Cistanche Salsa -soluviljelmän fenyylietanoidiglykosidibiosynteesiin osallistuvien vetyperoksidiresponsiivisten EST:iden tunnistaminen

Yhteystiedot: Audrey Hu Whatsapp/hp: 0086 13880143964 Sähköposti:audrey.hu@wecistanche.com

J. CHEN et ai

Abstrakti
Vetyperoksidi on tehokas abioottinen herättäjä, joka voi indusoida sekundäärisen metaboliitin biosynteesin kasveissa. Osoitamme, että suolaa sietävän lääkekasvin solususpensioviljelmässäCistanchesalsaa, bioaktiivisten komponenttien tuotantofenyylietanoliglykosidit(PeGs) lisääntyi H2O2-käsittelyn jälkeen. PeG:ihin liittyvien geenien tunnistaminen(fenyylietanoliglykosidit)H2O2:n vaikuttamaan biosynteesiin, rakensimme H2O2:lle herkkien geenien suppressiota vähentävän hybridisaatiokirjaston käyttämälläCistanchesalsaasolulinja ja tunnisti 105 ekspressoitua sekvenssimerkkiä (EST) ja 85 geeniä. EST-kirjaston toiminnalliset annotaatio- ja geeniontologia-analyysit osoittivat geenejä, jotka liittyivät erilaisiin stressireaktioihin, sekundaaristen metaboliittien biosynteesiin ja transkription säätelyyn. Niiden joukossa tunnistimme kaksi PeG:ihin liittyvää geeniä(fenyylietanoliglykosidit)biosynteesireitti (4-kumaraattikoentsyymi A ligaasi ja sinnamaatti-4-hydroksylaasi) ja kaksi WRKY-tyyppistä transkriptiotekijää. Valittujen geenien ilmentymät H2O2-käsittelyn jälkeen analysoitiin RT-qPCR:llä. Varhainen lisääntynyt PeG:n transkriptio(fenyylietanoliglykosidit)biosynteesireitin geenit hoidon jälkeen paljastivat, että H2O2 indusoi PeG:itä(fenyylietanoliglykosidit)biosynteesiä sen avaingeenien ylössäätelyn kautta.
Lisäavainsanat: cinnamaatti-4-hydroksylaasi, 4-kumaraattikoentsyymi A -ligaasi, vähentävä hybridisaatio.Cistanchesalsaa. fenyylietanoliglykosidit.

Johdanto

Cistanchesalsaaon monivuotinen kasviloinen Haloxylos ammodendrunin juuressa, ja se kasvaa Länsi-Kiinan autiomaassa. Vuosisatojen ajan,Cistanchelajia on käytetty perinteisenä yrttilääkkeenä (Wang et al. 2012). Bioaktiiviset komponentit ovatfenyylietanoliglykosidit(PeG:t), joilla on merkittävä vaikutus reaktiivisten happilajien (ROS) puhdistumaan, säteilysuojaan, immuniteetin parantamiseen ja ikääntymisen estämiseen (Nan et al. 2013). PeGs(fenyylietanoliglykosidit)biosynteesi sisälläCistancheinitioidaan fenyylialaniinista (kuva 1 Täydennys) ja syntetisoitu kofeiinihappo glykosyloidaan edelleen erilaisten PeG-yhdisteiden muodostamiseksi(fenyylietanoliglykosidit)(Wang ym. 2012). Kolme tärkeintä PeG:tä(fenyylietanoliglykosidit), ekinakosidi, akteosidi ja 2'-asetyylilakteosidi, pidetään aktiivisimpina aineosinaCistanche(Kobayashi et ai. 1984). Niiden sisällön parantamiseksiCistanchesoluviljelmä, erilaisia ​​elisiitoreita on testattu, mukaan lukien kitosaani, putreskiini, Ag plus ja osmoottinen stressi (Ouyang et al. 2005a,b, Cheng et al. 2005, 2006, Liu et al. 2007, Liu ja Cheng 2008). Kuitenkin geenit, jotka ovat mukana PeG:issä(fenyylietanoliglykosidit)biosynteesi sisälläCistanchegeenit, pääasiassa fenyylialaniinin metaboliareitin geenejä, on tunnistettu harvoin. Cistanche deserticolassa tunnistettiin äskettäin vain fenyylialaniiniammoniakkilyaasia (PAL) koodaava geeni (Hu et al. 2011). Muita geenejä, jotka koodaavat esimerkiksi cinnamaatti-4-hydroksylaasia (C4H), joka voisi katalysoida sinamaatin muuttumista kumarihapoksi, ja 4-kumaraattikoentsyymi A ligaasia (4CL), olennaista geeniä ligniinille ja flavanoideille biosynteesejä, ei ole löydettyCistanche.
Käytimme soluviljelmääCistanchesalsaatutkia PeG:itä(fenyylietanoliglykosidit)biosynteesi ja siihen liittyvien geenien ilmentyminen. Tutkimme myös tehokkaan H2O2-elisiaattorin vaikutusta PeG:iin(fenyylietanoliglykosidit)biosynteesi. Lisäksi löytää varhain reagoivia geenejä, jotka ovat mukana PeG:issä(fenyylietanoliglykosidit)biosynteesiä, suoritimme suppressiivisen subtraktiivisen hybridisaation (SSH) H2O2--herkkien geenien cDNA-kirjaston rakentamiseksi.

