Cistanche Deserticolan kokonaisglykosidien vaikutukset hepG2-solujen Wnt/-Catenin Signaling Reitti -proteiinin proliferaatioon, apoptoosiin ja ilmentymiseen

FENG Duo1,2, WANG Jing2, JIANG Yong-jun3, ZHOU Shi-qi1, DUAN Hao1, GUO Yu1, ZHAO Jian1, YAN Wen-jie1,*

(1.Beijing Key Laboratory of Bioactive Substances and Functional Food, College of Biochemical Engineering, Beijing Union University, Beijing 100023, China; 2. Institute of Food and Nutrition Development, maatalous- ja maaseutuministeriö, Peking 100081, Kiina; 3. Inner Mongolia Sankou Biotechnology Co., Ltd., Ordos, Sisä-Mongolia 017000, Kiina)

Abstrakti: Tutkia estovaikutustaglykosidit yhteensäCistanche deserticola(TG) HepG2-soluissa ja sen mekanismissa. Tässä artikkelissa eri konsentraatioita (0, 3,5, 10,5, 21, 31,5, 42 ug/ml) TG:tä käsiteltiin 24 tunnin ajan HepG2-maksasyöpäsoluilla, ja HepG2-solujen elinkelpoisuus havaittiin käyttämällä CCK8-määritystä. . HepG2-soluapoptoosin havaitsemiseen käytettiin Hoechst33342/PI-kaksoisvärjäysmenetelmää ja Annexin V-FITC/PI:tä. Solujen migraatioilmiö havaittiin solumigraatiomäärityksellä. Sillä välin solusyklin etenemisen muutokset havaittiin virtaussytometrialla. Ja -fetoproteiinin (AFP), -kateniinin, disheveledin (Dsh) ja GSK-3 ilmentyminen havaittiin Western blot -menetelmällä. Tulokset osoittivat, että TG saattoi vähentää HepG2-solujen proliferaatiota pitoisuudesta riippuvaisella tavalla, jolloin solujen elinkelpoisuus oli vain 31,04 prosenttia, kun TG oli 42 ug/ml. Lisäksi TG voi vaurioittaa solurakennetta ja indusoida solujen apoptoosia, ja apoptoosinopeus voi olla jopa 32,44 prosenttia AV/PI-detektiolla. Lisäksi TG voisi myös edistää solunekroosia ja rajoittaa solujen migraatiota. Käsitellyn ryhmän ja kontrolliryhmän välillä oli merkittäviä eroja. Samaan aikaan suuri TG-pitoisuus voisi pysäyttää HepG2-solut G2/M-vaiheessa. Lopuksi verrokkiryhmään verrattuna -kateniinin ja Dsh:n suhteellinen ekspressio väheni, kun taas GSK-3 lisääntyi TG-käsitellyissä ryhmissä. Yhteenvetona voidaan todeta, että TG voisi estää HepG2-solujen kasvua vaikuttamalla solusyklin etenemiseen, edistämällä apoptoosia ja rajoittamalla solujen migraatiota. Mekanismi voi tapahtua Wnt/-catenin-signalointireitin kautta, joka aktivoi GSK-3-kateniinin hajoamaan maksasyövän estämiseksi.

Avainsanat: Cistanche deserticola; kokonaisglykosidit; HepG2-solu; anti-hepatooma; Wnt/-Catenin signaalireitti

Cistanche deserticola makuuluu lääke- ja elintarvikehomologiseen aineeseen ja on Orobaceae-lajin monivuotinen loisyrtti.Sillä on hapettumista estäviä, väsymystä, ikääntymistä estäviä, kasvaimia, maksan suojaavia, endokriinisiä säätelyjä, muistia parantavia ja osteoporoosia estäviä vaikutuksia. Se tunnetaan nimellä "Aavikon ginseng". Vahvistettuaan, että deserticola deserticolasta on tullut lääke- ja elintarvikehomologinen aine vuonna 2018, se on herättänyt paljon huomiota. Se ei voi olla vain kiinalaisen kasviperäisen lääketieteen kliinistä käyttöarvoa, vaan myös vaikuttaa ruoan ravitsemukselliseen interventiovaikutukseen.Se osoittaa myös suurta potentiaalia uusien luonnollisten maksasyövän vastaisten tuotteiden kehittämisessä [2-3]. Deserticola deserticola -ruokien ravitsemustutkimukset ja toiminnalliset vaikutukset syvenevät yhä enemmän [4].

Aavikon elävä vesisäiliö

Viime vuosina on raportoitu, että Cistanche deserticolalla onkasvainten vastainenvaikutus. Ye et ai. [5]ovat havainneet, että Cistanche deserticola -suolasta uutettu echinacea voi estää HepG2-solujen lisääntymistä vähentämällä TREM2:n ilmentymistä ja estämällä PI3K/AKT-signaalireitin; Jotkut tutkijat ovat havainneet, että Cistanche deserticolan fenyylietanoidiglykosidit voivat estää HepG2-solujen lisääntymistä [6]; Ekinosidilla on tietty estovaikutus munuaissyöpä 786-O-solujen [7] ja SW480 paksusuolensyöpäsolujen [8] lisääntymiseen; Toisessa tutkimuksessa Cistanche deserticolasta peräisin olevien fenyylietanoidiglykosidien on osoitettu vähentävän maksavaurioita H22-kasvainta kantavissa hiirissä ja parantavan immuunijärjestelmää alentamalla AFP-tasoja, mikä vaikuttaa haitallisesti kasvaimen kasvuun [9]. Sekä Cistanche deserticola -keite [10] että polysakkaridi [11] voidaan kuljettaa Wnt/- Catenin-signalointireitin kautta, mikä parantaa Parkinsonin rottien kliinisiä oireita ja sillä on hermoja suojaava rooli. Lisäksi tutkimukset ovat osoittaneet, että echinacea voi estää Wnt by/ - Catenin-signalointireitillä on rintasyövän vastainen rooli [12]; Lisäksi se voi myös vähentää THP-1-soluja ihmisen akuutissa leukemiassa – kateniiniproteiinin ilmentymistä [13]. Koko ajan Wnt/-Catenin-signalointireitti on saanut huomattavaa huomiota [14]. On raportoitu, että se voidaan havaita 20 prosentissa - 35 prosentissa HCC-tapauksista [15] - Catenin aktivaatio. On olemassa yhä enemmän todisteita siitä, että Wnt/-Catenin-signalointireitillä on tärkeä rooli maksasyövän esiintymisessä ja kehittymisessä [16], mutta säätelevätkö Cistanche deserticolan kokonaisglykosidit Wnt/- - Hepatoomaa estävästä vaikutuksesta on vain vähän raportteja. Catenin-signalointireitti. Cistanche deserticola -uutteen kokonaisglykosideja, mukaan lukien fenyylietanoidiglykosidit ja muut glykosidit [17], tutkittiin tässä kokeessa tutkimalla HepG2-solujen proliferaatiota, apoptoosia, migraatiota ja niihin liittyviä proteiinien ilmentymistasoja, jotka Cistanche deserticola (TG) indusoivat. , tutkia TG:n mekanismia, joka estää maksasyöpää, ja selittää TG:iden mahdollista mekanismia maksasyöpää vastaan. Tarjota tietty tieteellinen perusta Cistanche deserticolan kliinisen käytön lisäämiselle maksasyövän alalla.

