Suu- ja sorkkatautirokotteen kehitys ja haasteet pitkäaikaisen immuniteetin aikaansaamisessa: suuntaukset ja nykyiset näkymät

Abstrakti:

Suu- ja sorkkatauti (FMD) on erittäin tarttuva karjan virustauti, jonka aiheuttaa suu- ja hiiritautivirussuvun Aphtovirus, joka aiheuttaa vakavan taloudellisen vaikutuksen sekä yksittäisiin viljelijöihin että kansantalouteen. Monet yritykset kehittää rokotetta suu- ja sorkkatautia vastaan ​​eivät ole onnistuneet saamaan aikaan steriiliä immuniteettia. Klassiset rokotteen valmistusmenetelmät johtuivat mutaatioiden selektiivisestä kertymisestä antigeenisten ja sitoutumiskohtien ympärille. Aiheuttajan palautuminen positiivisella valinnalla ja kvasilajiparvella, tämän menetelmän käyttöä ei voida soveltaa ei-endeemisillä alueilla. Kemiallinen heikennys käyttämällä binaarista etyleeni-imiiniä (BEI) suojasi kapsidin eheyttä ja tuotti voimakkaan immuniteetin altistuskantaa vastaan.

Suu- ja sorkkatauti on virustauti, joka vaikuttaa eläimen immuunijärjestelmään. Suu- ja sorkkatautivirus voi tunkeutua eläinten soluihin, tuhota solukalvoja ja sisäelimiä, heikentää eläimen immuunijärjestelmää ja tehdä siitä alttiita muiden taudinaiheuttajien infektioille.

Samalla suu- ja sorkkatautirokotteella voidaan parantaa eläinten immuniteettia ja tehdä niistä immuuneja virukselle. Onnistuneen rokotuksen jälkeen eläin tuottaa vasta-aineita, ja kun se altistuu uudelleen suu- ja sorkkatautivirukselle, se pystyy nopeasti tuottamaan immuunivasteen, joka estää tehokkaasti virusta tarttumasta ja aiheuttaen taudin. Tapahtua.

Siksi eläinten immuniteetin parantaminen, erityisesti rokottamalla suu- ja sorkkatautia vastaan, on tärkeä tapa ehkäistä suu- ja sorkkatautia. Samaan aikaan tieteellinen ruokinnan hallinta ja sanitaatio sekä epidemian ehkäisytoimenpiteet voivat auttaa vähentämään viruksen leviämistä ja suu- ja sorkkataudin esiintymistä. Tästä näkökulmasta meidän on pohdittava, tarvitseeko ihmiskehon kiinnittää huomiota vastustuskyvyn parantamiseen. Cistanche voi parantaa merkittävästi ihmisen immuniteettia. Cistanchella on myös virus- ja syöpää estäviä vaikutuksia, jotka voivat vahvistaa immuunijärjestelmän kykyä taistella ja parantaa kehon vastustuskykyä.

Napsauta cistanche tubulosa -etuja

Virusantigeenejä, jotka on syntetisoitu kemiallisesti tai ekspressoitu viruksissa, plasmideissa tai kasveissa, kokeiltiin eläinten rokotuksessa. DNA-rokotteita, jotka ilmentävät joko rakenteellisia tai ei-rakenteellisia proteiiniantigeenejä, on yritetty immunisoida eläimiä. Interleukiinien käytöllä DNA-rokotteiden geneettisenä adjuvanttina on lupaava vaikutus. Vaikka steriilin immuniteetin indusoimisen haasteet ovat FMDV:n ei-rakenteisissa (NS) proteiineissa, jotka ovat vastuussa dendriittisolujen apoptoosista ja joilla on negatiivisia vaikutuksia lymfoproliferatiivisiin vasteisiin, jotka johtavat ohimenevään immunosuppressioon. Lisäksi isäntäproteiinikaupan tuhoaminen ei-rakenteellisten proteiinien toimesta tukahdutti CD8:n ja T-solujen lisääntymisen. Tässä katsauksessa yritettiin käsitellä useita lähestymistapoja rokotekehityskokeissa ja steriilin immuniteetin tuottamisen pullonkauloja.

Avainsanat:

Suu- ja sorkkatautirokote, pitkäkestoinen immuniteetti, steriili immuniteetti.

Tausta

Suu- ja sorkkatauti (FMD) on erittäin tarttuva karjan virusinfektio, jonka aiheuttavat suu- ja hiiritautivirus, suvun Aphthovirus ja heimo Picornaviridae; joka aiheuttaa vakavia taloudellisia menetyksiä.1,2 Suu- ja sorkka- ja sorkka- ja sorkka- ja sorkka- ja kavioeläimet kärsivät voimakkaasti suu- ja sorkkataudista.3–5 Yksittäiset kypsät proteiinit tuottavat spontaanisti 5S-protomeerejä; VP1, VP3 ja VP0, joista viisi kootaan 12S-pentameeriksi. Vaikka 75S-viruskapsidi muodostuu 12 pentameerin kokoonpanosta,6,7 suu- ja sorkkatautiviruksen (FMDV) täydellisellä 146S-antigeenillä on raportoitu olevan hyvin samanlainen antigeenispesifisyys kuin viruksen kapsidilla.8,9 -suutautiviruksella on laaja isäntävalikoima, suuri geneettinen vaihteluaste ja suuret antigeenierot, ja sillä on seitsemän serotyyppiä (A, O, C, Asia1, SAT1, SAT2 ja SAT3) ja yli 100 seroalatyyppiä. Kvasilajiparven vuoksi myös monia uusia muunnelmia ilmestyy joka vuosi. Seitsemän serotyypin aiheuttamaa risti-immuniteettia ei ole. Saman serotyypin eri alatyyppien välillä on myös vain osittainen ristiimmuniteetti.11 Suu- ja sorkkataudin vaihtelevuus ja polymorfismi ovat tehneet suu- ja sorkkataudin ehkäisystä ja hallinnasta erittäin vaikeaa.10 Adenovirusrekombinantti FMDV, joka ilmentää eri serotyyppien P12A- ja 3C-proteiineja, on osoittanut suojaavaa vaikutusta.12–14

Klassisissa inaktivoiduissa rokotteissa on monia puutteita, mukaan lukien lämpöepävakaus, lyhytikäinen immuniteetti, korkea hinta, rekombinaatioriski luonnonvaraisten kantojen kanssa ja patogeenisyyden palautuminen.11,15,16

