ABSTRAKTI

Tavoitteet:Maclura pomifera (Rafin.) Schneider on kaikkialla maailmassa laajalle levinnyt laji, jota viljellään usein myös koristetarkoituksiin. Aiemmat tutkimukset paljastivat, että M. pomifera -hedelmät sisältävät runsaasti prenyloituja isoflavonoideja, niillä on merkittävää biologista aktiivisuutta ja niillä on todennäköisiä etuja erityisesti paikallisesti käytettynä. Koska fenoliyhdisteet ovat olennaisia ​​lähteitä ikääntymistä ehkäisevien kosmeettisten tuotteiden kehittämisessä, tässä tutkimuksessa tutkittiin M. pomiferan 80-prosenttisen metanoliuutteen (MPM) ikääntymistä ehkäisevää potentiaalia arvioimalla antioksidanttisia ja solunulkoisia matriisia hajottavia entsyymejä estäviä vaikutuksia.

Cistanchen glykosidi voi myös lisätä SOD:n aktiivisuutta sydämen ja maksan kudoksissa ja vähentää merkittävästi lipofussiinin ja MDA:n pitoisuutta kussakin kudoksessa, poistaen tehokkaasti erilaisia ​​reaktiivisia happiradikaaleja (OH-, H2O₂ jne.) ja suojaamalla DNA-vaurioilta. OH-radikaalien toimesta. Cistanche-fenyylietanoidiglykosideilla on vahva vapaita radikaaleja poistava kyky, suurempi pelkistyskyky kuin C-vitamiini, ne parantavat SOD:n aktiivisuutta siittiösuspensiossa, vähentävät MDA-pitoisuutta ja niillä on tietty suojaava vaikutus siittiöiden kalvon toimintaan. Cistanche-polysakkaridit voivat lisätä SOD:n ja GSH-Px:n aktiivisuutta D-galaktoosin aiheuttamien kokeellisesti vanhentuvien hiirten punasoluissa ja keuhkokudoksissa sekä vähentää MDA- ja kollageenipitoisuutta keuhkoissa ja plasmassa sekä lisätä elastiinipitoisuutta. hyvä huuhteluvaikutus DPPH:lle, pidentää hypoksian aikaa vanhenevilla hiirillä, parantaa SOD:n aktiivisuutta seerumissa ja viivyttää keuhkojen fysiologista rappeutumista kokeellisesti vanhenevilla hiirillä Solumorfologisen rappeutumisen yhteydessä kokeet ovat osoittaneet, että Cistanchella on hyvä antioksidanttikyky ja sillä on potentiaalia olla lääke ihon ikääntymisen sairauksien ehkäisyyn ja hoitoon. Samaan aikaan Cistanchen ekinakosidilla on merkittävä kyky poistaa DPPH-vapaita radikaaleja ja sillä on kyky poistaa reaktiivisia happilajeja ja estää vapaiden radikaalien aiheuttamaa kollageenin hajoamista, ja sillä on myös hyvä korjaava vaikutus tymiinin vapaiden radikaalien anionien vaurioihin.

Napsauta Cistanche Tubulosa Supplement -kohtaa

【Lisätietoja:george.deng@wecistanche.com / WhatApp:86 13632399501】

Materiaalit ja menetelmät:Tätä tutkimusta varten arvioitiin 80 prosentin MPM:n estopotentiaali eri ikääntymisprosessiin liittyville entsyymeille. Ottaen huomioon oksidatiivisen stressin yksiselitteisen roolin ikääntymisessä, käytettiin myös in vitro antioksidanttitestejä. Lisäksi osajiini määritettiin näytteen pääasialliseksi bioaktiiviseksi isoflavonoidiksi korkean suorituskyvyn ohutkerroskromatografia-analyysillä.

Tulokset:Mekaanisesti erilaisten antioksidanttimääritysten tulokset osoittivat uutteen merkittävän antioksidanttipotentiaalin. MPM:n estopotentiaalia hyaluronidaasi-, kollagenaasi- ja elastaasientsyymejä vastaan, jotka liittyvät suoraan ikääntymisprosessin kiihtymiseen, tutkittiin ja tulokset paljastivat, että MPM inhiboi edellä mainittuja entsyymejä nimenomaisesti. MPM:llä oli ainutlaatuinen fenoli- ja flavonoidipitoisuus; 113,92 ± 2,26 mg gallushappoekvivalenttia/g ja 66,41 ± 0,74 mg QE/g, vastaavasti. Kun tarkasteltiin kokonaisantioksidanttikapasiteetin määrityksiä, on mahdollista ehdottaa, että MPM on lupaava ikääntymistä estävä aine.

Johtopäätös:Tämän seurauksena tämä tutkimus paljastaa, että M. pomiferan hedelmien uutteilla on merkittävä ikääntymisen estopotentiaali ja niitä voidaan käyttää tähän tarkoitukseen.

Avainsanat:Maclura pomifera, anti-aging, antioksidantit, HPTLC, osajin

JOHDANTO

Samoin kaikki elimet, myös ihmisen iho, käyvät läpi erilaisia ​​fysiologisia muutoksia iän myötä.1 Ikääntymiselle on olemassa kaksi luokkaa: sisäistä ikääntymistä ohjaa genetiikka ja ulkoinen ikääntyminen on luonnollinen seuraus fysiologisista muutoksista, jotka johtuvat ympäristötekijöiden, kuten ultravioletin (UV) haitallisista vaikutuksista. ) säteily, kemialliset myrkyt ja tupakointi.1,2 Verisuonten ja rauhasten rakenteen hajoaminen, kuitukudoksen häviäminen ja solujen uusiutumisen hidastuminen ovat ikääntymisen perustekijöitä,3 jotka johtavat kudosten rappeutumisen lisääntymiseen, ryppyjen lisääntymiseen ja solunulkoisen matriisin (ECM) vähenemiseen. ).4

Suurimpana elimenä iholla on useita tehtäviä, kuten suoja, kehon lämpötilan säätely ja aistien havaitseminen.5 Iho koostuu orvaskestä, verinahasta ja ihonalaisesta kudoksesta ja on ensimmäinen este ihmiskehon ja ulkokehon välillä. ympäristö.6,7 ECM on dermiksen suurin yksikkö ja tukee kasvua ja elastisuutta muodostamalla rakenteellisen tukirakenteen.8 Kollageeni, elastiini ja fibronektiini, jotka muodostuvat ihon fibroblasteista, muodostavat ECM:n ja ovat fuusioituneet proteoglykaanien kanssa.5 Kollageeni on perusproteiini, joka muodostaa noin 25-35 prosenttia kaikesta kehon proteiinipitoisuudesta ja jota löytyy erityyppisten eläinten sidekudosten solunulkoisesta tilasta.3 Yksi ihon ikääntymisen ja ryppyjen muodostumisen tärkeimmistä syistä on kollageenin muuttuminen rakenne.1 Elastiini on proteiini, joka antaa iholle ainutlaatuisen fysiologisen joustavuuden ja jota esiintyy useissa sidekudoksissa.6 Ihon kosteuttaminen ja ihon pitäminen sileänä, kosteana ja voideltuna ovat tärkeitä tekijöitä, jotka estävät ihon ikääntymistä. glykosaminoglykaanilla (GAG), hyaluronihapolla, on elintärkeä rooli näissä toimissa.8 Hyaluronidaasi-, kollagenaasi- ja elastaasientsyymit hajottavat nämä keskeiset ainesosat, mikä johtaa ihon ikääntymisen kiihtymiseen. Lisäksi mikro-organismeille, saasteille, ionisoivalle säteilylle, kemikaaleille ja myrkyille altistuminen johtaa reaktiivisten happilajien (ROS) muodostumiseen ja sen haitalliset seuraukset kiihdyttävät ihon ikääntymistä.9 ROS voi käynnistää monimutkaisia ​​molekyylireittejä ja sen seurauksena kollagenaasi, elastaasi , ja hyaluronidaasiaktiivisuus voi lisääntyä, mikä johtaa havaittaviin ECM:n hajoamiseen ja ihon tekstuurin muutoksiin.10 Mainituista syistä uudet luonnolliset aineet, jotka estävät ROS:n muodostumista ja estävät ECM:ää hajottavia proteaaseja, voivat viivyttää ihon ikääntymisprosessia.11