Kuva 1. Suhteellinen geeniekspressio määritettynä RT-qPCR:llä H202-käsittelyn jälkeen. CsWRKY1 - WRKY-transkriptiotekijä (Contig07), CsC4H1 - sinnamaatti4-hydroksylaasi (Contig09), Cs4CL1 - 4-kumaraatti: ligaasi (Contig03), CsHSP1 - lämpösokkiproteiini 70 kDa (Contig 01) ja CsSOD1 - superoksididismutaasi (Contig16). Soluja käsiteltiin 80 ug dm-3 H2O2:lla nestemäisessä väliaineessa 2 tunnin ajan ja ilmentymiä verrattiin vedellä käsiteltyyn kontrolliin. Keinot plus - kolmen biologisen toiston SD; * - P < 0,05,="" **="" -="" p=""><>

Materiaalit ja menetelmät

CS2001-solulinja muodostettiin terälehdistäCistanchesalsaa(CA Mey.) Beck keräsi Neimenggun maakunnassa ja jatkoviljeli. Viljelymenetelmä oli samanlainen kuin aiemmin julkaistu protokolla (Liu et al. 2007). Yleensä jatkoviljelyyn käytettiin kiinteää Murashigen ja Skoogin (1962; MS) alustaa ja PeG:ille nestemäistä alustaa.(fenyylietanoliglykosidit)biosynteesi (se oli modifioitu MS-elatusaine, jota oli täydennetty 30 g dm-3 glukoosilla ja 20 mg dm-3 indoli-3-etikkahapolla). H2O2-käsittelyä varten 5.{10}} ± 0,2 g solua nopean kasvun aikana, yleensä 20-30 päivää sen jälkeen, kun ne oli viljelty kiinteässä alustassa, siirrostettiin 50 cm3:n nestemäiseen alustaan ​​250 cm3:n erlenmeyerpullossa. ja viljelty pimeässä erilaisten H202-pitoisuuksien kanssa tai ilman. PeG:t(fenyylietanoliglykosidit)pitoisuus 10 vuorokauden H2O2:n induktion jälkeen analysoitiin aiemmin julkaistulla menetelmällä (Liu et al. 2007), joka perustui käänteisfaasin korkean erotuskyvyn nestekromatografiaan metanoligradienttieluutiolla.