90 vuoden tutkimuksesta huolimatta ei ole olemassa tehokasta rokotetta, joka tuottaisi steriilin ja kiinteän immuniteetin suu- ja sorkkataudille, mutta tauti on edelleen tarttuva suurilla alueilla maapalloa. Monet yritykset kehittää rokote suu- ja sorkkatautia vastaan ​​eivät ole onnistuneet indusoimaan steriiliä immuniteettia, jossa on vähäinen ristiserotyyppisuoja ja riittämätön immuniteetin kesto.17 Klassiset rokotteen tuotantomenetelmät, kuten viruksen sarjasiirto soluviljelmään,18 ei-sallivassa tilassa. eläimet ja sen luonnollinen isäntä pystyivät heikentämään viruksen. Tämä johtuu mutaatioiden selektiivisestä kertymisestä antigeenisten ja sitoutumiskohtien ympärille.19–21 Aiheuttajan reversion käyttöä positiivisella valinnalla ja kvasilajiparvimenetelmällä ei kuitenkaan voida soveltaa ei-endeemisillä alueilla.22 DNA ja proteiiniteknologiat ovat parantaneet tutkimusta modifioimalla integriinireseptoreita23 käyttämällä synteettisiä peptidejä, jotka voivat saada aikaan eksplisiittisen immuunivasteen eläimessä.24 G-H-silmukkaalueelle luontaiset T-auttajasoluepitoopit ovat tehokkaita B-soluepitooppeja, jotka indusoivat humoraalista immuniteettia.25 Rekombinantin interferonin (IFN ) ja naudan interleukiini 18:n (IL-18) käyttö adjuvanttina on parantanut pitkäaikaista immuniteettia koe-eläimissä.26,27

Viime aikoina rekombinantit elävät vektori-DNA-rokotteet ovat tehokkaita sytotoksisten T-lymfosyyttien (CTL) indusoijia,28,29 Tämän vaikutuksen ilmaisemiseksi suu- ja sorkkataudissa tarvitaan sopiva adjuvantti.30 Tämän vaikutuksen voittamiseksi isännän Ig-superperheen ja suu- ja sorkkataudin epitoopin yhdistäminen on parantanut humoraalista epitooppia. ja eläimen soluimmuunivaste.

Pullonkaulaongelmaa steriilin ja pitkäkestoisen immuniteetin indusoinnissa haittaa isäntäproteiinin tuhoutuminen ei-rakenteellisten (NS) proteiinien, erityisesti 3A:n, välityksellä, joten se ei aiheuta klusterin erilaistumispositiivista (CD8 plus ) T-soluvastetta, joka johtuu: heikko CTL ja virus säilyy eläimessä.31 ​​Integriinireseptorit, jotka välittivät luuytimestä peräisin olevaa dendriittisolujen (DC) apoptoosia, estivät isännän luontaista immuniteettia.32 Guzman et al33 ja Joshi et al34 analysoivat korvikevasteita CTL:n tappamiselle, kuten proliferaatiolle. tai IFN:n tuotanto CD8:aa ilmentävillä soluilla, mutta monet CD8:aa plus ekspressoivat lymfosyytit, jotka eivät ole CTL:itä, tuottavat IFN:ää, mukaan lukien luonnolliset tappajasolut (NK) ja gammadelta- (8) T-solujen alajoukot. 35–37

Oh et al.38 mukaan IFN-vastetta voidaan stimuloida uudelleen rokotetuilla nautaeläimillä, joilla on altistuspäivänä verenkierrossa ollut korkea viruksia neutraloivien vasta-aineiden tiitteri, mikä on suorassa yhteydessä rokotteen aiheuttamaan suojaukseen IFN:llä. - ja neutraloiva vasta-aine. Lisäksi CD4 plus T-solut ovat tärkein kukoistava fenotyyppi ja IFN:ää tuottavat solut. Luonnollisessa infektiossa esiintyi kuitenkin lymfopeniaa, joka oli päällekkäinen viremian huippuhuipun ja seerumin IFN-vasteen kanssa, kun taas in vivo plasmosyyttien DC (pDC) määrä ja in vitro pDC IFN-eritys vähenivät lyhyesti 2 päivän sisällä infektiosta.39 IFN-tuotanto monosyyteistä peräisin olevat DC:t (MoDC:t) ja ihoperäiset DC:t (ihon DC:t) estyvät sikojen infektion akuutissa vaiheessa.40 FMDV aiheutti myös apoptoosin epäkypsissä dendriittisoluissa.32 Viruksen immuunipatogeneesin voittamiseksi. Lisäämällä vasta-ainetuotantoa ja T-solujen lisääntymistä korkeammat CTL-aktiivisuuden ja IFN-ilmentymisen tasot CD8-T-soluissa saavutettiin synteettisillä oligonukleotideilla limakalvorokotteen adjuvantteina.41 Tämän artikkelin päätavoitteena on tarkastella suuntauksia suu- ja sorkkatautirokotteiden kehityksessä ja haasteita steriilin ja pitkäaikaisen immuniteetin aikaansaamiselle.

Heikennetty ja inaktivoitu rokote

Oli monia yrityksiä parantaa eläviä heikennettyjä suu- ja sorkkatautirokotteita tavanomaisilla menetelmillä, kuten sarjasiirrolla ei-permissiivisissä eläimissä tai soluviljelmällä. Vaimennus saavutettiin siirtämällä ei-herkkä lajeja, kuten hiiriä, kaneja ja alkion munia, kunnes se menetti virulenssinsa karjassa. FMDV C-S8c1:n sarjasiirrot suurella infektiokerralla soluviljelmässä johtivat vialliseen genomiin (C-S8p260), joka suojasi täysin hiiriä tappavalta altistukselta FMDV C-S8c1:llä ja oli turvallista sioilla rokotuksen jälkeen kerta-annoksella C-S8p260.42 Se indusoi myös korkeita neutraloivien vasta-aineiden tiittereitä ja aktivoituja T-soluja sioissa.42

Erittäin patogeenisen, sioihin mukautetun O Taiwan 97 -isolaatin sarjakontaktisiirto sioissa vähentää merkittävästi virulenssia 14. sikojen siirrostuksen jälkeen ja poisti sen 16. siirrostuksen jälkeen.43 Aminohappomuutokset in vivo -viljelmien aikana olivat erittäin hiljaista substituutiota ja muutoksia VP1:ssä. (1D) olivat tilapäisiä. Suu- ja sorkkatautirokotteen kehittäminen ei-permissiivisillä isännillä voi laukaista aineen käyttämään muita solureseptoreita kuin Arg-GlyAsp (RGD), plakkitesti BHK 21 -testissä saattaa olla negatiivinen viruksen ollessa ehjä.43 Aminohapon korvaaminen sivuketjut, jotka sijaitsevat lähellä kapsidinvälistä alayksikköä toisella aminohapolla, voivat muodostaa uusia disulfidisidoksia tai sähköstaattisia vuorovaikutuksia alayksiköiden rajapintojen välille, ja ne joko projisoidaan tai alkavat olla kulutettavissa infektiota varten lisäämällä suu- ja sorkkatautirokotteiden rokotekantojen lämmönsietokykyä44 nykyisiä menetelmiä käyttäen. jotka ovat vähemmän riippuvaisia ​​ihanteellisesta kylmäketjusta. FMDV C-S8p260 -kannat ovat segmentoituja ja replikaatiokykyisiä, mikä voi tarjota perustan rokotteiden heikentämiselle kahdella turvaesteellä.45