Maclura pomifera (Rafin.) Schneider kuuluu Moraceae- tai mulperiperheeseen ja tunnetaan myös osage-appelsiinipuuna, jota viljellään lähes maailmanlaajuisesti.12 M. pomiferalla on useita biologisia vaikutuksia, kuten antibakteerisia, sieniä torjuvia, virustenvastaisia, sytotoksisia, kasvainten vastaisia, estrogeenisiä, ja malarialääke13 sen prenyloitujen isoflavonien eli osajiinin ja pomiferiinin vuoksi, joita pidetään hedelmien tärkeimpinä metaboliitteina.14 Anti-aging-kosmetiikan tuotannossa fenoliyhdisteet ovat merkittäviä luonnollisia lähteitä. Siten on kasvava kiinnostus fenoliyhdisteitä sisältävien kasvien, kuten M. pomiferan, tutkimiseen tällaisia ​​aktiviteetteja varten. Aiemmissa tutkimuksissa havaittiin, että Macluran isoflavonit lisäävät kollageenin, elastiinin ja fibrilliinin ilmentymistasoja, jotka ovat vertailukelpoisia tai parempia kuin vastaavat retinolin pitoisuudet. Näin ollen voidaan olettaa, että Maclura-isoflavonit ovat tehokkaita ECM-proteiinistimulantteja.15 Nämä tiedot huomioon ottaen tämän tutkimuksen tavoitteena on tutkia M. pomifera 80-prosenttisen metanoliuutteen (MPM) ikääntymistä ehkäisevää potentiaalia tutkimalla sen potentiaalia antioksidanttisena bioaktiivisuutena ja estoaineena. ECM:ää hajottavat entsyymit. Lisäksi uutteen pääasiallisen bioaktiivisen komponentin, osajinin, kvantitatiivinen analyysi mitattiin korkean suorituskyvyn ohutkerroskromatografialla (HPTLC), ja fenolin kokonaispitoisuuden ja flavonoidien kokonaispitoisuuden määritykset suoritettiin fenoliprofiilin tarkempaa ymmärtämistä varten. Tulokset osoittavat, että M. pomifera saattaa olla arvokas ikääntymistä ehkäisevien tuotteiden lähde.

MATERIAALIT JA MENETELMÄT

Kemikaalit

Sigma Chemical Co. (St. Louis, MO, USA) toimitti kaikki testeissä käytetyt entsyymit, kemikaalit ja referenssit. Kaikkien kemikaalien laatu oli analyyttistä laatua.

Kasvimateriaali

M. pomiferan hedelmät kerättiin Uşakista, Türkiyestä toukokuussa 2020. Tri Hilal Bardakcı suoritti kasvinäytteiden kasvitieteellisen tunnistusmenettelyn. Lahjakorttinäyte kasvista talletettiin Acıbademin yliopistoon, farmasian tiedekunnan herbariumiin (ACUPH 00002).

Uutteiden valmistus

Hedelmät erotettiin pieniksi paloiksi ja laitettiin tehosekoittimen läpi. Hedelmät (6,45 kg) maseroitiin 3 125 ml:lla 80-prosenttista metanolia (MeOH) ravistuksella kolmen päivän ajan huoneenlämmössä pimeässä paikassa. Maseraatti suodatettiin ja tämä menettely toistettiin kahdesti. Saadut suodokset kerättiin yhteen ja sitten metanoli haihdutettiin pyöröhaihduttimessa. Raaka metanoliuute lyofilisoitiin (saanto oli 204,37 g, 3,16 prosenttia) ja säilytettiin -20 asteessa (MPM).

Tärkeimpien bioaktiivisten yhdisteiden kvantifiointimenettely HPTLC:llä

Kaikki käytetyt kemikaalit ja reagenssit olivat analyyttistä laatua. Kloroformi (CHC13) ja etyyliasetaatti (EtOAc) ostettiin Sigma-Aldrichilta. Kaupallisesti saatavilla oleva osajin-standardi ostettiin Sigma-Aldrichilta (SMB {{10}}0092). HPTLC-analyysit suoritettiin 20 cm x 10 cm lasisilla HPTLC-silikageeli 60 F254 -levyillä (Merck, Darmstadt, Saksa). Osajin-pitoisuus MPM:ssä määritettiin CAMAG HPTLC -analyyttisellä järjestelmällä. Tässä tutkimuksessa käytetyn liikkuvan faasin ovat aiemmin kuvanneet Bozkurt et al.16 M. pomiferan aktiivisten aineosien eristämisen aikana. 10 mg/ml MeOH-uutetta käytettiin analyysikoeliuoksena. Osajinin standardikantaliuos (0,5 mg/ml) valmistettiin käyttämällä 2 ml asetonia. Työliuos, jossa oli 50 ug/ml standardiyhdistettä, valmistettiin laimentamalla asetonilla varastoliuoksesta. Jokainen näyte suodatettiin 0,45 um:n ruiskusuodattimen läpi. 10 μl uutetta ja vähintään viisi erilaista standardiliuoskonsentraatiota (3.3-4,7 μL) levitettiin 8 mm pituisten vyöhykkeiden muodossa silikageelilasille HPTLC-levyille 60 F254 CAMAG Automaticin kanssa. TLC Sampler IV. Kehitykset suoritettiin CAMAG Automatic Developing Chamber-2 (ADC- 2) -tilassa ja liikkuva faasi oli CHCl3: EtOAc [8:2 (v/v)]. Kammiota kyllästettiin 10 minuuttia ja levyä esikäsiteltiin 5 minuuttia ennen kehitystä. Kosteutta säädettiin ADC{30}}:lla käyttämällä MgCl2:ta (33 % RH) 10 minuutin ajan. Densitometrinen arviointi suoritettiin käyttämällä CAMAG TLC Scanner IV -laitetta fluoresenssitilassa. Raon mitta pidettiin 5 × 0,2 mm:ssä, mikro, ja skannausnopeudeksi asetettiin 20 mm/s. Standardipitoisuudet saatiin vertaamalla vastaanottimen toimintakäyrien (AUC) alla olevaa pinta-alaa standardien kalibrointikäyrään 280 nm:ssä. Standardien läsnäolo uutteessa varmistettiin vertaamalla kunkin uutteen ja standardin sekä retentiotekijöitä (Rf) että päällekkäisiä UV-spektrejä. Osajiinin määrä määritettiin vertaamalla uutteesta ja fraktioista hajaheijastuneen valon intensiteettiä standardiyhdisteeseen.

