Gao-Zi-Yao parantaa vanhojen spontaanien verenpainerottien oppimista ja muistia, osa 2

Koeeläimet

Kahdentoista kuukauden ja kahdeksan viikon ikäiset urospuoliset spontaani hypertensiiviset rotat (SHR) ostettiin Nanjing Animal Model Centeristä.

8-Viikon ikäisten miesten ja muistin välillä on vahva suhde. Tänä aikana urosolennon aivot kehittyvät nopeasti, ja sen hermosolujen väliset yhteydet lisääntyvät vähitellen, mikä puolestaan ​​vaikuttaa sen muistin kehittymiseen.

Tutkimukset osoittavat, että miespuolisten olentojen muisti paranee edelleen iän myötä. Tällä ei ole vain merkittävää vaikutusta heidän selviytymiseen ja lisääntymiseen, vaan se auttaa heitä sopeutumaan paremmin ympäristöön ja selviytymään uusista haasteista.

Siksi meidän tulisi aktiivisesti rohkaista nuoria miehiä osallistumaan erilaisiin hyödyllisiin aktiviteetteihin, kuten pulmapelien ratkaisemiseen, uusien taitojen oppimiseen ja uusien alueiden tutkimiseen. Nämä toiminnot stimuloivat heidän aivojaan, jolloin he voivat kehittyä nopeammin ja parantaa muistikykyään.

Samalla meidän tulisi myös tarjota sopiva ympäristö ja tunnelma nuorille urosolentoille. Niiden saaminen tuntemaan olonsa turvalliseksi ja läheiseksi voi edistää heidän aivojensa kehitystä ja parantaa muistiaan.

Lyhyesti sanottuna meidän pitäisi tehdä kaikkemme auttaaksemme nuoria miehiä parantamaan muistiaan, jotta heistä tulee älykkäämpiä, itsevarmempia ja kykenevämpiä olentoja. Tämä ei edistä ainoastaan ​​heidän henkilökohtaista kehitystään, vaan myös koko lajin vaurautta ja selviytymistä. Voidaan nähdä, että meidän on parannettava muistia, ja Cistanche deserticola voi parantaa merkittävästi muistia, koska Cistanche deserticolalla on antioksidanttisia, anti-inflammatorisia ja ikääntymistä estäviä vaikutuksia, jotka voivat auttaa vähentämään oksidatiivisia ja tulehdusreaktioita aivoissa ja siten suojaamaan hermoston terveyttä. Lisäksi Cistanche deserticola voi myös edistää hermosolujen kasvua ja korjausta, mikä parantaa hermoverkkojen yhteyttä ja toimintaa. Nämä vaikutukset voivat auttaa parantamaan muistia, oppimista ja ajattelunopeutta ja voivat myös estää kognitiivisten toimintahäiriöiden ja hermostoa rappeutuvien sairauksien kehittymistä.

Lisää muistia napsauttamalla tiedä lisäravinteet

Tässä mallissa verenpainetauti alkaa kehittyä 4 kuukauden iässä ja verenpaineeseen liittyvien muutosten ilmaantuessa aivojen mikroverisuonistoon 6 kuukauden iässä [37].

Rotat pidettiin optimaalisissa olosuhteissa normaalin hygienian mukaisesti, pidettiin 25 asteen lämpötilassa 12/12 valo/pimeä-syklillä ja ruokittiin tavanomaisella rotanruoalla ja vedellä ad libitum.

Kaikki toimenpiteet on hyväksynyt ja suoritettu SoochowUniversityn vahvistamien eläinten hoitoa ja käyttöä koskevien ohjeiden mukaisesti, mikä on yhdenmukaista edellisen raporttimme kanssa[35].

Kokeet suoritettiin National Institutes of Health Guidelines for the Laboratory Animals -ohjeistuksen (NIH, julkaisunumero 85–23, tarkistettu 1996) mukaisesti. Tämä tutkimus on raportoitu ARRIVEn ohjeiden mukaan.

Kahdeksan viikkoa vanhaa SHR:ää käytettiin ikääntymisen hallintaan (SHR-Young, n=10). Kahdentoista kuukauden ikäisiä rottia käsiteltiin Gao-Zi-Yaolla tai ilman sitä tislatulla vedellä (Vanha SHR-C, n=10), pienellä annoksella (Vanha SHR-L, n=10), keskiannoksella (Vanha SHR-M, n=10), suuri annos (Vanha SHR-H, n=10) maharuokinnalla.

Pienen, keskisuuren ja korkean Gao-Zi-Yaon annokset ovat 1/2-, 1-, kolminkertaiset annokset kliinisen potilaan käyttöön laskettuna kehon pinta-alan mukaan. Gao-Zi-Yao liuotettiin 5 ml:aan tislattua vettä ennen levittämistä ja sitä annettiin kertaluonteisesti 4 viikon ajan.

Verenpainetta ja sykettä seurattiin viikoittain häntämansettimenetelmällä, ja kehonpainoa seurattiin myös viikoittain edellisen havainnon mukaisesti [35].