Fenyylietanoliglykosidi on Cistanche deserticolan tärkein aktiivinen komponentti

1.Materiaali ja metodit

1.1 Materiaalit ja välineet

HepG2-solut (Human Hepatocellulaariset karsinoomat) hankittiin Peking Unionin lääketieteellisen yliopiston, Kiinan peruslääketieteen instituutin solukeskuksesta.KokonaisglykosiditCistanche-uutejauhe(massaosuus suurempi tai yhtä suuri kuin 75 prosenttia yhdistettynä ekinakosidiin ja uima-altaan reunaan, toimittaa Inner Mongolia Sankou Biotechnology Co., Ltd.) liuotettiin DMEM-elatusaineeseen vastaaviin TG-pitoisuuksiin myöhempiä kokeita varten.

Cistanche-uutejauhe

Napsauta tästä nähdäksesi Cistanche Extract Protect Liver -tuotteet

【Ask for more】 Email: xue122522@foxmail.com /  Whats App:  0086 18599088692 /  Wechat:  18599088692

Naudan sikiön seerumi ostettiin Gibcolta, USA; Vasta-aineet (penisilliini-streptomysiini gentamysiini-seosliuos), DMEM-H-elatusaine, soluapoptoosin ja solusyklin havaitsemispakkaus, anneksiini V-FITC/väriliuos ja apoptoosin Hoechst 33342/PI-väriliuos ostettiin Genview'lta; 0,25 prosentin trypsiini- ja BCA-proteiinipitoisuuden määrityspakkaus ostettiin yhtiöltä Beijing Dingguo Changsheng Biotechnology Co., Ltd; Kanin anti-kateniinivasta-aineet ostettiin ABclonalilta; Kanin anti-Dsh (ADAR1) -vasta-aine ostettiin Biosilta; Kanin anti-GSK3-vasta-aineet ja kanin anti-AFP-vasta-aineet ostettiin Affinityltä. CO2-soluhautomo (Innova CO-170), matalan lämpötilan nopea pöytäsentrifugi (3K15, Sigma, Saksa), monitoiminen entsyymimerkintälaite (INFINITE M NANO TECAN), fluoresenssimikroskooppi (C-SHG1, Nikon, Japani) ), virtaussytometria (FACSCALIBUR, BD, USA), elektroforeesilaite (EN027015, BIO-RAD, USA), kalvonsiirtolaite (043BR57802, BIO-RAD, USA).

1.2 Kokeellinen menetelmä

1.2.1 Solujen kulku

HepG2-soluja viljeltiin täydellisessä DMEM-elatusaineessa, joka sisälsi 1 0 % naudan sikiön seerumia ja 1 % kolmoisvasta-aineita (100 U/ml penisilliiniä, 100 mg/ml streptomysiiniä ja gentamysiiniä) 5 % CO2-soluinkubaattorissa 37 °C:ssa. tutkinto. Kun solut kasvoivat 80-90 prosentin yhtymäkohtaan, ne digestoitiin 0,25 prosentilla trypsiinillä (-EDTA) ja jatkoviljeltiin suhteessa 1:2:4. Solujen kasvun 2-3 päivän jälkeen logaritminen kasvu vaiheen solut otettiin alaviljelmää tai myöhempiä kokeita varten

1.2.2 TG:n vaikutus HepG2-solujen morfologiaan

Logaritmisen kasvuvaiheen HepG2-solut otettiin ja siirrostettiin 24-kuoppalevylle solukonsentraatiolla 5 ug per kuoppa × 104 kpl/ml, sen jälkeen kun solut ovat kiinnittyneet seinämään, lisää TG. lopulliseen konsentraatioon 0, 3,5, 10,5, 21, 31,5, 42 µG/ml, 0,5 ml kuoppaa kohti, viljeltiin 24 tuntia ja tarkkailtiin kunkin ryhmän solumorfologiaa valomikroskoopilla.

1.2.3 TG:n vaikutus HepG2-solujen proliferaatioon

Ota HepG2-solut logaritmisessa kasvuvaiheessa ja säädä solukonsentraatio arvoon 1 × 104 kappaletta/kuoppa, siirrostettu 96-kuoppaisille levyille, lisäämällä 100 kappaletta per kuoppa μ 50. Inkuboidaan soluinkubaattorissa. Sen jälkeen kun solut ovat kiinnittyneet seinämään, niitä käsitellään edellä olevan kohdan 1.2.2 mukaisilla lääkkeillä ja jokaisessa ryhmässä on kuusi reperforaatiota, joita viljellään 24 tuntia. Solujen eloonjäämisaste mitattiin käyttämällä CCK8-menetelmää ja absorbanssiarvo (OD) mitattiin aallonpituudella 450 nm. Solujen eloonjäämisaste ja solun estoaste laskettiin käyttämällä seuraavaa kaavaa.

