Kuinka Cistanche voi auttaa luustoa?

Ottaa yhteyttä:joanna.jia@wecistanche.com/ WhatsApp: 008618081934791

[Abstrakti]Tavoite:Tutkia luuytimen mesenkymaalisten kantasolujen (MSC) suuntautuvaa erilaistumista, joka johtuu munuaisia ​​vahvistavan perinteisen kiinalaisen lääketieteen vaikutuksesta, ja kehittää teoriaa "munuaiset hallitsevat luuta ja sydäntä". Menetelmä: perinteisen kiinalaisen lääketieteen neste

Cistancheekinakosidivoi lievittääosteoporoosi

SD-rotille annettiin mahalaukunsisäisesti 4 päivää ja sitten veri kerättiin vatsa-aortasta lääkeseerumin valmistamiseksi. Neljännen sukupolven M SC:t siirrostettiin kahteen 6-kuoppalevyyn 5 × 106:lla, jokaisessa oli 6 kuoppaa, jaettuna nollaryhmiin,

Morinda officinalis -ryhmä, eucommia ulmoides -ryhmä, psoraleeniryhmä,cistancheryhmä, epimediumryhmä. Kun solut kasvavat 80 prosenttiin, jokaiseen perinteisen kiinalaisen lääketieteen ryhmään lisätään lääkettä sisältävää seerumi LD M EM -elatusainetta ja nollaryhmän alkuperäisen alustan viljelyä jatketaan; 10. induktiopäivänä otetaan 6-kuoppalevy ALP-värjäystä varten; toinen on 6-hyvin 20. päivänä värjätty Alizarin Redillä. Tulokset: Morinda officinalis -ryhmä, Eucommia ulmoides -ryhmä,Cistancheryhmä, Epimedium-ryhmä osoitti positiivista ALP-värjäytymistä 10. päivänä, valkoisia kalsiumkyhmyjä nähtiin noin 14. päivänä ja Alizariinin punainen värjäys oli positiivinen 20. päivänä. Johtopäätös: "Muuainen

"Pääluun ja ytimen" teorian ohjaamana munuaisia ​​vahvistava kiinalainen lääketiede voi indusoidaluutaluuytimen mesenkymaaliset kantasolut erilaistumaan osteoblasteiksi.

Avainsanat: luuytimen mesenkymaaliset kantasolut; osteoblastit; suunnattua eriyttämistä

Perinteinen kiinalainen lääketiede uskoo, että munuaiset hallitsevatluut, varastoida esanssia ja tuottaa luuydintä. Sekä kliiniset että kokeelliset tutkimukset ovat vahvistaneet tämän teorian kliinisen ohjaavan merkityksen, mutta tutkimusta luuytimen mesenkymaalisten kantasolujen (MSC) erilaistumisen induktiosta ei ole tehty. M SC:t ovat eräänlaisia ​​pluripotentteja aikuisen kantasoluja, joita esiintyy pääasiassa luuytimessä, mutta myös alkion aikana mesenkymaalista alkuperää olevissa luuston ulkopuolisissa kudoksissa, kuten ihon fibroblasteissa, rasvan kantasoluissa, luustolihasten satelliittisoluissa ja verisuonten endoteelisoluissa. . Luuytimen M SC:t (BM SC:t) ovat luuytimen strooman komponentteja. Sen jälkeen kun ne on eristetty ja viljelty in vitro, tietyissä induktioolosuhteissa, niillä on kyky erilaistua osteoblasteiksi, kondrosyyteiksi, hermosoluiksi, rasvasoluiksi, sydänlihassoluiksi jne. monin tavoin. Luukudostekniikan tärkeimmät siemensolujen lähteet ovat osteoblastit ja BMSC:t. Vaikka osteoblasteilla on hyvä osteogeeninen aktiivisuus, niiden lähde on rajallinen, niitä on vaikea eristää ja saada suurina määrinä, ja niillä ei ole riittävää potentiaalia laajamittaiseen laajenemiseen in vitro, mikä on vaikeaa täyttää kliinisten sovellusten tarpeita luukudostekniikassa; BM SC:illä ei ole vain hyvä osteoblastien erilaistumispotentiaali ja korkea erilaistumispotentiaali. Osteogeeninen aktiivisuus, voimakas proliferaatiopotentiaali ja kätevä lähde voivat tyydyttää autologisen kudostekniikan.

