Gomisin N estää melanogeneesiä säätelemällä PI3K/Akt- ja MAPK/ERK-signalointireittejä melanosyyteissä

Ottaa yhteyttä:joanna.jia@wecistanche.com/ WhatsApp: 008618081934791

Abstrakti: Gomisin N, yhdellä Schisandra Chinensiksestä löytyvistä ligniiniyhdisteistä on useissa tutkimuksissa osoitettu olevan antioksidanttisia, kasvaimia estäviä ja tulehdusta ehkäiseviä vaikutuksia. Tässä raportoimme ensimmäistä kertaa Gomisin N:n melanogeenisen tehon nisäkkäillä. soluissa sekä seeprakalan alkioissa. Gomisin N vähensi merkittävästi melaniinipitoisuutta ilman solutoksisuutta. Vaikka se ei kyennyt moduloimaan sienen katalyyttistä aktiivisuuttatyrosinaasiin vitro,Gomisin Nalensi toimivien avainproteiinien ilmentymistasojamelanogeneesi. Gomisin N:n säätelemä melanokortiini 1 -reseptori (MC1R), adenylyylisyklaasi 2, mikroftalmiaan liittyvä transkriptiotekijä (MITF), tyrosinaasi,tyrosinaasiproteiini-1(TRP-1) ja tyrosinaasiin liittyvä proteiini-2 (TRP-2). Lisäksi Gomisin N:llä käsitellyt Melan-A-solut osoittivat kohonneita p-Akt- ja p-ERK-tasoja, mikä tarkoittaa, että PI3K/Akt- ja MAPK/ERK-reittien aktivaatio voi toimia estävästi.melanogeneesi. Vahvistimme myös, että Gomisin vähensi melaniinin tuotantoa tukahduttamalla MITF:n ilmentymisen,tyrosinaasi, TRP-1 ja TRP-2hiiren ja ihmisen soluissa sekä kehittyvissä seeprakalan alkioissa. Yhteistyönä päätämme, ettäGomisin Nestää melaniinin synteesiä estämällä MITF:n ja melanogeenisten entsyymien ilmentymistä, luultavasti moduloimalla PI3K/Akt- ja MAPK/ERK-reittejä.

Avainsanat:Schisandra Chinensis;Gomisin N; lignaani;melanogeneesi; ihon valkaisuun

cistanchella on ihoa valkaisutoiminto

1. Esittely

Melaniini on pigmentti, jota löytyy useimmista eläinten elimistä, kuten ihosta, hiuksista, silmistä, sisäkorvasta, luista, sydämestä ja aivoista [1,2].Melanogeneesion monimutkainen prosessi, jossa on mukana useita signalointireittejä. Melanokortiini 1 -reseptori (MC1R) on keskeinen säätelijämelanogeneesi, välittää signaalia sen ligandien, kuten melanosyyttejä stimuloivan hormonin (MSH) ja adrenokortikotrooppisen hormonin (ACTH) kautta [3]. Orvaskeden melanosyytit biosyntetisoivat ihon melaniinia ja siirtyvät sitten keratinosyytteihin, joissa niillä on tärkeä rooli ihon suojauksessa absorboimalla auringonvalon UV-säteilyä ja poistamalla reaktiivisia vapaita radikaaleja [4,5]. Melaniinin synteesiä ja siirtymistä ihossa ja karvatupeissa säätelee sen esiasteiden saatavuus [6]. L-tyrosiini ja L-dihydroksifenyylialaniini (L-DOPA), melanogeenisten entsyymien tärkeimmät substraatit, toimivat myös hormonin kaltaisina säätelijöinä melanogeneesissä [7]. Toisaalta melaniinin ylituotanto aiheuttaa ei-toivottuja iho-ongelmia, kuten pisamia ja melasmaa [8,9]. Melanogeneesi voi vaikuttaa normaalien ja pahanlaatuisten melanosyyttien käyttäytymiseen moduloimalla solujen elastisia ominaisuuksia [10]. Vaikka ihosoluissa ilmennetyillä serotoniinin ja melatoniinin reseptoreilla on keskeinen rooli solujen homeostaasin ylläpitämisessä, melaniinin liiallinen tuotanto hallitsemattomien hormonaalisten muutosten kautta voi aiheuttaa patologisia tiloja ihossa [11].

Siten on tehty laajoja yrityksiä selventää molekyylimekanismeja, jotka ohjaavat melanogeneesiä ensisijaisena vaiheena hyperpigmentaaristen ihosairauksien hoidossa. Lisäksi erilaisiaihon valkaisuunaineita, jotka estävät melaniinin synteesiä, on tunnistettu kasvi- ja ei-kasviuutteista ja niitä on käytetty kaupallisesti kosmeettisissa valmisteissa [12,13]. Yleisimmin käytettyjä valkaisuaineita ovat hydrokinoni, mekinoli, arbutiini, kojiinihappo, askorbiinihappo ja retinoidihappo [12,14]. Niiden käytöllä on kuitenkin useita rajoituksia hoidettaessa akuutteja tai kroonisia hyperpigmentaation oireita ihmisillä. Esimerkiksi hydrokinoni, vaikka sitä on käytetty pitkään pigmentin poistamiseen 1960-luvulta lähtien, voi aiheuttaa ihoärsytystä ja kosketusihottumaa [15,16]. Se johtaa myös DNA-vaurioihin lisäämällä reaktiivisten happilajien tuotantoa ja eksogeenisen okronoosin kehittymistä nisäkässoluissa [17,18]. Muut tututtyrosinaasiinhibiittoreilla, kuten kojiinihapolla ja askorbiinihapolla, ei ole vain huono ihon läpäisy, stabiilisuus ja valkaisuteho, vaan ne voivat myös aiheuttaa sytotoksisuutta, ihotulehdusta ja punoitusta pitkäaikaisessa käytössä [19,20]. Tässä suhteessa on kasvava tarve kehittää turvallisempia ja tehokkaampia valkaisuaineita ihmisihon hyperpigmentaation hoitoon. Perinteisessä lääketieteessä käytetyt luonnolliset yrtit voivat tarjota vaihtoehtoisia lähteitä uusien valkaisuaineiden tunnistamiseen, jotka hallitsevat keskeisiä vaiheitamelanogeneesivähemmän tai ei ollenkaan sivuvaikutuksia [21].