Kaavassa nollaryhmä sisältää vain CCK8-nestettä, kun taas kontrolliryhmä sisältää 0 μ G/ml käsittelyryhmän, koeryhmä: 3,5, 10,5, 21, 31,5, 42 μ G/ml käsittelyryhmä.

1.2.4 TG:n vaikutus HepG2-solusykliin

Ota logaritmisen kasvuvaiheen solut ja paina 5 x A solutiheys 105 solua per kuoppa ympättiin kuusikuoppaiselle levylle, ja järjestelmä, jossa oli 2 ml kuoppaa kohti, joka sisälsi 5 x 105 solua, asetettiin viljelylaatikkoon ja altistettiin lääkekäsittelylle. edellä kohdassa 1.2.2 kuvatulla tavalla. Viljelmän jälkeen suoritettiin seuraavat toimenpiteet pakkauksen ohjeiden mukaisesti.

1.2.5 TG:n vaikutus HepG2-solujen migraatioon:

Valitse logaritmisen kasvuvaiheen solut ja aseta ne kuusikuoppaiselle levylle. 2 ml:n järjestelmä kuoppaa kohden, joka sisälsi 6 × 105 solua, poistettiin, kun solujen adheesio ja soluaggregaatio olivat yli 90 prosenttia. Suorita huumehoito yllä olevan kohdan 1.2.2 mukaisesti. Valitse 0 tunnin kohdalla satunnaisesti 5 näkökenttää mikroskoopin alla valokuville, aseta ne inkubaattoriin jatkoviljelyä varten 24 tunniksi, ota valokuvia optisen mikroskoopin alla, käytä Image J -ohjelmistoa solujen naarmuuntumisalueen analysoimiseen ja laske migraationopeus seuraavan kaavan (2) mukaisesti [18].

1.2.6 Hoechst 33342/PI kaksoisvärjäysmenetelmä apoptoosin havaitsemiseen

Valitse logaritmisen kasvuvaiheen solut ja aseta ne {{0}}kuoppalevylle, jossa 0,5 ml:n järjestelmä, joka sisälsi 3 × 104 solua käsiteltiin edellä olevan kohdan 1.2.2 mukaisilla lääkkeillä ja 1 ml:lla soluvärjäyspuskuria. lisättiin, minkä jälkeen 5 µl Hoechst-väriainetta ja 5 µl LPI-väriliuosta värjäystä varten. Inkuboi pimeässä 37 asteessa 7-10minuuttia, ota 24-reikälevy ulos, kostuta se PBS:llä ja ota valokuvia fluoresenssimikroskoopilla tarkkailua varten.

1.2.7 HepG2-soluapoptoosin havaitseminen anneksiini V-FITC/PI-kaksoisvärjäyksellä

Valitse logaritmisen kasvuvaiheen solut ja aseta ne kuusikuoppaiselle levylle järjestelmällä 2 ml kuoppaa kohden, joka sisälsi 2 × 105 solua, käsiteltiin lääkkeillä yllä olevan kohdan 1.2.2 mukaisesti, ja seuraavat toimenpiteet suoritettiin pakkauksen ohjeiden mukaisesti. lisäämällä 5 µl Annexin V-FITC- ja 5 µl PI-värjäysliuosta, inkuboitiin 4 asteessa pimeässä ja asetettiin sitten virtaussytometriaan apoptoosin havaitsemista varten.

1.2.8 TG:n vaikutus proteiinin ilmentymiseen HepG2-soluissa

Press 2 × 106 solua/solu käsiteltiin edellä olevan kohdan 1.2.2 mukaisilla lääkkeillä käyttämällä 80 µl lysaattia (RIPA: PMSF=100:1), joka hajoaa proteiineja ja sitten SDS-PAGE-elektroforeesilla jokaisen proteiininäytteen erottamiseen. (50 näytettä per kuoppa μg) Suorita proteiinin siirto PVDF-kalvolle jäähauteessa käyttäen 1 × Puhdista teippi TBST-puskuriliuoksella, sulje BSA-ravistelupöytä hitaasti huoneenlämpötilassa 1 tunnin ajan ja lisää vasta-aine (AFP, GSK3) suhteessa - , - Catenin, Dsh), inkuboi 4 asteessa yön yli ja inkuboi sitten PVDF-kalvoa laimennetun sekundaarisen vasta-aineen kanssa huoneenlämpötilassa 1-2 tuntia. GAPDH:ta käytetään sisäisenä referenssinä. Kun olet kehittänyt ja kiinnittänyt PVDF-kalvon, tarkkaile muutoksia kohdeproteiinin ilmentymisessä [6].

1.3 Tietojen analysointi

ANONA yhden tekijän merkitsevyysanalyysi suoritettiin käyttämällä SPSS 25.0 tilastollista ohjelmistoa ilmaistaan; Virtaussytometrian kokeelliset tiedot analysoitiin käyttämällä Flowjoa; Käytä Graphpad Prism 8:a.0.2 piirtämiseen. P<0.05 indicates a statistically significant difference, while P<0.01 indicates a highly significant difference.

2.Tulokset ja analyysi

2.1 TG:n vaikutus HepG2-solujen morfologiaan

kuva 1 hepg2-solut, joita on käsitelty erilaisilla tg-pitoisuuksilla 24 tunnin ajan (200x)

Apoptoosiprosessin aikana ensinnäkin sen tilavuus pienenee ja muotoutuu vähitellen, ja sitten kiinnittyneet solut käyvät hitaasti läpi prosesseja, kuten kutistumista, pyöristymistä, irtoamista ja solunsisäistä kromosomipyknoosia. Jotkut ytimet rikkoutuvat, marginalisoituvat ja muodostuvat apoptoottisia rakkuloita. Kuten havaittiin kuviossa 1, 3,5 ja 10,5 µm Kun HepG2-soluja käsiteltiin g/ml TG:llä, solutilavuus pieneni vähitellen; Ja sitten visuaalisesti tarkkaile 21 μ G/ml:ssa ydin alkoi kutistua ja tilavuus pieneni; kolmekymmentäyksi piste viisi μ G/ml:ssa solujen mukana oli kelluvia ja solujätteitä; neljäkymmentäkaksi μ G/ml:ssa solukalvo repeää kokonaan, solut hajoavat, tapahtuu nekroosia ja raja on epäselvä. Solut ovat uhkaavan romahtamisen ja kuoleman tilassa.

