Cistanche Tubulosa -vesiuutteen vaikutukset suolistosairauksista kärsivien hiirten suolistomikrobistoon

1. Esittely

Suoliston mikro-organismit kolonisoivat pääasiassa suolen ontelon ja limakalvokerroksen ja vuorovaikuttavat isännän kanssa materiaalin ja energian vaihdon, transformaation ja muiden prosessien kautta [1]. Ne ovat merkinantokeskuksia, jotka yhdistävät ympäristöviestit, kuten ruokavalion, geneettisten ja immuunisignaalien kanssa, mikä vaikuttaa isännän aineenvaihduntaan, immuniteettiin, hermostoon ja vasteeseen infektioita vastaan ​​[2]. Normaalisti suolistoflooran ja isäntien välillä on dynaaminen tasapaino; suoliston dysbioosi voi kuitenkin johtaa muutoksiin terveyden/tautien tasapainossa, immuunihäiriöihin ja moniin sairauksiin [3]. Kohtalaiset muutokset suoliston mikrobiotassa ovat isäntälle hyväksyttäviä; Tämä voi kuitenkin edelleen tarjota mahdollisuuksia vahvistaa muutoksia muissa pahentavissa tekijöissä, kuten bakteriofaageissa, bakteriosiinissa ja oksidatiivisessa stressissä [4].

CISTANCHE TUBULOSA SUOLLISTEN MIKROBIOT PARANTAMINEN PHGS75% ECH 30% ACT 12%

Aiemmat tutkimukset ovat osoittaneet senCistanche tubulosan etanoliuute(CT), perinteinen kiinalainen kasviperäinen kaava, voi säädellä suoliston mikrobikoostumusta rotilla [5], ja CT:n kokonaisglykosidit säätelevät suoliston mikrobistoa [6]. Cistanche-lajeja, jotka loistavat pääasiassa Tamarix-lajien juurissa, kutsutaan myös "aavikon ginsengiksi", ja Cistanche deserticola (CD) ja Cistanche tubulosa (CT) varresta koostuvaa tonic-ainetta käytetään yrttilääkkeenä [7 ].ThCT-fenyylietanoliglykosidien (PHG) tärkeimpien kemiallisten komponenttien, jotka ovat antioksidantteja [8, 9], havaittiin parantavan lisääntymishäiriöitä [10], estävän maksan tähtisolujen aktivaatiota ja estävän signaalireittien johtumista TGF:ssä{{3} }/SMAD [11] ja ehkäistä naudan seerumin albumiinin aiheuttamaa maksafibroosia rotilla [12]. CT:n yli 100 komponentin joukossa polysakkaridi on myös yksi tärkeimmistä aineista, joiden pitoisuus on runsas [13, 14]. Aiemmat tutkimukset ovat osoittaneet, että C. deserticola -polysakkaridit indusoivat melanogeneesiä melanosyyteissä, vähentävät oksidatiivista stressiä [15], lievittävät kognitiivisia toimintahäiriöitä säätelemällä antioksidanttisia ja anti-inflammatorisia prosesseja rotilla [16], suojaavat PC12-soluja OGD/RP-indusoituja vaurioita vastaan ​​[17]. ],parantaa ekinakosidin imeytymistä in vivoja vaikuttaa suoliston mikrobiotaan [18].