Schisandra chinensis, joka tunnetaan myös pohjoisen hienomakuisena marjana, tavataan luontaisesti Koillis-Kiinassa, Kaukoidässä Venäjällä, Japanissa ja Koreassa [22]. Tätä kasvia on pitkään käytetty yösokeuden, ihon palovamman, aseptisen tulehduksen ja maksasairauksien hoitoon perinteisessä itämaisessa lääketieteessä [23,24]. S. chinensis -hedelmäuutteella ja sen lignaaniyhdisteillä on osoitettu olevan erilaisia ​​farmakologisia vaikutuksia hiiren solulinjoissa. Esimerkiksi Schisandra A:lla ja C:llä on antioksidatiivisia vaikutuksia, kun taas Schisandra B:llä on antifibroottisia, anti-inflammatorisia, antioksidantteja ja anti-apoptoottisia vaikutuksia [25]. Toinen ligniiniyhdisteGomisin N(Kuva 1A) on raportoitu estävän oksidatiivisen stressin aiheuttamaa apoptoosia estämällä sytokromi C:n vapautumista mitokondrioista sytoplasmaan, kaspaasi 3:n ja PARP:n pilkkoutumista ja Ca2 plus -indusoitua mitokondrioiden läpäisevyyden siirtymistä H9c2-rotan sydänlihassoluissa [7,8]. Mielenkiintoista on, että useat tutkimukset, joissa käytettiin hiirimalleja ja ihmisen ihosolulinjoja, ovat paljastaneet S. chinensiksen terapeuttisen potentiaalin ihosairauksien hoidossa. Lee et ai. raportoivat, että S. chinensis -hedelmän metanoliuute lievitti kosketusihottuman oireita vähentämällä tulehdusta edistävien sytokiinien, kuten TNF- ja IFN-, tuotantoa paikallisesti käytettynä [8,24]. Kang et ai. osoitti, että Schisandra Fructus -vesiuute esti IKB-aktivaatiota ja estäen siten TNF-, IL-6- ja GM-CSF-tuotannon ihmisen syöttösolulinjassa HMC-1 [26]. Nämä havainnot saivat meidät olettamaan että S. chinensis lignans saattaa vaikuttaa ihosolujen toimintaan laajemmin. Tässä tutkimuksessa pyrimme tutkimaan oletettuja roolejaGomisin N, yksi tärkeimmistä lignaaniyhdisteistä S. Chinensisissä, säätelyssämelanogeneesiarvioiden siten sen mahdollista käyttöä kosmeettisena aineena. Täällä ilmoitamme siitäGomisin Nestää melaniinin biosynteesiä ilman solutoksisuutta ihmisen ja hiiren soluissa sekä seeprakalan alkioissa.

2. Tulokset

2.1. Gomisin N:n vaikutukset melaniinin muodostumiseen ja solujen elinkelpoisuuteen

Gomisin N:n vaikutusten tarkistamiseksimelanogeneesi, käsittelimme hiiren melanosyyttejä erilaisilla pitoisuuksillaGomisin N72 tunnin ajan ja arvioi sitten muutokset melaniinipitoisuudessa. Gomisin N -hoito vähensi melaniinipitoisuutta sekä normaalissa melanosyyttisolulinjassa Melan-A että B16F10-melanoomasoluissa annoksesta riippuvaisella tavalla ilman solutoksisuutta (kuvio 1B, C). Havaitsimme, että Gomisin N esti -MSH:n indusoimaa melaniinin tuotantoa B16F10-soluissa, mikä oli verrattavissa PTU-käsittelyllä saatuihin tuloksiin [27] (kuvio 1C). Arvioida, vähentääkö melaniiniaGomisin NHoito johtuu tyrosinaasin vähentyneestä aktiivisuudesta, suoritimme L-DOPA-värjäysmäärityksen normaaleissa ihmisen epidermaalisen melanosyyttisoluissa (NHEM). Kuten kuvasta 1E näkyy, Gomisin N:llä käsitellyt NHEM-solut osoittivat alentuneita L-DOPA-tasoja verrattuna käsittelemättömiin soluihin. Gomisin N:n melaniinin tuotantoa estävä vaikutus ei kuitenkaan ollut merkittävä ihmisen melanooman MNT-1-soluissa (kuva 1D) .

2.2. Gomisin N:n vaikutukset tyrosinaasiaktiivisuuteen

Tutkimaan onkoGomisin Nestäätyrosinaasiaktiivisuus in vitro, käytimme sienityrosinaasia ja B16-melanoomasolulysaatteja. Positiivisena kontrollina käytettiin Kojic-happoa, joka on hyvin tunnettu tyrosinaasin estäjä. Sienityrosinaasilla käsiteltynä, kun taas kojiinihappo vähensi merkittävästi entsymaattista aktiivisuutta, gomisin N ei aiheuttanut mitään muutosta L-DOPA:n muuttumisessa dopakromiksi (kuvio 2A). B16-melanoomasoluilla käsitelty Gomisin N johti kuitenkin laskuun. sisääntyrosinaasisolulysaatin aktiivisuus annoksesta riippuvalla tavalla (kuvio 2B). Lisäksi, kun niitä käsitellään yhdessä -MSH:lla inB16-soluissa,Gomisin Nkäänsi -MSH:n stimuloiman dopakromin muodostumisen lisääntymisen (kuvio 3C). Huomattakoon, että Gomisin N näytti olevan tehokkaampi kuin kojiinihappo estämään solujen toimintaatyrosinaasiaktiivisuusB16-soluista -MSH-ärsykkeellä. Nämä havainnot viittaavat siihen, että hiiren ja ihmisen soluissa havaittu GomisinN:n melaniinin tuotantoa estävä vaikutus (kuva 1) ei johdu sen tehtävästä estää suoraan tyrosinaasin katalyyttistä aktiivisuutta. On kuitenkin edelleen mahdollista, että Gomisin N säätelee tyrosinaasin tai muiden proteiinien ilmentymistä, joilla on keskeinen roolimelanogeneesi.

2.3. Gomisin N:n vaikutukset MC1R-signalointireitin inaktivointiin

Pyrimme selventämään taustalla olevaa mekanismia, joka on vastuussa GomisinN:n estävästä vaikutuksesta melaniinin tuotantoon. Me perustelimme senGomisin Nsaattaa säädellä signaaliproteiineja, jotka ovat mukanamelanogeneesija siten estävät melaniinin synteesiä. Melanokortiini 1 -reseptori (MC1R) on amelanosyyttinen G-proteiiniin kytketty reseptori, joka toimii keskeisenä melaniinin synteesin säätelijänä. MC1R:n aktivoituminen sen ligandilla -MSH:lla tai adrenokortikotrooppisella hormonilla (ACTH) johtaa adenylyylisyklaasin lisääntymiseen, mikä puolestaan ​​lisää solunsisäistä cAMP-tasoa [2,3]. Tämän seurauksena MITF:n transkriptiotaso nousee Protein kinase-C (PKA)/responsive element-bindingprotein (CREB) -reitin kautta [2,28]. Arvioidaksemme Gomisin N:n säätelyvaikutusta MC1R-signalointireitille, tarkistimme MC1R:n ja sen alavirran signalointimolekyylien ilmentymistasot Melan-A-solujen Gomisin N:llä käsittelyn jälkeen. Havaitsimme, että Gomisin N alensi merkittävästi sekä MC1R:n että adenylyylisyklaasi 2:n proteiinitasoja. annoksesta riippuvalla tavalla (kuvat 3A–C). Kuten odotettiin,Gomisin N-käsitellyt solut osoittivat myös alentuneet MITF:n ja sen tunnettujen kohteiden tyrosinaasin, TRP-1 ja TRP-2 proteiinitasot (kuvio 3A, D–G). Nämä havainnot viittaavat siihen, että Gomisin N estää melaniinia tuottavia entsyymejä inaktivoimalla MITF:n MC1R-signalointireitin kautta.