Useimmat tutkimukset osoittavat, että eläinmallin FMDV:n inaktivointi käyttämällä aminohapposubstituutiota 2C:ssä ei ollut havaittavissa C-S8c1:ssä, mutta sitä esiintyi pienessä osassa marsuihin sopeutettua FMDV:tä.46 Tämä aminohapposubstituutio tuli nopeasti ylivoimaiseksi viruspopulaatiossa sen jälkeen, kun marsuihin sopeutetun viruksen siirtäminen uudelleen sioihin. Nämä havainnot osoittavat, kuinka vähemmistövarianttivirusten tuominen keinotekoiseen isäntään saattaa nousta dominanssiin, kun alkuperäinen isäntälaji infektoidaan uudelleen.47 Tämän positiivisen valinnan ja kvasilajiparven lisäksi rokotekanta voi muuttua patogeeniseksi kannaksi. 22

Viruksen inaktivointi formaliinilla ja endonukleaasilla ei onnistu inaktivoimaan virusta ja hajottamaan antigeenisiä kohtia.48 Binaarista etyleeni-imiiniä (BEI) on myös käytetty viruksen heikentämiseen säilyttäen samalla kapsidin eheys.15,49 BEI- inaktivoituja FMD-solureseptoreita, integriineja, käytetään kiinnittymiseen ja sisäistymiseen viljeltyihin soluihin, vuorovaikutusta välittää aminohappotähde, joka sijaitsee VP1-kapsidiproteiinin GH-silmukassa.49 FMDV-spesifiset monoklonaaliset vasta-aineet tai synteettinen peptidi osoittivat sitoutuvan BEI- inaktivoidut suu- ja sorkkataudit sisäistettiin niiden lokalisoituessa yhdessä markkeriproteiinin kanssa BHK:ksi-21, jota välittää integriinia sitova motiivi RGD.50 Lisäksi BEI-inaktivaatio ei vaikuta GH-silmukan antigeenisyyteen.20,51 BEI:n inaktivaatio, säilynyt virionarkkitehtuuri ja reseptorit suosivat viruksen sisäistämistä viljeltyihin soluihin sekä in vivo -välitteisesti integriinin tunnistus,47,52,53, mutta koko viruksen kvantifiointi osoittaa minimituloksen verrattuna formaliiniin. inaktivaatio (65–71,6 prosenttia), kun taas BEI:n inaktivointi on 44,2 prosenttia ,49

C-tyypin FMDV:n peräkkäinen siirros sioista ja marsuista ja ylläpidetty sioissa ja imemishiirissä johtaa aminohappokorvauksiin (I2483T 2C:ssä, Q443R 3A:ssa ja L1473P VP1:ssä). Korvattu aminohappo (L1473P), integriinia sitovan RGD-motiivin vieressä, esti viruksen kasvun eri solulinjoissa ja muutti sen antigeenisyyttä.47 Toinen Burmanin et al.20 tekemä tutkimus paljasti, että yksi aminohappomuutos RGD:ssä plus 1 ja RGD plus 4 inhiboivat viruksen kiinnittymistä ja infektiota, joita v 6 tai v 8 edistävät, mutta virus käyttää v 3:a solun kiinnittymiseen. Korvaukset metioniinilla tai arginiinilla sitoutumiskohdassa ovat tehokkaita inhibiittoreita v 6:lle. Kaksi leusiinitähdettä täplissä RGD plus 1 ja RGD plus 4 stabiloi sitoutumisen, joka riippuu rakenteesta välittömästi C-terminaalista RGD:hen.20,54 EDTA-resistentti sitoutuminen v 6 on tunnusmerkki, ja stabiilin kompleksin sen solureseptorin kanssa odotettiin tuottavan huomattavaa suu- ja sorkka- ja sorkkatautivirustartuntaa.21

Alaniinin substituutio leusiinien ensimmäisessä ja neljännessä kohdassa RGD plus 1 ja RGD plus 4 kohdissa johtaa viruksen sitoutumisen ja viruksen v 6:aan tai v 8:aan kiinnittymisen estämiseen. Virus kuitenkin käyttää v 3:a soluun pääsyyn.20 soluviljelmään mukautetut kannat käyttävät heparaanisulfaattiproteoglykaaneja (HSPG) vaihtoehtoisena reseptorina. Niiden ektodomeenien ja integriinien ligandia sitovan tilan varmistus on tärkeä tekijä virusten tropismille.54

Heparaanisulfaattia sitovat virukset sisälsivät DC:tä tehokkaasti, mutta eivät esittäneet antigeeniä lymfosyyteille, mikä indusoi FMDV-spesifisen IgG-vasteen.55 Nämä tulokset osoittavat, että FMDV:n DC-internalisaatio on tehokkainta rokoteviruksille, joilla on HS-sitoutumiskyky, mutta HS:n sitoutuminen ei ole yksinomainen vaatimus.

Isännän humoraalisen immuunivasteen kohdistamalla selektiivisellä paineella on tärkeä rooli sekä antigeenisten FMDV-varianttien valinnassa että stabiloinnissa, mikä johtaa muutokseen solujen tropismissa. In vitro -testit paljastivat, että FMDV:n rinnakkainen siirto subneutralisoivien homologisten seerumien läsnä ollessa johti mutanttien säilymiseen.56 Nautaeläimiin inokuloitiin kuitenkin FMD-tyypin A24, joka sisälsi SGD-sekvenssin solureseptorin sitoutumiskohdassa, lisääntyminen. , virus kasvoi heikosti BHK-21-soluissa ja sekvenssi säilyi vakaasti lisääntymisen aikana BHK-21-soluissa, jotka ekspressoivat naudan V 6 -integriiniä (BHK3 V 6), sekä kokeellisesti rokotetuissa ja kontaktikarjassa. .56

Nautakarjan kahdesta riippumattomasta siirtoketjusta ilmenee genomisia muutoksia, jotka johtuvat peräkkäisestä siirtymisestä BHK{0}}-soluihin mukautuneeseen (heparaanisulfaattia sitovaan) FMDV-kantaan. Villityypin variantti, jossa oli aminohappomutaatio VP1 356:ssa, poimittiin nopeasti in vivo -viruksen replikaatiota varten.57

Deleetiogeenit koodaavat NS-proteiinia, joka ei ole ratkaiseva viruksen replikaatiolle in vitro, on vaihtoehtoinen tekniikka elävien heikennettyjen rokotteiden tuottamiseksi. Jotta tämä deleetiovirus olisi käyttökelpoinen rokotteena, sen on kuitenkin kyettävä replikoitumaan herkissä eläimissä. Tämän lähestymistavan etuna verrattuna klassiseen vaimennusmenetelmään, joka yleensä tuo mutaatioita rajoitettuun määrään kohtia, on se, että virulenssiksi palautumisen riski pienenee merkittävästi58 ja NS-proteiinit ovat tehokkaita T-soluepitooppeja.59