Solut 2 tuntia H202-käsittelyn jälkeen kerättiin alustasta suodatinpaperilla käyttäen Büchner-suppiloa, minkä jälkeen ne jäädytettiin nestetypessä ja jauhettiin jauheeksi. Jokainen 2 g solujauhetta hajotettiin käyttämällä seosta, jossa oli 1 cm3 2-merkaptoetanolia, 1 cm3 200 g dm{{10}} sarkosyyliä, ja 8 cm3 GTC-puskuria (5 M guanidinium-isotiosyanaatti, 62,5 mM Tris-HCl, pH 8,0, 6,25 mM EDTA, pH 8,0, 5 mM tiourea ja 10 mM ditiotreitoli). Sitten soluja inkuboitiin jäillä 15 minuuttia, sitten lisättiin 1/3 tilavuudesta 8,5 M CH3COOK:ta, pH 6,0, ja soluja inkuboitiin jäissä 15 minuuttia ja sitten sentrifugoitiin 15 000 g:llä 15 minuuttia. . Supernatantti lisättiin yhtä suureen tilavuuteen isopropanolia kokonais-RNA:n saostamiseksi. Kokonais-RNA puhdistettiin edelleen RNeasy-minikitillä (Qiagen, Hilden, USA) valmistajan ohjeiden mukaisesti. Lähetti-RNA eristettiin kokonais-RNA:sta käyttämällä Oligotex mRNA midi -pakkausta (Qiagen).

fenyylietanoliglykosiditsisäänCistancheSalsa

SSH-kirjasto luotiin kontrolli- ja 30-prosenttisesti H2O2--iiduista solunäytteistä 2 tuntia herättämisen jälkeen käyttämällä PCR-select cDNA-vähennyssarjaa (Clontech, Mountain View, USA). Kirjaston rakentamista varten tuotteet puhdistettiin erikseen käyttämällä geelipuhdistuspakkausta (Qiagen) ja kloonattiin pGEM-vektoriin käyttämällä TA-kloonauspakkausta (Tiangen, Peking, Kiina). Plasmidit itsenäisistä klooneista eristettiin ja sekvensoitiin käyttämällä T7-aluketta. Kaikkia kirjaston ekspressoitujen sekvenssimerkkien (EST) sekvenssejä (vektorisekvenssit poistettuina) käytettiin jatkuvaan kokoamiseen CAP3:n kanssa (http://doua.prabi.fr/software/cap3). EST:t ryhmiteltiin jatkuviksi ja singletoniksi; niitä käytettiin homologiahakuun käyttäen BLASTx-ohjelmaa NCBI:ssä (http://blast.ncbi.nlm.nih.gov). Sekvenssejä merkittiin sitten huomautuksina, analysoitiin ja luokiteltiin geeniontologian (GO) termien mukaan käyttämällä Blast2GO:ta (http://www. blast2go.com).
Reaaliaikainen kvantitatiivinen polymeraasiketjureaktio (RT-qPCR) suoritettiin Bustin et ai. (2009). cDNA-näytteet syntetisoitiin käyttäen PrimeScript RT -reagenssipakkausta (Takara, Dalian, Kiina) 0,5 ug:sta kokonais-RNA:ta. RT-qPCR suoritettiin käyttämällä SYBR Premix Ex Taq II- ja ROX plus -sarjoja (Takara) ABI 7300 -reaaliaikaisessa PCR-järjestelmässä (Applied Biosystems, Foster City, USA) kolmella teknisellä kopiolla. Pohjusteet suunniteltiin online-Primer3-ohjelmistolla Takaran toimittamien ohjeiden mukaisesti; tässä tutkimuksessa käytetyt alukkeet on lueteltu taulukossa 1 Suppl. Geeniekspressiot normalisoitiin 18S-RNA:ksi, jonka ilmentyminen oli stabiili kaikissa näytteissä.

Tulokset analysoitiin R-versiolla 3.1.1, erojen merkitys varmistettiin Studentin t-testillä.