2.4. Gomisin N:n vaikutukset Akt:n ja ERK1/2:n fosforylaatioon melan-A-soluissa

PI3K/Akt- ja MAPK/ERK-polkujen tiedetään osallistuvan melanogeneesiin transkriptionaalisesti tai transkription jälkeisessä säätelyssä MITF:ää [29,30]. Arvioidaksemme, vaikuttaako GomisinN näihin signalointireitteihin, arvioimme Akt:n ja ERK1/2:n fosforylaatiotilan Western blot -analyysillä. Kuten kuvasta 3H–J näkyy, suuriannoksinen käsittely (30 µM).Gomisin Nparansi merkittävästi sekä Akt:n että ERK:n fosforylaatiota. Nämä tiedot osoittavat, että Gomisin N:n estävä vaikutus onmelanogeneesiliittyy todennäköisesti P13K/Akt- ja MAPK/ERK-reitteihin.

2.5. Gomisin N esti melanogeneesiä seeprakalan alkioissa

Seuraavaksi pyrimme tutkimaan, onko Gomisin N tehokas estossamelanogeneesiin vivo. Tätä tarkoitusta varten käsittelimme seeprakalan alkioita Gomisin N:llä 72 tunnin ajan pitoisuuksilla 1, 10, 20 ja 30 µM ja mittasimme sitten melanogeenisten proteiinien ilmentymistasot. Havaitsimme, että Gomisin N -hoito esti melaniinin muodostumista kehittyvissä seeprakalan alkioissa.Gomisin N-käsitellyt alkiot osoittivat melaniinipitoisuuden vähenemistä pitoisuudesta riippuvaisella tavalla verrattuna käsittelemättömään kontrolliin (kuvio 4). Huomasimme myös, että proteiinitasottyrosinaasiMITF, TRP-1 ja TRP-2 vähentyivät Gomisin N -hoidolla (kuva 5). Nämä tulokset osoittavat, että Gomisin N estää melanogeneesiä in vivo säätelemällä transkriptiotekijää MITF ja sen kohteitatyrosinaasi, TRP-1 ja TRP-2.

2.6. Gomisin N käänsi rapamysiinin aiheuttaman melanogeneesin ihmisen MNT:ssä-1

Vaikka Gomisin N esti merkittävästimelanogeneesiMelan-A- ja B16-soluissa sekä seeprakalan alkioissa emme havainneet sen vaikutusta ihmisen MNT-1-melanoomasoluihin. Odotimme, että Gomisin N:n vaikutus saattaa olla havaittavissa MNT-1-soluissa olosuhteissa, joissa melanogeneesiä säätelee sopiva ärsyke. Rapamysiinin on osoitettu indusoivan melanogeneesiä lisäämällä tyrosinaasiaktiivisuutta ja MITF:n, tyrosinaasin, TRP-1 ja TRP-2 [31] proteiinitasoja, osittain autofagian aktivoinnin kautta [32]. Seurasimme tasojatyrosinaasiMITF, TRP-1 ja TRP-2 MNT-1-soluissa Western blot -analyysillä, Gomisin N andrapamysiinillä suoritetun yhteishoidon jälkeen. Rapamysiinihoito indusoi merkittävästi MITF-, TRP-1- ja TRP-2-tasoja, mutta sillä ei ollut vaikutustatyrosinaasitasot (kuva 6). Gomisin N -hoito kuitenkin kumosi merkittävästi rapamysiinin vaikutukset MITF:iin, TRP-1- ja TRP-2-arvoihin pitoisuudesta riippuvaisella tavalla. Käänteinen vaikutusGomisin Nrapamysiiniä vastaan ​​oli lupaavampi pitoisuuksilla 20 ja 30 µM kuin 10 µM. Nämä tulokset viittaavat siihen, että Gomisin N estäämelanogeneesiihmisen MNT-1 melanoomasoluissa säätelemällä transkriptiotekijää MITF ja sen kohteita TRP-1 ja TRP-2.

3. Keskustelu

Melaniinin päätehtävä on suojata ihosoluja UV-säteilyltä [33–35]. Hyperpigmentaatio, joka johtuu ihon melaniinin ylituotannosta, aiheuttaa ei-toivottuja kosmeettisia ongelmia ja liittyy ihottumaan ja ihosyöpään. Useat raportit ovat ehdottaneetmelanogeneesitärkeä kohde metastaattisen melanooman hoidossa [36,37]. Siten on kasvava tarve kehittää melanogeenisiä aineita, jotka säätelevät melanogeneesiä ilman solutoksisuutta [38]. Ihon melanogeneesiin liittyy useita reittejä [39,40]. Sitoutuessaan ligandiin MC1R tehostaa adenylyylisyklaasin aktiivisuutta, mikä myöhemmin lisää cAMP:n solunsisäisiä tasoja [41,42]. PKA/CREB-reitin cAMP-riippuvaisen aktivaation on laajalti raportoitu lisäävän MITF:n transkriptiotasoja, mikä tehostaa melaniinin synteesiä [43]. MITF toimii kolmen tärkeimmän melanogeenisen entsyymin tyrosinaasin, TRP-1 ja TRP-2 pääsäätelijänä selkärankaisilla [3,21,44]. Nämä entsyymit ovat kalvon läpäiseviä proteiineja, jotka sijaitsevat melanosyyttien melanosomaalisessa kalvossa. Tyrosinaasi säätelee nopeutta rajoittavaa vaihettamelanogeneesimuuntamalla L-tyrosinaasi L-DOPA:ksi [23]. TRP-1 ja TRP-2 ovat myös tärkeitä melaniinin synteesissä, vaikka niiden toimintoja ei täysin ymmärretä.