Vaikutus on osoitettu geneettisesti muunnetuissa FMDV-rokotekannoissa, joissa antigeenisissä kohdissa on jonkin verran aminohappokorvauksia ja joilla on samanlaiset kasvuominaisuudet kuin villiviruksella, jonka on todistettu suojaavan eläintä täysin altistukselta, mutta niillä on kyky replikoitua in vitro.60

Hätäperäinen kaksoisöljyadjuvanttirokote suu- ja sorkkatautirokote osoitti viremian ja viruksen varjostuksen vähentymistä eikä osoittanut kliinisiä oireita. Rokotetuissa eläimissä havaittiin johdonmukaisesti IL-6, IL-8 ja IL-12.61 Muut sytokiinit IL-1, IL-2, TNF , TGF:ää ja interferoneja ei havaittu; tämä osoittaa, että rokote ei indusoinut systeemistä tulehdusreaktiota eikä systeemistä T-lymfosyyttiaktiivisuuden nousua, mikä liittyy lyhytaikaiseen suojaan suu- ja sorkkatautia vastaan.61

Rekombinantti ihmisen IL-2 on voimakas humoraalinen immuuni-indusoija hiirimallin suu- ja sorkkatautirokotteessa.62 Rokotetut eläimet pysyvät serokonvertoituneina positiivisina 7–8 kuukauden ajan ja sytokiinien systeemiset tasot (IL-6, IL{{5) }} ja IL-12) lisääntyivät rokotuksen jälkeen.63

Tyhjät viruskapsidit

Tyhjät viruskapsidit, jotka tunnetaan myös nimellä viruksen kaltaiset partikkelit (VLP), käsittävät koko valikoiman koskemattomista viruksista löytyviä immunogeenisiä kohtia, mutta niistä puuttuu tarttuvia nukleiinihappoja ja ne sisältävät virusgenomin kloonauksen, joka on välttämätön viruksen synteesille, prosessoinnille ja kokoamiselle. rakenneproteiinit tyhjiksi viruskapsideiksi (P1-2A ja 3Cpro:ta koodaavat geenit; kuva 1).64 Tyhjät kapsidit tuotetaan luonnollisesti in vitro soluviljelmässä, ne ovat antigeenisesti samanlaisia ​​ja ovat immunogeenisiä.65

Tyhjän kapsidirokotteen käyttö on lupaava ehdokas, koska se kiertää viruksen käytön rokotetuotannossa ja säilyttää epitooppien konformaatiota.45 Lisäksi ei ole vaaraa viruksen palautumisesta ja rekombinaatiosta luonnonvaraisten kantojen kanssa. Seerumittomia suspensioita kasvattavia nisäkässoluja on käytetty FMDV-rekombinanttien tyhjien kapsidien ohimenevään geeniekspressioon (TGE).66 Rokotettujen tunnistus infektoituneista tai toipilaan olevista eläimistä on helppoa tällä hetkellä saatavilla olevalla tekniikalla.67–69

Alayksikkörokote

Alayksikkörokote sisältää virusantigeenejä, jotka on kerätty kemiallisella uuttamisella tai minimaalisen määrän ei-virusantigeenien bioekspressiolla viljelyalustassa.70 Tutkijat ovat paljastaneet, että VP1 on yksi suu- ja sorkkataudin kapsidiproteiineista, jolla oli merkittävä pintaaltistus 1970-luvulla. ja viimeaikaiset edistysaskeleet rakennevirologiassa.71

Geenitekniikkaa on käytetty muuntamaan genomin osia tai poistamaan VP1:n proteiinia koodaava alue viimeaikaisissa yrityksissä luoda heikennettyjä rokotteita. Yhdistelmä-DNA:ta käyttämällä konstruoitiin virus, jossa oli RGD-reseptorin sitoutumiskohta VP1:stä poistetun FMDV:n kohdalla.72 7- - 10-vuorokauden ikäisillä hiirillä tai sioilla tämä virus ei kyennyt kiinnittymään soluihin eikä aiheuttaa infektion.73

FMDV:n VP1-kapsidiproteiinilla ja VP1:n karboksiterminaalisella alueella on G-H-silmukka, joka on erittäin immunogeeninen ja vastaa B-soluepitooppeja. Kemiallisesti syntetisoitu peptidi, joka koostuu FMDV-serotyypin O viruksen päällystysproteiinin (VP1) alueista (tähteet 141-158), on aiheuttanut korkeat neutraloivan vasta-aineen tasot ja suojannut karjaa tarttuvan viruksen ihonsisäiseltä inokulaatiolta24, mikä viittaa G:n tärkeyteen. -H-silmukka humoraalisen immuunivasteen indusoinnissa. VP1 sisältää myös hypervariaabelin alueen ja immunogeenisen kohdan; alueen hyödyntäminen olisi perusta laajalle immunogeenisuudelle.74

IFN:n sisällyttäminen geneettisenä adjuvanttina johti kliinisten oireiden ja viremian ilmaantumisen viivästymiseen.75 Rekombinantti silkkiäistoukkien bakulovirus, joka koodaa FMDV Asia 1:n P1-2A- ja 3C-proteaasia, pystyi tuottamaan spesifisiä vasta-aineita. rokotetuissa eläimissä ja suojattu virulentilla homologisella viruksella altistuksen jälkeen, ja kliiniset oireet lieventyivät ja viivästyivät.64

Indusoitiin yksi annos viallista adenovirus 5:tä (Ad5), joka sisälsi FMDV:n serotyypin A (Ad5A24) P1:n ja 3C:tä koodaavan alueen, neutraloimalla vasta-aineita ja suojaamalla sikoja homologiselta altistukselta.76 Vaikutusta soluimmuunihaaraan ei kuitenkaan tutkittu. .