Tulokset

Vetyperoksidi aiheutti kaikkien kolmen tärkeimmän PeG:n biosynteesin(fenyylietanoliglykosidit)sisäänCistanchesalsaasuspensiosoluja (taulukko 1), mutta ilman ilmeistä vaikutusta solujen kasvuun (kuva S2). Ekinakosidipitoisuus nousi jo 10 ug dm-3 H2O2-käsittelyn jälkeen (P < 0.05),="" suurempi="" nousu="" havaittiin="" 20="" ug="" dm:n="" jälkeen.="" -3="" h2o2-käsittely="" (p="">< 0,01),="" ja="" suurin="" nousu="" oli="" 40,="" 80="" ja="" 160="" ug="" dm-3="" h2o2-käsittelyjen="" jälkeen.="" samanlaiset="" tulokset="" esitetään="" akteosidilla,="" mutta="" sen="" pitoisuus="" saavutti="" huippunsa="" 80="" ug="" dm-3="" h2o2-käsittelyn="" jälkeen.="" 2'-asetyylilakteosidin="" biosynteesi="" oli="" vähemmän="" herkkä="" h202-käsittelylle;="" sen="" pitoisuuden="" merkittävä="" kasvu="" (p="">< 0,05)="" oli="" yli="" 40="" ug="" dm-3="" h2o2-pitoisuuksilla.="" 80="" ug="" dm-3="" h2o2-käsittelyn="" jälkeen="" kaikkien="" kolmen="" tärkeimmän="" peg:n="">(fenyylietanoliglykosidit)nousi merkittävästi (P ​​< 0.01)="" kontrolliin="" verrattuna.="" siksi="" tätä="" pitoisuutta="" käytettiin="">
Luodaksemme kirjaston, joka oli rikastettu H2O2:n voimistuneilla varhaisherkillä geeneillä, käytimme cDNA:taCistanchesalsaasuspensiosoluja, joita käsiteltiin 80 ug dm-3 H2O2:lla 2 tunnin ajan. Single-pass-sekvensointi 129 rekombinanttikloonia SSH-kirjastossa tuotti 105 puhdasta EST:tä vektorisekvenssin poissulkemisen jälkeen. CAP3 käytti näitä selkeitä EST:itä kokoamiseen, ja 18 jatkumoa ja 67 singletonia tuotettiin (taulukko 2). Siten tästä kirjastosta eristettiin 85 geeniä. Puhtaiden 105 EST:n keskipituus oli 527 bp, mikä on riittävä sekvenssien samankaltaisuuteen perustuvaan toiminnalliseen luokitteluun.

fenyylietanoliglykosiditsisäänCistancheSalsa

Kaikki kirjastosta saadut 85 geeniä haettiin BLASTx:lla GenBankin ei-redundanttiproteiinitietokantaa vastaan ​​sekvenssin samankaltaisuuden toteamiseksi (E-arvo pienempi tai yhtä suuri kuin 0.001). 21 geeniä ei osoittanut osumia tietokannassa, ne saattavat olla erityisiäCistanchesalsaa. BLASThitsillä saadut tulokset tuotiin Blast2GO-ohjelmistoon GO- ja KEGG-polun rikastusanalyysejä varten. 64 geenistä, joilla oli BLAST-osumia, 50 oli merkitty muiden lajien homologisten geenien kuvauksen mukaisesti. Annotoidut geenit nimettiin BLAST-osumien kuvauksen mukaan. GO-analyysi (Kuva 3 Suppl.) osoittaa, että näiden 50 geenin joukossa oli 14 geeniä, jotka osallistuivat vasteisiin ärsykkeisiin ja yli 30 geeniä, jotka liittyvät aineenvaihduntaprosesseihin (taulukot 1 ja 2). Näistä geeneistä eristettiin odotetusti kaksi PeG-biosynteesireitin geenihomologia: 4-kumaraattikoentsyymi A -ligaasi (nimeltään Cs4CL1: Contig03) ja cinnamaatti-4-hydroksylaasi (nimeltään CsC4H1: Contig14). Lisäksi suoritettiin RT-qPCR kirjastosta peräisin olevien geenien indusoituneiden ilmentymien vahvistamiseksi H202-käsittelyn jälkeen.

