antioksidantti- ja tyrosinaasia estävä vaikutus kuin uutteella. Lisäksi EU-fraktiot, erityisesti EUBu, alkoivat osoittaa samanlaisia ​​vaikutuksia kuin positiivisella kontrolliryhmällä annoksella 25 ug/ml.

Kuva 2. EU:n antioksidanttiaktiivisuus ja sienten tyrosinaasia estävä aktiivisuus. EU-uutteen ja fraktioiden DPPH:n (A) ja ABTS:n (B) radikaalipoistoaktiivisuus. Positiivisena kontrollina käytettiin askorbiinihappoa (20 µg/ml). Tyrosinaasia estävä vaikutus käyttämällä EU-uutteen ja fraktioiden L-DOPA:ta (C). Positiivisena kontrollina käytettiin arbutiinia (10 mM). Kaikki kaaviot osoittavat kontrollin prosenttiosuudet, ja tiedot on ilmaistu keskiarvoina ± SEM (n=3). Tilastollinen merkitsevyys asetettiin * p < 0,05, ** p < 0,01 ja *** p < 0,001 verrattuna askorbiinihappo- tai arbutiiniryhmään.

3.3. EU:n vaikutus B16-F10-solujen elinkelpoisuuteen

EU:n solusytotoksisuuden arvioimiseksi B16-F10-melanoomasoluja käsiteltiin eri pitoisuuksilla (12,5, 25, 50 ja 100 ug/ml) EU-uutetta ja fraktioita 24 tunnin ajan, ja solujen elinkelpoisuus analysoitiin MTT-määritys. Tulokset esitetään solujen elinkelpoisuuden prosenttiosuutena verrattuna kontrolliin. EU-uute ja -fraktiot eivät olleet sytotoksisia testatulla pitoisuusalueella 12.5 50 ug/ml B16-F10-soluille. Sytotoksisuus kuitenkin varmistettiin B16-F10-soluissa EU-fraktioiden (EUEA ja EUBu) pitoisuudella 100 ug/ml (kuva 3). Siksi myöhemmät kokeet suoritettiin käyttämällä EU-uutteen ja fraktioiden pitoisuuksia 12,5, 25 ja 50 ug/ml.

3.4. EU:n vaikutus melaniinin synteesiin

EU:n anti-melanogeenisen vaikutuksen määrittämiseksi EU-uutteen ja fraktioiden estovaikutusta melaniinin synteesiin tutkittiin B16-F10-soluissa. B16-F10-soluja käsiteltiin EU-uutteella ja fraktioilla konsentraatioilla 12,5, 25 ja 50 µg/ml tai arbutiinilla pitoisuudella 10 mM 1 tunnin ajan ja sitten niitä stimuloitiin -MSH:lla (100 mM) 72 tunnin ajan. . Melaniinipitoisuus kasvoi 305,44 prosenttia, kun sitä stimuloitiin -MSH:lla verrattuna kontrolliin (kuvio 4A). Kuitenkin EU:lla hoidetuilla ryhmillä pitoisuudella 50 µg/ml melaniinipitoisuus oli merkittävästi alentunut verrattuna vain -MSH:lla stimuloituun ryhmään, ja tulokset olivat samanlaiset kuin kontrolliryhmän. Lisäksi arbutiinipositiiviseen kontrolliin verrattuna EU-fraktiot pitoisuutena 50 µg/ml osoittivat alhaisempaa melaniinin tuotantoa. Näiden tulosten mukaisesti EU-uutteen ja -fraktioiden pitoisuuksien noustessa melaniinin synteesin estonopeus B16-F10-soluissa kasvoi (kuva 4B).

Erityisesti melaniinin synteesin estonopeus EU-fraktioissa pitoisuudella 50 µg/ml oli merkittävästi korkeampi kuin arbutiinilla. Siksi EU-fraktioilla oli merkittävä annosriippuvainen estävä vaikutus melaniinin synteesiin B16-F10-melanoomasoluissa.