Probiootit ovat eläviä, ei-patogeenisiä mikro-organismeja, joilla on terveyshyötyjä ja jotka saavat aikaan mikrobien tasapainon ruoansulatuskanavassa, kun niitä annetaan riittävinä määrinä [19].Thne voivat tehostaa epäspesifisiä solujen immuunivasteita, joille on tunnusomaista makrofagien, luonnollisten tappajasolujen (NK) ja antigeenispesifisten sytotoksisten T-lymfosyyttien aktivaatio ja erilaisten sytokiinien vapautuminen kantaspesifisellä ja annoksesta riippuvaisella tavalla [20]. Probioottikannat parantavat suoliston epiteelin ominaisuuksia TJ-modulaation kautta, ja spesifisten probioottisten kantojen on osoitettu säätelevän musiinin ilmentymistä, mikä vaikuttaa limakerroksen ominaisuuksiin ja säätelee epäsuorasti suoliston immuunijärjestelmää [21]. Maitohappobakteerikannat (LAB) ja Bifidobacterium ovat tärkeimpiä probiootteja, joita on käytetty monilla aloilla [22–26].ThNiiden terveyshyötyjä on lukuisia, ja niiden antioksidanttikapasiteetti on tärkeä tekijä heidän terveyteen liittyvissä toiminnoissaan [27]. Probiootit voivat kelatoida metalli-ioneja estääkseen niitä katalysoimasta hapettumista [28, 29]; ne voivat myös lisätä antioksidanttientsyymien ilmentymistä [30, 31], tuottaa erilaisia ​​metaboliitteja, joilla on antioksidanttiaktiivisuutta [32, 33], välittää antioksidanttisignalointireittejä [34–36] ja säädellä reaktiivisia happilajeja (ROS) tuottavia entsyymejä ja suoliston mikro-organismien vaste oksidatiiviseen stressiin [37].

Tuore tutkimus osoitti, että CD:n polysakkaridit voivatstimuloivat joidenkin maitohappobakteerien kasvua, mikä voi hyödyttää ihmisten terveyttä [38]. Polysakkaridien pitoisuus CD:ssä on kuitenkin erilainen kuin CT:ssä [7, 39], ja tämä ero voi johtaa erilaisiin vaikutuksiin suoliston mikro-organismeihin. Lisäksi vaikka CD-polysakkaridit voivat vähentää oksidatiivista stressiä aktivoimalla NRF2/HO-1-reittiä [15], yksittäisen polysakkaridin vaikutukset voivat poiketa useiden koostumusten kokonaisvaikutuksesta CT:ssä.ThOn tarpeen määritellä tarkasti CT-vesiuutteiden vaikutukset suoliston mikro-organismeihin. Lisäksi PHG:t voivat myös vastustaa oksidatiivista stressiä [40] ja tukahduttaa lipopolysakkaridivälitteisiä tulehdusvasteita aktivoimalla Keap1/Nrf2/HO-1-reitin [41].Thsiksi CT-vesiuutteen vaikutuksen määrittäminen on erittäin arvokasta. Lisäksi tiettyjen vesipitoisen CD-uutteen aineosien vaikutukset oksidatiiviseen stressiin ja suolistoflooraan viittaavat siihen, että vastustuskyky oksidatiiviselle stressille saattaa korreloida suolistoflooran muutoksiin.

Täyttääksemme aukot edellä mainituista aiheista tiedossa tutkimme CT-vesiuutteen vaikutuksia suolistoflooran häiriöistä kärsivien hiirten suoliston mikrobiotaan.ThNämä tulokset antavat arvokasta tietoa mahdollisista mekanismeista, joilla TT muuttaa suolistoflooraa ja antaa suoliston vastustuskyvyn oksidatiiviselle stressille.

2. Materiaalit ja metodit

2.1. Koeeläimet.

Yhteensä 18 SPF-luokan urospuolista C57BL/6J-hiirtä, jotka painoivat 18–22 g, ostettiin Xinjiangin lääketieteellisen yliopiston Experimental Animal Centeristä lisenssinumerolla SCXK (uusi) 2018-0003.ThHeitä pidettiin häkeissä standardoiduissa olosuhteissa: 12 tunnin valo/pimeä valojakso, lämpötila 23 ± 2 astetta ja kosteus 55 ± 5 %.ThEläimille ruokittiin kaupallista ravintoa (51 % typpitöntä uutetta, 25 % raakaproteiinia, 4,6 % raakarasvaa, 6,5 % raakatuhkaa, 4 0 % raakakuitua ja 8,9 % kosteutta) ja vesijohtovettä.ThEläimet hoidettiin Kansallisten terveyslaitosten Laboratorioeläinten hoito- ja käyttöoppaassa kuvattujen suositusten mukaisesti.