Kahden PeG:n ilmentymisen vahvistamiseksi, että SSH-kirjastosta tunnistetut olennaiset geenit reagoivat H2O2-käsittelyyn(fenyylietanoliglykosidit)RT-qPCR:llä mitattiin biosynteesireittiin liittyvät geenit (Cs4CL1, CsC4H1), kaksi ROS-indusoitua geeniä (CsSOD1: Contig 16, CsHSP1: CISTH099) ja yksi WRKY-perheen transkriptiotekijää muistuttava geeni (CsWRKY1: Contig 07). H202:lla (kuvio 1). CsC4H1-, Cs4CL1-, CsSOD1- ja CsWRKY1-lausekkeita säädeltiin enemmän kuin 15--kertaisesti, 3--kertaisesti, 45--kertaisesti ja 4--kertaisesti, vastaavasti 2 tuntia H2O2:n jälkeen. hoitoon. CsHSP1:n ilmentyminen muuttui vain 1,8-kertaisesti H2O2-käsittelyn jälkeen.
CsWRKY1:n, CsC4H1:n ja Cs4CL1:n ilmentymien aikakulku H202-käsittelyn jälkeen analysoitiin edelleen RT-qPCR:llä (kuvio 2). CsC4H1- ja Cs4CL1-ekspressiot lisääntyivät voimakkaasti (yli 80--kertaiset ja vastaavasti 50--kertaiset) 16-h-hoidon jälkeen ja sitten alasäädeltyjä 32 tunnin kuluttua. CsWRKY1:n ilmentyminen lisääntyi yli 20--kertaisesti 4 tunnin kohdalla ja laski sitten 8 tunnin kuluttua (kuvio 2).

Kuva 2. CsWRKY1:n (A), CsC4H1:n (B) ja Cs4CL1:n (C) suhteellinen ilmentyminen eri aikoina 80 ug dm-3 H2O2:lla käsittelyn jälkeen. Lausekkeet normalisoitiin kontrolliksi; (käsitelty vedellä). Keinot plus - kolmen biologisen toiston SD; * - P < 0,05,="" **="" -="" p=""><>

Keskustelu

Vetyperoksidi on hyvin tunnettu kasvieliitsioija, jolla on erilaisia ​​vaikutuksia kasveihin. Kuten ROS, se voi indusoida ROS-poistojärjestelmän, joka koostuu superoksididismutaasista, katalaasista, peroksidaaseista jne., ja se toimii alavirran signaalina suolasta, osmoottisesta ja dehydraatiosta.

korostaa (Wi et al. 2006, Kar 2011, Furlan ym. 2013, Sathiyaraj ym. 2014). Esitettiin, että H2O2:n muodostumiseen kasveissa liittyy indusoitunut sekundääristen metaboliittien biosynteesiCistanchesalsaasoluviljelmä. Kuten odotettiin, tuloksemme paljastavat, että PeGs(fenyylietanoliglykosidit)biosynteesiCistanche salsasoluviljelmä indusoitiin H202-käsittelyn jälkeen (taulukko 1). Kolmen tärkeimmän PeG:n sisältö(fenyylietanoliglykosidit)lisääntynyt H2O2-käsittelyn jälkeen, mikä osoittaa sen keskeisen roolin PeG:iden biosynteesissä. SSH-kirjastossa rikastetut geenit viittasivat edelleen sen vaikutukseen PeG:ihin(fenyylietanoliglykosidit)biosynteesin induktio sisäänCistanche salsa.

Monet tunnetut H2O2--responsiiviset geenit, kuten askorbaattiperoksidaasi (CISTH069, Karyotou ja Donaldson 2005), h-kinonioksidoreduktaasi (CISTH125, Bello, ym. 2001), CsSOD1, CsHSP1 (Baruah1 et al.), ja tautiresistenssivastegeenit (Contig10, Nanda, et ai. 2010) rikastettiin SSH-kirjastossa (taulukko 3, taulukko 2, lisäys). Jotkut näistä tyypillisistä ROS-responsiivisista geeneistä, joilla oli indusoitunut ilmentyminen H202-käsittelyn jälkeen, vahvistettiin edelleen RT-qPCR:llä (kuvat 1 ja 2), mikä osoitti, että tähän rakennettiin pätevä SSH-kirjasto. Tästä kirjastosta löydettiin myös kaksi PeG-biosynteesireitin geeniä, CsC4H1 ja Cs4CL1, ja nämä kaksi geeniekspressiota indusoitiin H202-käsittelyllä ajasta riippuvaisella tavalla (kuvio 2). Se viittaa siihen, että H202-käsittely aiheutti PeG:itä(fenyylietanoliglykosidit)biosynteesi geneettisellä tasolla PAL-reitin geenien säätelyn kautta. PAL:ia ja muita alavirran PeG:iden biosynteesigeenejä (Wang et al. 2012) ei kuitenkaan tunnistettu SSH-kirjastossa; se saattaa johtua siitä, että kirjastoa ei ole sekvensoitu riittävästi. CsC4H1- ja Cs4CL1-indusoitujen ilmentymien ja lisääntyneen PeGs-biosynteesin välinen suhde H2O2-käsittelyn jälkeen tulisi selvittää lisäanalyysillä.