3.5. EU:n vaikutus melaniinin synteesiin ja solujen tyrosinaasiaktiivisuuteen

Vahvistimme EU-uutteen ja -fraktioiden vaikutuksen B16-F10-melanoomasolujen melanogeneesin mekanismiin liittyvään solunsisäiseen tyrosinaasiaktiivisuuteen. Kaikkia ryhmiä, paitsi kontrollia, stimuloitiin a-MSH:lla (100 nM) 48 tunnin ajan ja sitten niitä käsiteltiin erilaisilla pitoisuuksilla EU-uutetta ja fraktioita (12,5, 25 ja 50 ug/ml) tai arbutiinia ( 10 mM) 24 tunnin ajan. Tämän seurauksena EU-uute ja -fraktiot estivät merkittävästi MSH-indusoitua tyrosinaasiaktiivisuutta B16-F10-soluissa annoksesta riippuvalla tavalla (kuva 4C). Solunsisäinen tyrosinaasiaktiivisuus kasvoi 251,00 prosenttia, kun sitä stimuloitiin a-MSH:lla verrattuna kontrolliin. Kuitenkin EU:lla hoidetut ryhmät pitoisuudella 50 ug/ml vähensivät merkittävästi tyrosinaasiaktiivisuutta verrattuna a-MSHonly-stimuloidun ryhmän vastaavaan.

Siten tyrosinaasiaktiivisuus esti annoksesta riippuvalla tavalla EU-käsittelyllä B16-F10-soluissa, ja vaikutus oli erityisen voimakas kon. pitoisuus 50 ug/ml. EUEE:n tyrosinaasiaktiivisuuden esto konsentraatiolla 50 ug/ml oli pienempi kuin arbutiinilla (85,13 prosenttia), kun taas EU-fraktioiden (EUEA ja EUBu) tyrosinaasiaktiivisuuden esto oli suurempi kuin arbutiinilla (121,99 ja 128,11 prosenttia). , vastaavasti). Näiden tulosten mukaisesti EU-uutteen ja fraktioiden pitoisuuksien noustessa solunsisäisen tyrosinaasin aktiivisuuden estoaste B16-F10-soluissa kasvoi (kuva 4D).

Kuva 4. EU:n melaniinin synteesi ja solujen tyrosinaasiaktiivisuus. EU-uutteen melaniinipitoisuus ja fraktiot B16-F10-melanoomasoluissa (A). EU-uutteen ja fraktioiden melaniinin synteesin estonopeus B16-F10-melanoomasoluissa (B). EU-uutteen ja fraktioiden solunsisäinen tyrosinaasiaktiivisuus B16-F10-melanoomasoluissa (C). EU-uutteen ja fraktioiden solunsisäisen tyrosinaasiaktiivisuuden estonopeus B16-F10-melanoomasoluissa (D). Tulokset (A, C) esitetään prosentteina -MSH-ryhmän perusteella. Tulokset (B, D) esitetään prosentteina vertailuryhmän perusteella. Tiedot ilmaistaan ​​keskiarvoina ± SEM (n=3). Tilastollinen merkitsevyys asetettiin arvoon *** p < 0,001 verrattuna -MSH-stimuloituihin B16-F10-soluihin ja # p < 0,05, ## p < 0,01 ja ### p < 0,001 verrattuna soluihin. arbutiiniryhmä.

3.6. EU:n vaikutus melanogeneesiin liittyviin CREB- ja ERK-proteiinien ilmentymiseen

Melanogeneesi suojaa ihmisen ihoa erilaisilta ulkoisilta ärsykkeiltä, ​​ja tähän prosessiin osallistuu erilaisia ​​mekanismeja. -MSH, melanogeneesin ensimmäiseen vaiheeseen osallistuva hormoni, stimuloi melanosyyttejä fosforyloimaan CREB:tä ja ERK:ta, mikä indusoi melanogeneesiin liittyvien signaaliproteiinien synteesiä [18]. Tässä tutkimuksessa tutkimme melanogeneesin säätelemiä proteiineja, mukaan lukien CREB ja ERK, määrittääksemme EU:n melanogeneesiä estävän mekanismin -MSH:n indusoimalle melaniinin synteesille B16-F10-melanoomasoluissa. Tuloksena vahvistimme, että CREB- ja ERK-fosforylaatio lisääntyi merkittävästi, kun B16-F10-soluja stimuloitiin -MSH:lla. Kuitenkin, kun soluja käsiteltiin EU-uutteella ja fraktioilla, -MSH:n aiheuttama fosforylaatio tukahdutettiin annoksesta riippuvalla tavalla. Erityisesti voidaan nähdä, että EU-uute ja fraktiot, joiden pitoisuus on 50 µg/ml, ovat tehokkaimpia eri hoitopitoisuuksista (kuva 5A–D).