LUONNOLLINEN CISTANCHE TUBULOSA IMUNITEETTA PARANTAAN PHGS75% ECH 30% ACT 12%

2.2. Vesipitoisen uutteen uuttaminen.

Kuivatut C. tubulosa -viipaleet, jotka toimitti Hotan Dichen Pharmaceutical Biotechnology Co., Ltd., jauhettiin jauheeksi ja valittiin rakeet, joiden hiukkaskoko oli 20 - 40 silmäkokoa.ThUuttoolosuhteet olivat seuraavat: kiinteän nesteen suhde 1:19, lämpötila 80 astetta, mikroaaltoaika 6 minuuttia, ultraääniaika 16 minuuttia, mikroaaltoteho 400 W ja ultraääniteho 400 W.ThVesiuutteen pääkomponenttien pitoisuudet mitattiin HPLC:llä (Agilent 1260 Infinity II, Kalifornia, USA). Lyhyesti sanottuna standardiaineet ekinakosidi (0,2 mg/ml) ja akteosidi (0,2 mg/ml) liuotettiin 50-prosenttiseen metanoliin toimimaan vertailuaineliuoksena.Thfi, 1 g CT-vesiuutetta liuotettiin 100 ml:aan 50-prosenttista metanolia ja jätettiin jähmettymään 30 minuutiksi.ThUuteliuosta käsiteltiin ultraäänellä teholla 250 W ja 35 kHz 10 minuuttia ja sen jälkeen sentrifugoitiin nopeudella 12, 000 rpm/min.ThSupernatantti suodatettiin 0,45 μm:n mikrohuokoisella suodatinkalvolla.ThVertailuaineliuos ja suodos havaittiin sitten HPLC:llä seuraavissa olosuhteissa: oktadekyylisilaanilla sidottu silikageeli täyteaineena, metanoli liikkuvana faasina A ja 0,1 % muurahaishappoa liikkuvana faasina B.ThKolonnin lämpötilaksi asetettiin 30 astetta, tunnistusaallonpituudeksi 330 nm ja injektiotilavuudeksi 10 µl.

2.3. Kokeilut.

Viikon mukauttamisen jälkeen 18 hiirtä jaettiin satunnaisesti kuuteen ryhmään: A (normaali, johon on lisätty keskiannos CT-vesiuutetta), B (normaali ilman CT-vesiuutetta), C (malli ilman vesiuutetta), D ( malli, johon on lisätty suuren annoksen CT-vesiuutetta), E (malli, johon on lisätty keskiannoksen CT-vesiuutetta) ja F (malli, johon on lisätty pieniannoksinen CT-vesiuute).ThRyhmät käsiteltiin seuraavasti: normaali ryhmä kasteltiin normaalilla suolaliuoksella, malliryhmä kasteltiin kefiksiimilla (30 mg/kg, Shiyao Group Ouyi Pharmaceutical Co., Ltd., Shijiazhuang, Kiina) ja normaalilla suolaliuoksella, korkea. -annosryhmä kasteltiin kefiksiimilla ja 221,14 mg/kg CT-vesiuutetta, keskiannoksen ryhmä kasteltiin kefiksiimilla ja 165,54 mg/kg vesiuutteella ja pieniannoksinen ryhmä kasteltiin kefiksiimilla ja 110,57 mg/kg vesipitoisesta uutteesta.The Ryhmä kasteltiin 165,54 mg:lla/kg vesipitoista uutetta, eikä kefiksiimiä lisätty. Sefiksiimi annettiin päivittäin keskipäivällä h ja muut aineet päivittäin klo 15:00 h. Kokeiden aikana C-, D-, E- ja F-ryhmät pidettiin suolistohäiriöiden mallitilassa.ThUlosteet kerättiin seitsemän päivän välein steriilille leikkauspöydälle ja säilytettiin -20 asteessa.