Osajin-pitoisuus raakakasviuutteesta mitattiin käyttämällä HPTLC-densitometriaa. Osajin-standardin Rf-arvon todettiin olevan 0,556. Osajiinin esiintyminen testinäytteissä varmistettiin vertaamalla niiden Rf-arvoja ja päällekkäin niiden UV-spektrejä (kuva 1). Kvantitointi suoritettiin vertaamalla näytteiden AUC-arvoja kalibrointikäyrään, joka saatiin käyttämällä standardiyhdistettä osajin. Kalibrointifunktio oli y=2.268*10-8x. Kalibrointifunktion korrelaatiokerroin (R) ja variaatiokerroin olivat 0,998 prosenttia ja 1.06 prosenttia. HPTLC-analyysi osoitti, että MPM sisältää 0,22 prosenttia (w/w) osajiinia. HPTLC-tutkimuksen tulokset on esitetty taulukossa 1.

Fenoliprofiilimääritys

Kokonaisfenolipitoisuuden määritys

Määritys suoritettiin näytteiden kokonaisfenolipitoisuuksien arvioimiseksi Folin-Ciocalteun menetelmällä, jota aiemmin käyttivät Kurt-Celep et al.{2}} μL juuri laimennettuja näyteliuoksia sekoitettiin 75 μl:aan Na2CO3:a (20 prosenttia). ) ja 100 µl FCR (Folin-Ciocalteu-reagenssi) laimennettuna H20:lla (1:9). Kun oli inkuboitu 30 minuuttia 45 °C:ssa, seosten absorbanssi luettiin spektrofotometrisesti aallonpituudella 765 nm. Tulokset ilmaistiin mg gallushappoekvivalentteina (GAE) per gramma uutetta.

Kokonaisflavonoidipitoisuuden määritys

Fraktioiden kokonaisflavonoidipitoisuudet mitattiin Bardakci et al.18:n aiemmin raportoimalla menetelmällä. Tiivistetysti, vasta valmistettu 1 M CH3COONa ja 10 % AlCl3 sekoitettiin näytteisiin. Sitten seosten inkubointi suoritettiin 30 minuutin ajan huoneenlämpötilassa ja pimeässä. Inkubointiprosessin jälkeen absorbanssi laskettiin 415 nm:ssä. Tulokset vahvistettiin mg kversetiiniekvivalentteina (QE) 1 g:ssa näytettä.

Antioksidanttiaktiivisuuden määrittäminen in vitro

2,2-difenyyli-1-pikryylihydratsyyli (DPPH) -radikaaleja poistava aktiivisuustesti

DPPH-radikaaleja poistavan aktiivisuuden määrittämiseksi tehtiin juuri laimennettujen näyteliuosten (eri pitoisuudet valmistettu 1 mg/ml varastoliuoksesta) ja metanolipitoisen DPPH-liuoksen (100 mM) yhdistelmä. Huoneenlämmössä 45 minuutin inkuboinnin jälkeen absorbanssi luettiin aallonpituudella 517 nm. Butyloitua hydroksitolueenia (BHT) käytettiin vertailuyhdisteenä kalibrointikäyrän saamiseksi. Tulosten IC50-arvot ilmoitettiin ug/ml.19

Ferric-pelkistävän antioksidanttivoiman (FRAP) testi

FRAP-reagenssin saamiseksi 25 ml 300 mM asetaattipuskuria (pH 3,6), 2,5 ml TPTZ [2,4,6-tris(2-pyridyyli)-s-triatsiini] ja 2,5 ml FeCl3.6H20:ta (20 mM) sekoitettiin. Sen jälkeen 10 ml näytettä lisättiin 260 ml:aan FRAP-reagenssia ja laimennettiin 300 ml:ksi tislatulla vedellä 96-kuoppaisella levyllä. Kun oli inkuboitu 30 minuuttia 37 °C:ssa, absorbanssin mittaus suoritettiin aallonpituudella 593 nm. BHT:ta käytettiin vertailuyhdisteenä. Rautakloridiliuosta (0,252 mM) käytettiin standardikäyrän saamiseksi ja tulokset annettiin mM FeSO4:na 1 g:ssa kuivauutetta.20

Kuparia vähentävän antioksidanttikapasiteetin (CUPRAC) testi

CUPRAC-testi arvioitiin Barakin et al.21 aiemmin kuvaaman menetelmän mukaisesti. Samat tilavuudet 10 mM CuSO4:a, neokupraiinia ja ammoniumasetaattipuskuria (85 ml) sekoitettiin 96-kuoppalevyllä. Sen jälkeen seokseen lisättiin vastaavasti 51 ml tislattua vettä ja 43 ml näyteliuoksia. 20 minuutin inkuboinnin jälkeen absorbanssi luettiin 450 nm:ssä. Tulokset ilmoitettiin mg:na askorbiinihappoekvivalenttia 1 g:ssa kuivauutetta.

Kokonaisantioksidanttikapasiteetin (TOAC) määrittäminen

Kokonaisantioksidanttikapasiteettitesti laskettiin Barakin et al. aiemmin selittämän fosfomolybdeenimenetelmän mukaisesti.22 Ensinnäkin TOAC-liuoksen saamiseksi; 28 mM yksiemäksistä natriumfosfaattia, 4 mM ammoniummolybdaattia ja 600 mM H2S04:a sekoitettiin. Sitten 300 µl TOAC-liuosta sekoitettiin 30 µl:aan näyteliuoksia 96:n terveellä levyllä. 90 minuutin inkubointijakson jälkeen 95 asteessa, absorbanssi luettiin aallonpituudella 695 nm. Askorbiinihappoa käytettiin standardikäyrän saamiseksi ja tulokset laskettiin mg Trolox-ekvivalentteina 1 g:ssa kuivauutetta.

Inhiboiva vaikutus ihon ikääntymiseen liittyviin entsyymeihin

Kollagenaasin vastainen aktiivisuus

MPM:n anti-kollagenaasiaktiivisuuden mittaamiseksi valmistettiin 50 mM trikiinipuskuriliuos (pH: 7,5) (400 mM NaCl ja 10 mM CaCl2). Clostridium histolyticum (ChC - EC. 3.4.23.3) käytettiin kollagenaasin lähteenä, joka liuotettiin 50 mM trikiinipuskuriliuokseen, jotta saavutettiin alkupitoisuus 0,8 U/ml. Substraattina käytettiin 2 mM N-[3-(2-furyyli)akryloyyli]-Leu-Gly-Pro-Alaa (FALGPA) liuotettuna trikiinipuskuriin. Uutteita inkuboitiin kollagenaasientsyymin kanssa puskuriliuoksessa 15 minuuttia ennen substraatin lisäämistä reaktion aloittamiseksi. Lopullisen reaktioseoksen kokonaistilavuus oli 150 ui; Trisiinipuskuri, 0,8 mM FALGPA, 0,1 yksikköä ChC:tä ja 25 µl MPM. Nollatuloksiin käytettiin vettä. Substraatin lisäämisen jälkeen absorbanssi mitattiin välittömästi. Positiiviset kontrollit suorittivat epigallokatekiinigallaattia (EGCG).23