4 viikon kuluttua suoritettiin Morris-vesilabyrinttikoe ja rotat tapettiin nukutuksessa natriumpentobarbitaalilla (50 mg/kg ip), hippokampuksen kudosta kerättiin lisäanalyysiä varten. Kaikki kokeelliset protokollat ​​hyväksyttiin Soochowin yliopiston eettisen lisenssikomitean toimesta.

Morrisin vesilabyrinttikoe

Morris-vesilabyrinttikoe (BW-MWM101, Shanghai Bio-will Co., Ltd., Shanghai, Kiina) suoritettiin kuten aiemmin on kuvattu tietyin muutoksin [38]. Testi oli suunniteltu kuudeksi päiväksi, päivät 1-5 olivat harjoitusjaksoa ja päivä 6 testituloksia varten.

Rotat saivat koulutusta 2 minuutin maitotuotteen ajan, ja latenssiajaksi kirjattiin tasolle nousuaika. Päivänä 6 alusta poistettiin. Rotat laitettiin kaukaisimmalle etäisyyskvadrantille ja uintirata tallennettiin 2 minuutin ajan.

Ohjelmisto laski oppimis- ja muistitoimintoparametrit.

NO:n ja tulehdustekijöiden seerumin tasojen mittaus ELISA:lla

Seerumitasot NO (luettelonumero: S0023), IL-1 (luettelonumero: A301BH80153), IL-2 (luettelonumero: A31038348), IL-6 (luettelonumero: A30681042), ja TNF- (luettelonumero: A38280855) mitattiin kaupallisesti saatavilla olevilla ELISA-pakkauksilla (BiotechnologyCo., Ltd. Shanghai Entsy Research. Shanghai, Kiina). Kaikki vaiheet suoritettiin valmistajan ohjeiden mukaisesti.

Nissl värjäys

Rotan hippokampuksen kudos eristettiin, kiinnitettiin, upotettiin parafiiniin ja inkuboitiin sitten 1-prosenttisessa toluidiinisinisessä värjäysliuoksessa 5–10 minuuttia huoneenlämpötilassa. Kymmenen leikettä huuhdeltiin tislatulla vedellä, liotettiin 95-prosenttisessa etanolissa 5–30 minuuttia ja kuivattiin 100-prosenttisessa etanolissa.

Dehydraation jälkeen viipale laitettiin ksyleeniin ja peitettiin käyttämällä hartsiväliainetta. Hippokampuksen CA1-, CA2- ja dentate gyrus (DG) -alueiden neuronien lukumäärää tarkkailtiin ja analysoitiin käyttämällä ImageJ-analyysiohjelmaa.

Western blot oppimiseen ja muistiin liittyville proteiineille

Western blot oppimiseen ja muistiin liittyville proteiineille suoritettiin kuten kuvattiin edellisessä raportissamme muutamin muutoksin [39].

Hippokampuskudokset homogenisoitiin RIPA-puskurilla (50 mmTris, 150 mM NaCl, 1 % Triton-X-100, pH 7,0), joka sisälsi fenyylimentaanisulfonyylifluoridia (R&D Systems Inc., Minneapolis, US). Homogenaatteja sentrifugoitiin 12, 000 × g 10 minuutin ajan 4 asteessa.

Soluproteiinit erotettiin SDS-PAGE:lla ja siirrettiin PVDF-kalvoille (Hybond TM-ECL; AmershamPharmacia Biotech, Inc.). Kalvot estettiin 5 % rasvattomalla maidolla PBS:ssä ja 0,1 % Tween-20 huoneenlämmössä.

Sitten blotteja inkuboitiin primaarisen vasta-aineen kanssa: Anti-glutamaattireseptori 1 (1:1000, Abcam, Inc., luettelonumero: ab183797), AntiNMDAR2B-vasta-aine (1:1000, Abcam, Inc., luettelonumero: ab28373), anti-fosfo -CaMKII-vasta-aine (1:1000, Abcam, Inc., luettelonumero: ab171095), antifosfo-CREB-vasta-aine (1:1000, Abcam, Inc., luettelonumero: 32096) tai anti-GAPDH (Santa Cruz Biotech, Inc., Luettelonumero: sc-47724).

Seuraavaksi kalvoja inkuboitiin 1 tunti sekundaarisen vasta-aineen kanssa (HRP-konjugoitu anti-kanin Ig-G, 1:2000, Abcam, Inc. luettelonumero: ab205718). Kalvot pestiin sitten kolme kertaa 15 minuutin ajan käyttämällä TBS-T:tä ylimääräisten vasta-aineiden poistamiseksi ennen inkubaatiota 1 minuutin ajan kemiluminoivien reagenssien kanssa (ECL, R&D Systems Inc., Minneapolis, MN, USA).

Lisäksi immunoreaktiiviset vyöhykkeet havaittiin elektroforeesigeelianalyysijärjestelmällä (GL2200 Pro, Crestream Inc. USA). Juovien intensiteetti analysoitiin Image J -ohjelmistolla. Kohdeproteiinien määrä normalisoitiin GAPDH-ilmentymällä [39].