2.2 TG:n vaikutus HepG2-solujen lisääntymiseen

Kuvio 2 TG:n vaikutus HepG2-solujen proliferaatioon

Huomautus: * tarkoittaa samaa kuin 0 μ Ero oli merkitsevä arvolla g/ml (P<0.05), and * * indicates a significant difference (P<0.01).

Kuten kuviosta 2 voidaan nähdä, 24 tunnin käsittelyn jälkeen erilaisilla TG-pitoisuuksilla HepG2-solujen proliferaatio on rajoitettu vaihtelevaan määrään. Verrattuna kontrolliryhmän solujen eloonjäämisprosenttiin, hoitoryhmän solujen eloonjäämisaste osoittaa laskevaa suuntausta pitoisuuden kasvaessa, mikä on 96,95 prosenttia, 92,59 prosenttia, 92,78 prosenttia, 77,24 prosenttia, 31,04 prosenttia ja pitoisuus on 3,5, 10,5 ja 21 μ G/ml:ssa ei ollut merkittävää eroa ja lasku oli pientä, kun taas 31,5 prosenttia μ G/ml ja 42 μ g/ml:ssa oli merkittävä ero (P<0.01), with an IC50 of 37.77 after TG treatment μ g/mL. CCK8 test results indicate that when TG concentration is 21 μ When the concentration is above g/mL, the inhibitory effect on HepG2 cells is better.

2.3 TG:n vaikutus HepG2-solusykliin

Kuvio 3 TG:n eri konsentraatioiden vaikutukset HepG2-solujen solusykliin

Kuten kuvasta 3 käy ilmi, 24 tunnin käsittelyn jälkeen erilaisilla TG-pitoisuuksilla havaittiin, että pitoisuuden kasvaessa G0/G1-faasi väheni asteittain, mikä oli 59,9 prosenttia, 56,7 prosenttia, 56 prosenttia, 54 prosenttia , 33,4 prosenttia ja 29,1 prosenttia , mikä laski merkittävästi; Vaiheen S osuus oli vastaavasti 14,3 prosenttia, 15,8 prosenttia, 16,8 prosenttia, 18,7 prosenttia, 25,1 prosenttia ja 27,6 prosenttia vaihtelevalla kasvulla; 3.5-21 verrokkiryhmään verrattuna (23,88 prosenttia) μ G2/M-vaiheessa g/ml:ssa on vain vähän muutosta, mikä on 25,85 prosenttia, 24,92 prosenttia ja 25,33 prosenttia. Kun TG on 31,5 μ G/ml ja 42 μ At g/ml, se kasvoi merkittävästi, 37,89 prosenttia ja 39,42 prosenttia. Tässä testissä havaittiin, että TG pieninä pitoisuuksina (3.5-21 μ G/ml) ei estä solujen jakautumista ja proliferaatiota pääasiallisella tavalla, joka vaikuttaa solukiertoon, ja korkeilla pitoisuuksilla (31,5 μ G/ml ja 42 μ G/ml) voi indusoida solupysähdyksen S- ja G2/M-vaiheessa, mikä estää solujen lisääntymistä. Samaan aikaan, kun TG on 31,5 μ G/ml ja 42 μ At g/ml, myös subG1 nousi, mikä on yhdenmukaista Sun Qianin et al. [19] että artemisiniinijohdannaiset voivat lisätä HepG2-solujen subG1-piikkiä korkeilla pitoisuuksilla. Hän havaitsi myös, että artemisiniinipitoisuuden kasvaessa G2/M-vaiheen solujen osuus kasvaa. Solusyklin tulokset viittaavat siihen, että TG voi edistää solusyklin etenemisen estämistä ja siten indusoida solujen apoptoosia.

2.4 TG:n vaikutus HepG2-solujen migraatioon

Kuvio 4 TG:n eri konsentraatioiden vaikutukset HepG2-solujen migraatioon

Huomautus: * tarkoittaa samaa kuin 0 μ Ero oli merkitsevä arvolla g/ml (P<0.05), and * * indicates a significant difference (P<0.01).

Syöpäsolumetastaasi on yksi syövän hoidon avaimista, ja siihen liittyy läheisesti myös syövän uusiutuminen. Sen tutkimiseksi, voiko TG estää HepG2-solujen migraatiota, käytettiin raaputusmenetelmää solujen migraation tarkkailuun. Kuten kuvasta 4 näkyy, TG-pitoisuuden kasvaessa 24-tunnin liikkuvuus vähenee vähitellen, ja ilmeinen estovaikutus on. Liikkuvuus on 14,82 prosenttia , 13,42 prosenttia , 12,66 prosenttia , 10,11 prosenttia , 8,46 prosenttia , 7,24 prosenttia , 21 μ G/ml osoitti merkittäviä eroja (P<0.05), 31.5 μ G/mL and 42 μ G/mL showed a significant difference (P<0.01). The results of this experiment indicate that TG can inhibit the migration of liver cancer cells, thereby limiting the metastasis of cancer to other tissues.