Cistancheekinakosidivoi hoitaaosteoporoosi

1 Materiaali ja menetelmät

1.1 Materiaali

1.1.1 Koeeläimet

Kaksitoista SPF SD -rottaa, jotka painavat 120 g ~ 150 g, eivät rajoitu uroksiin ja naaraisiin, joita tarjoaa Guangzhoun perinteisen kiinalaisen lääketieteen yliopiston kokeellinen keskus.

1.1.2 Reagenssit ja laitteet Haiclone L-DM EM-elatusaine, Haiclone South American Fetal Bovine Serum (FBS), Morinda officinalis, Psoralen, Eucommia, Cistanche, Epimedium kiinalainen lääkejauhe, DM SO (sigma), Alizarin red (Guangzhou Weijia), alkalista fosfataasiväriä (Nanjing Jiancheng Biological Co., Ltd.), 0,25 prosenttia pankreatiinia (GI BCO -yhtiö). 0,22 μm ruiskusuodatin (MI LL Ipo re), 75 cm2:n viljelypullo, 96-kuoppalevy, 6-kuoppalevy (corning). Pyörivä haihdutin, mikrolevylukija (Thermo), jäähdytetty sentrifugi (sigma 3K 15), CO2-inkubaattori (SH ELDO NA -yhtiö).

1.2 Menetelmä

1.2.1 Perinteistä kiinalaista lääketiedettä sisältävän seerumin valmistus

Otetaan 15 0 g raakaa kiinalaista lääkejauhetta, lisätään 10-kertainen määrä 70-prosenttista etanolia, kuumennetaan palautusjäähdyttäen kahdesti, 1 h joka kerta, suodatetaan, yhdistetään suodos, konsentroidaan suodos alennetussa paineessa 300 ml:ksi. jäähdytä huoneenlämmössä ja säilytä jääkaapissa 4 asteessa myöhempää käyttöä varten. Laimenna perinteisen kiinalaisen lääketieteen neste 0,3 g:ksi raakalääkettä/ml ja letkuletkulla, 1 ml joka kerta, kahdesti päivässä, 4 päivän jatkuvan annon jälkeen, veri kerätään vatsa-aortasta, yön yli saostamisen jälkeen, sentrifugoidaan 2500r 20 min. , kerää supernatantti ja neula Steriloi suodattimen läpi ja säilytä -20 asteessa.

1.2.2 MSC:iden erottaminen ja viljely

Kun SD-rotat oli nukutettu vatsaontelon läpi, molempien alaraajojen reisi- ja sääriluu otettiin pois aseptisissa olosuhteissa ja pehmytkudokset puhdistettiin, luunpäät leikattiin rongeurilla, ydinontelo paljastettiin ja 10 ml ruiskua käytettiin imemään L-DM EM:ää, joka sisälsi 10 prosenttia naudan sikiön seerumia. Pese ydinontelo väliaineella toistuvasti, kunnes luu näyttää valkoiselta ja valonläpäisykyky kasvaa. Kerää ydinontelon pesuneste 75 cm2:n viljelypulloon ja aseta se 37-asteiseen 5-prosenttiseen CO 2 -inkubaattoriin. Vaihda neste 2-3 päivän välein.

1.2.3 MSC:iden kulku

Kun solut ovat 9 0 prosenttia täynnä pullon pohjasta, ne pilkotaan 0,25 prosentilla trypsiinillä, pipetoidaan sitten solususpensioon ja siirretään suhteessa 1:3.

1.2.4 MSC:t indusoivat erilaistumista

Kun P4-solut ovat 90 prosenttia ylenkasvuisia, ne pilkotaan 0,25 prosentilla trypsiinillä solususpension valmistamiseksi. Solut kylvetään 2 6-kuoppalevyille, joiden solutiheys on 5 × 106 kuoppaa kohti, ja 6 kuoppaa levyä kohden. Jaettu tyhjäryhmään, Morinda officinalis -ryhmään, Psoralen-ryhmään, Eucommia ulmoides -ryhmään, Cistanche cistanche -ryhmään, epimediumryhmään. Kun solut olivat 80-prosenttisesti täynnä pullon pohjaa, väliaine vaihdettiin. Nollaryhmän alkuperäisen alustan viljelyä jatkettiin ja kiinalaisen lääketieteen ryhmään lisättiin 10 prosenttia kiinalaista lääkettä sisältävää seerumia sisältävää L-DM EM-elatusainetta.

1.2.5 Alkalinen fosfataasivärjäys

Induktioviljelmän 10. päivänä 6-kuoppalevy otettiin ulos ja värjättiin alkalisen fosfataasin värjäyssarjan menetelmän mukaisesti. Tarkkaile tuloksia mikroskoopin alla.