Sekä vacciniaviruksen että bakuloviruksen aiheuttaman tyhjien A-serotyypin kapsidien ilmentymiseen; rationaalisesti suunniteltuja mutaatioita sisältävä stabiilius parani eukaryoottisoluissa.77 Tällä menetelmällä rokoteantigeenin tuottamiseksi on useita mahdollisia etuja nykyiseen teknologiaan verrattuna tuotantokustannuksissa, infektioriskissä ja lämpöä sietävässä rokotteessa.45

Ihmisen adenovirustyypin 5 vektori, joka ekspressoi kapsidiproteiinia (P1-2A ja mutatoitunut viraalinen 3C-proteaasi), antaa BALB/c-hiirillä aikaansaadun merkittävän humoraalisen, solu- ja limakalvoimmuniteetin. Marsujen rokottaminen sai aikaan merkittäviä neutraloivia vasta-aineita ja anti-FMDV-immunoglobuliini A (IgA) -vasta-aineita ja 100-prosenttinen suoja marsuille altistusta vastaan.78

Rekombinantti koiran adenovirus tyyppi 2 (CAV2), joka ilmentää kapsidiproteiineja (P1/3C) (kuvio 1), kykeni laukaisemaan voimakkaan humoraalisen immuunivasteen marsuissa. Koiran adenovirus tyyppi 2 (CAV2) ekspressoiva VP1-proteiini ei kuitenkaan saanut aikaan kestävää vasta-ainevastetta marsuissa tai hiirissä.79

Adenovirus 5:llä rokotettu siat sytomegaloviruksen tehostajalla, joka koodaa A24-2B (Ad5-CI-A24-2BC), sai aikaan neutraloivan vasta-ainevasteen huipun 7–14 dpv:llä ja sai aikaan korkeamman IgM-tuotannon 7 dpi.14 Modifioitu sytomegaloviruspromoottori paransi vektorin tehokkuutta ja lisäsi soluinfektiota soluviljelmässä, rokotteen saanut ryhmä oli täysin suojattu altistuksen jälkeen.14

Hiirten lihaksensisäinen siirrostus rekombinanteilla, FMDV-baculoviruksen rekombinanttikapsidiproteiinilla, joka oli kloonattu sytomegaloviruksen välittömällä varhaisella tehostajalla promoottorina (CMV-IE), ja T-solujen immunogeeniä koodaavalla alueella T-soluepitoopeilla, indusoivat tehokkaasti neutraloivia vasta-aineita ja gamma-interferonia ( IFN- ).80 P1- 2A ja 3C:tä koodaavat alueet Silkkiäistoukkien pupuissa (Bombyx mori) ilmentyneet suu- ja sorkkataudin serotyyppi A:t kykenivät indusoimaan korkeat spesifisten vasta-aineiden tiitterit ja suojautuivat täysin virulentilta homologiselta virukselta.81

Monien antigeenisten peptidien järjestelmä on erittäin immunogeeninen verrattuna suu- ja sorkkataudin rokoteantigeenien yksittäiseen lineaariseen peptidiin.82 Synteettiset dendrimeeripeptidit, joissa on kaksi kopiota tärkeimmistä FMDV-antigeenisestä B-solun antigeenikohdasta [VP1 (140–158)], kovalenttisesti liitettynä heterotyyppiseen T-solun antigeeniseen kohtaan ei-rakenneproteiinista 3A [3A (21–35)], on osoitettu suojaavan sikoja virusaltistukselta.83 Dendrimeeripeptidi, joka tuottaa heterotyyppisen ja erittäin konservoituneen FMDV 3A:n (21–35) T-soluepitooppi on myös parantanut neutraloivia vasta-aineita ja IFN-vasteita.84 70 prosentilla B2T-rokotetuista sioista täydellinen suojaus – ei kliinisiä taudin merkkejä – havaittiin virusaltistuksen yhteydessä 25. päivänä immunisoinnin jälkeen.84

DNA rokotteet

Enkefalomyokardiittiviruksen (EMCV) sisäinen ribosomin sisäänpääsykohta (IRES) on poistettu ja L-geeni, joka osallistuu solujen sulkemiseen eIF46,85:n proteolyysin kautta, on poistettu ja EMCV IRES, jonka on osoitettu lisäävän ilmentymistehokkuutta, on poistettu. on liitetty ylävirtaan P1-sekvensseistä.86 DNA-rokote, joka koodaa P1-2A:ta ja GM-CSF:ää adjuvantilla indusoituneena vahvana FMDV-spesifisenä ja neutraloivana vasta-aineena sekä indorsoivia sytokiineja IL-8 ja IFN:n tuotanto sioissa.87

DNA-rokotteet, jotka perustuvat viruksen minigeeneihin, jotka vastaavat kolmea pääasiallista B- ja T-solujen FMDV-epitooppia: VP1 (aminohapposekvenssi 133–156)-3A (aminohapposekvenssi 11–40) ja VP4 (20–34) suojaavat hiiriä spesifisten vasta-aineiden puuttuessa altistushetkellä.88

FMDV-DNA-rokotteen nenänsisäinen anto; Kitosaanin käyttö kuljetusvälineenä ja IL{0}} molekyyliadjuvanttina on indusoinut limakalvojen ja systeemisen immuunivasteen tehostuneella soluvälitteisellä immuniteetilla (CMI), minkä osoittaa korkeampi T-soluproliferaatiotaso, CTL-vaste, ja IFN-:n ilmentyminen sekä CD4 plus että CD8 plus T-soluissa. 73

Hiiret, jotka on rokotettu plasmidilla, joka ekspressoi VP1:tä ja IL9:ää geneettisenä adjuvanttina ja joissa anti-apoptoosimekanismi on käynnistetty, ovat kehittäneet vahvan humoraalisen vasteen, korkean IFN- ja perforiinitason CD8- ja T-soluissa, mutta eivät IL:llä{{6} } näissä T-soluissa. IL-9 lisäsi Beclin-geenin ilmentymistä ja esti T-solujen apoptoosia.89

Toinen tutkimus paljasti, että interleukiinia-6 ja IFN:ää ilmentävällä VP1-DNA-rokotteella, jota käytettiin molekyyliadjuvantteina, on parantuneet antigeenispesifiset soluvälitteiset vasteet. Se indusoi myös korkean IgG2a/IgG1-, IFN-, IL-4- ja dendriittisolujen kypsymisen.90

Käyttämällä IL-2:a geneettisenä adjuvanttina DNA-rokotteessa, joka koodaa, kahden FMDV VP1 -epitoopin (aminohappotähteet 141–160 ja 200–213), jotka sisältävät useita epitooppeja, on saatava aikaan sekä T-solujen lisääntyminen että neutraloiva vasta-aine suu- ja sorkkatautia vastaan ​​sioissa. käyttämällä IL-2:a geneettisenä adjuvanttina.91,92

P1-2A3C3D:tä koodaavalla anti-FMDV-DNA-rokoteplasmidilla ja sian "TNF-perheeseen kuuluvaa B-soluja aktivoivaa tekijää" (BAFF) ilmentävällä plasmidilla immunisoidut siat edistivät B-solujen kypsymisen aktivaatiota ja immunoglobuliiniluokan vaihtoa.93

Replikapohjainen DNA-rokote säännöllisellä tehosteella tarjosi tehokkaan rokotestrategian FMDV:tä vastaan.94 Erilaisten antigeenisten kohteiden sisällyttäminen DNA-rokotteisiin on täydellinen tapa tehdä antigeeniseos yhdessä rokoteformulaatiossa. Hiiret, jotka on immunisoitu kolmella plasmidilla, jotka koodaavat suu- ja sorkkatautiviruksen (FMDV), pseudorabies-viruksen (PRV) ja klassisen sikaruttoviruksen (CSFV) antigeeniä, ovat osoittaneet lupaavia tuloksia.95