2.4. Hiiren paksusuolen histopatologinen havainnointi.

Kokeen lopussa hiiret tapettiin kohdunkaulan dislokaatiolla, ja niiden paksusuolen sisältö kerättiin steriilille leikkauspöydälle ja säilytettiin -80 °C:ssa; samaan aikaan paksusuolen kudosnäytteet kiinnitettiin 10 % neutraaliin formaliiniin.Thfi, näytteet kuivattiin käyttämällä gradienttipitoisuutta etanolia, hyalinisoitiin ksyleeniä käyttäen, upotettiin parafiiniin, leikattiin ja värjättiin hematoksyliini-eosiinilla. Morfologisia muutoksia paksusuolen limakalvossa havaittiin ja verrattiin optisella mikroskoopilla. Villun pituus ja kryptan syvyys paksusuolessa mitattiin ja laskettiin villun pituuden suhde kryptan syvyyteen (V/C-arvo) (51).

2.5. DNA:n erottaminen ja kirjaston rakentaminen.

DNA uutettiin ulosteista käyttämällä EZNA®Soil DNA Kit -sarjaa (Omega Bio-Tek, Norcross, GA, USA) valmistajan ohjeiden mukaisesti. DNA:n laatu määritettiin käyttämällä fluorometriä (QuantiFluor™-ST, Promega Corporation, USA). Parilliset alukkeet 16s rDNA:n V3-V4-alueella suunniteltiin monistamaan aluetta ja tuottamaan 466 bp DNA-fragmentteja.ThEteenpäin aluke oli 341F (-5- CCTACGGGNGGCWGCAG-3-) ja käänteinen aluke oli 806R (-5-GGACTACHVGGGTATCTAAT-3-). Jokainen PCR-tilavuus oli 25 µl, ja se sisälsi 2,5 µl 10 × PCR-puskuria, 2 µl dNTP:tä, 1 µl kutakin aluketta ja 20–30 ng templaatti-DNA:ta.Thfi, indeksoidut sovittimet kiinnitettiin amplikonien päihin sekvensointikirjastojen luomiseksi.The kirjastoa validoitiin käyttämällä QuantiFluor™ fluorometriä ja kvantifioitiin 10 nmoliksi.

2.6. 16s rRNA:n geenisekvensointi ja mikrobiyhteisöanalyysi.

The Illumina-alustaa (Illumina MiSeq) käytettiin 2 × 250 bp:n parillisen pään datan saamiseksi. Operatiiviset taksonomiset yksiköt (OTU:t) saatiin Uparse-ohjelmistolla standardiklusteroinnin avulla 97 %:n samankaltaisuudella.ThRDP-luokittajan naiivia Bayesin määritysalgoritmia käytettiin OTU:iden kohdistamiseen Greengene-tietokannan julkaisun 13.5 kanssa ja lajimerkintöjen suorittamiseen.ThSuoliston mikrobiotan alfadiversiteetti laskettiin Shannonin ja Simpsonin indekseillä ja ryhmien väliset erot analysoitiin lineaarisella erotteluanalyysillä Effect Size (LEfSe).ThBeetan monimuotoisuus analysoitiin Bray-Curtisin eroavaisuuksien pääkoordinaattianalyysillä (PCoA). PICRUSt2:ta käytettiin arvioimaan suoliston mikrobiomin mikrobien metabolinen kapasiteetti [42].

2.7. Tilastotietojen analyysi.

SPSS 20:tä käytettiin yksisuuntaiseen ANOVAan, ja kokeelliset tiedot ilmaistiin X ± S; X osoittaa keskiarvon ja S keskihajonnan.

LUONNOLLINEN CISTANCHE TUBULOSA aineenvaihdunnan hillitsemiseen PHGS75% ECH 30% ACT 12%

3. Tulokset

3.1. 8e CT-vesiuutteen vaikutus paksusuolen morfologiaan.