Tässä tutkimuksessa Gomisin N, S. chinensiksen lignaaniyhdiste, osoitti pigmenttiä poistavaa aktiivisuutta ilman solutoksisuutta. Gomisin N esti melaniinin synteesiä viljellyissä nisäkässolulinjoissa sekä seeprakalan alkioissa. Gomisin N näytti olevan tehokkaampi kuin positiivinen kontrolli PTU, joka esti melaniinin tuotantoa Melan-A-soluissa (kuvio 1B). Gomisin N vähensi melaniinipitoisuutta pitoisuudesta riippuvaisella tavalla. Verrattuna käsittelemättömään kontrolliryhmään, 10 uMGomisin Nalensi melaniinipitoisuutta noin 40 prosenttia ilman solumyrkyllisyyttä. 10-µM Gomisin N:n melanogeeninen aktiivisuus oli verrattavissa 100-µM PTU:n melanogeeniseen aktiivisuuteen Melan-A-soluissa. Samoin Gomisin näytti olevan tehokkaampi kuin PTU -MSH-aktivoiduissa B16F10-soluissa, joissa 5-- ja10-µM Gomisin N:n vaikutukset olivat verrattavissa 10-- ja {{12-soluihin. }}µM PTU (kuvio 1C). Gomisin N:llä käsitellyt NHEM-solut osoittivat alentuneita L-DOPA-tasoja, mikä viittaa siihen, että GomisinN estäätyrosinaasiaktiivisuus viljellyissä soluissa (kuvio 1E). Nämä havainnot saivat meidät tutkimaan tarkemmin taustalla olevaa mekanismia, jolla Gomisin N estää melanogeneesiä.

Tutkimme, onkoGomisin Nmoduloi suoraan katalyyttistä aktiivisuuttatyrosinaasiin vitro. Toisin kuin Kojihapolla, Gomisin N ei osoittanut inhiboivia vaikutuksia sienten tyrosinaasiaktiivisuuteen (kuvio 2A). Gomisin N alensi kuitenkin merkittävästi sellulaarista tyrosinaasiaktiivisuutta B16-melanoomasolulysaateissa sekä -MSH-käsittelyn kanssa että ilman sitä (kuvio 2B, C). Gomisin N:n solutyrosinaasiaktiivisuuden eston -MSH-ärsykkeellä havaittiin olevan merkittävämpi kuin positiivisen kontrollin Kojic-hapon (kuvio 2C).

Oletimme, että Gomisin N:n anti-melanogeeninen toiminta saattaa ilmetä tyrosinaasin ja tyrosinaaseihin liittyvien proteiinien (TRP:iden) transkriptionaalisen tai posttranskriptionaalisen säätelyn kautta. Tämän validoimiseksi mittasimme signalointimolekyylien ilmentymistasoja MC1R-reitillä, joka on pääasiallinen tekijä melaniinintuotannon määrä ja laatu melanosyyteissä. Odotettiin, että Gomisin N alensi MC1R:n ja adenylyylisyklaasien 2 tasoja Melan-A-soluissa (kuvio 3A–C). Lisäksi,Gomisin Nheikensi MITF:n ja sen kohdeproteiinien, mukaan lukien tyrosinaasin, TRP-1 ja TRP-2, ilmentymistä (kuvat 3A, D–G). Nämä tulokset viittaavat siihen, että melaniinipitoisuuden alentuneet tasot Gomisin N -hoidon aikana johtuvat MC1R-reitin deaktivoitumisesta.

Toisaalta PI3K/Akt- ja MAPK/ERK-reitit voivat fosforyloida MITF:n ja siten moduloida sen aktiivisuutta jälkitranskriptionaalisesti [45]. Kuitenkin PI3K/Akt- ja MAPK/ERK-polkujen aktivoinnin kokonaisvaikutusmelanogeneesion kiistanalainen. Sekä PI3K/Akt- että MAPK/ERK-reitit aktivoituvat konstitutiivisesti ihmisen melanoomassa kumuloituneiden mutaatioiden vuoksi [46]. C2--keramidivälitteisen depigmentaation tiedetään tapahtuvan Mel-Ab-soluissa p-Akt-tasojen alenemisen kautta [47]. On olemassa useita luonnollisia yhdisteitä, jotka aktivoivat melanogeneesiä lisäämällä p-ERK-tasoja B16-melanoomasoluissa [28]. Sitä vastoin on myös näyttöä siitä, että kohonneet p-ERK- ja p-Akt-tasot estävät melaniinin synteesiä [28,48]. Melanogeneesin monimutkaisuuden säätely voidaan osittain selittää sillä, että fosforylaatio tehostaa MITF:n transkriptioaktiivisuutta, mutta samalla indusoi MITF:n ubiquitiosta proteosomeista riippuvaa hajoamista [26,49–51]. Tietomme osoittivat, että sekä p-Akt- että p-ERK-tasot lisääntyivät Gomisin N:llä käsitellyissä Melan-A-soluissa (kuva 3H–J). Tämä tarkoittaa, että PI3K/Akt- ja MAPK/ERK-reitit voivat osaltaan estää melaniinin tuotantoa.

Vahvistimme edelleen Gomisin N:n melanogeenisen vaikutuksen seeprakalan in vivo -mallissa. Gomisin N:llä käsitellyt seeprakalan alkiot osoittivat merkittävän melaniinin pigmentaation vähenemisen (kuva 4). Lisäksi Gomisin N alensi merkittävästityrosinaasi, MITF, TRP-1 ja TRP-2 seeprakalan alkioiden kehittämisessä. Nämä havainnot yhdessä viittaavat siihenGomisin Nindusoi depigmentaatiota vähentämällä MITF:n ja melanogeenisten entsyymien ilmentymistä in vivo. Gomisin N:n melanogeeninen vaikutus vahvistettiin edelleen rapamysiinin stimuloimissa ihmisen melanooma MNT-1 -soluissa. Vaikka Gomisin N johti vain pieniin muutoksiin melaniinipitoisuudessa MNT-1-soluissa (kuva 1D), se oli tehokas kumoamaan rapamysiinin aiheuttaman MITF:n, TRP-1- ja TRP-2-tason noususäätelyn pitoisuudesta riippuvaisella tavalla (kuvat 6A, C–E). Kaiken kaikkiaan sääntelyvaikutusGomisin NMITF:ssä ja melanogeenisissa entsyymeissä havaittiin toistettavasti hiiren ja ihmisen soluista sekä seeprakalan alkioista.

Yhteenvetona tämä teos viittaa siihen, että Gomisin N:llä voi olla korkea potentiaali romaaninaihon valkaisuunagentti. Gomisin N näyttää estävänmelanogeneesitukahduttamalla MITF:n ilmentymistä MC1R-reitin kautta sen sijaan, että moduloisit suoraan MITF:n katalyyttistä aktiivisuutta.tyrosinaasija TRP:t. Vaikka yksityiskohtaiset mekanismit ovat vielä selvittämättä, Gomisin N:n aiheuttama depigmentaatio liittyy todennäköisesti PI3K/Akt- ja MAPK/ERK-reittien aktivoitumiseen (kuva 7).