3.7. EU:n vaikutus melanogeneesiin liittyvien MITF-, TRP-1-, TRP-2- ja tyrosinaasiproteiinien ilmentymiseen

Sen tutkimiseksi, vaikuttavatko EU-uute ja -fraktiot -MSH:n indusoimien melanogeneesiin liittyvien proteiinien ilmentymiseen, suoritettiin Western blot -analyysi MITF-, TRP-1-, TRP-2- ja tyrosinaasiproteiinien ilmentymisen arvioimiseksi. Kaikkien melanogeneesiin liittyvien proteiinien tasot nousivat merkittävästi -MSH-stimulaatiolla, mutta EU-uute ja -fraktiot tukahduttivat tehokkaasti MITF-, TRP-1-, TRP-2- ja tyrosinaasiproteiinien ilmentymistä -MSH-stimuloidussa. B16-F10 solut (kuva 6). Aiempien tulosten mukaisesti, erityisesti useimpien EU-uutteiden ja fraktioiden kohdalla 50 µg/ml, näiden proteiinien ilmentyminen oli estynyt enemmän kuin positiivisella kontrolliarbutiinilla tehdyn käsittelyn jälkeen. Lisäksi käsittely EU-fraktioilla sai aikaan suuremman vaikutuksen samalla pitoisuudella kuin EU-uutteella.

Kuva 6. EU:n estävä vaikutus melanogeneesiin liittyvään MITF-, TRP-1-, TRP-2- ja tyrosinaasiproteiinien ilmentymiseen. Edustava Western blot -nauhakuva EUEE:n (A), EUEA:n (B) ja EUBu:n (C) MITF:stä, TRP-1, TRP-2 ja tyrosinaasista. Käytettäessä GelQuantNET-ohjelmaa Western blot -kaistan suhteellinen intensiteetti esitetään seuraavana pylväsdiagrammina; MITF/-aktiini, TRP-1/-aktiini, TRP-2/-aktiini ja tyrosinaasi/-aktiini. -aktiinia käytettiin Western blottauksen sisäisenä kontrollina. Tiedot ilmaistaan ​​keskiarvoina ± SEM (n=3). Tilastollinen merkitsevyys asetettiin * p < 0.05, **p < 0,01 ja *** p < 0,001 verrattuna -MSH-stimuloituun B{ {22}}F10 solut.

4. Keskustelu

Melanosyytit sijaitsevat ihon pohjakerroksessa, ja melaniinin synteesiaste melanosyyteissä määrää ihmisen ihon värin [19]. Melaniini on ihon pigmentti, joka suojaa ihoa vähentämällä haitallisten ultraviolettisäteiden tuottaman ROS:n määrää. Kun iho altistuu UV-säteilylle, aktivoituu melanosyyttejä stimuloiva a-MSH ja melanosyytit tuottavat melaniinia (20), mutta liiallinen melaniinin tuotanto voi aiheuttaa ihon pigmentoitumista, mikä aiheuttaa esteettisiä ongelmia.

A-MSH:n sitoutuminen melanosyyttireseptoriin melanosyyttispesifinen melanokortiini-1-reseptori (MC1R) aktivoi signalointiproteiiniadenylaattisyklaasia ja lisää cAMP 121:n solunsisäisiä tasoja. Kun cAMP-taso melanosyyteissä nousee, CREB- ja ERK-signalointireitit, jotka edistävät melanogeneesiin osallistuvien proteiinien tuotantoa, aktivoituvat. 18,22]. Tämä aktivoitu CREB- ja ERK-signalointireitti lisää MITF:n ilmentymistä ja edistää sen jälkeen TRP-1, TRP-2 ja tyrosinaasin ilmentymistä (23MITF on tyrosinaasin säätelyn transkriptiotekijä ja sillä on keskeinen rooli melaniinin synteesin säätelyssä, mukaan lukien melanosyyttien lisääntymisen, erilaistumisen ja eloonjäämisen säätely (24). Tämä proteiini ei säätele vain melanogeneesiä säätelemällä alaproteiineja, mukaan lukien TRP-1, TRP-2 ja tyrosinaasia, mutta osallistuu myös solusyklin etenemisen säätelyyn (25]. Yhdessä ulkoisen stimulaation, kuten UV-säteilyn, aiheuttama a-MSH-MC1R:n sitoutuminen aktivoi pääasiassa CREB- ja ERK-signalointireittejä melanosyyteissä, mikä lisää MITF:n, TRP:n ilmentymistä -1, TRP-2 ja tyrosinaasiproteiinit melaniinin tuotannon indusoimiseksi. Siksi tämän prosessin estäminen voi johtaa melaniinin synteesin estymiseen melanosyyteissä.