Thedustavat yhdisteet (ekinakosidi ja akteosidi) ja niiden CT-uutteen pitoisuudet validoitiin HPLC:llä (kuva S1). Vesiuutteen vaikutuksen määrittämiseksi suolistossa tutkimme paksusuolen villien pituutta ja syvennysten syvyyttä CT-vesiuutteella käsittelyn jälkeen.Thpaksusuolen villit normaalissa ja suuren annoksen ryhmissä (A, B ja D) olivat pidempiä ja sormimaisia, kun taas malli- ja pieniannoksisten ryhmien (C ja F) paksusuolen villit olivat lyhyitä ja paksusuolen kärjet villit olivat rikki (kuva 1). Näin ollen suuriannoksinen CT-vesiuute lisäsi merkittävästi paksusuolen villien pituutta ja pienensi suoliston häiriöistä kärsivien hiirten syvennyksen syvyyttä verrattuna malliryhmän hiiriin (P < 0.01). Sitä vastoin resession syvyys ei eronnut merkitsevästi suuria annoksia saaneiden ja normaalin ryhmän välillä (P > 0,05) (taulukko S1).ThNämä tulokset osoittivat, että CT-vesiuutteen suuri annos voi parantaa suolistosairauksista kärsivien hiirten paksusuolen sisäistä morfologiaa.

3.2. 8e CT-vesiuutteen vaikutus suolen mikrobiston monimuotoisuuteen.

Suoritimme 16s rRNA-geenin sekvensoinnin selvittääksemme mahdollisia syitä paksusuolen sisällä tapahtuviin morfologisiin muutoksiin ja tutkiaksemme muutoksia suoliston mikrobiotassa CT-vesiuutteella käsittelyn jälkeen. Keskimäärin 100 553 tehokasta tunnistetta, jotka vaihtelivat välillä 77 734 - 125 144, saatiin raakatiedoista (taulukko S2).Thnämä tagit ryhmiteltiin 4932 OTU:ksi (taulukko S3). Sitten analysoimme suoliston mikrobiotan monimuotoisuutta näiden OTU:iden perusteella.ThShannonin ja Simpsonin indeksit eivät osoittaneet eroa A-ryhmän (normaali CT-vesiuutteen kanssa) ja B-ryhmän (normaali ilman CT-vesiuutetta) välillä (kuva 2(a)).Thon osoitettu, että hiirillä ilman kefiksiimikäsittelyä CT-vesiuutteella ei ehkä ole ollut muita hyödyllisiä tai haitallisia vaikutuksia suoliston mikrobiotan monimuotoisuuteen. Malliryhmän (C) -diversiteetti osoitti kuitenkin laskevaa suuntausta normaaliryhmiin verrattuna.ThHiirillä, joita käsiteltiin suuri- ja keskiannoksisilla CT-vesiuutteilla, havaittiin merkkejä monimuotoisuuden palautumisesta, kun taas tällaista ilmiötä ei havaittu hiirillä, joita oli käsitelty pieniannoksisella CT-vesiuutteella (kuvio 2(a)). Sillä välin PCoA paljasti, että normaaleissa ryhmissä (A ja B) ja suolistohäiriöryhmissä, joille annettiin suuria annoksia (D) ja keskiannoksia (E) CT-vesiuutteita, oli yleensä lyhyempi näytteiden välinen etäisyys kuin malliryhmässä ja pieniannoksinen CT-vesiuutteen lisäaineryhmä (F) (Kuva 2(b)).ThNämä tulokset osoittivat, että CT-vesiuute voisi auttaaparantaa suoliston mikrobiston monimuotoisuuttahiirillä, joilla on suolistosairauksia.