1.2.6 Alizariininpunainen värjäys

Ota 20induktioviljelypäivänä esiin 6-kuoppalevy, ime osteoblastien induktioliuos, pese 3 kertaa P BS:llä, kiinnitä 95-prosenttisella alkoholilla 10 minuutin ajan, lisää 0,1 prosenttia. Alizarin Red-Tr on HCl (pH 8,3), 37-asteinen vesihaude 30 min, tarkkaile tuloksia mikroskoopilla.

Cistancheekinakosidivoi vastustaa apoptoosia ja edistääluutakasvu

2 tulosta

2.1 Solumorfologian havainnointi

MSC:t ovat fibroblastin kaltaisia ​​soluja, jotka muodostavat fusiformin kiinnittyessään seinään (katso kuva 1). Induktioliuoksen lisäämisen jälkeen nollaryhmän solut eivät muuttuneet merkittävästi; 3. päivästä alkaen Morinda officinalis -ryhmän, Eucommia ulmoides -ryhmän, Cistanche deserticola -ryhmän ja Epimedium-ryhmän solut osoittivat aggregoitunutta solujen kasvua ja hieman lisääntynyttä solutilavuutta (katso kuva 2), 14 päivää myöhemmin havaittiin ilmeistä kyhmyjen muodostumista takamikroskoopin alla (katso kuva 3). Psoraleeniryhmän soluissa ei ollut selvää muutosta.

2.2 Alkalinen fosfataasivärjäys

10. päivänä Morinda officinalis -ryhmä, Eucommia ulmoides -ryhmä, Cistanche cistanche -ryhmä ja Epimedium -ryhmä värjättiin alkalisella fosfataasilla. Havaittiin, että solujen aggregaatioalue muuttui violetiksi ja mustaksi (katso kuvio 4) ja soludispersio oli sininen (katso kuvio 5). ). Psoraleeniryhmä ja tyhjä ryhmä olivat negatiivisia.

2.3 Alizariininpunainen värjäys

21. päivänä Morinda officinalis -ryhmä, Eucommia ulmoides -ryhmä, Cistanche-ryhmä, Epimedium-ryhmä Alizarin Red värjäsi valkoisen rakeisen aineen 6-kuoppalevyn pohjalle ja tummanpunaiseksi värjäyksen jälkeen. Jitian-ryhmä, psoraleeniryhmä, eucommia-ryhmä, cistanche-ryhmä, epimediumryhmä. Mikroskoopin alla solujen aggregaatioalueella on punaisia ​​hiukkasia, jotka ovat kalsiumkyhmyjä (kuva 6). Psoraleeniryhmä ja tyhjä ryhmä olivat negatiivisia.

3 Keskustelu

3.1 Perinteistä kiinalaista lääketiedettä sisältävän seerumin valmistus

Perinteisen kiinalaisen lääketieteen koostumus on monimutkainen, ja jokaisen komponentin tutkiminen on vaikeaa. Seerumin farmakologia voi jossain määrin voittaa epävarmien tekijöiden, kuten perinteisen kiinalaisen lääketieteen valmisteiden fysikaalisten ja kemiallisten ominaisuuksien vaikutuksen koetuloksiin, ja se on suhteellisen lähellä lääkkeen todellista biotransformaatiota elimistössä.

Varsinainen prosessi. Toisin sanoen sillä on kaksi suurta etua: ①Se heijastaa yhdisteen biokemiallista muutosvaikutusta kehossa;

②Voit voittaa itse lääkkeen fysikaalisten ja kemiallisten ominaisuuksien suorat häiriöt kokeeseen [1].

Sekä seerumivalmiste että M SC -peräiset eläimet ovat SD-rottia ja seerumin valmistukseen käytetään homologisia eläimiä, jotka voivat vähentää lajierojen aiheuttamaa immuunivastetta ja parantaa koetulosten luotettavuutta [2] ottaen huomioon eläinten aineenvaihdunta. . Erilainen, ota paino, kehon pinta-alan muunnosmenetelmä annettavaksi. Jotkut ihmiset ajattelevat, että on olemassa monia entsyymejä, anti-Body-, komplementteja, sytokiinejä ja muita biologisesti aktiivisia aineita, joilla voi olla suora vaikutus soluihin, viruksiin, taudinaiheuttajiin sekä kudoksiin ja elimiin, joita käytetään in vitro -kokeissa ja jotka voivat häiritä kokeiden tulokset ja vaikuttavat lääkkeen tehon objektiiviseen arviointiin. Farmakologinen häiriö seerumin inaktivoinnin jälkeen [3]. Perinteisen kiinalaisen lääketieteen komponentit ovat kuitenkin monimutkaisia ​​ja farmakologiset vaikutukset kehoon monimutkaisia. Inaktivoimaton seerumi voi paremmin heijastaa lääkkeen vaikutuksia kehossa, eikä kokeen aikana havaittu sytotoksisia vaikutuksia.