4. Materiaalit ja menetelmät

4.1. Materiaalit

RPMI1640 ostettiin Gibco-BRL:ltä (Gaithersburg, MD, USA). Dulbeccon modifioitu Eaglen elatusaine (DMEM), sikiön naudan seerumi (FBS) ja penisilliini-streptomysiini (PS) ostettiin Hyclonelta (Carlsbad, CA, USA). Melanosyyttien kasvualusta ostettiin PromoCelliltä (Heidelberg, Saksa). Fenyylimetyylisulfonyylifluoridi (PMSF), 12-O-tetradekanoyyliforboli-13-asetaatti (TPA), Kojihappo, 1-fenyyli-2-tiourea (PTU), sienityrosinaasi, 3,{{ 9}}dihydroksi-l-fenyylialaniini (L-DOPA), -MSH, dimetyylisulfoksidi (DMSO) ja paraformaldehydi ostettiin SigmaChemical Co.:lta (St. Louis, MO, USA).Gomisin Nyhdisteen toimitti Chul Young Kim (Hanyang University, Ansan, Korea). Rapamysiini ostettiin Sigma-Aldrichilta (St. Louis, MO, USA).

4.2. Soluviljely

Hiiren melanoomasolulinja B16F10 toimitettiin Korean Cell Line Bankista (Soul, Korea). Hiiren melanosyyttien Melan-A-solut [52] olivat antelias lahja tohtori Byeong Gon Leeltä (SkinResearch Institute, Amore Pacific Co., Yongin). -si, Korea). Ihmisen MNT-1-melanoomasolut tarjosi avokätisesti Aeyeong Lee (Lääketieteellinen kollaasi Donggukin yliopistossa, Goyang-si, Korea). Primääriset normaalit ihmisen epidermaaliset melanosyytit (NHEM) ostettiin PromoCelliltä (Heidelberg, Saksa). Melan-A-soluja kasvatettiin RPMI 1640 -elatusaineessa (Gibco, Carlsbad, CA, USA), jota oli täydennetty 10 prosentilla FBS:llä, 1 prosentilla PS:llä ja 200 nM TPA:lla. DMEM:ää, jota oli täydennetty 10 prosentilla FBS:llä ja 1 prosentilla PS:llä, käytettiin Melan-A-solujen ja NHEM-solujen ylläpitämiseen. Kaikkia soluja inkuboitiin 37 °C:ssa 5-prosenttisessa CO2-inkubaattorissa.

4.3. Melaniinipitoisuuden mittaus

Melan-A-solut kylvettiin 24-kuoppalevylle (1 × 105 solua/kuoppa), käsiteltiinGomisin Nja inkuboitiin sitten 72 tuntia. 72 tunnin kuluttua melaniinipitoisuus mitattiin, kuten aiemmin on kuvattu [53]. Lyhyesti sanottuna, elatusaineen poistamisen jälkeen solut pestiin kolme kertaa PBS:llä. Sen jälkeen jokaiseen kuoppaan lisättiin natriumhydroksidiliuosta (1 ml, 1 N) melaniinin liuottamiseksi. Absorbanssi aallonpituudella 405 nm mitattiin käyttämällä mikrolevylukijaa. Tämä määritys toistettiin B16F10-soluilla (2 × 104 solua/kuoppa) ja MNT{10}}-soluilla noudattaen samaa menetelmää.

4.4 Western Blot -analyysi

Melan-A-solut kylvettiin 100 mm:n maljoille (1 x 106 solua/malja) ja käsiteltiin 1, 5 tai 10 uM:llaGomisin Nkolmen päivän ajan 37 ◦C:ssa. Solut pestiin PBS:llä ja kerättiin sitten kaapimella. Irrotetut solut laitettiin 1 ml:aan PBS:ää ja sentrifugoitiin nopeudella 75 00 rpm 5 minuuttia. Ylemmän liuoksen poistamisen jälkeen solupelletit hajotettiin lyysipuskurilla (50 mM Tris-HCl, pH 8.{15}}, 0,1 % SDS, 150 mM NaCl, 1 % NP-40, 0,02 % natriumatsidia, 0,5 % natriumdeoksikolaattia, 100 ug/ml PMSF, 1 g/ml aprotiniinia) 24 tunnin ajan 4 °C:ssa. Kokonaisproteiinit uutettiin ultrasentrifugilla 12, 000 rpm 30 minuutin ajan 4 °C:ssa. Proteiinipitoisuus mitattiin käyttämällä Bradford-määritystä. Proteiinit (30 ug) erotettiin käyttämällä 10-prosenttista natriumdodekyylisulfaatti-polyakryyliamidigeelielektroforeesigeeliä (SDS-PAGE) ja siirrettiin anitroselluloosakalvolle. Kalvoa estettiin 1 tunti 5-prosenttisella rasvattomalla maidolla Tris-puskuroidussa suolaliuoksessa, jossa oli Tween-20 (TBST), ja inkuboitiin sitten 12 tuntia 4 ◦C:ssa primääristen vasta-aineiden kanssa, jotka kohdistuivat -tubuliiniin (Santa Cruz, CA, USA). ), MITF (Cell Signaling, Danvers, MA, USA), tyrosinaasi (Cell Signaling), ERK (Cell Signaling), phospho-ERK (Cell Signaling), AKT (Cell Signaling), fosfo-AKT (Cell Signaling), MC1R ( Santa Cruz), adenylyylisyklaasit 2 (Santa Cruz), TRP-1 (Santa Cruz) ja TRP-2 (Santa Cruz). Primaaristen vasta-aineiden poistamisen jälkeen kalvot pestiin kolme kertaa TBST:llä ja inkuboitiin sekundaarisen kanssa. vasta-aineita (kanin anti-vuohen IgG-HRP; hiiren anti-kanin HRP, Santa Cruz) 1 tunnin ajan. Kalvoja käsiteltiin tehostetulla kemiluminesenssireagenssilla käyttämällä ChemiDoc XRS plus -kuvausjärjestelmää (Bio-Rad, Hercules, CA, USA). Nauhojen densitometrinen analyysi suoritettiin Image MasterTM 2D Elite -ohjelmistolla (versio 3.1, GE Healthcare, Chicago, IL, USA).

4.5. Tyrosinaasin aktiivisuusmääritys

Arvioida Gomisin N:n inhiboiva vaikutus sieniintyrosinaasiaktiivisuus, tyrosinaasia inkuboitiin 1, 5 tai 10 uM kanssaGomisin Ntai positiivinen kontrolli Kojic acid. Jokainen näyte liuotettiin metanoliin. L-DOPA (8,3 mM) ja sienityrosinaasi (125 U) laimennettiin 80 mM fosfaattipuskuriin (pH 6,8). 40 µl kutakin näytettä ja 120 µl L-DOPA:ta sekoitettiin 96-kuoppalevyllä, minkä jälkeen lisättiin 40 µl laimennettua sienityrosinaasia. Levyjä inkuboitiin sitten 15 minuuttia, ja absorbanssi mitattiin 490 nm:ssä käyttäen mikrolevylukijaa.