3.3. Muutokset CT-vesiuutteella käsitellyn suolen mikrobiston koostumuksessa.

ThMikrobiootan koostumusprofiileja verrattiin eri ryhmien kesken. Sukutasolla proteobakteerien suhteellinen runsaus malliryhmässä oli korkeampi kuin muissa ryhmissä (kuva 3(a)).ThProteobakteerien lisääntyminen viittasi siihen, että kefiksiimi muutti mallihiirten mikrobiomia ja että CT-vesiuute voisi hyödyttää suoliston mikrobiota, koska lisääntynyt proteobakteerien esiintyvyys on häiriintyneen suolistoflooran keskusmerkki [43–45]. Lisäksi suvun tasolla Lactobacilluksen suhteellinen runsaus malliryhmässä laski verrattuna normaaliannoksiin ja suuriannoksisiin ryhmiin; se kuitenkin lisääntyi verrattuna keski- ja pieniannosryhmiin (kuvio 3(b)).ThNämä tulokset osoittivat, että suuriannoksinen CT-vesiuute saattaa edistää joidenkin Lactobacillus-suvun bakteerien kasvua.

Erilainen mikrobiota tutkittujen ryhmien välillä määritettiin edelleen LEfSe-analyysin mukaan.ThAnalyysi osoitti, että kefiksiimihoidon jälkeen Turicibacter-, Alphaproteobacteria-, Acidobacteria-, Betaproteobacteriales- ja Chloroflexi-bakteerien suhteellinen määrä kasvoi merkittävästi, kun taas Lactobacillus-, Eubacterium{0}}nodatum{1}cardial Pseudonocardien suhteellinen määrä , ja Christensenellaceae_R-7_-ryhmä väheni merkittävästi verrattuna normaaliin ryhmään (kuva 4(a)). Hämmästyttävää on, että kun malliryhmää täydennettiin suuriannoksisella CT-vesiuutteella, Muribaculaceae-, Lactobacillus-, Kineosporiaceae-, Eubacterium nodatum -ryhmän ja Pedobacter-bakteerien suhteellinen määrä kasvoi merkittävästi verrattuna malliryhmään. Samaan aikaan Rhodobacter-, Ruminococcaceae UCG_013-, Roseburia-, Ruminiclostridium_9- ja Candidatus Stoquefichus -bakteerien suhteellinen määrä väheni merkittävästi verrattuna malliryhmään (kuva 4(b)).

3.4. Suoliston mikrobiston toiminnot, jotka liittyvät hoitoon CT-vesiuutteella.

Käytimme PICRUSt2-ohjelmistoa ennustamaan suoliston mikrobiotan aineenvaihduntareittejä, ja normaalia ryhmää käytettiin referenssinä muiden ryhmien muutosten analysoinnissa. Kefiksiimikäsittelyn aikana etyylibentseenin hajoamisen, sideroforiryhmän ei-ribosomaalisten peptidien biosynteesi ja ksenobioottien metabolia sytokromi P450 -reittien kautta lisääntyivät; käsittelyn jälkeen suuri- ja keskiannoksisilla CT-vesiuutteilla niiden suhteellinen runsaus palasi normaalille tasolle. Samaan aikaan syanoaminohappometaboliareitin suhteellinen runsaus väheni kefiksiimihoidon aikana; se kuitenkin lisääntyi suuren annoksen CT-vesiuutteen käsittelyn jälkeen. Lisäksi yleensä muutokset eri metaboliittireiteissä kefiksiimihoidon jälkeen olivat merkittäviä verrattuna normaaliryhmään; CT-vesiuutteen lisääminen pystyi kuitenkin estämään liialliset muutokset (kuvio 5).

4. Keskustelu

Paksusuolen morfologiaa voivat muuttaa kasvu, ruoansulatus ja imeytyminen, immuunisäätely ja suoliston vaurioiden korjaus [46–50].ThV/C-suhde voi heijastaa kattavasti suoliston ruoansulatuskanavan tilaa ja on suoraan verrannollinen suoliston ruoansulatus- ja absorptiokykyyn [51, 52]. Tässä tutkimuksessa villi- ja syvennysten biopsia ja tilastotiedot osoittivat, että suuriannoksinen vesipitoinen uute voisi osittain parantaa paksusuolen sisällä olevaa viallista morfologiaa.