2.5 Hoechst 33342/PI kaksoisvärjäysmenetelmä apoptoosin havaitsemiseen

Kuva 5 TG:n eri pitoisuuksien vaikutukset Hoechst 33342/PI:hen HepG2-soluissa

Ydinvärjäys suoritettiin Hoechst 33342:lla kromatiinin kondensaation havaitsemiseksi [20]. Normaalit solut osoittivat alhaista sinistä, apoptoottiset solut osoittivat korkeaa sinistä/alhaista punaista ja nekroottiset solut osoittivat matalaa sinistä/korkeaa punaista. Kuten kuviosta 5 voidaan nähdä, verrattuna kontrolliryhmään, TG-käsittelyryhmässä havaittiin kromatiinikonsentraatio ja tuman fragmentoituminen. Samaan aikaan, kun TG oli arvossa 3.5-21, havaittiin, että μ G/ml alueella sininen fluoresenssi lisääntyi vähitellen, mikä viittaa siihen, että TG estää pääasiassa solujen lisääntymistä apoptoosin kautta alhaisilla pitoisuuksilla; Ja yli 21 μ G/ml:ssa punainen fluoresenssi lisääntyy, mikä viittaa siihen, että TG pääasiassa vahingoittaa ja tuhoaa solurakennetta tappaakseen soluja suuremmilla pitoisuuksilla. Tämän kokeen tulokset osoittavat, että TG-käsittely voi indusoida HepG2-solujen apoptoosia ja nekroosia.

2.6 Anneksiini V-FITC/PI kaksoisvärjäys TG:n vaikutuksen havaitsemiseksi HepG2-soluapoptoosiin

Kuvio 6 TG:n vaikutus HepG2-solujen AV/PI-kaksoisvärjäytymiseen

Huomautus: * tarkoittaa samaa kuin 0 μ Ero oli merkitsevä arvolla g/ml (P<0.05), and * * indicates a significant difference (P<0.01).

TG:n apoptoosia indusoivan vaikutuksen määrittämiseksi HepG2-soluihin käytimme anneksiini V-FITC/PI-kaksoisvärjäysmenetelmää HepG2-solujen värjäykseen. Kuten kuvasta 6 näkyy, pitoisuuden kasvaessa apoptoosinopeus osoittaa nousevaa trendiä, 0, 3,5, 21, 41 μ Apoptoottiset määrät g/ml olivat 5,63 prosenttia, 7,65 prosenttia, 10,93 prosenttia ja 32,44 prosenttia, vastaavasti, annoksesta riippuvaisella tavalla. Tulokset osoittivat, että TG voi indusoida apoptoosia tuhoamalla HepG2-solujen kalvon eheyden. Tämä tulos on yhdenmukainen HepG2-solujen AV/PI-värjäystulosten kanssa, joita ovat käsitelleet Qi Xinxin et ai. [6].

2.7 TG:n vaikutus proteiinin ilmentymiseen HepG2-soluissa

Kuvio 7 Proteiinin ilmentyminen HepG2-soluissa, jotka on käsitelty erilaisilla TG-pitoisuuksilla

Huomautus: * tarkoittaa samaa kuin 0 μ Ero oli merkitsevä arvolla g/ml (P<0.05), and * * indicates a significant difference (P<0.01).

Alfafetoproteiinia (AFP) käytetään seerumimarkkerina primaarisen maksasyövän diagnosoinnissa ja tehokkuuden testaamisessa [21]. Kuten kuvasta 7 voidaan nähdä, AFP:n ilmentymistaso hoitoryhmässä on laskenut verrokkiryhmään verrattuna, mikä viittaa siihen, että TG voi jossain määrin estää maksasyövän ilmaantumista, mutta todennäköisyys, että maksasyövä paranee, on hyvin pieni. . Lisäksi Dsh - Catenin-taso laski lineaarisesti lääkepitoisuuden kasvaessa; GSK-3 Lisääntyi asteittain, mutta ei annoksesta riippuvaisella tavalla. Siksi spekuloidaan, että TG voi säädellä Dsh - Catenin ja GSK-3 suhteellista ekspressiota Wnt/ - Catenin klassisen signalointireitin kautta apoptoosin indusoimiseksi HepG2-soluissa.

3 .Keskustelu ja johtopäätökset

Maksasyöpä on yksi yleisimmistä pahanlaatuisista kasvaimista Kiinassa ja myös kolmen suurimman kuolleisuuden joukossa.[22]. Tärkeimmät maksasyövän hoitomenetelmät ovat kirurginen resektio, maksansiirto, kemoterapia ja immunoterapia [23-25]. On raportoitu, että vuonna 2016 maksasyövän ilmaantuvuus Kiinassa oli 9,57 prosenttia ja kuolleisuus jopa 13,92 prosenttia [26]. "Varhaisen maksasyövän epäspesifisten oireiden vuoksi oireiden ilmaantuessa ne ovat enimmäkseen keski- ja myöhäisvaiheessa. Siksi ihmiset käyttävät aktiivisemmin perinteistä kiinalaista lääketiedettä maksasyövän hoidossa [27]."Ihmiset uskovat, että luonnolliset yhdisteet niillä on vähiten molekyylimyrkyllisyyttä ja ne ovat osoittautuneet hyödyllisiksi maksasyövän hoidossa, joten he seulovat aktiivisesti uusia luonnollisia yhdisteitä maksasyövän torjuntaan.

Cistanche deserticolan kokonaisglykosidit voivat estää maksasyövän soluja maksasyövän varhaisessa vaiheessa

Viime vuosina useat vaikutuksetCistanche deserticolaovat herättäneet paljon huomiota ja niistä on vähitellen tullut yksi kuumia kohtia terveellisen ruoan ja lääketutkimuksen kehittämisessä. Solumorfologia- ja CCK{0}}-kokeet ovat vahvistaneet, että tietty TG-pitoisuus voi tuhota solumorfologian ja estää HepG2-solujen kasvua ja proliferaatiota, ja pitoisuus on suoraan verrannollinen solun estoasteeseen.