Tyrosinaasiaktiivisuus B16-melanoomasolulysaateissa mitattiin -MSH-käsittelyn kanssa tai ilman sitä, kuten aiemmin ovat kuvanneet Ohguchi et ai. [54] pienin muutoksin. Solulysaatti valmistettiin edellä Western Blot -analyysiosassa kuvatulla tavalla. Supernatantin kokonaisproteiinit mitattiin Bradford-määrityksellä käyttäen naudan seerumialbumiinia standardina [55]. Sama määrä proteiineja laimennettiin ja käytettiin tyrosinaasiaktiivisuusmäärityksessä.

estävät tyrosinaasin aktiivisuutta

4.6. L-DOPA-värjäys NHEM-soluissa

NHEM-solut kylvettiin {{0}}kuoppalevylle ja inkuboitiin 72 tuntia Gomisin N:n kanssa. Solut kiinnitettiin 4-prosenttisella paraformaldehydillä 40 minuutin ajan, minkä jälkeen niitä käsiteltiin 0,1-prosenttisella Triton X{:lla. {6}} 2 minuutin ajan. Jokaiseen kuoppaan lisättiin L-DOPA (0,1 prosenttia), minkä jälkeen inkuboitiin 2 tuntia. Liuoksen poistamisen jälkeen solut pestiin kahdesti PBS:llä. Kuvat on kuvattu mikroskoopilla.

4.7. Seeprakalakokeet

Seeprakalan alkiot saatiin Zebrafish Resource Bankista (Daegu, Korea). Alkioita käsiteltiin Gomisin N:llä 72 tunnin ajan. Depigmentoiva vaikutusGomisin Nseeprakalan alkioissa havaittiin stereomikroskoopilla. Western blot -analyysiä varten Gomisin N:llä käsitellyt alkiot hajotettiin käyttämällä lyysipuskuria, josta valmistettiin kokonaisproteiinit edellä mainitulla tavalla.

5. Johtopäätökset

Tuloksemme tukee näkemystä, että Gomisin N:llä on suuri potentiaali käyttää funktionaalisena elintarvikkeena jaihon valkaisuunagentti.Gomisin Non yksi S. Chinensiksen tärkeimmistä ligniiniyhdisteistä. Faktoissa. Chinensis on kasviperäinen lääke, jota käytetään monien ihmisten sairauksien parantamiseen. Epidemiologiset lisätutkimukset ovat kuitenkin tarpeen Gomisin N:n turvallisuuden osoittamiseksi iholla. Näin ollen in vivo -tutkimukset ja kliiniset kokeet pystyvät osoittamaan selkeämmin GomisinN:n tehokkuuden. Yhteenvetona tämä tutkimus viittaa siihenGomisin Nvoi olla mahdollinen hypopigmenttiaine ja luonnollinenihon valkaisuunehdokas kosmetiikkateollisuuteen.

cistanche parantaa valkaisua

Viitteet

1. Alaluf, S.; Atkins, D.; Barrett, K.; Blount, M.; Carter, N.; Heath, A. Epidermaalisen melaniinin vaikutus ihmisen ihonvärin objektiivisiin mittauksiin. Pigment Cell Res. 2002, 15, 119–126. [CrossRef] [PubMed]

2. D'Mello, SA; Finlay, GJ; Baguley, BC; Askarian-Amiri, ME Signaling Pathways in Melanogenesis. Int. J. Mol. Sci. 2016, 17, 1144. [CrossRef] [PubMed]

3. Slominski, A.; Tobin, DJ; Shibahara, S.; Wortsman, J. Melaniinin pigmentaatio nisäkkäiden ihossa ja sen hormonaalinen säätely. Physiol. Rev. 2004, 84, 1155–1228. [CrossRef] [PubMed]

4. Herrling, T.; Jung, K.; Fuchs, J. Melaniinin rooli ihon vapaiden radikaalien suojelijana ja sen rooli vapaiden radikaalien indikaattorina hiuksissa. Spectrochim Acta A Mol. Biomol. Spectrosc. 2008, 69, 1429–1435. [CrossRef] [PubMed]

5. Brozyna, AA; Jozwicki, W.; Roszkowski, K.; Filipiak, J.; Slominski, AT Melaniinipitoisuus melanomametastaasseissa vaikuttaa sädehoidon lopputulokseen. Oncotarget 2016, 7, 17844–17853. [CrossRef] [PubMed]

6. Slominski, A.; Wortsman, J.; Plonka, PM; Schallreuter, KU; Paus, R.; Tobin, DJ Karvatupen pigmentaatio.J. Tutki. Dermatol. 2005, 124, 13–21. [CrossRef] [PubMed]

7. Slominski, A.; Zmijewski, MA; Pawelek, J. L-tyrosiini ja L-dihydroksifenyylialaniini hormonin kaltaisina melanosyyttien toimintojen säätelijöinä. Pigment Cell Melanoma Res. 2012, 25, 14–27. [CrossRef] [PubMed]

8. Lee, AY Viimeaikainen edistyminen melasman patogeneesissä. Pigment Cell Melanoma Res. 2015, 28, 648–660. [CrossRef][PubMed]9. Speeckaert, R.; van Gele, M.; Speeckaert, MM; Lambert, J.; van Geel, N. Hyperpigmentaatiosyndromien biologia. Pigment Cell Melanoma Res. 2014, 27, 512–524. [CrossRef] [PubMed]

10. Slominski, RM; Zmijewski, MA; Slominski, AT Melaniinipigmentin rooli melanoomassa. Exp. Dermatol.2015, 24, 258–259. [CrossRef] [PubMed]11. Slominski, A.; Wortsman, J.; Tobin, DJ Ihon serotoninerginen/melatoninerginen järjestelmä: Suojaa paikka auringon alla. FASEB J. 2005, 19, 176–194. [CrossRef] [PubMed]

12. Sarkar, R.; Arora, P.; Garg, KV Cosmeceuticals hyperpigmentaatioon: Mitä on saatavilla? J. CutaneousAesthet. Surg. 2013, 6, 4–11. [CrossRef] [PubMed]

13. Miyamura, Y.; Coelho, SG; Wolber, R.; Miller, SA; Wakamatsu, K.; Zmudzka, BZ; Ito, S.; Smuda, C.; Passeron, T.; Choi, W.; et ai. Ihmisen ihon pigmentaation ja ultraviolettisäteilyn vasteiden säätely. Pigment Cell Res. 2007, 20, 2–13. [CrossRef] [PubMed]

14. Davis, EC; Callender, VD Tulehduksen jälkeinen hyperpigmentaatio: Katsaus ihon värin epidemiologiaan, kliinisistä ominaisuuksista ja hoitovaihtoehdoista. J. Clin. Aesthet. Dermatol. 2010, 3, 20–31. [PubMed]

15. Sales-Campos, H.; Souza, PR; Peghini, BC; da Silva, JS; Cardoso, CR Yleiskatsaus öljyhapon modulatorisista vaikutuksista terveyteen ja sairauksiin. Mini. Rev. Med. Chem. 2013, 13, 201–210. [CrossRef] [PubMed]