Tutkiaksemme, kuinka vesipitoinen uute muuttaa suoliston morfologiaa ja vaikuttaa suoliston mikrobiotaan, työskentelimme taaksepäin suolistoflooran muutoksista. Havaitsimme, että proteobakteerien, häiriöttömän suolistoflooran keskusmarkkerin, suhteellinen runsaus lisääntyi kefiksiimihoidon aikana verrattuna ilman kefiksiimihoitoa.ThMuiden napamerkkien, Bacteroidetes ja Firmicutes, suhteellisessa runsaudessa ei ollut merkittäviä muutoksia, vaikka nämä

ryhmät ovat vallitsevia ihmisen suolistossa; Bacteroidetes/Firmicutes-suhteen todettiin olevan pienempi liikalihavilla ihmisillä verrattuna laihoihin ihmisiin, ja tämän suhteen havaittiin kasvavan painonpudotuksen myötä ihmisillä, jotka noudattavat kahta tyyppistä vähäkalorista ruokavaliota [38, 41, 43–45, 48, 53, 54]. Samaan aikaan liikalihavuuteen liittyvä Turicibacter [55] oli merkittävästi kohonnut malliryhmässä verrattuna muihin ryhmiin. Erityisesti suoliston mikrobiotan monimuotoisuutta mallihiirissä parannettiin lisäämällä CT-vesiuutetta. Havaitsimme joitain spesifisiä suolistobakteereja hiirissä erilaisilla hoidoilla; esimerkiksi Lactobacillus ja Muribaculaceae olivat kaksi pääbakteerisukua, jotka lisääntyivät suuren annoksen CT-vesiuutteella käsitellyssä ryhmässä verrattuna malliryhmään (kuva 4). Viimeaikaiset tutkimukset ovat osoittaneet, että CT-vesiuutteiden polysakkarideilla on merkittäviä

joidenkin maitohappobakteerien kasvu, mikä voisi hyödyttää isännän terveyttä [43]. Samanaikaisesti Muribaculaceae ovat probioottisia organismeja, jotka liittyvät pitkäikäisyyteen [57].These ehdotti, että mekanismi, jolla CT-vesiuute parantaa suoliston mikrobiotaa, voi olla probioottisten organismien kasvun edistäminen tai suojaaminen. Toinen huomionarvoinen bakteeri oli YE57. Vaikka suuriannoksinen CT-vesiuute lisäsi YE57-bakteerin suhteellista runsautta tässä tutkimuksessa (kuva 4), aiemmissa tutkimuksissa on havaittu, että sen runsaus oli suurempi normaalissa suolistossa kuin suolistossa, jota käsiteltiin korkean pitoisuuden yrttiteejäännöksellä. [58] ja että sen runsaus väheni sen jälkeen, kun Bacillus licheniformis yhdistettiin XOS:ään (ksylooligosakkarideja) [59].ThTämän bakteerin rooli suoliston mikrobiomassa ansaitsee lisätutkimuksen. Lisäksi suhteellisen pieni näytemäärä tässä tutkimuksessa saattaa aiheuttaa vääriä positiivisia ja vääriä negatiivisia, ja tulevia suurempia näytteitä koskevaa tutkimusta ehdotetaan tunnistettujen bakteerimarkkerien validoimiseksi.