Tilastollinen analyysi

Tilastolliseen analyysiin käytettiin SPSS 18.{1}} -ohjelmistoa. Tiedot esitetään keskiarvona ± SEM Ryhmityt tiedot analysoitiin käyttämällä yksisuuntaista varianssianalyysiä, jota seurasi Student-Newman-Keuls-testi. P-arvoa < 0,05 pidettiin tilastollisesti merkitsevänä edellisessä raportissamme [35].

Tulokset

Systolinen verenpaine (SBP), syke ja ruumiinpaino nuoren SHR:n ja vanhan SHR:n välillä

Yong SHR osoitti alhaisempaa SBP:tä kahden ensimmäisen viikon aikana verrattuna vanhaan SHR:ään, minkä jälkeen se kasvoi niin, ettei kahden ryhmän välillä ollut eroa seuraavien kolmen viikon aikana (kuvio 2A).

Päinvastoin, syke ei ollut eroa kahden ryhmän välillä kahden ensimmäisen viikon aikana, sitten nuori SHR nousi huomattavasti verrattuna vanhaan SHR:ään kolmen myöhemmän viikon aikana (kuvio 2B). Nuori SHR osoitti pienempää ruumiinpainoa verrattuna vanhaan SHR:ään koko havaintojakson ajan (kuvio 2C).

Morrisin vesilabyrinttiparametrit nuoren SHR:n ja vanhan SHR:n välillä

Hippokampuksesta riippuvan oppimisen ja muistin määrittämiseksi suoritettiin Morris-vesilabyrinttikoe. Vanha SHR osoitti pidemmän pakolatenssin neljän ensimmäisen päivän aikana verrattuna nuoriin SHR:iin (kuva 3A).

Kohdekvadrantin ylitysajat olivat vähemmän vanhassa SHR:ssä kuin nuoressa SHR:ssä (kuva 3B).

Ajan prosenttiosuus kohdealustan neljänneksellä oli lyhyempi vanhassa SHR:ssä verrattuna nuoreen SHR:ään (kuva 3C). Polun pituuden prosenttiosuus kvadrantissa oli myös lyhyempi vanhassa SHR:ssä verrattuna vanhaan SHR:ään (kuva 3D). Nämä tulokset viittaavat siihen, että vanhalla SHR:llä on heikentynyt kognitiivinen toiminta.

Hermosolujen lukumäärä hippokampuksessa nuoren SHR:n ja vanhan SHR:n välillä

Hermosolujen lukumäärä hippokampuksen eri alueilla laskettiin Nissl-värjäyksellä. Tulokset osoittivat, että vanhan SHR:n CA1-, CA2- ja DG-alueilla on pienempi määrä neuroneja verrattuna nuoriin SHR:iin (kuvio 4).

Oppimiseen ja muistiin liittyvä proteiini-ilmentyminen hippokampuksessa nuoren SHR:n ja vanhan SHR:n välillä

Western blot -tulokset osoittivat, että oppimiseen ja muistiin liittyvien proteiinien (GluR1, NMDAR 2B, fosforyloitu-CaMK II ja fosforyloitu-CREB) ilmentyminen vanhassa SHR-hippokampuksessa oli alhaisempaa kuin nuoressa SHRhippokampuksessa (kuvio 5).

Gao-Zi-Yaon vaikutus verenpaineeseen, sykkeeseen ja kehon painoon vanhassa SHR:ssä

Gao-Zi-Yaon vaikutus SBP:hen analysoitiin. Hoito pienellä annoksella Gao-Zi-Yao alensi SBP:tä merkittävästi vanhassa SHR:ssä toisesta viikosta neljänteen viikkoon verrattuna vanhaan SHR-kontrolliryhmään, keskisuuret ja suuret Gao-Zi-Yao-annokset vähensivät merkittävästi SBP:tä vanhassa SHR:ssä ensimmäisestä viikosta neljäs viikko verrattuna kontrolliin vanhaan SHR:ään (kuva 6A). Nämä tulokset osoittavat, että Gao-Zi-Yaolla on verenpainetta alentava vaikutus vanhassa SHR:ssä.

Vertailimme myös Gao-Zi-Yaoonin sykkeen ja kehon painon vaikutuksia koskevia tietoja. Tietomme osoittivat, että sykkeessä ja ruumiinpainossa ei ollut merkittävää eroa kaikkien ryhmien välillä koko havaintojakson aikana (kuvio 6B, C).

Gao-Zi-Yaon vaikutus seerumin NO-, IL-1-, IL-2- ja TNF-tasoihin vanhassa SHR:ssä

Käsittely keskisuurilla ja suurilla GAO-ZIYAO-annoksilla lisäsi seerumin NO-tasoja verrattuna SHR-kontrolliryhmän tasoihin (kuvio 7A). Hoito kaikilla testatuilla GAO-ZI-YAO-annoksilla alensi IL-1, IL-2 seerumitasoja verrattuna SHR-kontrolliryhmän tasoihin (kuvio 7B, C); kuitenkin vain suuri GAO-ZI-YAO-annos suppressoi seerumin TNF-tasoja (kuvio 7D).

Nämä tulokset osoittavat, että GAO-ZI-YAO voisi säädellä oksidatiivista stressiä ja tulehdusta.

For more information:1950477648nn@gmail.com