Tällä hetkellä käytössä olevat erilaiset ihonvalkaisuaineet, mukaan lukien hydrokinoni ja hydrokortisoni, ovat enimmäkseen haitallisia kemikaaleja, ja pitkäaikainen käyttö voi aiheuttaa sivuvaikutuksia, kuten ihoärsytystä ja kutinaa [1,26–28]. Siksi on tarpeen keskittyä turvallisten ja tehokkaiden luonnollisten ihonvalkaisuaineiden kehittämiseen, joilla on mahdollisimman vähän sivuvaikutuksia, kuten EU [29].

Tässä tutkimuksessa tutkimme, kuinka EU-fraktiot estävät melaniinin synteesiprosesseja ja vähentävät melaniinin tuotantoa, mikä johtaa ihon valkaisuun B16-F10-melanoomasoluissa.

Koska UV-säteilyn aiheuttama oksidatiivinen stressi indusoi melaniinipigmenttien kerääntymistä, radikaaleja poistava aktiivisuus ja ROS-aktiivisuuden esto ovat tehokkaita melanogeneesin tukahduttamisessa, ja luonnollisilla tuotteilla, joilla on tällaista antioksidanttiaktiivisuutta, voi olla erinomaisia ​​valkaisuvaikutuksia [30,31]. Siksi tutkimme ensin EU-uutteen ja -fraktioiden antioksidanttiaktiivisuutta B16/F10-melanoomasoluissa käyttämällä DPPH- ja ABTS-määrityksiä, jotka ovat yleisiä ja yksinkertaisia ​​menetelmiä kasvien antioksidanttiaktiivisuuden analysoimiseksi in vitro. DPPH on stabiili vapaa radikaali, ja sitä käytetään hydrofobisten yhdisteiden radikaaleja sieppaavan aktiivisuuden analysointiin käyttämällä pelkistäviä aineita, kuten askorbiinihappoa ja tokoferolia. ABTS-määrityksellä voidaan mitata hydrofobisten ja hydrofiilisten yhdisteiden, ketjua katkaisevien antioksidanttien ja vetyä luovuttavien antioksidanttien radikaaleja poistavaa aktiivisuutta [24]. Vahvistimme EU:n uutteiden ja fraktioiden korkean DPPH- ja ABTS-radikaalinpoistotoiminnot. Erityisesti vaikutukset olivat voimakkaimmat pitoisuudella 50 µg/ml, ja EU-fraktioilla oli parempi antioksidanttiaktiivisuus verrattuna uutteen.

Tyrosinaasi on tärkein melanogeneesiin osallistuva entsyymi, ja monet ihoa valkaisevat aineet ovat ensisijaisesti tyrosinaasiestäjiä. Siksi tutkimme EU-fraktioiden vaikutusta melanogeneesiä edistävään tyrosinaasiaktiivisuuteen. Vahvistimme L-DOPA:n estävän vaikutuksen solujen tyrosinaasiaktiivisuuteen määrittääksemme, estävätkö EU:n uutteet ja fraktiot suoraan tyrosinaasiaktiivisuutta. Tämän seurauksena EU-uutteen ja fraktioiden tyrosinaasia estävä vaikutus lisääntyi annoksesta riippuvalla tavalla. Lisäksi EU oli yllä olevien tulosten mukaisesti tehokkain pitoisuudella 50 µg/ml, ja EU-fraktioilla oli suurempi vaikutus kuin uutteen. Erityisesti EUBu:n konsentraatiolla (50 ug/ml) oli suurempi vaikutus kuin arbutiinilla, positiivisella kontrollilla.

Seuraavaksi tutkimme EU-uutteen ja -fraktioiden ihoa valkaisevaa vaikutusta melanogeneesiin -MSH-indusoiduissa B16-F10-melanoomasoluissa. Käytimme ensin MTT-määritystä määrittääksemme pitoisuusalueen, jolla EU-uute ja -fraktiot eivät olleet sytotoksisia B16-F10-soluille. Tuloksemme vahvistivat, että sytotoksisuutta ei esiintynyt konsentraatioalueella 12,5 - 50 µg/ml.

Kun B16-F10-soluja oli stimuloitu -MSH:lla melaniinin synteesin indusoimiseksi, EU-uutteen ja -fraktioiden ihoa valkaiseva vaikutus melaniinipitoisuuteen ja solunsisäiseen tyrosinaasiaktiivisuuteen tunnistettiin. EU-uutteen ja -fraktioiden mallit melaniinipitoisuudesta ja solunsisäisestä tyrosinaasiaktiivisuudesta osoittivat samanlaisia ​​tuloksia. Käsittely kaikilla EU-uutteilla ja -fraktioilla osoitti, että melaniinipitoisuus ja solunsisäinen tyrosinaasiaktiivisuus vaimenivat annoksesta riippuen. Erityisesti EU-fraktioiden pitoisuudessa 50 µg/ml havaittiin yli 50 prosentin melaniinipitoisuuden ja solunsisäisen tyrosinaasiaktiivisuuden menetys verrattuna vain -MSH:lla stimuloituun ryhmään (kuvio 4A, C).