3.2 Munuaista tonisoivan kiinalaisen lääketieteen indusoiva vaikutus MSC:iden ohjattuun erilaistumiseen

Luuytimen M SC:t (BM SC:t) ovat luuytimen strooman komponentteja. Sen jälkeen kun ne on eristetty ja viljelty in vitro, tietyissä induktioolosuhteissa, niillä on kyky erilaistua osteoblasteiksi, kondrosyyteiksi, neurosyyteiksi, rasvasoluiksi, kardiomyosyyteiksi jne. monin tavoin. Kokeelliset tutkimukset ovat osoittaneet, että sekä perinteinen kiinalainen lääketiede [4] että yhdiste munuaisia ​​vahvistava kiinalainen lääketiede [5] saavat MSC:t erilaistumaan osteoblasteiksi. Kokeessa viisi kiinalaista lääkeseerumia, jotka on valmistettu viidestä lääkkeestä, joilla on "munuaista vahvistavia ja luita ja lihaksia vahvistavia" vaikutuksia, psoraleenia lukuun ottamatta, voivat indusoida M SC:iden erilaistumisen osteoblasteiksi, mutta spesifinen mekanismi säilyy. tutkittavaksi edelleen.

3.3 Munuaisia ​​vahvistavan perinteisen kiinalaisen lääketieteen sisältävän seerumin kliininen merkitys MSC-solujen erilaistumisen saamisessa osteoblasteiksi.

Luukudostekniikalla on laajat mahdollisuudet kliinisiin sovelluksiin, ja siitä on tullut nykyaikaisen ortopedian tutkimuskeskus. BM SC:t, jotka ovat parhaita siemeniä luukudostekniikalle tällä hetkellä, voivat eliminoida näiden häiritsevien tekijöiden vaikutuksen koetuloksiin ja auttaa vähentämään seerumin ei-solupitoisuutta. Sen vaikutustutkimuksen keskeinen tehtävä on tehdä se mahdollisimman yksinkertaisissa olosuhteissa. Erilaistuvat suoraan osteoblasteiksi ja muuttuvat sitten kypsiksi luusoluiksi. Tällä hetkellä yleisesti käytetyt induktorit MSC:iden erilaistumiseen osteoblasteiksi ovat deksametasoni. Se koostuu C-vitamiinista ja -glyserofosfaattinatriumista. Kliinisesti deksametasonilla on sivuvaikutuksia, kuten infektio, osteonekroosi ja osteoporoosi, ja sillä on merkittävä estävä vaikutus solujen lisääntymiseen in vitro [6, 7], mikä rajoittaa MSC:iden käyttöä indusoijana in vivo transplantaation jälkeen. Munuaisia ​​vahvistava kiinalainen lääketiede saa MSC:t erilaistumaan osteoblasteiksi. Pitkäaikaisessa kliinisessä käytössä munuaisia ​​vahvistavan kiinalaisen lääketieteen myrkyllisiä ja sivuvaikutuksia ei ole havaittu. Siksi sen käytöllä indusoijana in vivo on laaja kliininen sovellusnäkymä.

Lyhyesti sanottuna suurin osa nykyisestä tutkimuksesta M SC:istä luukudostekniikan siemensoluina on vielä koevaiheessa. Tällä hetkellä tutkitaan kuinka saada tarpeeksi MSC:itä lyhyessä ajassa ja saada ne erilaistumaan osteoblasteiksi yksinkertaisilla menetelmillä. Keskity. Vaikka perinteiset kiinalaiset lääkkeet, joilla on munuaisia ​​virkistävä ja luita ja lihaksia vahvistavia vaikutuksia, voivat saada M SC:t erilaistumaan osteoblasteiksi, sillä on valoisa tulevaisuus M SC:iden erilaistumisen indusoijana hidastetun yhtymisen, ei-liittymisen ja murtumien osteoporoosin hoidossa. . Vaikutusmekanismia on vielä tutkittava.

Cistanche echinacosidevoi vastustaa apoptoosia ja edistääluun kasvua