Solusyklillä tarkoitetaan koko prosessia, jonka solu käy läpi yhden mitoosin päättymisestä seuraavan jakautumisen loppuun. Se on jaettu kahteen vaiheeseen: välivaiheeseen ja jakoon. Virtaussytometriassa käytetään fluoresoivia väriaineita erottamaan G0/G1-, S- ja G2/M-faasi. Solusyklin havaitsemisen avulla havaitaan, että eri TG-pitoisuuksilla käsittelyn jälkeen havaitaan, että suurilla TG-pitoisuuksilla (31,5 µG/ml ja 42 µG/ml) voidaan estää soluja olemasta G2/M-vaiheessa. ja vaikuttavat HepG2-solujen aktiivisuuteen, mikä johtaa sytotoksisuuteen ja siten inhiboi solujen lisääntymistä. Syövän etenemisen aikana primaaristen kasvainten syöpäsolut tunkeutuvat viereisiin normaaleihin kudoksiin, muodostavat etäpesäkkeitä kaukaisiin kohtiin ja muodostavat uusia pesäkkeitä. On arvioitu, että yhteensä 90 prosenttia syöpäkuolleisuudesta johtuu etäpesäkkeistä [28]. Wnt-signalointireitti osallistuu epiteeli-mesenkymaalisiin solujen transformaatioprosessiin ja mesenkymaalista epiteelisoluun transformaatioprosessiin syövän etäpesäkkeiden edistämiseksi. Hepatosellulaarisessa karsinoomassa (HCC) korkeat kateniinitasot liittyvät lisääntyneeseen etäpesäkkeisiin ja huonoon ennusteeseen [29]. Tässä tutkimuksessa havaittiin, että TG:llä 24 tunnin ajan käsiteltyjen HepG2-solujen migraationopeus väheni vähitellen pitoisuuden kasvaessa konsentraatiosta riippuvalla tavalla.Tämä osoittaa, että TG voi hallita syöpäsolujen migraatiota ja estää syövän leviämisen edelleen, mahdollisesti vähentämällä Wnt-signalointireittiä - Catenin-ilmentymistä.Yleensä sairaat tumat näyttävät pienemmiltä; Jotkut kromatiini keskittyy tai aggregoituu reuna-alueille, kun taas toisilla on tyypillisiä ominaisuuksia, kuten ydinkromatiinin fragmentoituminen ja apoptoottisten kappaleiden muodostuminen [30-31]. Hoechst 33342 on sininen fluoresoiva väriaine, joka voi tunkeutua solukalvon läpi ja jolla on alhainen toksisuus soluille. Joissakin tutkimuksissa on havaittu, että apoptoottisten solujen morfologisia ominaisuuksia, mukaan lukien tuman koagulaatio ja fragmentoituminen, on havaittu HepG2-soluissa, jotka on värjätty Hoechst 33342:lla [32]. Tässä kokeessa havaittiin, että 24 tunnin TG-käsittelyn jälkeen niiden solujen osuus, joissa oli kromatiinikoagulaatiota ja fluoresoivia tumafragmentteja, kasvoi konsentraatiosta riippuvaisella tavalla, mikä on yhdenmukainen Yang et al.:n tutkimuksen tulosten kanssa. [33] gingerolin aiheuttaman HepG2-solujen apoptoosin. Käyttämällä Annexin V-FITC/PI-kaksoisvärjäysmenetelmää 24 tunnin ajan TG:llä käsiteltyjen HepG2-solujen havaitsemiseksi havaittiin, ettäsolujen apoptoosinopeus nousi vähitellen pitoisuuden kasvaessa.

VastaanottajaCistanche deserticolin talglykosidit

Dsh, - Catenin ja GSK-3 On tyypillinen Wnt/ - Disheveled (Dvl/Dsh) on tärkeä säätelijä Catenin-signalointireitissä, joka on avainproteiini Wnt-signalointireitissä ja voi välittää Wnt-signaaleja alavirtaan efektorit [34]. Klassisessa Wnt-signalointireitissä Dsh:n kutsuu solukalvoon Frizzled-reseptori, joka toimii proto-onkogeeninä ja liittyy somaattisen akselin estotekijään (Axin), adenomatoottiseen polypoosi coli -geeniin (APC) ja GSK:hen. -3 Sitoutuminen hajoamiskompleksin muodostamiseksi, joka estää GSK:ta-3 kyllä ​​- Cateniinin fosforylaatiohajoaminen aiheuttaa - Cateniini menee ytimeen ja toimii [34-36]. - Cateniinia ilmentyy pääasiassa normaalien solujen solukalvossa ja se liittyy solujen kiinnittymiseen. Se osallistuu myös Wnt-signalointireittien tiedonsiirtoon, sääteleen solujen lisääntymistä ja erilaistumista. Kun Wnt-signalointireitti aktivoituu epänormaalisti, - Cateninin uudelleenjakautuminen voi olla yksi syy kasvaimen esiintymiseen [37]. Raporttien mukaan se voidaan havaita 20 prosentissa - 35 prosentissa HCC-tapauksista [15] - Cateniinin aktivaatio. Samanaikaisesti on myös mahdollista tukahduttaa Wnt by/- Catenin-signalointireitti aktivoi autofagian estääkseen HepG2-solujen lisääntymisen [38]. Tämä tutkimus havaitsi, että TG-hoidon jälkeen HepG2-solut, Dsh - Catenin-taso laski lineaarisesti lääkeainepitoisuuden kasvaessa; GSK-3 Asteittain lisääntynyt, mutta ei annoksesta riippuvaisella tavalla. Siksi voidaan päätellä, että TG kulkee Wnt/-catenin-signalointireitin kautta indusoidakseen apoptoosia HepG2-soluissa.

Maailman laajimmin käytetyt primaarisen maksasyövän biomarkkerit ovat alfafetoproteiini (AFP) [39]. AFP:llä on tärkeä rooli primaarisen 9 maksasyövän potilaiden varhaisessa seurannassa, patologisessa luokittelussa, hoidon valinnassa ja ennusteessa. Hoitomenetelmästä riippumatta, kun AFP-taso on yli 400 ng/ml, se johtaa huonoon eloonjäämiseen [40]. Havaitsemalla AFP-proteiinin ilmentymistaso TG:llä käsitellyissä soluissa,havaittiin, että TG voi tehokkaasti vähentää AFP:n ilmentymistä, mikä osoittaa, että TG:llä voi olla rooli maksasyövän solujen estämisessä maksasyövän varhaisessa vaiheessa.