CREB- ja ERK-signalointireitit ovat tärkeitä signalointireittejä, jotka aktivoituvat -MSH:n stimulaatio melanogeneesissä. Siksi CREB:llä ja ERK:lla, jotka osallistuvat erilaisiin mekanismeihin, on keskeinen rooli melaniinin synteesiprosessissa. -MSH:n stimulaatio B16-F10-melanoomasoluissa lisäsi MITF:n ja melanogeneesiin liittyvän tyrosinaasigeeniperheen (TRP-1, TRP-2 ja tyrosinaasi) ilmentymistä CREB:n aktivoitumisen kautta. ja ERK. Tässä tutkimuksessa tarjoamme todisteita siitä, että EU-uute ja -fraktiot estävät melaniinin synteesiä sekä siihen liittyviä ylävirran signalointireittejä, CREB:tä ja ERK:ta.

Kun TRP-1 ja TRP-2 nostivat MITF:n lisääntynyttä ilmentymistä, tyrosinaasin ilmentyminen edisti ja melanogeneesiin liittyvät entsyymit tuottivat melaniinia [18,32]. Melanogeneesivälitteisten proteiinien ilmentymistä tarkkailtiin käyttämällä Western blot -menetelmää EU-uutteen ja -fraktioiden anti-melanogeenisen vaikutuksen määrittämiseksi B16-F10-melanoomasoluissa. Tuloksemme vahvistivat, että MITF-, TRP-1-, TRP-2- ja tyrosinaasiproteiinien ilmentyminen lisääntyi merkittävästi -MSH-stimuloidussa ryhmässä.

Käsittely EU-uutteella ja fraktioilla kuitenkin vähensi näiden melanogeneesiin liittyvien proteiinien ekspressiota annoksesta riippuvalla tavalla. Erityisesti havaittiin merkittävä väheneminen ekspressiossa EU-fraktioiden pitoisuudella 50 ug/ml. Tuloksemme osoittavat, että 50 µg/ml EU-fraktioita esti MITF:n, tärkeän transkriptiotekijän, ilmentymistä, mikä inhiboi merkittävästi tyrosinaasin ilmentymistä ja siten melaniinin tuotantoa.

Näiden tulosten perusteella havaitsimme, että 50 µg/ml EU-fraktioita esti -MSH-stimuloidun melaniinin tuotantoa B16-F10-melanoomasoluissa alentamalla melanogeneesiin liittyvää signalointia erinomaisen antioksidanttivaikutuksen perusteella. Siksi tuloksemme viittaavat siihen, että EU-fraktio voi olla mahdollinen ehdokas valkaisuhoitoon, joka hallitsee tehokkaasti melanogeneesiä.5. Johtopäätökset

Tässä tutkimuksessa arvioimme antioksidanttisia ja antimelanogeenisia vaikutuksia -MSH:n aiheuttamaan melanogeneesiin B16-F10-melanoomasoluissa vahvistaaksemme EU-fraktioiden toiminnan ihoa valkaisuaineina. Yhteenvetona totesimme, että EU-fraktioilla on voimakkaita antioksidanttisia vaikutuksia ja ne estivät melanogeneesiin liittyviä proteiineja, kuten TRP-1, TRP-2 ja tyrosinaasia, säätelemällä MITF:ää ja ovat siksi arvokkaita luonnollisia melanogeneesin estäjiä.

Erityisesti EU-uutteen ja fraktioiden pitoisuus (50 ug/ml) vaadittiin melaniinin synteesin inhiboimiseksi -MSH-stimuloiduissa B16F10-soluissa. Lisäksi vahvistimme, että EU-fraktioilla on ylivoimaiset antioksidanttiset ja estävät vaikutukset melaniinin tuotantoon. Näin ollen EU voisi olla hyödyllinen luonnollisille terapeuttisille aineille ihosairauksien hoidossa ja ihon valkaisuaineina kosmetiikkateollisuudessa.