16. Parvez, S.; Kang, M.; Chung, HS; Cho, C.; Hong, MC; Shin, MK; Bae, H. Ihondepigmentointi- ja vaalentamisaineiden tutkimus ja mekanismi. Phytother. Res. 2006, 20, 921–934. [CrossRef] [PubMed]

17. Luo, L.; Jiang, L.; Geng, C.; Cao, J.; Zhong, L. Hydrokinonin aiheuttama genotoksisuus ja oksidatiivinen DNA-vaurio HepG2-soluissa. Chem. Biol. Ole vuorovaikutuksessa. 2008, 173, 1–8. [CrossRef] [PubMed]

18. Enguita, FJ; Leitao, AL Hydrokinoni: Ympäristön saastuminen, myrkyllisyys ja mikrobiologiset vastaukset.BioMed Res. Int. 2013, 2013, 542168. [CrossRef] [PubMed]

19. Draelos, ZD Ihoa vaalentavat valmisteet ja hydrokinonikiista. Dermatol. Siellä. 2007, 20 308–313. [CrossRef] [PubMed]

20. Koo, JH; Lee, I.; Yun, SK; Kim, HU; Park, BH; Park, JW Saippuoitu helokkiöljy vähentää melanogeneesiä B16-melanoomasoluissa ja vähentää UV-säteilyn aiheuttamaa ihon pigmentaatiota ihmisillä. Lipids 2010, 45, 401-407. [CrossRef] [PubMed]

21. Cordell, GA; Colvard, MD Luonnontuotteet ja perinteinen lääketiede: Paradigman käyttöönotto. J. Nat. Tuot.2012, 75, 514–525. [CrossRef] [PubMed]

22. Panossian, A.; Wikman, G. Schisandra Chinensis Bailin farmakologia: Yleiskatsaus venäläiseen tutkimukseen ja käyttötarkoituksiin lääketieteessä. J. Ethnopharmacol. 2008, 118, 183–212. [CrossRef] [PubMed]

23. Chen, P.; Pang, S.; Yang, N.; Meng, H.; Liu, J.; Zhou, N.; Zhang, M.; Xu, Z.; Gao, W.; Chen, B.; et ai. Schisandrin B:n hyödylliset vaikutukset sydämen toimintaan sydäninfarktin hiirmallissa. PLoS ONE 2013, 8, e79418. [CrossRef] [PubMed]

24. Lee, HJ; Jo, S.; Ryu, J.; Jeong, HS; Lee, G.; Ryu, MH; Jung, MH; Kim, H.; Kim, BJ SchisandraChinensis Turczin efektit. hedelmiä dinitrofluoribentseenin aiheuttamassa kosketusihottumassa hiirillä. Mol. Med. Raportti 2015, 12, 2135–2139. [CrossRef] [PubMed]

25. Chun, JN; Cho, M.; Niin minä.; Jeon, JH Schisandra Chinensis -hedelmäuutteen ja sen lignaanien suojaavat vaikutukset sydän- ja verisuonisairauksia vastaan: katsaus molekyylimekanismeihin. Fitoterapia 2014, 97, 224–233.[CrossRef] [PubMed]

26. Kang, OH; Chae, HS; Choi, JH; Choi, HJ; Park, PS; Cho, SH; Lee, GH; Joten, HY; Choo, YK;Kweon, OH; et ai. Schisandra Fructus -vesiuutteen vaikutukset sytokiinien vapautumiseen ihmisen syöttösolulinjasta. J. Med. Ruoka 2006, 9, 480–486. [CrossRef] [PubMed]

27. Poma, A.; Bianchini, S.; Miranda, M. L-tyrosiinin aiheuttaman mikrotumien tuotannon esto fenyylitiourealla ihmisen melanoomasoluissa. Mutat. Res. 1999, 446, 143–148. [CrossRef]

28. Kim, HJ; Kim, IS; Dong, Y.; Lee, IS; Kim, JS; Kim, JS; Woo, JT; Cha, BY Sirsimariinin melanogeneesiä indusoiva vaikutus mikroftalmiaan liittyvän transkriptiotekijän ja tyrosinaasin ilmentymisen lisääntymisen kautta. Int. J. Mol. Sci. 2015, 16, 8772–8788. [CrossRef] [PubMed]

29. Busca, R.; Abbe, P.; Mantoux, F.; Aberdam, E.; Peyssonnaux, C.; Eychene, A.; Ortonne, JP; Ballotti, R. Rasmediates cAMP-riippuvainen aktivaatio ekstrasellulaaristen signaalisäädeltyjen kinaasien (ERK) melanosyyteissä. EMBO J. 2000, 19, 2900–2910. [CrossRef] [PubMed]

30. Busca, R.; Ballotti, R. Cyclic AMP on tärkeä sanansaattaja ihon pigmentaation säätelyssä. Pigment Cell Res.2000, 13, 60–69. [CrossRef] [PubMed]

31. Hah, YS; Cho, HY; Lim, TY; Park, DH; Kim, HM; Yoon, J.; Kim, JG; Kim, CY; Yoon, TJ Rapamysiinin aiheuttama melanogeneesin induktio ihmisen MNT-1-melanoomasoluissa. Ann. Dermatol. 2012, 24, 151–157. [CrossRef][PubMed]

32. Yun, WJ; Kim, EY; Park, JE; Jo, SY; Bang, SH; Chang, EJ; Chang, SE Mikrotubuluksiin liittyvä proteiinikevytketju 3 osallistuu melanogeneesiin säätelemällä MITF-ilmentymistä melanosyyteissä. Sci. Report.2016, 6, 19914. [CrossRef] [PubMed]

33. Spritz, RA; Kuulo, VJ, Jr. Pigmentaation geneettiset häiriöt. Adv. Hyräillä. Genet. 1994, 22, 1–45. [PubMed]

34. Kadekaro, AL; Chen, J.; Yang, J.; Chen, S.; Jameson, J.; Swing, VB; Cheng, T.; Kadakia, M.; Abdel-Malek, Z. -melanosyyttejä stimuloiva hormoni suppressoi oksidatiivista stressiä ap53-välitteisen signalointireitin kautta ihmisen melanosyyteissä. Mol. Cancer Res. 2012, 10, 778–786. [CrossRef] [PubMed]

35. Wasmeier, C.; Hume, AN; Bolasco, G.; Seabra, MC Melanosomes yhdellä silmäyksellä. J. Cell Sei. 2008, 121,3995–3999. [CrossRef] [PubMed]

36. Brozyna, AA; Jozwicki, W.; Carlson, JA; Slominski, AT Melanogeneesi vaikuttaa yleiseen ja taudista vapaaseen eloonjäämiseen potilailla, joilla on vaiheen III ja IV melanooma. Hyräillä. Pathol. 2013, 44, 2071–2074. [CrossRef] [PubMed]