CT-vesiuutekoostumus saattaa olla tärkeä sen vaikutuksista koostumukseen ja toiminnallisiin muutoksiin hiirten, joilla on suolistohäiriöitä, suolen mikrobistossa. PHG:t ovat yleisiä aktiivisia komponentteja CD:ssä ja CT:ssä, ja ekinakosidi tunnistettiin tärkeimmäksi PHG:ksi TT:ssä [60]. Viime vuosikymmeninä ekinakosidilla on osoitettu olevan monia farmakologisia vaikutuksia, kuten ikääntymistä estäviä ja hermostoa suojaavia vaikutuksia, sydämen toiminnan parantaminen, hyperlipidemian ja hyperglykemian vähentäminen sekä liikalihavuuden aiheuttaman diabeteksen ja metabolisen oireyhtymän ehkäisy [53, 61–65] . Havaitsimme muutoksia suoliston mikrobiotan aineenvaihduntareiteissä.ThKefiksiimin käsittely johti etyylibentseenin hajoamiseen ja sideroforiryhmän ei-ribosomaalisten peptidien biosynteesiin liittyvien bakteerien rikastumiseen, kun taas suuren ja keskiannoksen CT-vesiuutteen käsittelyt saattoivat lievittää näitä muutoksia, mikä osoittaa, että tämä uute hillitsi bakteeriyhteisöön liittyvää toimintaa. näihin toimintoihin. Lisäksi lisääntynyt bakteeririkastuminen, joka liittyy syanoaminohapon aineenvaihduntareittiin, käsittelyssä suuriannoksisella vesipitoisella uutteella ja sen vähentynyt rikastuminen mallihiirissä osoitti, että CT-vesiuute voi edistää syaaniaminohapon aineenvaihduntaa.ThMuutokset merkityksellisissä metaboliiteissa voivat tarjota tälle vesipitoiselle uutteelle farmakologisia vaikutuksia.

Vaikka mekanismi, jolla CT-vesiuute muuttaa suoliston mikrobiotan koostumusta ja toimintaa, on monimutkainen, on olemassa joitakin vihjeitä, joiden avulla voidaan spekuloida mahdollisesta mekanismista. On raportoitu, että sekä maitohappobakteerit että CT-vesiuutteet voivat vastustaa oksidatiivista stressiä. Tulehduksen aikana esiintyvä oksidatiivinen stressi on yleinen tekijä, joka pahentaa suoliston häiriöitä vähentämällä voimakkaasti suoliston mikrobien monimuotoisuutta ja edistämällä tiettyjen bakteerien lisääntymistä (4). Päinvastoin, reaktiiviset happilajit edistävät myös bakteeriryhmien selektiivistä kasvua nitraatti- ja tetrationaattihengityksen kautta [66–68]; Esimerkiksi Enterobacteriaceae-heimon bakteerit voivat kasvaa nopeasti suolistoflooran koostumuksen muutosten seurauksena hapetusolosuhteissa tulehduksen aikana [69, 70]. Useimmat elävät organismit kehittävät entsymaattista puolustusta, ei-entsymaattista antioksidanttipuolustusta ja korjausmekanismeja happiradikaalien poistamiseksi [71]. Nämä luonnolliset antioksidanttijärjestelmät eivät kuitenkaan yleensä ole riittäviä estämään oksidatiivisia vaurioita elävissä organismeissa. Useita muita synteettisiä antioksidantteja, mukaan lukien butyloitu hydroksianisoli ja butyloitu hydroksitolueeni, on käytetty laajalti hapettumisen vähentämiseen, mutta niiden turvallisuus on kyseenalaistettu [72, 73]. Siksi tutkijat ovat pyrkineet löytämään turvallisempia ja luonnollisempia antioksidantteja, jotka saadaan luonnossa esiintyvistä aineista. Koska sekä polysakkaridit että maitohappobakteerit pystyvät eliminoimaan oksidatiivista stressiä, CT-vesiuutteiden tarkan antioksidanttimekanismin määrittäminen suoliston mikrobiotaan vaatii lisätutkimuksia tulevaisuudessa.

Lopuksi havaitsimme, että CT-vesiuute pystyiparantaa suoliston mikrobiotaahiirillä, joilla on suolistosairauksia edistämällä monimuotoisuutta,hidastaa aineenvaihdunnan muutoksia, ja suoliston mikrobiotan rakenteen uudistaminen, ja nämä tulokset voivat tarjota referenssin vastaavien lääkkeiden kehittämiselle tulevaisuudessa.

LUONNOLLINEN CISTANCHE TUBULOSA SUOLLISTEN MIKROBIOTIEN RAKENTEEN UUDELLEENMUUTOKSIIN PHGS75% ECH 30% ACT 12%