H2O2-käsittelyn indusoimien PAL-reittigeenien lisäksi SSH-kirjastosta löydettiin kaksi WRKY-perheen transkriptiotekijää (CsWRKY1, CsWRKY2) (taulukko 3 ja taulukko 2 Täydennys), ja CsWRKY1-indusoitu ilmentyminen varmistettiin RT-qPCR:llä. . Sen ilmentyminen oli herkkä H202-käsittelylle aikaisemmin kuin kahden PAL-reittigeenin, Cs4CL1 ja CsC4H1, ilmentyminen (kuvio 2). Aiempien tutkimusten perusteella riisissä on havaittu joidenkin WRKY-transkriptiotekijöiden ja PAL-reitin geenien yhteisilmentymistä (Gupta et al. 2012). Lisäksi PAL-geenin ilmentyminen lisääntyy OsWRKY03-yli-ilmentymismutantissa (Liu et al. 2005). Edellä mainitut kaksi WRKY-perheen transkriptiotekijää voivat myös olla mukana PeG:issä(fenyylietanoliglykosidit)biosynteesi sisälläCistanchesalsaa. Mielenkiintoista on, että SSH-kirjastosta löydettiin kuivumiseen liittyviä EST:itä (CISTH067, CISTH064), mikä saattaa viitata siihen, että H2O2-hoito liittyi dehydraatioon reagoivien geenien ilmentymiseenCistanchesalsaakuten on havaittu muissa kasveissa (Schmidt ym. 2013, Zhou et al. 2013). Yksi gibberelliinin (GA) signalointiin liittyvä geeni, gibberelliinireseptorin gid1b:n kaltainen (CISTH092), tunnistettiin SSH-kirjastosta, mikä viittaa GA-signaloinnin ja H2O2-hoidon yhteyteenCistanchesalsaa, joka raportoitiin myös ohrassa (Bahin et al. 2011). Tarvitaan kuitenkin lisää tutkimuksia sen varmistamiseksi, liittyvätkö nämä geenit PeG:ihin(fenyylietanoliglykosidit)biosynteesi. Muut kuin yllä mainitut geenit, tässä rakennettu SSH-kirjasto esittelee myös geenejä, joissa on tai ei ole BLAST-osumia. Se parantaa ymmärrystämme H2O2:n vaikutuksesta C. salsaan ja toimittaa ensinnäkin tietoa sen PeG:iden biosynteesiin osallistuvista geeneistä.

Lopuksi arvioimme H2O2:n vaikutuksen PeG:iin(fenyylietanoliglykosidit)induktioCistanchesalsaasoluviljelmä. SSH-kirjasto rakennettiin H202-käsittelyn jälkeen ja valittujen geenien ilmentyminen varmistettiin RT-qPCR:llä. Kaksi PeG-biosynteesireittiin liittyvää geeniä ja muita H2O2-responsiivisia geenejä tunnistettiin. Nämä havainnot laajentavat ymmärrystämme H2O2--indusoiduista PeG:istä(fenyylietanoliglykosidit)biosynteesi sisälläCistanchesalsaamolekyylitasolle tarjoamalla tietoa geenien manipulointiinCistanchesalsaasoluviljelmiä PeG:iden parantamiseksi(fenyylietanoliglykosidit)tuotantoa.

Lähde: "Cistanche-salsasoluviljelmän fenyylietanoidiglykosidibiosynteesiin osallistuvien vetyperoksidiresponsiivisten EST:iden tunnistaminen"J. CHEN et ai.