37. Slominski, A.; Kim, TK; Brozyna, AA; Janjetovic, Z.; Brooks, DL; Schwab, LP; Skobowiat, C.; Jozwicki, W.; Seagroves, TN Melanogeneesin rooli melanooman käyttäytymisen säätelyssä: Melanogeneesi johtaa HIF-1-ilmentymisen ja HIF-riippuvaisten kulkureittien stimulaatioon. Kaari. Biochem. Biophys. 2014, 563,79–93. [CrossRef] [PubMed]

38. Kim, HJ; Lee, JH; Shin, MK; Hyun Leem, K.; Kim, YJ; Lee, MH Gastrodia elata ekstrakton melanogeneesin estävä vaikutus HM3KO-melanoomasoluissa. J. Cosmet. Sci. 2013, 64, 89–98. [PubMed]

39. Hemesath, TJ; Hinta, ER; Takemoto, C.; Badalian, T.; Fisher, DE MAP-kinaasi yhdistää transkriptiotekijän Microphthalmia c-Kit-signalointiin melanosyyteissä. Nature 1998, 391, 298–301. [PubMed]

40. Hinta, ER; Ding, HF; Badalian, T.; Bhattacharya, S.; Takemoto, C.; Yao, TP; Hemesath, TJ; Fisher, DELineage-spesifinen signalointi melanosyyteissä. C-kit-stimulaatio värvää p300/CBP:n mikroftalmiaan.J. Biol. Chem. 1998, 273, 17983–17986. [CrossRef] [PubMed]

41. Bertolotto, C.; Abbe, P.; Hemesath, TJ; Bille, K.; Fisher, DE; Ortonne, JP; Ballotti, R. Microphthalmiagene tuote signaalimuuntimena cAMP-indusoidussa melanosyyttien erilaistumisessa. J. Cell Biol. 1998, 142 827–835. [CrossRef] [PubMed]

42. Pogenberg, V.; Ogmundsdottir, MH; Bergsteinsdottir, K.; Schepsky, A.; Phung, B.; Deineko, V.; Milewski, M.; Steingrimsson, E.; Wilmanns, M. Rajoitettu leusiinivetoketjudimerointi ja melanosyyttipääsäätimen MITF:n DNA-tunnistuksen spesifisyys. Genes Dev. 2012, 26, 2647–2658. [CrossRef] [PubMed]

43. Flaherty, KT; Hodi, FS; Fisher, DE Geeneistä lääkkeisiin: Kohdennettuja strategioita melanoomaan. Nat. Rev. Cancer2012, 12, 349–361. [CrossRef] [PubMed]

44. Lee, TH; Seo, JO; Baek, SH; Kim, SY Resveratrolin estävät vaikutukset melaniinin synteesiin ultravioletti-B-indusoidussa pigmentaatiossa marsun nahassa. Biomol. Siellä. 2014, 22, 35–40. [CrossRef] [PubMed]

45. Su, TR; Lin, JJ; Tsai, CC; Huang, TK; Yang, ZY; Wu, MO; Zheng, YQ; Su, CC; Wu, YJ Melanogeneesin esto gallushapolla: PI3K/Akt-, MEK/ERK- ja Wnt/-cateninsignaling-reittien mahdollinen osallisuus B16F10-soluissa. Int. J. Mol. Sci. 2013, 14, 20443–20458. [CrossRef] [PubMed]

46. ​​Yajima, I.; Kumasaka, MY; Thang, ND; Goto, Y.; Takeda, K.; Yamashita, O.; Iida, M.; Ohgami, N.; Tamura, H.; Kawamoto, Y.; et ai. RAS/RAF/MEK/ERK ja PI3K/PTEN/AKT-signalointi pahanlaatuisen melanooman etenemisessä ja hoidossa. Dermatol. Res. Harjoittele. 2012, 2012, 354191. [CrossRef] [PubMed]

47. Kim, DS; Kim, SY; Moon, SJ; Chung, JH; Kim, KH; Cho, KH; Park, KC Ceramide estää solujen lisääntymistä AKT/PKB:n inaktivoinnin kautta ja vähentää melaniinin synteesiä Mel-Ab-soluissa. Pigment Cell Res. 2001, 14, 110–115. [CrossRef] [PubMed]

48. Kim, JH; Baek, SH; Kim, DH; Choi, TY; Yoon, TJ; Hwang, JS; Kim, MR; Kwon, HJ; Lee, CHD Melaniinin synteesin alasäätely A:lla ja sen soveltaminen in vivo salamamalliin. J. Investig. Dermatol. 2008, 128, 1227–1235. [CrossRef] [PubMed]

49. Hartman, ML; Czyz, M. MITF melanoomassa: Mekanismit sen ilmentymisen ja toiminnan takana. Cell Mol.Life Sci. 2015, 72, 1249–1260. [CrossRef] [PubMed]

50. Kim, DS; Hwang, ES; Lee, JE; Kim, SY; Kwon, SB; Park, KC Sfingosiini-1-fosfaatti vähentää melaniinin synteesiä jatkuvan ERK-aktivoinnin ja sitä seuraavan MITF:n hajoamisen kautta. J. Cell Sei. 2003, 116,1699–1706. [CrossRef] [PubMed]

51. Xu, W.; Gong, L.; Haddad, MM; Bischof, O.; Campisi, J.; Jep, ET; Medrano, EE Mikroftalmiaan liittyvän transkriptiotekijän MITF-proteiinitasojen säätely ubikitiinikonjugoivan entsyymin hUBC9:n kanssa. Exp. Cell Res. 2000, 255, 135–143. [CrossRef] [PubMed]

52. Bennett, DC; Cooper, PJ; Hart, IR Ei-kasvaingeenisten hiiren melanosyyttien linja, joka on syngeeninen B16-melanooman kanssa ja vaatii kasvainpromoottorin kasvuun. Int. J. Cancer 1987, 39, 414-418. [CrossRef][PubMed]

53. Meira, WV; Heinrich, TA; Cadena, SM; Martinez, GR Melanogeneesi estää hengitystä B16-F10-melanoomasoluissa, kun taas lisää mitokondriosolujen sisältöä. Exp. Cell Res. 2017, 350, 62–72. [CrossRef][PubMed]

54. Ohguchi, K.; Tanaka, T.; Iliya, I.; Ito, T.; Iinuma, M.; Matsumoto, K.; Akao, Y.; Nozawa, Y. Gnetol potenttyrosinaasin estäjänä Gnetum-suvusta. Biosci. Biotechnol. Biochem. 2003, 67, 663–665. [CrossRef] [PubMed]

55. Uchida, R.; Ishikawa, S.; Tomoda, H. Tyrosinaasiaktiivisuuden ja melaniinin pigmentaation estäminen 2-hydroksityrosolin vaikutuksesta. Acta Pharm. Sinica B 2014, 4, 141–145. [CrossRef] [PubMed]