Anti-elastaasiaktiivisuus

MPM:n arviointi anti-elastaasiaktiivisuuden suhteen suoritettiin käyttämällä 0,2 mM Tris-HCl-puskuriliuosta (pH: 8.{5}}). Sian haimasta saatu elastaasin kantaliuos (PE, EC 3.4.21.36) valmistettiin tislatulla vedellä pitoisuudella 3,33 mg/ml. Substraattina käytettävä N-sukkinyyli-Ala-Ala-p-nitroanilidi (AAAPVN) liuotettiin puskuriliuokseen (1,6 mM). MPM-uutetta inkuboitiin 1 ug/ml PE:n kanssa 15 minuuttia 37 asteessa ennen substraatin lisäämistä. 15 minuutin esi-inkuboinnin lopussa 0,8 mM AAAPVN-substraattia lisättiin entsyymiseokseen, joka sisälsi 1 mg/ml kasviuutetta, ja inkubointi suoritettiin uudelleen 15 minuutin ajan 37 asteessa. Käytettäessä 0,25 mg/ml EGCG:tä positiivisena kontrollina tämä testinäyte sisältää saman tilavuuden EGCG:tä MPM:n sijaan, ja testiasetukset toistettiin. Inkubointijaksojen jälkeen mitattiin neljässä eri aikapisteessä 5-30 minuutin ajan Thermo Scientific Multiskan SkyHigh Microplate -spektrofotometrillä 365 nm:n virityksellä ja 410 nm:n emissiolla.24, 25

Anti-hyaluronidaasiaktiivisuus

Anti-hyaluronidaasiaktiivisuus suoritettiin modifioimalla menetelmää, jonka ovat kuvanneet Kolayli et al.26 ja Lee et al.3. Ensin kaupallisesti ostettu hyaluronidaasi (EC 3.2.1.35, Sigma-Aldrich) liuotettiin 0:aan. 02 M fosfaattipuskuri (pH: 3,5), joka sisältää NaCl:a ja naudan seerumin albumiinia. Sitten hyaluronihappo, entsyymin sopiva substraatti, valmistettiin asetaattipuskuriin (0,1 M, pH: 3,5) ja valmistettiin käytettäväksi. Määritysseosta, joka sisälsi 20 ul:sta MPM:ää pitoisuutena 1 mg/ml, 10 ul:sta hyaluronidaasia ja 60 ul:sta 0,1 M asetaattipuskuria, esi-inkuboitiin 20 minuuttia 37 °C:ssa. Inkubointiajan jälkeen seokseen lisättiin 10 ui hyaluronihappoa ja inkuboitiin jälleen 37 asteessa 20 minuuttia. Kokonaisinkubaatioajan lopussa mitattiin eri ajankohtina Thermo Scientific Multiskan SkyHigh Microplate Spectrophotometer -spektrofotometrillä 600 nm:ssä. Nollaryhmä ei sisältänyt entsyymejä koejärjestelyssä, kun taas kontrolliryhmä ei sisältänyt uutetta. Anti-hyaluronidaasiaktiivisuuden prosenttiosuus laskettiin käyttämällä seuraavaa yhtälöä:

Vanhenemista estävät toiminnot (prosenttia )= [(kontrollin abs - näytteen abs)/ kontrollin abs] × 100

Tilastollinen analyysi

Tähän tutkimukseen sisältyvät anti-elastaasi-, anti-kollagenaasi- ja anti-hyaluronidaasiaktiivisuuskokeet toistettiin kolme kertaa itsenäisesti. Tilastollinen ero analysoitiin GraphPad Prism 8 -ohjelmiston t-testillä (p pienempi tai yhtä suuri kuin 0,05).

TULOKSET JA KESKUSTELU

Anti-aging-potentiaalin määrittäminen

Elastiini, kollageeni ja hyaluronihappo ovat tunnettuja ECM:n sisältöjä, joilla on keskeinen rooli ihon nuoressa ulkonäössä. Elastiini on elintärkeä proteiini ihon elastisten ominaisuuksien ylläpitämisessä, joten elastiinin väheneminen ECM:ssä johtaa ikääntymisprosessin kiihtymiseen.27 Aikaisempi kirjallisuus osoittaa suoran yhteyden ryppyjen ja ihon ikääntymisen välillä, kun elastiinin määrä on vähentynyt.28 Hyaluronihappo on hydrofobinen GAG-molekyyli, joka depolymeroituu hyaluronidaasin kautta. Hyaluronihappo on ratkaisevan tärkeä ihon sileyden ja kosteuden pitämiseksi vakaana; Tästä syystä on osoitettu, että liiallinen hajoaminen johtaa ihon kuivumiseen ja ryppyihin.29 Ajan myötä ikääntymisprosessin myötä kollageenin väheneminen aiheuttaa ihon ohenemista, mitä pidetään mikroskooppisessa tutkimuksessa erottuvana merkkinä.3{{23 }} Todettiin täsmällisesti, että kollageenin hajoamisen viivyttäminen kollagenaasi-inhibiittoreiden avulla lykkää ihon rakenteen ryppyjä ja ikääntymistä.5 Nämä tiedot huomioon ottaen aineilla, jotka estävät elastaasia, kollagenaasia ja hyaluronidaasia, on huomattavaa potentiaalia ikääntymistä estävissä tuotteissa. Aiemmat tutkimukset ovat osoittaneet, että useilla isoflavonoideilla on merkittävää estävää bioaktiivisuutta edellä mainittuja entsyymejä vastaan. Addotey ym.31 osoittivat, että neljä erilaista isoflavonoidia esti hyaluronidaasia jopa 61,2 prosenttia. Kim et ai.32 ovat osoittaneet, että Glycyrrhiza uralensis Fisch:stä eristetyllä isoflavonoidilla, lakorisidiinilla, on merkittävää elastaasia estävää aktiivisuutta. Lakritsin IC50-arvoksi laskettiin 61,2 ± 4,2 uM, kun taas oleanolihapon arvoksi 131,4 ± 11,4 vertailuyhdisteenä. Tulokset osoittivat, että isoflavonoidit saattavat estää elastaasientsyymejä. Yllämainitun tutkimuksen mukaisesti Kim et al.33 tutki yhdeksää erilaista prenyloitua isoflavonoidia, jotka olivat erittäin sukua osajiinille ja jotka oli eristetty Flemingia philippinensis Merr -lajin juurista. & Rolfe. Tutkijat ilmoittivat, että viidellä prenyloidulla isoflavoneilla oli voimakas estoaktiivisuus neutrofiilien elastaasia vastaan, IC50-arvot vaihtelivat välillä 19-12,0 µM, kun taas oleanolihapon IC50-arvo oli 28,4 µM. Toisessa tutkimuksessa Ergene Öz et ai. 34 tutki in vitro viiden Ononis spinoza L.:n juurista eristetyn isoflavonoidin estovaikutusta hyaluronidaasia, kollagenaasia ja elastaasia vastaan. Isoflavonien hyaluronidaasia estävän aktiivisuuden ilmoitettiin olevan välillä 22.08-45.58 prosenttia, kun taas tanniinihapon esto oli samalla pitoisuudella 88,32 prosenttia. Kollagenaasi-inhibitiotulokset laskettiin välillä 20.41- 28.49 prosenttia ja elastaasi-inhibitio mitattiin 20.47-46.88 prosenttia. EGCG:tä käytettiin vertailuna molemmissa määrityksissä, ja estoaktiivisuudet samassa pitoisuudessa mitattiin 41,18 prosentiksi ja 84,64 prosentiksi, vastaavasti. Toisessa tutkimuksessa tutkittiin suoraan M. pomiferasta eristetyn pomiferiinin paikallisia hoitoja. 15 Pomiferiini on prenyloitu isoflavonoidi, jota löytyy M. pomiferan hedelmistä ja sen molekyylirakenne muistuttaa suuresti osajiinia. Tutkijat ilmoittivat, että pomiferiini osoitti voimakasta ECM-proteiinia stimuloivaa aktiivisuutta lisäämällä kollageenia ja elastiinia, jotka ovat parempia tai vastaavia kuin vertailuyhdiste, retinoli. Kaikki mainitut tutkimukset paljastivat, että isoflavonit ovat kohtalaisia ​​tai tehokkaita näiden entsyymien estäjiä ja niillä on merkittävää potentiaalia luonnollisina ikääntymistä ehkäisevinä materiaaleina.