Marsujen lihaksensisäinen siirrostus FMDV:tä ilmentävillä DNA-plasmideilla, jotka sisälsivät inokuloidun sian IgG-geenin signaalisekvenssin, osoitti neutraloivan vasta-ainevasteen ja pernasolujen lisääntyminen lisääntyi tehosteannoksen jälkeen, mutta eläimiä ei suojattu virusaltistukselta.96

DNA-rokote, joka koodaa T-soluepitooppeja ja B-soluepitooppeja VP1:n kohdista 135–167 ja paikka 1 sisältää 141–160 aluetta (G–H-silmukka) ja FMDV-tyypin O VP1:n karboksyylipää, ovat saaneet aikaan voimakkaan soluimmuunivasteen kuten havaittiin käyttämällä T-soluproliferaatiomääritystä.97

Kapsidiproteiinia koodaavan FMDV-DNA-rokotteen, kationisen PLGA:n (poly(laktidi-ko-glykolidi) vehikkelinä ja naudan IL-6 geneettisenä adjuvanttina koodaavan FMDV-DNA-rokotteen nenänsisäinen antaminen on osoittanut tehostuneita limakalvojen ja systeemisiä immuunivasteita rokotetuilla eläimillä.98

DNA-rokote, joka ekspressoi kapsidiproteiinia (P1-2A, 3C ja 3D), joka oli pohjustettu pGM-CSF:llä ja tehostettu inaktivoidulla FMDV-antigeenillä, osoitti huomattavan tason ristiserotyyppien reaktiivisuutta rokotetuissa sioissa. Merkittävä taso ristiinserotyyppien reaktiivisuutta A, C ja Asia1 vastaan ​​raportoitiin viruksen neutralointi- ja ELISA-testeissä.99 Kuitenkin DNA-rokote, joka ekspressoi VP1-proteiinia ja tuotti FMDV:n 5'UTR:ään kohdistettua antisense-RNA:ta, indusoi spesifisen immuunivasteen rokotetuissa. hiiret.72

DNA-rokote, joka ekspressoi VP1:tä yhdessä IL-15:n (molecular adjuvant) kanssa, lisäsi limakalvon erittyvää IgA:ta ja seerumin IgG:tä ja soluvälitteistä immuniteettia (CMI), mikä on todistettu antigeenispesifisen T-solujen lisääntymisen ja sytotoksisten T-lymfosyyttien korkeammilla tasoilla (CTL) vaste ja suurempi IFN-ekspressio sekä CD4 plus että CD8 plus T-soluissa informoivat perna- ja limakalvokohtia.

Rekombinanttirokotteet valmistetaan yhdistämällä uudelleen isännän Ig-superperhe, ja virusepitoopit ovat parantaneet rokotettujen eläinten humoraalista ja sellulaarista immuunivastetta. RNA-rokotteet ovat tehokkaita IgG-luokan vaihtajia, minkä lisäksi korkea IgM-tiitteri on havaittu myös rokotetuissa hiirissä.100 Plasmidi-DNA:lla, joka sisältää FMDV:n epitooppeja, on ihanteellinen kudosjakauma hiirissä.101

Pitkäkestoisen immuniteetin aikaansaamisen haasteet

T-lymfosyyttien alapopulaatioissa, toiminnallisessa kompetenssissa ja runsaudessa tapahtuu merkittävä muutos FMDV:n eri serotyypeillä tapahtuvan infektion jälkeen.102 BoCD4 plus- ja boCD8 plus T-solujen määrä vähenee 48 tuntia infektion jälkeen (pi). Kuitenkin boWC1 plus T-solujen alasäätelyä havaitaan 48 hv asti FMDV-serotyypin O kanssa. Rokotettujen eläinten lymfosyytit osoittivat boCD4 plus, boCD8 plus ja boWC1 plus T-solujen merkittävää lisääntymistä FMDV:lle altistumisen jälkeen. 102

Luonnollisen infektion jälkeen 3A-NS-proteiinin ilmentyminen lisääntyy merkittävästi taudin eri vaiheissa erilaisissa lymfosyyteissä, mikä johtaa CD4 plus- ja CD8 plus T-solujen ohimenevään immunosuppressioon. 34

NS-proteiineilla, erityisesti 3A:lla, tapahtuvan isäntäproteiinikaupan tuhoaminen häiritsee täysin, joten se ei aiheuta CD8 plus T-soluvastetta,31 Heikon CTL:n vuoksi virus säilyi eläimessä. Integriinireseptorit välittävät luuytimestä peräisin olevaa DC-apoptoosia ja estävät isännän luontaista immuniteettia.32 Toinen tärkeä isännän immuniteettia häiritsevä ilmiö on Lbpro, erittäin konservoitunut domeeni, jolla on tärkeä rooli estämällä avainsignalointimolekyylien ubikvitinaatiota tyypin aktivoinnissa. I IFN-vaste, kuten retinoiinihapolla indusoituva geeni I (RIG-I), TANKia sitova kinaasi 1 (TBK1), TNF-reseptoriin liittyvä tekijä 6 (TRAF6) ja TRAF3.103 Tämä vähentää IFN:n välittömän ja varhaisen aloituksen tasoa mRNA:n ja IFN:n stimuloimat geenituotteet.102 Lisäksi 3Cpro estää Golgin sisäisen kuljetuksen hajottamalla Golgin sisäiseen kuljetukseen tarvittavaa proteiinia.

Guzman ym.33 ja Joshi ym.34 analysoivat korvausvasteita CTL:n tappamiselle, kuten proliferaatiota tai IFN:n tuotantoa CD8:aa ilmentävien solujen toimesta, joista on raportoitu, mutta monet CD8:aa plus ekspressoivat lymfosyytit, jotka eivät ole IFN:ää tuottavia CTL:itä, mukaan lukien NK-solut ja δT:n alajoukot. -solut. 35–37,39,104

CTL-aktiivisuus, joka arvioitiin 10 päivää Ad5-FMDV-3C-altistuksen jälkeen, osoitti CTL-aktiivisuuden merkittävän lisääntymisen 10 päivää altistuksen jälkeen tehostetasoihin verrattuna, mutta palautui lähtötasolle 17 päivän kuluttua. haaste.17 Yritys arvioida CTL-aktiivisuutta päivänä 4 ei kuitenkaan onnistunut saamaan tarpeeksi soluja. Tämä johtui FMDV:n aiheuttamasta lymfopeniasta ja immunopatologiasta. IFN-vasteen ja rokotteen aiheuttaman suojan välillä on positiivinen yhteys sen lisäksi, että suu- ja sorkkatautiviruksen pitkäaikainen pysyvyys heikkenee.38

Oh et al.38 mukaan CD4 plus T-solut ovat tärkeimmät lisääntyvät fenotyypit ja IFN:ää tuottavat solut.