--- BIOLOGIA PLANTARUM 59 (4): 695-700, 2015 J. CHEN et al. DOI: 10,1007/s10535-015-0541-v

Viitteet

Bahin, E., Bailly, C., Sotta, B., Kranner, I., Corbineau, F., Leymarie, J.: Reaktiivisten happilajien ja hormonaalisten signalointireittien välinen ylikuuluminen säätelee viljan lepotilaa ohrassa. - Plant Cell Environ. 34: 980-993, 2011.
Baruah, K., Norouzitallab, P., Liayati, L., Sorgeloos, P., Bossie, r P.: Lämpösokkiproteiinia (Hsp) indusoivan tuotteen synnyttämät reaktiiviset happilajit edistävät Hsp70:n tuotantoa ja Hsp{1} }välitteinen suojaava immuniteetti Artemia franciscanassa patogeenisiä vibrioita vastaan. - Kehittäjä Comp. Immunol. 46: 470-479, 2014.
Bello, RI, Gomez-Diaz, C., Navarro, F., Alcain, FJ, Villalba, JM: NAD(P)H:n: kinonioksidoreduktaasi 1:n ilmentyminen HeLa-soluissa  vetyperoksidin ja kasvuvaiheen rooli. - J. biol. Chem. 276: 44379-44384, 2001.
Bustin, SA, Vandesompele, J., Pfaffl, MW: qPCR:n ja RT-qPCR:n standardointi. - Genet. Eng. Biotechnol. Uutiset 29: 40-43, 2009.
Cheng, XY, Wei, T., Guo, B., N, I W., Liu, CZ:Cistanchedeserticola-solususpensioviljelmät:fenyylietanoliglykosiditbiosynteesi ja antioksidanttiaktiivisuus. - Prosessi Biochem. 40: 3119-3124, 2005.
Cheng, XY, Zhou, HY, Cui, X., Ni, W., Liu, CZ parantaminenfenyylietanoliglykosiditbiosynteesi sisälläCistanchedeserticola-solususpensioviljelmät kitosaanielisiittorilla. - J. Biotechnol. 121: 253-260, 2006.
Furlan, A., Llanes, A., Luna, V., Castro, S.: Abskisiinihappo välittää vesistressin aiheuttamaa vetyperoksidin tuotantoa maapähkinässä. - Biol. Tehdas. 57: 555-558, 2013.
Gupta, SK, Ra,i AK, Kanwar, SS, Chand, D., Singh, NK, Sharma, TR: Yksittäinen toiminnallinen blastiresistenssigeeni Pi54 aktivoi riisissä monimutkaisen puolustusmekanismin. - J. exp. Bot. 63: 757-772, 2012.
Hu, GS, Jia, JM, Hur, YJ, Chung, YS, Lee, JH, Yun, DJ, Chung, WS, Yi, GH, Kim, TH, Kim, DH: Fenyylialaniiniammoniakki-lyaasigeenin molekyylien karakterisointiCistanchedeserticola. - Mol. Biol. Rep. 38: 3741-3750, 2011.
Kar, RK: Kasvien reaktiot vesistressiin: reaktiivisten happilajien rooli. - Kasvien signaalien käyttäytyminen 6: 1741-1745, 2011.
Karyotou, K., Donaldson, RP: Askorbaattiperoksidaasi, vetyperoksidin poistaja glyoksisomaalisissa kalvoissa. - Kaari h. Biochem. Biophys. 434: 248-257, 2005.
Kobayashi, H., Karasawa, H., Miyase, T., Fukushima, S.: Studies on the constituents ofcistancheon herba. 4. Kahden uuden fenyylipropanoidiglykosidin, cistanosidi-C:n ja cistanosidi-D:n, eristäminen ja rakenteet. - Chem. Pharm. Sonni. 32: 3880-3885, 1984.