Tässä tutkimuksessa tutkittiin MPM:n hyaluronidaasia, kollagenaasia ja elastaasia inhiboivia aktiivisuuksia in vitro ikääntymistä ehkäisevän potentiaalin määrittämiseksi. Suoritettiin vertaileva määritys kollagenaasin estomäärityksellä kahdessa vaiheessa, esim. 20 ja 40 min, sekä MPM:lle että vertailuyhdisteelle, EGCG:lle. Tulokset osoittivat, että kollagenaasin estoaktiivisuus lisääntyi ajan myötä. 1 mg/ml MPM osoitti 84,55 ± 1,99 prosentin eston, kun taas 25{{40}} µg/ml EGCG osoitti 84,66 ± 1,83 prosenttia 20 minuutin inkuboinnin jälkeen. Inhiboiva bioaktiivisuus vahvistui ajan myötä, 40 minuutin kuluttua MPM ja EGCG esti kollagenaasia 94,68 ± 2,42 prosenttia ja 94,98 ± 2,81 prosenttia, vastaavasti. Kirjallisuuden mukaisesti MPM osoitti merkittävää estoaktiivisuutta elastaasia vastaan. Tulokset mitattiin neljällä aikapisteellä (5, 10, 20 ja 30 min) ja osoittivat lisäystä ajan myötä (kuvio 2). EGCG:tä (250 µg/ml) käytettiin vertailukohtana ja estoaktiivisuus lisääntyi joka ajankohtana (44,07 ± 0.{33}} prosenttia, 52,19 ± 0.{37}} prosenttia, 64,69 ± 0.{{41} }} prosenttia ja vastaavasti 86,21 ± 0.00 prosenttia). Samaan aikaan MPM pitoisuutena 1 mg/ml osoitti suurempaa tehostamis- ja estoaktiivisuutta, mikä nousi 34,70 ± 0,57 prosentista 97,40 ± 1,04 prosenttiin 5 minuutista 30 minuuttiin. Samalla tavalla 1 mg/ml MPM esti hyaluronidaasientsyymiä merkittävästi 40 minuutin inkubaation jälkeen. 83,91 ± 2,36 prosentin inhibitio mitattiin 40 minuutin kuluttua, tämän 80 minuutin inkuboinnin jälkeen inhibitioaste vahvistui 97,19 ± 0,45 prosenttiin. Kun tarkasteltiin kokonaisia ​​entsyymien estomäärityksiä, tulokset osoittivat selvästi, että MPM voi olla arvokas luonnollinen ikääntymistä estävä aine ja sitä voidaan käyttää erilaisten ikääntymistä ehkäisevien tuotteiden sisällössä; näin ollen M. pomifera voi saada lisää taloudellista merkitystä.

Antioksidanttipotentiaalin määritys

Lukuisat eksogeeniset ja endogeeniset tekijät johtavat ihon ikääntymiseen erilaisten mekanismien kautta. Suurimpaan osaan näistä tekijöistä vaikuttaa suoraan tai epäsuorasti ROS:n muodostuminen ihon ECM:ssä.35 Koska iho peittää kehomme ulkoosan, se kohtaa jokapäiväisessä elämässä merkittäviä määriä UV-säteilyä. Näin ollen suurin osa iho-ongelmista, kuten auringonpolttama, hyperpigmentaatio ja ihokarsinogeneesi, ovat peräisin tai liittyvät UV-säteilyn suoriin vaikutuksiin. Samoin valovanheneminen on lisäseuraus sen vaarallisista ominaisuuksista.36 Lisäksi UV-valo synnyttää ihokudoksessa ROS-muodostusta ja sen seurauksena oksidatiivista stressiä, joka on yksi tärkeimmistä valon ikääntymiseen johtavista mekanismeista.37 Oletuksena oli, että liiallisesta ikääntymisestä lähtien. ROS:n muodostuminen aiheuttaa ihon ennenaikaista ikääntymistä, merkittävällä antioksidanttikapasiteetilla varustetut aineet voivat olla arvokas apu UV-säteilyn vaarallisia vaikutuksia vastaan. Vastaavasti kliiniset tutkimukset osoittavat, että paikallisella antioksidanttien käytöllä on ihoa suojaava vaikutus.38

Paikallisen antioksidanttien käytön ja ihon ikääntymisen lykkääntymisen välisen yhteyden jälkeen, joka on vakiintunut aikaisemmassa kirjallisuudessa, MPM:n in vitro antioksidanttipotentiaalin tutkiminen tarjoaa arvokasta tietoa sen anti-aging-potentiaalista paikallisesti käytettynä. Aikaisempi kirjallisuus osoitti, että suuren määrän isoflavonoideja sisältävät uutteet voivat olla arvokkaita antioksidantteja. Aiemmassa tutkimuksessa runsaasti isoflavonoideja sisältävä F. macrophylla -uutteen uute vähensi UVB:n aiheuttamia ihovaurioita poistamalla ROS:n.39 Santos ja Silva4{{10}} osoittivat, että prenyloiduilla isoflavonoideilla on tärkeä antioksidanttipotentiaali niiden vuoksi. flavonoidiosa ja prenyylisivuketjun additiivinen vaikutus. M. pomiferan uutteiden ja isoflavonoidien antioksidanttipotentiaalia arvioitiin aiemmassa tutkimuksessa. Tulokset osoittivat, että vesialkoholiuute ja puhdas osajiini osoittivat merkittävää aktiivisuutta DPPH-, FRAP- ja TOAC-määrityksissä, vaikka pomiferiini- ja etyyliasetaattifraktiot osoittivat korkeampaa aktiivisuutta.41 Tässä tutkimuksessa DPPH-radikaaleja poistava aktiivisuus, FRAP-, CUPRAC- ja TOAC-määritykset olivat suoritettiin MPM:n in vitro antioksidanttipotentiaalin kattavaa määritystä varten (taulukko 2). MPM osoitti merkittävää DPPH-radikaaleja poistavaa aktiivisuutta, jossa IC50-arvo mitattiin vuonna 1998.86 ± {{20}}.02. FRAP- ja TOAC-määritykset johtivat myös huomattavaan metallia pelkistävään aktiivisuuteen, 0,191 ± 0,01 mM FeSO4/DE ja 114,43 ± 0,02 AAE/g DE, vastaavasti. Nämä havainnot olivat yhdenmukaisia ​​Orhanin et al. julkaiseman aiemman tutkimuksen kanssa.41 CUPRAC-määritys suoritettiin M. pomifera -hedelmäuutteilla tietojemme mukaan ensimmäistä kertaa. Vastaavasti MPM osoitti huomattavaa kuparia vähentävää aktiivisuutta CUPRAC-määrityksessä, jossa tuloksiksi mitattiin 73,928 ± 0,01 AAE/g DE. Kun tarkasteltiin kokonaisantioksidanttikapasiteetin määrityksiä, on mahdollista ehdottaa, että MPM on lupaava ikääntymistä estävä aine.