Tekijän panokset:

Conceptualization, J.-HL ja D.-KK; Tietojen kuratointi, BL; Muodollinen analyysi, J.-HL; Rahoituksen hankinta, Y.-ML; Investigation, J.-HL ja Y.-DJ; Methodology, BL, H.-WS ja B.-JS; Hankkeen hallinto, Y.-ML ja D.-KK; Ohjelmisto, D.-KK; Supervision, Y.-ML ja D.-KK; Visualisointi, J.-HL; Kirjoitus – alkuperäinen luonnos, J.-HL; Kirjoittaminen – arvostelu ja editointi, J.-HL ja Y.-DJ Kaikki kirjoittajat ovat lukeneet käsikirjoituksen julkaistun version ja hyväksyneet sen.

Rahoitus:

Tätä tutkimusta tukivat kauppa-, teollisuus- ja energiaministeriö (MOTIE) ja Korean teknologian kehittämisinstituutti (KIAT) taloudellisen yhteistyöalueen teollisuuden kannustinohjelman (P0004749) kautta.

Eturistiriidat:

Kirjoittajat ilmoittavat, että heillä ei ole kilpailevia etuja.

Näytteen saatavuus:

Näytteitä yhdisteistä ei ole saatavilla kirjoittajilta.

Lyhenteet

-MSH - melanosyyttejä stimuloiva hormoni

CREB cAMP -vasteelementtiä sitova proteiini

DOPA 3,4-dihydroksifenyylialaniini

EU Elaeagnus umbellata

EUEE EU 70-prosenttinen etanoliuute

EUEA EU:n etyyliasetaattifraktio

EUBu EU-butanolifraktio

MC1R-melanosyyttispesifinen melanokortiini-1-reseptori

MITF Microphthalmia-assosioitunut transkriptiotekijä

ROS Reaktiiviset happilajit

TRP Tyrosinaasiin liittyvä proteiini

Viitteet

1. Desmedt, B.; Courselle, P.; De Beer, JO; Rogiers, V.; Grosber, M.; Deconinck, E.; De Paepe, K. Yleiskatsaus ihon valkaisuaineisiin ja käsitys laittomista kosmetiikkamarkkinoista Euroopassa. J. Eur. Acad. Dermatol. Venereol. 2016, 30, 943–950. [CrossRef] [PubMed]

2. Costin, GE; Kuulo, VJ Ihmisen ihon pigmentaatio: Melanosyytit moduloivat ihon väriä vasteena stressiin. Faseb J. 2007, 21, 976–994. [CrossRef]

3. Lin, YS; Wu, WC; Lin, SY; Hou, WC Glysiinihydroksamaatti estää tyrosinaasin aktiivisuutta ja melaniinipitoisuutta vähentämällä cAMP/PKA-signalointireittejä. Amino Acids 2015, 47, 617–625. [CrossRef]

4. Fernandez-Garcia, E. Ihonsuojaus UV-valoa vastaan ​​ravinnon antioksidanteilla. Ruokaa. Toiminto. 2014, 5, 1994–2003. [CrossRef]

5. Kowalska, J.; Banach, K.; Rok, J.; Beberok, A.; Rzepka, Z.; Wrze´sniok, D. Fluorokinolonien aiheuttaman fototoksisuuden molekyyli- ja biokemiallinen perusta – UV-A-säteilylle altistuneiden ihmisen melanosyyttien antioksidanttijärjestelmän tutkimus. Int. J. Mol. Sci. 2020, 21, 9714. [CrossRef] [PubMed]

6. MatÉs, JM; Pérez-Gómez, C.; Castro, IND Antioksidanttientsyymit ja ihmisten sairaudet. Clin. Biochem. 1999, 32, 595–603. [CrossRef]

7. Bickers, DR; Athar, M. Oksidatiivinen stressi ihosairauksien patogeneesissä. J. Investig. Dermatol. 2006, 126, 2565–2575. [CrossRef]

8. Kim, YJ; Uyama, H. Tyrosinaasin estäjät luonnollisista ja synteettisistä lähteistä: Rakenne, estomekanismi ja tulevaisuuden näkökulma. Cell. Mol. Life Sci. 2005, 62, 1707–1723. [CrossRef]

9. Pillaiyar, T.; Manickam, M.; Namasivayam, V. Ihon valkaisuaineet: tyrosinaasin estäjien lääkekemian näkökulma. J. Enzyme Inhib. Med. Chem. 2017, 32, 403–425. [CrossRef]

10. Smit, N.; Vilanova, J.; Pavel, S. Luonnollisten ihonvalkaisuaineiden metsästys. Int. J. Mol. Sci. 2009, 10, 5326–5349. [CrossRef]

11. Draelos, ZD Ihoa vaalentavat valmisteet ja hydrokinonikiista. Dermatol. Siellä. 2007, 20, 308–313. [CrossRef]

12. Anna, MI; Chiara, G.; Marinella, DL; Deborah, P.; Fabiano, C.; Nunziatina, DT; Claudia, M.; Maria, LT; Alessandra, B. Elaeagnus umbellatasta eristettyjen yhdisteiden antioksidanttivaikutus edistää ihmisen ikenen fibroblastien hyvinvointia. J. Nat. Tuot. 2020, 83, 626–637.