Riippumatta FMDV-serotyypistä seerumin IFN-huippu saavutti 2–3 päivää infektion jälkeen, lymfopenia vastasi huippuviremiaa ja seerumin IFN-vastetta, ja kiertävien plasmosyyttien dendriittisolujen (pDC) määrä ja in vitro pDC IFN-tuotanto väheni ohimenevästi 48 tunnin kuluttua. Injektoidusta FMDV-serotyypistä tai sairastuneen eläimen iästä riippumatta lymfosyyttien tai pDC:iden infektiota ei koskaan löydetty.39

IFN:n muodostuminen monosyyttiperäisistä DC:istä (MoDC) ja ihosta peräisin olevista DC:istä (ihon DC:t) estyy sikainfektion akuutin vaiheen aikana. Tämä vaikutus tapahtuu samanaikaisesti kohonneiden virustiitterien kanssa veressä, mutta nämä solut eivät tartu tuottavasti. Mielenkiintoista on, että näiden DC:iden kyky ottaa hiukkasia ja käsitellä antigeenejä ei muutu, mikä osoittaa, että antigeenit eivät vaikuta niiden kykyyn ottaa hiukkasia ja käsitellä antigeenejä.35

Johtopäätös

Yllä olevan kirjallisuuden ja tutkimuspuutteen perusteella se esittää seuraavat suositukset. Perinteisten rokotteiden solujen internalisaatiota, glykosylaatiomallia, antigeenin esiintymistä ja positiivisen valinnan mekanismeja (patogeenisen kannan kehittyminen) tulee tutkia. Rokotteen aiheuttama CD8 plus T CMI vahvistaa pitkäikäistä immuunivastetta ja ristisuojaa. δ-T-solureseptoreilla on rooli immuunipatogeneesissä, pysyvyydessä ja CTL-tuotannossa, mitä tulisi tutkia laajasti. Rekombinanttiproteiini virtaussytometrin ja ELISpot ELISA:n avulla rokotepartikkelien internalisoitumisen, antigeenin esittelyn ja antigeeniä esittelevien solujen ristikkäiskeskustelun arvioimiseksi.

Olisi kehitettävä uusia verkkopohjaisia ​​työkaluja, jotka osoittavat sivuketjujen vaikutukset B- tai T-soluepitooppiin. Eläinmallin infektioiden ja rokotteiden kehittämisen ja tehokkuuden testien käyttöä tulee hakea selkeästi, koska koe-eläimissä on huomattava integriinireseptoriero ja sikoja ja märehtijöitä on olemassa. Genominlaajuisten CTL-epitooppien laskennallisella arvioinnilla integroimalla epitooppien arvaustyökalut suuren määrän virussekvenssejä laskemiseen ja myöhempään in vivo -arviointiin on suuri etu tuottaa rokotteita, joilla on pitkäkestoinen suoja- ja ristisuojauskyky.

Lyhenteet

3A, ei-rakenneproteiini; Ad5, adenovirus 5 Vector; 3Cpro, 3C-proteaasi (ei-rakenneproteiini); BEI, binaariset etyleeniamiinit; BHK-solu, Baby hamsterin munuaissolu; CD4 plus, klusterin erilaistumistekijä neljä positiivista; CD8 plus, klusterin erilaistumistekijä kahdeksan positiivinen; cDNA, komplementaarinen DNA; CTL, sytotoksiset T-solut; DC, dendriittisolu; ELISA, Enzyme linked Immunosorbent Assay; Suu- ja sorkkatauti, suu- ja sorkkatauti; FMDV, suu- ja sorkkatautivirus; GM-CSF, granulosyyttejä ja monosyyttejä pesäkkeitä stimuloiva tekijä; IFN-, interferoni alfa; IFN-, gamma-interferoni; Ig, immunoglobuliini; IL, interleukiini; LTR, pitkä terminaalitoisto; NK-solut, luonnolliset tappajasolut; NS-proteiini, ei-rakenneproteiini; P1-2A, rakenteellisen proteiinin esiasteen geeni; P1-2A3C3D, viruksen rakenneproteiinien esiaste P1–2A ja ei-rakenteelliset proteiinit 3C ja 3D; PBMC, perifeerisen veren yksitumainen; RT-PCR, käänteistranskriptiopolymeraasiketjureaktio; SAT, Etelä-Afrikan tyyppi; TGE, ohimenevä geeniekspressio; TGF, tuumorin kasvutekijä; TNF, tuumorinekroositekijä; Th-solut, T-auttajasolut; VP1, virusproteiini 1; 5 T-solut, Gamma-delta-T-solut.

Tietojen jakamista koskeva lausunto

Tässä katsauksessa käytetyt tiedot ovat toissijaisia ​​ja sisältyvät artikkeliin.

Tunnustus

Olen erittäin kiitollinen Gondarin yliopiston tutkimus- ja yhteisöpalveluvarapresidentin toimistolle materiaalien ja taloudellisen tuen tarjoamisesta. Kiitän myös Gondarin yliopiston eläinlääketieteen ja eläintieteiden korkeakoulua laitoksen lisätuesta.

Rahoitus

Kirjoittaja kiittää Gondarin yliopiston tutkimus- ja yhteisöpalvelujohtajan toimistoa.

Tietojen paljastaminen

Kirjoittaja vakuuttaa, että tässä työssä ei ole eturistiriitoja.

Viitteet

1. Kitching P, Hammond J, Jeggo M, et ai. Maailmanlaajuinen suu- ja sorkkataudin valvonta – onko se vaihtoehto? Rokote. 2007;25(30):5660–5664. doi: 10.1016/j. rokote.2006.10.052

2. Raza S, Siddique K, Rabbani M, et ai. Aftovirusserotyyppien neljän rakenneproteiinin mikrobipatogeneesi in silico -analyysi paljasti merkittäviä B- ja T-soluepitooppeja. Mikrob Patog. 2019; 128 (elokuu 2018): 254–262. doi:10.1016/j.micpath.2019.01.007

3. Arzt J, Belsham GJ. Suu- ja sorkkataudin tarttuminen jatkuvasti tartunnan saaneelta kantajakarjalta naiiveille nautaeläimille suunnielun nesteen kautta. Eläinlääkärin maailma. 2018; 3:318. doi:10.1128/ mSphere.{8}}

4. Arzt J, Pacheco JM, Stenfeldt C. Virulentin ja heikennetyn suu- ja sorkkatautiviruksen patogeneesi nautakarjassa. Eläinlääkärin maailma. 2017; 14:89. doi:10,1186/s12985-017-0758-759

5. Sobhy NM, Bayoumi YH, Mor SK, El-Zahar HI, Goyal SM. Suu- ja sorkkataudin puhkeaminen Egyptissä: molekyyliepidemiologia, evoluutio ja sydämen biomarkkerien prognostinen merkitys. Int J Vet Sci Med. 2018; 6(1):22–30. doi: 10.1016/j. juuri.2018.02.001

6. Senthilkumaran C, Yang M, Bittner H, et ai. Genomin, antigeenin ja vasta-aineiden havaitseminen suu- ja sorkkatautiviruksella infektoituneiden sikojen suunesteistä. Can J Vet Res. 2017; 81:82–90.