Fenoliprofiili ja HPTLC-analyysi

Isoflavonoidit ovat fenolisia aineita, jotka tunnetaan kasvien ainesosina, jotka ovat vastuussa erilaisista merkittävistä biologisista vaikutuksista, kuten antioksidanteista, syövänvastaisista ja gynekologisista ongelmista.42 Aiemmat tutkimukset ovat osoittaneet, että prenyloidut isoflavonoidit ovat tärkeimpiä fenoliyhdisteitä M. pomifera -hedelmissä.43 Lukuisat tutkimukset ovat tunnistaneet osajinin. ja pomiferiini M. pomifera -hedelmien pääainesosina, jotka ovat ensisijaisesti vastuussa siitä, että se on biologista toimintaa.12 Osajin ja pomiferiini ovat hyvin samankaltaisia ​​prenyloituja isoflavonoideja, jotka eroavat vain yhden hydroksyyliryhmän osalta.44 Aiemmat raportit osoittivat ristiriitaisia ​​tuloksia osajiinin ja pomiferiinin sisällöstä. M. pomifera -hedelmistä. Kartal et al.45 kehittivät LC-MS-menetelmän osajiinin ja pomiferiinin määrittämiseksi M. pomiferassa, jotka kerättiin Ankaran maakunnasta Türkiyestä. Tulokset osoittivat, että pomiferiinipitoisuus oli hieman korkeampi kuin osajiinipitoisuus hedelmänäytteiden eri osissa. Toisessa tutkimuksessa M. pomifera -hedelmänäytteitä kerättiin Keskilännen ja Etelä-Yhdysvaltojen eri alueilta ja osajiini- ja pomiferiinipitoisuudet mitattiin uudella HPLC-analyysimenetelmällä. Tulokset osoittivat, että maantieteelliset erot johtavat merkittäviin muutoksiin isoflavonoidimäärissä näytteissä.46 Tsao et al.47 määrittelivät Kanadasta kerättyjen hedelmien osajiini- ja pomiferiinipitoisuudet ja havaitsivat, että pomiferiinipitoisuus oli hieman suurempi kuin osajiinipitoisuus. Sitä vastoin Hwang et al.48 tiivistivät useita tutkimuksia, jotka havaitsivat osajiinin olevan korkeampi kuin pomiferiinin määrä eri uutteissa. Voidaan väittää, että M. pomifera -hedelmien osajiini- ja pomiferiinipitoisuudet ovat poikkeuksellisen vaihtelevia maantieteellisten erojen ja uuttotekniikoiden vuoksi niiden selvästi analogisen kemiallisen rakenteensa vuoksi. Tätä tutkimusta varten MPM:n määrä mitattiin HPTLC-analyysillä, ensimmäistä kertaa tietojemme mukaan. Analyysin tulokset osoittivat, että osajin on Uşakin maakunnasta kerätyn MPM:n hallitseva ainesosa, 0,22 prosenttia näytteestä koostui osajinista (taulukko 1). Lisäksi MPM:n fenoliprofiilin lisäarvioimiseksi suoritettiin kokonaisfenoli- ja kokonaisflavonoidipitoisuuden määritykset. Tulokset osoittivat, että MPM:llä oli huomattava fenoli- ja flavonoidipitoisuus seuraavasti; 113,92 ± 2,26 mg GAE/g ja 66,41 ± 0,74 mg QE/g, vastaavasti. Fenoliprofiilin arvioinnin tulokset osoittivat, että MPM saattaa olla merkittävä ehdokas uudeksi luonnolliseksi ikääntymistä estäväksi aineeksi.

PÄÄTELMÄ

Vaikka M. pomifera -hedelmien ajankohtaista toteutusta tutkivat tutkimukset ovat suhteellisen uusia, tällä tavalla huomio on lisääntymässä rohkaisevien raporttien myötä. Siksi tämän tutkimuksen tarkoituksena oli kuvata kattava arvio M. pomifera -hedelmäuutteen mahdollisesta ikääntymisen estopotentiaalista. HPTLC-analyysiä käytettiin M. pomifera -hedelmien isoflavonoidipitoisuuden määrittämiseen tietojemme mukaan ensimmäistä kertaa sekä in vitro -tutkimuksia kokonaisfenoliprofiilin määrittämiseksi. Tulokset osoittivat, että osajin on näytteiden pääainesosa. Lisäksi uutteen in vitro antioksidanttipotentiaali arvioitiin neljällä eri määrityksellä, ja tulokset osoittivat MPM:n merkittävän antioksidanttipotentiaalin. Lisäksi mitattiin estoaktiivisuutta entsyymejä vastaan, jotka liittyvät ikääntymisprosessiin, ja havaittiin, että MPM:llä oli huomattava entsyymien estoaktiivisuus. Yhteenvetona voidaan todeta, että tämä tutkimus tarjoaa tietoa, joka voi johtaa uusien ihonhoitotuotteiden tuotantoon.

Etiikka

Eettisen toimikunnan hyväksyntä:Tutkimukseen ei vaadita eettisen toimikunnan hyväksyntää.

Tietoinen suostumus:Ei välttämättä.

Vertaisarviointi:Ulkoisesti vertaisarvioitu.

Tekijän osuudet

Konsepti: THB, TBŞ., HB, suunnittelu: THB, İ.KC, EC, tiedonkeruu tai käsittely: THB, İ.KC, HB, analyysi tai tulkinta: THB, İ.KC, kirjallisuushaku: THB, TBŞ., Kirjoitus: THB, EC

Eturistiriita:Kirjoittajat eivät ilmoittaneet eturistiriitaa.

Taloudellinen tiedote:Tätä tutkimusta tuki Acıbadem Mehmet Ali Aydınlar University Commission of Scientific Projects (nro: 2020/02/07).

VIITTEET

1. Hwang E, Park SY, Yin CS, Kim HT, Kim YM, Yi TH. Panax ginsengin ja Crataegus pinnatifidan seoksen ikääntymistä estävät vaikutukset ihon fibroblasteissa ja terveessä ihmisen ihossa. J Ginseng Res. 2017;41:69-77.