13. Sabir, SM; Dilnawaz, S.; Imtiaz, A.; Hussain, M.; Kaleem, MT Pakistanista peräisin olevan lääkekasvin Elaeagnus umbellata (Thunb.) antibakteerinen vaikutus. Saudi. Med. J. 2007, 28, 259–263.

14. Nazir, N.; Zahoor, M.; Nisar, M.; Khan, I.; Karim, N.; Abdel-Halim, H.; Ali, A. Elaeagnus umbellatan (Thunb.) fytokemiallinen analyysi ja diabeteksen vastainen potentiaali streptotsotosiinin aiheuttamissa diabeettisissa rotissa: Farmakologinen ja laskennallinen lähestymistapa. BMC-täydennys. Altern. Med. 2018, 18, 332. [CrossRef]

15. Wang, SY; Bowman, L.; Ding, M. Vapaiden radikaalien sieppauskapasiteetin ja antiproliferatiivisen aktiivisuuden vaihtelut syysoliivin (Elaeagnus umbellate) eri genotyyppien joukossa. Planta. Med. 2007, 73, 468–477. [CrossRef] [PubMed]

16. Nazir, N.; Zahoor, M.; Nisar, M.; Karim, N.; Latif, A.; Ahmad, S.; Uddin, Z. Elaeagnus umbellate Thunb. Skopolamiinin aiheuttamasta muistin heikkenemisestä hiirillä. BMC-täydennys. Altern. Med. 2020, 20, 143.

17. Park, SH; Jhee, KH; Yang, SA Elaeagnus umbellata -lehtien etanoliuutteen suojaavat vaikutukset -MSH-indusoituun melaniinin tuotantoon B16-F0-soluissa ja UVB-indusoituun vaurioon CCD-986sk-soluissa. J. Life Sci. 2019, 29, 555–563.

18. Qian, W.; Liu, W.; Zhu, D.; Cao, Y.; Tang, A.; Gong, G.; Su, H. Luonnolliset ihoa valkaisevat yhdisteet melanogeneesin hoitoon (katsaus). Exp. Siellä. Med. 2020, 20, 173–185. [CrossRef]

19. Gillbro, JM; Olsson, MJ Ihoa vaalentavien aineiden melanogeneesi ja mekanismit – olemassa olevia ja uusia lähestymistapoja. Int. J. Cosmet. Sci. 2011, 33, 210–221. [CrossRef]

20. Saba, E.; Kim, SH; Lee, YY; Park, CK; Voi JW; Kim, TH; Kim, HK; Roh, SS; Rhee, MH Korean punainen ginseng-uute parantaa melanogeneesiä ihmisillä ja indusoi vanhenemista estäviä vaikutuksia ultraviolettisäteilyllä saaneilla karvattomilla hiirillä. J. Ginseng. Res. 2020, 44, 496–505. [CrossRef] [PubMed]

21. Bertolotto, C.; Abbe, P.; Hemesath, TJ; Bille, K.; Fisher, DE; Ortonne, JP; Ballotti, R. Microphthalmia-geenituote signaalinmuuntimena cAMP-indusoidussa melanosyyttien erilaistumisessa. J. Cell. Biol. 1998, 142, 827-835. [CrossRef]

22. Lee, HJ; Lee, WJ; Chang, SE; Lee, GY Hesperidiini, suosittu antioksidantti, estää melanogeneesiä erk1/2-välitteisen MITF:n hajoamisen kautta. Int. J. Mol. Sci. 2015, 16, 18384–18395. [CrossRef]

23. Hinta, ER; Horstmann, MA; Wells, AG; Weilbaecher, KN; Takemoto, CM; Landis, MW; Fisher, DE alfa-Melanosyyttejä stimuloivan hormonin signalointi säätelee mikroftalmian ilmentymistä, geenin, josta puuttuu Waardenburgin oireyhtymä. J. Biol. Chem. 1998, 273, 33042–33047. [CrossRef]