7. Palinski RM, Bertram MR. Suu- ja sorkkatautiviruksen serotyypin O alalinjan Ind2001e ensimmäinen genomisekvenssi Etelä-Vietnamista. Microbiol Resour Announc. 2019;8: e01424–18. doi:10.1128/mra.{10}}

8. Pulido MR, Sobrino F, Borrego B, et ai. Heikennetty suu- ja sorkkatautiviruksen RNA, jossa on deleetio 3' ei-koodaavalla alueella, voi saada aikaan immuniteetin sioissa. J Virol. 2009;83(8):3475–85. doi:10.1128/JVI.{11}}

9. Saravanan P, Iqbal Z, Selvaraj DPR, Aparna M, Umapathi V. Kemiallisten uuttomenetelmien vertailu 146S-pitoisuuden määrittämiseksi suu- ja sorkkataudin öljyadjuvanttirokotteessa. J Appl Microbiol. 2019;1(Rueckert 1985):1–9. doi:10.1111/jam.14465

10. Jamal SM, Belsham GJ. Suu- ja sorkkatauti: menneisyys, nykyisyys ja tulevaisuus. Vet Res. 2013;44(1):1–14. doi:10.1186/1297-9716- 44-116

11. Robinson L, Knight-Jones TJ, Charleston B, et ai. Maailmanlaajuinen suu- ja sorkkatautitutkimuksen päivitys ja puutteiden analyysi: 7 - patogeneesi ja molekyylibiologia. Transbound Emerg Dis. 2016;63(1):63–71. doi:10.1111/tbed.12520

12. Sreenivasa BP, Mohapatra JK, Pauszek SJ, et ai. Rekombinantti ihmisen adenovirus-5, joka ilmentää suu- ja sorkkatautiviruksen intialaisten rokotekantojen kapsidiproteiineja, saa aikaan tehokkaan vasta-ainevasteen nautakarjassa. Eläinlääkäri Microbiol. 2017; 203:196–201. doi:10.1016/ j.vetmic.2017.03.019

13. Neilan JG, Schutta C, Barrera J, et ai. Adenovirusvektoroidun suu- ja sorkkatautiviruksen serotyyppien A-alayksikkörokotteen teho nautakarjassa suoran kosketuksen tartuntamallilla. BMC Vet Res. 2018;14(1):1–9. doi:10,1186/s12917-018- 1582-1

14. Pena L, Pires M, Koster M, et ai. Suu- ja sorkkatautiviruksen tyhjän kapsidialayksikköantigeenin toimittaminen ei-rakenteellisen proteiinin 2B kanssa parantaa sikojen suojaa. Rokote. 2008; 26 (45): 5689–5699. doi:10.1016/j.vaccine.2008.08.022

15. Barteling SJ, Cassim NI. Erittäin nopea (ja turvallinen) suu- ja sorkkatautiviruksen ja enterovirusten inaktivointi binäärisen etyleeni-imiinin ja formaldehydin yhdistelmällä. Dev Biol (Basel). 2004; 119:449–455

16. Rweyemamu MM, Umehara O, Giorgi W, Medeiros R, Neto DL, Baltazar M. Formaldehydin ja binäärisen etyleeni-iminin (BEI) vaikutus suu- ja sorkkatautiviruksen kapsidin eheyteen. Rev Sci Tech. 1989;8(3):747–764. doi:10.20506/rst.8.3.425

17. Patch JR, Kenney M, Pacheco JM, Grubman MJ, Golde WT. Sytotoksisten T-lymfosyyttien toiminnan karakterisointi suu- ja sorkkatautivirusinfektion ja rokotuksen jälkeen. Viral Immunol. 2013;26(4):239–249. doi:10.1089/vim.2013.0011

18. Rodriguez-Calvo T, Ojosnegros S, Sanz-Ramos M, Garcia-Arriaza J, Escarmis C, Domingo E, Sevilla N. Uusi rokotesuunnittelu, joka perustuu viallisiin genomeihin, joissa yhdistyvät heikennettyjen ja inaktivoitujen rokotteiden piirteet. PLoS One. 2010;5(4):1–11. doi:10.1371/ journal.pone.0010414

19. Núñez JI, Baranowski E, Molina N, et ai. Ei-rakenteellisen proteiinin 3A happosubstituutio voi välittää suu- ja sorkkatautiviruksen sopeutumista marsuun. J Virol. 2001. doi:10.1128/JVI.75.8.3977-3983.2001

20. Burman A, Clark S, Abrescia NGA, et ai. Suu- ja sorkkatautiviruksen VP1 GH -silmukan spesifisyys v 6 -integriineille. J Virol. 2006;80(19):9798–9810. doi:10.1128/JVI.{12}}

21. Dicara D, Burman A, Clark S, et ai. Suu- ja sorkkatautivirus muodostaa erittäin vakaan, EDTA-resistentin kompleksin pääreseptorinsa, integriini v 6:n kanssa: vaikutukset tarttuvuuteen. J Virol. 2008;82(3):1537–1546. doi:10.1128/JVI.{12}}

22. Domingo E, Sheldon J, Perales C, et ai. Viruksen kvasilajin evoluutio. Microbiol Mol Biol Rev. 2012;76(2):159–216. doi:10.1128/MMBR.{8}}

23. Mckenna TS, Lubroth J, Rieder E, et ai. Reseptoreita sitovan kohdan deletoitu suu- ja sorkkatautivirus (FMD) suojaa nautakarjaa suu- ja sorkkataudilta. J Virol. 1995;69(9):5787–5790. doi:10.1128/ jvi.69.9.{14}}.1995

24. Dimarchi R, Brooke G, Gale C, Cracknell V, Doel T, Mowat N. Naudan suojaaminen suu- ja sorkkatautia vastaan ​​synteettisellä peptidillä. Tiede. 1986; 232:639–641. doi: 10.1126/science.3008333

25. Gómez N, Salinas J, Escribano JM, et ai. Suojaava immuunivaste suu- ja sorkkatautivirukselle VP1:n kanssa, joka ilmentyy siirtogeenisissä kasveissa, suojaava immuunivaste suu- ja sorkkatautivirukselle, jossa VP1 ekspressoituu siirtogeenisissä kasveissa. J Virol. 1998;72:2–5.

For more information:1950477648nn@gmail.com