2. Ganceviciene R, Liakou AI, Theodoridis A, Makrantonaki E, Zouboulis CC. Ihon ikääntymistä estävät strategiat. Dermatoendokrinoli. 2012;4:308-319.

3. Lee H, Hong Y, Tran Q, Cho H, Kim M, Kim C, Kwon SH, Park S, Park J, Park J. Ginsenosidin RG3 uusi rooli ikääntymisen estämisessä mitokondrioiden toiminnan kautta ultraviolettisäteilytetyssä ihmisen ihossa fibroblastit. J Ginseng Res. 2019;43:431-441.

4. Rouvrais C, Bacqueville D, Patrick B, Haure MJ, Duprat L, Coutanceau C, Castex-Rizzi N, Duplan H, Mengeaud V, Bessou-Touya S. Retinaldehydin, delta-tokoferoliglukosidin ja glysyyliglysiinin ikääntymistä ehkäisevien ominaisuuksien arviointi oleamidiyhdistelmä. J Invest Dermatol. 2017;137(Lisäosa 2):S303.

5. Bravo K, Alzate F, Osorio E. Valittujen luonnonvaraisten ja viljeltyjen Andien kasvien hedelmät mahdollisten yhdisteiden lähteinä, joilla on antioksidantti- ja ikääntymistä estävä vaikutus. Ind Crops Prod. 2016;85:341-352.

6. Yepes A, Ochoa-Bautista D, Murillo-Arango W, Quintero-Saumeth J, Bravo K, Osorio E. Purppurat passionhedelmäsiemenet (Passiflora edulis f. edulis Sims) lupaavana ihon ikääntymistä ehkäisevien aineiden lähteenä: entsymaattinen , antioksidantti- ja monitasoiset laskennalliset tutkimukset. Arab J Chem. 2021;14:102905.

7. Rittié L, Fisher GJ. UV-valon aiheuttamat signaalikaskadit ja ihon ikääntyminen. Aging Res Rev. 2002;1:705-720.

8. Duque L, Bravo K, Osorio E. Kokonaisvaltainen ikääntymistä estävä lähestymistapa valikoiduissa viljellyissä lääkekasveissa: näkemys ihon valolta suojaamisesta eri mekanismien avulla. Ind Crops Prod. 2017;97:431-439.

9. Manjia NJ, Njayou NF, Joshi A, Upadhyay K, Shirsath K, Devkar VR, Moundipa FP. Lääkekasvien ikääntymistä ehkäisevä potentiaali KamerunissaHarungana madagascariensis Lam. ja Psorospermum aurantiacum Engl. estää in vitro ultravioletti-B-valon aiheuttamia ihovaurioita. Eur J Integr Med. 2019;29:100925.

10. Pujimulyani D, Suryani CL, Setyowati A, Handayani RAS, Arumwardana S, Widowati W, Maruf A. Curcuma mangga Val. Uute ihmisen BJ-fibroblasteissa MMP1:tä, MMP3:a ja MMP13:a vastaan. Heliyon. 2020;6:e04921.

11. Stavropoulou MI, Stathopoulou K, Cheilari A, Benaki D, Gardikis K, Chinou I, Aligiannis N. Kreikan propolisnäytteiden NMR-aineenvaihduntaprofilointi: niiden fytokemiallisten koostumusten vertaileva arviointi ja niiden ikääntymistä ehkäisevien ja antioksidanttiominaisuuksien tutkimus. J Pharm Biomed Anal. 2021;194:113814.

12. Filip S, Djarmati Z, Lisichkov K, Csanadi J, Jankov RM. Ylikriittisellä nesteuutolla saatujen Maclura (Maclura pomifera) -uutteiden eristäminen ja karakterisointi. Ind Crops Prod. 2015;76:995-1000.

13. Saloua F, Eddine NI, Hedi Z. Osage orange Maclura pomifera (Rafin.) Schneiderin siemen- ja siemenöljyn kemiallinen koostumus ja profiiliominaisuudet. Ind Crops Prod. 2009;29:1-8.

14. Veselá D, Kubínová R, Muselík J, Zemlicka M, Suchý V. Osajinin ja pomiferiinin antioksidantti- ja EROD-vaikutukset. Fitoterapia. 2004;75:209-211.

15. Gruber JV, Holtz R, Sikink SK, Tobin DJ. Paikallisten pomiferiinihoitojen in vitro ja ex vivo tutkimus. Fitoterapia. 2014;94:164-171.

16. Bozkurt İ, Dilek E, Erol HS, Çakir A, Hamzaoğlu E, Koç M, Keleş ON, Halici MB. Tutkimus Maclura pomiferan pomiferiinin vaikutuksista indometasiinin aiheuttamaan mahahaavaan: kokeellinen tutkimus rotilla. Med Chem Res. 2017;26:2048-2056.

17. Kurt-Celep İ, Celep E, Akyüz S, İnan Y, Barak TH, Akaydın G, Telci D, Yesilada E. Hypericum Olympic L. korjaa DNA-vaurioita ja estää UVB:n aiheuttaman MMP{2}}-aktivoinnin ihmisen ihossa fibroblastit. J Etnopharmacol. 2020;246:112202.

18. Bardakci H, Cevik D, Barak TH, Gozet T, Kan Y, Kirmizibekmez H. Sideritis congesta PH Davis et Hub. - Mor. Biochem Syst Ecol. 2020;92:104120.

19. Celep E, Seven M, Akyüz S, İnan Y, Yesilada E. Uuttomenetelmän vaikutus Sideritis-troijalaisen Bornm. Eteläafrikkalainen J Bot. 2019; 121:360–365.

20. Bardakcı H, Barak TH, Özdemir K, Celep E. Panimomateriaalin ja erilaisten lisäaineiden vaikutus kaupallisen Tilia platyphyllos Scop:n polyfenolikoostumukseen ja antioksidanttiseen bioaktiivisuuteen. infuusiot. J Res Pharm. 2020;24:133-141.

21. Barak TH, Celep E, İnan Y, Yesilada E. In vitro ihmisen ruuansulatuksen vaikutus Viburnum opulus L.:n (eurooppalaisen karpalon) hedelmäuutteiden fenolipitoisuuden biologiseen hyötyosuuteen ja antioksidanttiaktiivisuuteen. Ind Crops Prod. 2019;131:62-69.

22. Barak TH, Celep E, İnan Y, Yeşilada E. Sambucus ebulus L. -hedelmäuutteista peräisin olevien fenolien biosaatavuuden ja antioksidanttiaktiivisuuden simulointi ihmisen ruuansulatuksessa. Food Biosci. 2020;37:100711.

23. Ersoy E, Eroglu Ozkan E, Boga M, Yilmaz MA, Mat A. Kolmen Hypericum-lajin ikääntymistä estävä potentiaali ja tyrosinaasiaktiivisuus keskittyen fytokemialliseen koostumukseen LC-MS/MS:llä. Ind Crops Prod. 2019;141:111735.

24. Lee KK, Kim JH, Cho JJ, Choi JD. 150 kasviuutteen estävät vaikutukset elastaasiaktiivisuuteen ja niiden anti-inflammatoriset vaikutukset. Int J Cosmet Sei. 1999;21:71-82.