Cistanche teetä

Yhteenvetona,Cistanche deserticolan kokonaisglykosidit estävät HepG2-solujen proliferaatiota ja kasvua vaikuttamalla solusyklin etenemiseen, tuhoamalla solurakennetta, edistämällä apoptoosia ja rajoittamalla solujen migraatiota.Vaikutusmekanismi voi tapahtua Wnt/ - Catenin signaalireitin kautta, joka aktivoi GSK-3 Hajoaminen - Catenin voi estää maksasyövän, mutta lisätutkimusta tarvitaan. Tulevaisuudessa asiantuntijat ja tutkijat voivat tutkia syvällisesti Cistanche deserticolan käyttöä Wnt/ - Catenin-signalointireitin ylä- ja alavirran proteiinimolekyylejä käytetään kohdegeenien tarkistamiseen ja Cistanche deserticolan kokonaisglykosidien vaikutusmekanismin tutkimiseen. HepG2-soluja vastaan. Lisäksi, lääke- ja elintarvikehomologisena aineena, cistanche deserticolaa voidaan käyttää päivittäisessä ruokavaliossa sekä ehkäisyyn että hoitoon, ja se tarjoaa myös tietyn teoreettisen perustan Great Food Outlookin harjoittamiselle edistäen "terveen Kiinan" rakentamista. ja parantaa ihmisten terveyttä.

[1] FENG D, HE Y, JIANG YJ, et ai. Tutkimuksen edistyminen Cistanchesin ikääntymistä estävässä toiminnassa [J]. Journal of Food Safety & Quality, 2021, 12(11): 4429-4437.

[2] Ma G, Chen J, Wei T, et ai. FOXA2:n roolien estäminen maksasyövän solujen migraatiossa ja invaasiossa estämällä transkriptionaalisesti mikroRNA103a-3p:tä ja aktivoimalla GREM2/LATS2/YAP-akselia[J]. Sytoteknologia. 2021, 73:523-537.

[3] LI MQ, WANG K, ZHOU X. Mung-pavun peptidien proliferaation estäminen HepG2-solussa [J]. Journal of Chinese Institute of Food Science and Technology, 2018, 18(10): 52-57.

[4] HU Y, WANG S, WU X, et al. Kiinalaiset kasviperäisistä lääkkeistä johdetut yhdisteet syövän hoitoon: painopiste maksasolusyöpään [J]. J Etnopharmacol. 2013, 149(3):601-612. doi:10.1016/j.jep.2013.07.030.

[5] YE Y, SONG Y, ZHUANG J ym. Ekinakosidin syövän vastaiset vaikutukset hepatosellulaarisessa karsinoomahiirimallissa ja HepG2-soluissa [J]. J Cell Physiol. 2019, 234(2): 1880-1888. doi:10.1002/jcp.27063

[6] QI XX, YOU SP, HE ZX, et ai. Cistanche deserticola fenyylietanoliglykosidin vaikutus HepG2-solujen proliferaatioon ja apoptoosiin in vitro [J]. Journal of Xinjiang Medical University, 2021, 44(09): 1041-1047.

[7] XIE YT. Ekniakosidin vaikutukset 786-O-solujen apoptoosiin ja induktiivisiin mekanismeihin in vitro[D]. Baotou Teachers' College, 2020.

[8] HAN YM, JIN WM, ZENG H et ai., Effects of Echniacoside on Proliferation, Invasion and Metastas of Colon Cancer SW480 Cells in vitro and in vivo [J]. Journal of Guangzhou University of Traditional Chinese Medicine, 2020, 37(08):1542-1549.

[9] HU Q, YOU SP, LIU T ym. Tutkimus cistanchen [J]:n maksasyövän vastaisesta vaikutuksesta. Carcinogenesis,Teratogenesis & Mutagenesis, 2018, 30(03):194-199.

[10] XU Q, QIN W, WU FZ et al. Roucongrong (Herba Cistanches Deserticolae) -keiton vaikutus substantia nigraan Wnt/-kateniinin signaalireitin kautta rotilla, joilla on 6-hydroksidopamiinihydrokloridin aiheuttama Parkinsonin tauti[ J]. Journal of Traditional Chinese Medicine, 2021, 41(05):762-770.

[11] YIN SL, WANG HB, YANG S. Cistanche Deserticola -polysakkaridin neurosuojaavat vaikutukset Parkinsonin rotissa 6-HODA:n aiheuttama Wntt/-catenin-signalointireitin aktivoinnin [J] aiheuttama. Chinese 10 Journal of Integrative Medicine on Cardio-Cerebrovascular Disease, 2020, 18(08):1227-1230.

[12] TANG C H. Ekinakosidi estää rintasyöpäsoluja tukahduttamalla Wnt/-catenin-signalointireittiä[D]. Chongqingin lääketieteellinen yliopisto, 2020.

[13] FENG L, MA QL, SHI L, et ai. Ekinaseiini estää akuutin myelooisen leukemiasolujen proliferaatiota vaimentamalla SOX4/Wnt/beeta-kateniinisignaalia [J]. Immunological Journal, 2020, 36(02):138-142.

[14] Clevers H, et ai. Wnt/ -catenin signalointi ja sairaus[J]. Cell. 2012, 149(6):1192-205.

[15] Russell JO, Monga SP. Wnt/-Catenin Signaling maksan kehityksessä, homeostaasissa ja patologiassa [J]. Annu Rev Pathol. 2018, 13: 351-378. doi:10.1146/annurev-pathol-020117-044010

[16] LIU CY, CHEN KF, CHEN PJ. Maksasyövän hoito[J]. Cold Spring Harb Perspect Med. 2015, 5(9):a021535.

[17] WANG F, LI R, TU P, et al. Cistanche deserticolan kokonaisglykosidit edistävät neurologisten toimintojen palautumista indusoimalla neurovaskulaarista regeneraatiota Nrf{1}}/Keap-1-reitin kautta MCAO/R-rotilla. Farmakologian rajat 2020, 11, 236.

[18] SONG QJ. Akebia-hedelmäuutteiden estävä vaikutus ihmisen HepG2-hepatoomasolujen tarttumiseen, vaeltoon ja invasioon ja niihin liittyviin mekanismeihin[D]. Shanghain perinteisen kiinalaisen lääketieteen yliopisto, 2019.