Liu, CZ, Cheng, XY: Parannusfenyylietanoliglykosiditbiosynteesi soluviljelmissäCistanchedeserticola osmoottisen stressin vuoksi. - Plant Cell Rep. 27: 357-362, 2008.
Liu, JY, Guo, ZG, Zeng, ZL: Parempi kertyminenfenyylietanoliglykosiditsyöttämällä prekursori suspensioviljelmäänCistanchesalsaa. - Biochem. Eng. J. 33: 88-93, 2007.
Liu, XQ, Bai, XQ, Qian, Q., Wang, XJ, Chen, MS, Chu, CC: OsWRKY03, riisin transkription aktivaattori, joka toimii puolustussignalointireitillä ylävirtaan OsNPR1:stä. - Cell Res. 15: 593-603, 2005.
Murashige, T., Skoog, F.: Tarkistettu alusta nopeaan kasvuun ja biotesteihin tupakkakudosviljelmillä. - Fysio. Tehdas. 15: 473-497, 1962.
Nan, ZD, Zeng, KW, Shi, SP, Zhao, MB, Jiang, Y., Tu, PF:Fenyylietanoliglykosiditjoilla on tulehdusta estäviä vaikutuksia varrestaCistanchedeserticolaa viljellään Tarimin autiomaassa. - Fitoterapia 89: 167-174, 2013.
Nanda, AK, Andrio, E., Marino, D., Pauly, N., Dunand, C.: Reaktiiviset happilajit kasvi-mikro-organismien varhaisten vuorovaikutusten aikana. - J. Integr. Plant Biol. 52: 195-204, 2010.
Ouyang, J., Wang, XD, Zhao, B., Wang, YC: Tehostettu tuotantofenyylietanoli glykosiditsyöttämällä esiaste soluviljelmäänCistanchedeserticola. - Prosessi Biochem. 40: 3480-3484, 2005a.
Ouyang, J., Wang, XD, Zhao, B., Wang, YC: Parannettu tuotantofenyylietanoliglykosiditkirjoittajaCistanchedeserticola-solut, joita viljeltiin sisäisessä silmukkailmakuljetusbioreaktorissa, jossa on siivilä nousuputki. - Entsyymi Microbiol. Tech. 36: 982-988, 2005b.
Salcedo-Morales, G., Jimenez-Aparicio, AR, Cruz-Sosa, F., Trejo-Tapia, G.: Anatomical and histochemical characterization of in vitro haustorium from roots of Castilleja tenuiflora. - Biol. Tehdas. 58: 164-168, 2014.
Sathiyaraj, G., Srinivasan, S., Kim, YJ, Lee, OR, Parvin, S., Balusamy, SR, Khorolragchaa, A., Yang, DC: Vetyperoksidin sopeutuminen parantaa suolan sietokykyä aktivoimalla puolustukseen liittyviä proteiineja Panax ginseng CA Meyer. - Mol. Biol. Rep. 41: 3761-3771, 2014.
Schmidt, R., Mieulet, D., Hubberten, HM, Obata, T., Hoefgen, R., Fernie, AR, Fisahn, J., Segundo, BS, Guiderdoni, E., Schippers, JHM, Mueller-Roeber, B.: SUOLARESPONSIIVINEN ERF1 säätelee reaktiivisista happilajeista riippuvaista signalointia ensimmäisen vasteen aikana suolastressiin
riisissä. - Plant Cell 25: 2115-2131, 2013.
Wang, T., Zhang, XY, Xie, WY:Cistanchedeserticola YC Ma, "Desert Ginseng": arvostelu. - Amer. J. leuka. Med. 40: 1123-1141, 2012.
Wi, SG, Chung, BY, Kim, JH, Lee, KS, Kim, JS Vetyperoksidin laskeumakuvio riisin lehtien tupeissa suolastressin alaisena. - Biol. Tehdas. 50: 469-472, 2006.
Zhou, XF, Jin, YH, Yoo, CY, Lin, XL, Kim, WY, Yun, DJ, Bressan, RA, Hasegawa, PM, Jin, JB: CYCLIN H1 säätelee kuivuuden aiheuttamia stressireaktioita ja sinisen valon aiheuttamaa vatsan avautumista reaktiivisten happilajien kertymisen estäminen Arabidopsiksessa. - Plant Physiol. 162: 1030-1041, 2013.