25. Itoh S, Yamaguchi M, Shigeyama K, Sakaguchi I. Chaenomeles sinensis -uutteiden ikääntymisen estopotentiaali. Kosmetiikka 2019; 6:21.

26. Kolayli S, Can Z, Yildiz O, Sahin H, Karaoglu SA. Vertaileva tutkimus kastanjan (Castanea sativa Mill.) eri yksikukkaisen hunajan hyaluronidaasin, pakkasnesteen, antioksidanttien, antimikrobisten ja fysikaalis-kemiallisista ominaisuuksista. J Enzyme Inhib Med Chem. 2016;31(Lisäosa 3):96-104.

27. Korkmaz B, Horwitz MS, Jenne DE, Gauthier F. Neutrofiilien elastaasi, proteinaasi 3 ja katepsiini G terapeuttisina kohteina ihmisen sairauksissa. Pharmacol Rev. 2010;62:726-759.

28. Akazaki S, Nakagawa H, Kazama H, Osanai O, Kawai M, Takema Y, Imokawa G. Ikään liittyvät muutokset ihon ryppyissä arvioituna uudella kolmiulotteisella morfometrisellä analyysillä. Br J Dermatol. 2002;147:689- 695.

29. Barla F, Higashijima H, Funai S, Sugimoto K, Harada N, Yamaji R, Fujita T, Nakano Y, Inui H. Alkyyligallaattien estävät vaikutukset hyaluronidaasille ja kollagenaasille. Biosci Biotechnol Biochem. 2019;73:2335-2337.

30. Chung JH, Kang S, Varani J, Lin J, Fisher GJ, Voorhees JJ. Vähentynyt solunulkoisten signaalien säätelemä kinaasi ja lisääntynyt stressin aktivoiman MAP-kinaasiaktiivisuus ikääntyneessä ihmisen ihossa in vivo. J Invest Dermatol. 2000;115:177-182.

31. Addotey JN, Lenger's I, Jose J, Gampe N, Béni S, Petereit F, Hensel A. Isoflavonoidit, joilla on estäviä vaikutuksia ihmisen hyaluronidaasia-1 ja norneolignaanista klitorienolaktonia B Ononis spinosa L. -juuriuutteesta. Fitoterapia. 2018;130:169-174.

32. Kim KJ, Xuan SH, Park SN. Likorisidiini, Glycyrrhiza uralensis Fisheristä eristetty isoflavonoidi, estää UVA-indusoidun ihmisen ihon fibroblastien valovanhenemisen. Int J Cosmet Sei. 2017;39:133-140.

33. Kim JY, Wang Y, Uddin Z, Song YH, Li ZP, Jenis J, Park KH. Kilpailevat neutrofiilien elastaasia estävät isoflavonit Flemingia philippinensis -bakteerin juurista. Bioorg Chem. 2018;78:249-257.

34. Ergene Öz B, Saltan İşcan G, Küpeli Akkol E, Süntar İ, Bahadır Acıkara Ö. Isoflavonoidit haavan parantavina aineina Ononidis radixista. J Etnopharmacol. 2018;211:384-393.

35. Azevedo Martins TE, de Oliveira Pinto CAS, de Oliveira AC, Robles Velasco MV, Gorriti Guitiérrez AR, Cosquillo Rafael MF, Huamani Tarazona JP, Retuerto-Figueroa MG. Paikallisten antioksidanttien panos terveen ihon ylläpitämiseen - arvostelu. Sci Pharm. 2020; 88:27.

36. Krutmann J, Schroeder P. Mitokondrioiden rooli ihmisen ihon valovanhenemisessa: viallinen voimanrakennusmalli. J Investig Dermatol Symp Proc. 2009;14:44-49.

37. Dong KK, Damaghi N, Picart SD, Markova NG, Obayashi K, Okano Y, Masaki H, Grether-Beck S, Krutmann J, Smiles KA, Yarosh DB. UV-indusoitu DNA-vaurio käynnistää MMP:n-1 vapautumisen ihmisen ihossa. Exp Dermatol. 2008;17:1037-1044.

38. Oresajo C, Pillai S, Manco M, Yatskayer M, McDaniel D. Antioksidantit ja iho: formulaation ja tehon ymmärtäminen. Dermatol Ther. 2012;25:252-259.

39. Chiang HM, Chiu HH, Liao ST, Chen YT, Chang HC, Wen KC. Isoflavonoidirikas fleming macrophylla -uute vaimentaa UVB:n aiheuttamia ihovaurioita poistamalla reaktiivisia happilajeja ja estämällä MAP-kinaasin ja MMP:n ilmentymistä. Evid Based Complement Alternative Med. 2013; 2013: 696879.

40. Santos CMM, Silva AMS. Prenyyliflavonoidien antioksidanttivaikutus. Molekyylit. 2020; 25:696.

41. Orhan IE, Sezer Senol F, Demirci B, Dvorska M, Smejkal K, Zemlicka M. Joidenkin luonnollisten ja puolisynteettisten flavonoidijohdannaisten antioksidanttipotentiaali ja Maclura pomifera (Rafin.) Schneiderin (oranssi) ja sen välttämättömät uutteet öljyn koostumus. Turkkilainen J Biochem. 2016;41:403-411.

42. Křížová L, Dadáková K, Kašparovská J, Kašparovský T. Isoflavones. Molekyylit. 2019; 24:1076.

43. Su Z, Wang P, Yuan W, Grant G, Li S. Fenolit Maclura pomiferan hedelmistä. Nat Prod Commun. 2017;12:1743-1745.

44. Orazbekov Y, Ibrahim MA, Mombekov S, Srivedavyasasri R, Datkhayev U, Makhatov B, Chaurasiya ND, Tekwani BL, Ross SA. Prenyloitujen flavonoidien eristäminen ja biologinen arviointi Maclura pomiferasta. Evid Based Complement Alternative Med. 2018; 2018: 1370368.

45. Kartal M, Abu-Asaker M, Dvorska M, Orhan I, Zemlicka M. LC-DAD-MS-menetelmä pomiferiinin ja osajiinin, tärkeimpien isoflavonien analysoimiseksi Maclura pomiferassa (Rafin.) Schneider. Chromatographia 2009;69:325-329.

46. ​​Darji K, Miglis C, Wardlow A, Abourashed EA. Isoflavonitasojen HPLC-määritys osage-oranssissa Keskilännestä ja Etelä-Yhdysvalloista. J Agric Food Chem. 2013;61:6806-6811.

47. Tsao R, Yang R, Young JC. Antioksidanttiset isoflavonit osage appelsiinissa, Maclura pomifera (Raf.) Schneid. J Agric Food Chem. 2003;51:6445-6451.

48. Hwang HS, Winkler-Moser JK, Tisserat B, Harry‐O'kuru RE, Berhow MA, Liun SX. Osage-appelsiiniuutteen antioksidanttivaikutus soijaöljyssä ja kalaöljyssä varastoinnin aikana. J Am Oil Chem Soc. 2021;98:73-87.

【Lisätietoja:george.deng@wecistanche.com / WhatApp:86 13632399501】