[19] SUN Q, WANG J, LI Y ym. Artemisiniinijohdannaisten sytotoksisten vaikutusten synteesi ja arviointi [J]. Chem Biol Drug Des. 2017, 90(5): 1019-1028.

[20] ZHAO YM, SUN LN, ZHOU HY, et al. Jänniteriippuvaiset kaliumkanavat osallistuvat glutamaatin aiheuttamaan rotan aivotursohermosolujen apoptoosiin [J]. Neurosci Lett. 2006, 398(1-2):22-27.

[21] GALLE PR, FOERSTER F, KUDO M, et al. Alfafetoproteiinin biologia ja merkitys hepatoselluaarisessa karsinoomassa [J]. Liver Int, 2019, 39(12): 2214-2229.

[22] MA G, CHEN J, WEI T et ai. FOXA2:n roolin estäminen maksasyövän solujen migraatiossa ja invaasiossa estämällä transkriptionaalisesti mikroRNA-103a-3p ja aktivoimalla GREM2/LATS2/YAP-akselia[J]. Sytoteknologia. 2021, 73(4): 523-537.

[23] KAMARAJAH SK, FRANKEL TL, SONNENDAY C, et al. Kriittinen arvio American Joint Commission on Cancer (AJCC) 8. painoksen jaksotusjärjestelmästä potilaille, joilla on hepatosellulaarinen karsinooma (HCC): Valvonta-, epidemiologia-, lopputulosanalyysi (SEER) [J]. J Surg Oncol. 2018, 117(4):644-650.

[24] EDGE SB, COMPTON CC. American Joint Committee on Cancer: 7. painos AJCC:n syövän vaiheistuskäsikirjasta ja TNM[J]:n tulevaisuus. Ann Surg Oncol. 2010, 17(6):1471-1474.

[25] VAUTHEY JN, LAUWERS GY, ESNAOLA NF, et al. Hepatosellulaarisen karsinooman yksinkertaistettu vaiheistus[J]. Kliinisen onkologian lehti: American Society of Clinical Oncologyn virallinen lehti. 2002, 20(6): 1527-36.

[26] ZHENG R, ZHANG S, ZENG H, et al. Syövän ilmaantuvuus ja kuolleisuus Kiinassa, 2016. Journal of the National Cancer Center, 2022, 2(1), 1–9.

[27] ANWANWAN D, SINGH SK, SINGH S, et al. Maksasyövän haasteet ja mahdolliset hoitomenetelmät[J]. Biochim Biophys Acta Rev Cancer. 2020, 1873(1): 188314.

[28] CHAFFER CL, WEINBERG RA. Näkökulma syöpäsolujen etäpesäkkeisiin [J]. Science, 2011, 331(6024): 1559-1564.

[29] ZHONG Z, YU J, VIRSHUP DM, et ai. Wnts ja syövän tunnusmerkit[J]. Cancer Metastasis Rev 2020, 39: 625–645.

[30] SYAM S, ABDUL AB, SUKARI MA, et ai. Girinimbiinin kasvua estävät vaikutukset HepG2:lle sisältävät apoptoosin induktion ja solusyklin pysähtymisen [J]. Molekyylit. 2011, 16(8):7155-7170.

[31] ZHANG X, LUO W, ZHAO W ym. Isokriptotanshinonin aiheuttama apoptoosi ja aktivoitu MAPK-signalointi ihmisen rintasyövän MCF-7-soluissa[J]. J Rintasyöpä. 2015, 18(2):112-118.

[32] Ponselvi Induja M, Ezhilarasan D, Ashok Vardhan N. Evolvulus alsinoides -metanoliuute laukaisee apoptoosin HepG2-soluissa [J]. Avicenna J Phytomed. 2018, 8(6): 504-512.11

[33] YANG G, WANG SP, ZHONG LF, et al. 6-Gingerol indusoi apoptoosia lysosomi-mitokondrioakselin kautta ihmisen hepatooma G2 -soluissa[J]. Phytother Res. 2012, 26(11):1667-1673. doi: 10.1002/ptr.4632

[34]  LI J, GUO G, FAN YM, et ai. Disheveled edistää gliooman leviämistä: kokeellinen tutkimus [J]. Chinese Remedies & Clinics, 2021, 21(18): 3077-3080.

[35] Fiedler M, Mendoza-Topaz C, Rutherford TJ, Mieszczanek J, Bienz M. Disheveled on vuorovaikutuksessa Axinin DIX-domeenin polymerointirajapinnan kanssa häiritäkseen sen toimintaa kateniinin [J] alasäätelyssä. Proc Natl Acad Sci US A. 2011;108(5):1937-1942. doi: 10.1073/pnas.1017063108.

[36]  SHI QQ, ZUO GW, FENG ZQ, et ai. Tutkimus ginsenosidin Rh2-hepatoomavaikutuksesta ja -kateniinin hajoamismekanismista aktivoimalla GSK-3 [J]. Chinese Traditional and Herbal Drugs, 2016, 47(18):3231-3238.

[37] HE S, TANG S. WNT/-kateniinisignalointi maksasyöpien kehityksessä[J]. Biomed Pharmacother. 2020, 132: 110851.

[38] HU P, CHENG B, HE Y ym. Autofagia estää HepG2-solujen lisääntymistä estämällä glypikaani-3/wnt/-catenin-signalointia[J]. Onco Targets Ther. 2018;11:193-200.

[39] GAO YX, YANG TW, YIN JM, et ai. Biomarkkerien edistyminen ja tulevaisuudennäkymät primaarisessa maksasyövässä (katsaus)[J]. Int J Oncol. 2020, 57(1): 54-66.

[40] Tangkijvanich P, Anukulkarnkusol N, Suwangool P, et ai. Maksasolukarsinooman kliiniset ominaisuudet ja ennuste: seerumin alfa-fetoproteiinitasoihin perustuva analyysi [J]. J Clin Gastroenterol. 2000, 31(4):302-308.

[41] FENG D, DUAN H, LYU YN, et ai. Cistanche Deserticola Ma:n käyttö funktionaalisessa ruoassa Kiinassa[J]. Food Science and Technology, 2021, 46(12):76-81.