24. Vance, KW; Goding, CR Melanosyyttien kehitystä ja melanoomaa säätelevä transkriptioverkko. Pigmentti. Cell. Res. 2004, 17, 318–325. [CrossRef]

25. Bondurand, N.; Pingault, V.; Goerich, DE; Lemort, N.; Sock, E.; Le Caignec, C.; Wegner, M.; Goossens, M. Vuorovaikutus SOX10:n, PAX3:n ja MITF:n välillä, kolme Waardenburgin oireyhtymässä muuttunutta geeniä. Hyräillä. Mol. Genet. 2000, 9, 1907–1917. [CrossRef]

26. McGregor, D. Hydrokinoni: Arvio sen syöpää aiheuttavista ja mutageenisista ominaisuuksista aiheutuvista riskeistä ihmisille. Crit. Rev. Toxicol. 2007, 37, 887–914. [CrossRef]

27. Kolbe, L.; Kligman, AM; Schreiner, V.; Stoudemayer, T. Kortikosteroidien aiheuttama atrofia ja esteen heikkeneminen mitattuna ei-invasiivisilla menetelmillä ihmisen ihossa. Iho. Res. Technol. 2001, 7, 73–77. [CrossRef] [PubMed]

28. Huang, HC; Chang, SJ; Wu, CY; Ke, HJ; Chang, TM [6]-Shogaol estää -MSH:n indusoimaa melanogeneesiä kiihdyttämällä ERK:n ja PI3K/Akt-välitteisen MITF:n hajoamista. Biomed. Res. Int. 2014, 2014, 842569. [CrossRef]

29. Ozen, T.; Yenigun, S.; Altun, M.; Demirtas, I. Elaeagnus umbellata Thunb.:n fytokemialliset ainesosat, ChE- ja ureaasi-inhibitit, antiproliferatiiviset ja antioksidanttiset ominaisuudet. Kampa. Chem. Korkea. Läpäisykyky. Näyttö. 2017, 20, 559–578. [CrossRef]

30. Floegel, A.; Kim, DO; Chung, SJ; Koo, SI; Chun, OK ABTS/DPPH-määritysten vertailu antioksidanttikapasiteetin mittaamiseksi suosituissa yhdysvaltalaisissa antioksidanttirikkaissa ruoissa. J. Food Compos. Anaali. 2011, 24, 1043–1048. [CrossRef]

31. Hseu, YC; Chen, XZ; Gowrisankar, YV; jeni, HR; Chuang, JY; Yang, HL Ektoiinin ihoa valkaisevat vaikutukset -MSH-stimuloidun melanogeneesin tukahduttamisen ja antioksidantti-Nf2-polkujen aktivoinnin kautta UVA-säteilytetyissä keratinosyyteissä. Antioksidantit 2020, 9, 63. [CrossRef] [PubMed]

32. Jang, EJ; Shin, Y.; Park, HJ; Kim, D.; Jung, C.; Hong, JY; Kim, S.; Lee, SK Fytosfingosiinin anti-melanogeeninen aktiivisuus mikroftalmiaan liittyvän transkriptiotekijän signalointireitin moduloinnin kautta. J. Dermatol. Sci. 2017, 87, 19–28. [CrossRef] [PubMed]

Ji-Hyun Lee 1,†, Bori Lee 2,†, Yong-Deok Jeon 3, Hyun-Woo Song 2, Young-Mi Lee 2, Bong-Joon Song 4 ja Dae-Ki Kim 1,*

1 Department of Immunology and Institute of Medical Science, Jeonbuk National University Medical School, 20, Geonji-ro, Deokjin-gu, Jeonju-si 54907, Jeollabuk-do, Korea; jihyunsh1211@naver.com

2 Department of Oriental Pharmacy, College of Pharmacy ja Wonkwang-Oriental Medicines Research Institute, Wonkwang University, Iksan 54538, Jeonbuk, Korea; leebori1004@naver.com (BL); cristblack@naver.com (H.-WS); ymlee@wku.ac.kr (Y.-ML)

3 Korean farmasian laitos, Woosuk University, 443 Samnye-ro, Samnye-up, Wanju-Gun 55338, Jeollabuk-do, Korea; ydjeon1211jh@woosuk.ac.kr

4 Department of Food Science and Biotechnology, Wonkwang University, Iksan 54538, Jeonbuk, Korea; twinf1@hanmail.net

Kirjeenvaihto: daekim@jbnu.ac.kr; Puh.: plus 82-63-2703080

Nämä kirjoittajat osallistuivat yhtä paljon tähän työhön.

For more information:1950477648nn@gmail.com