Ekinosidin vaikutukset monoamiinin välittäjäaineisiin aivoiskemiasta kärsivillä rotilla striatumin solunulkoisessa nesteessä

Wei Lili1, Chen Hong1, Jiang Yong2, Tu Pengfei 2, Zhong Ming1, Du Juan1, Liu Fei1, Liu Chunyang1, Wang Lei1

(1. Farmasian koulu, Shihezin yliopisto, Xinjiangin erityiskasvilääketieteen avainlaboratorio, opetusministeriö, Shihezi, Xinjiang 832002;2. Perinteisen kiinalaisen lääketieteen moderni tutkimuskeskus, Pekingin yliopisto, Peking 100083)

Kiinan kirjan luokitusnumero: R-332; R284．1; R322．81; R338．14; R743.310.531

Asiakirjan tunnus: Artikkelinumero: 1001-1978 (2011) 02-0174-04

Abstrakti: Tavoite Tutkia vaikutustaEchinoside(ECH) monoamiinin välittäjäaineisiin striatumin solunulkoisessa nesteessä rotilla, joilla on fokaalinen aivoiskemia, ja tutkia ECH:n hermoja suojaavan vaikutuksen mahdollista mekanismia aivoissa. Menetelmät SD-rotat jaettiin satunnaisesti kontrolliryhmään, malliryhmään, ECH:n suuren ja pienen annoksen ryhmiin ja ligustratsiini (CXQ) -ryhmään. Jokaisen ryhmän rotille annettiin vastaavia lääkkeitä tai fysiologista suolaliuosta intraperitoneaalisesti kerran päivässä 7 päivän ajan. Kolmantena antopäivänä koetinholkki upotettiin aivojen striatumiin. Tunti viimeisen annon jälkeen tehtiin fokaalisen aivoiskemian (MCAO) rotan malli. Mallin valmistuksen jälkeen suoritettiin välittömästi mikrodialyysi. Dialysaatti injektoitiin korkean suorituskyvyn nestekromatografia-sähkökemialliseen detektoriin (HPLC-ECD) norepinefriinin (NE), dopamiinin (DA), 5-hydroksitryptamiinin (5-HT), 3:n määrittämiseksi. ,4-dihydroksifenyylietikkahappoa (DOPAC), homovanilliinihappoa (HVA), 5-hydroksi-indolietikkahappoa (HIAA) kunkin ryhmän striatumin solunulkoisessa nesteessä. Tulokset Verrokkiryhmään verrattuna NE-, DA- ja 5-HT-tasot malliryhmässä nousivat, ja myös happamat metaboliitit DOPAC, HVA ja HIAA lisääntyivät. Malliryhmään verrattuna kuuden aineen pitoisuudet ECH:n (30, 15 mg · kg - 1 · d - 1) ja CXQ-ryhmien suuri- ja pieniannoksisissa ryhmissä laskivat. Johtopäätös ECH:n hermoja suojaava vaikutus saattaa liittyä monoamiinin välittäjäaineiden lisääntymiseen aivoiskemian jälkeen.

Cistanche jauhe

Avainsanat: Echinoside; Aivoiskemia; Striatum; HPLC-ECD; Monoamiinin välittäjäaineet ja metaboliitit

Echinaceoside(ECH) on tehokas komponentti fenyylietanoidiglykosideista, jotka on eristetty ja puhdistettuCistanche deserticola, erikoistehdas Xinjiangissa. Tutkimukset ovat osoittaneet, että ECH:lla on hermostoa suojaavia vaikutuksia, kuten antioksidantti [1-2], hermosuojaus [3-4], ikääntymisen esto [5] sekä oppimisen ja muistin parantaminen [6-8]. Chen Hong et ai. vahvisti, että ECH:lla on suojaava vaikutus DA-hermosoluihin Parkinsonin taudissa [9]. Monoamiinin välittäjäaineet ovat eräänlaisia ​​tärkeitä aineita, jotka säätelevät kehon fysiologista toimintaa.Kudoksen sisältö voi kuvastaa välittäjäaineiden biosynteesiä, vapautumista, ottoa ja inaktivaatiota [10-11]. Tällä hetkellä ei ole olemassa asiaankuuluvaa raporttia ECH:n vaikutuksesta aivoiskemiasta kärsivien rottien aivoissa oleviin monoamiinilähettimiin. Tässä tutkimuksessa tutkittiin ECH:n vaikutusta aivoiskemiaa sairastavien rottien aivojuovion solunulkoisen nesteen monoamiinin välittäjäaineiden pitoisuuteen aivojen mikrodialyysiteknologian avulla ja alustavasti selvitettiin ECH:n mahdollista mekanismia aivojen hermosolujen suojaukseen.

Cistanche-uutejauhe

1.Materiaali

1.1 Koeeläimet

SD-rotat, ♂, kehon massa 250–300 g (ostettu Xinjiang Experimental Animal Centeristä, lisenssinumero: 2009-0053).

1.2 Lääkkeet ja reagenssit

ECH:n lahjoitti professori Tu Pengfei, Pekingin yliopiston farmasian korkeakoulu (puhtaus yli 95 prosenttia); Norepinefriini (NE), dopamiini (DA), 5-hydroksitryptamiini (5-HT), 3,4-dihydroksifenyylietikkahappo (DOPAC), homovanilliinihappo (HVA)

5-hydroksi-indolietikkahappo (HIAA) on Sigma; Tetrametyylipyratsiinihydrokloridi injektiota varten (CXQ, Harbin Sanlian Pharmaceutical Co., Ltd.); Sinkkifosfaattisementti (Shanghai Medical Instruments Co., Ltd.:n tuote, joka koostuu nesteestä ja jauheesta, sekoitettuna ajan kanssa); natrium1-alkyylisulfaatti (DIKMA); Sitruunahappohydraatti (Tianjin Jinke Fine Chemical Research Institute); Trinatriumsitraatti (Acros); dinatriumetyleenidiamiinitetraetikkahappo (JTTakerChemicalco); metanoli (DIKMA); asetonitriili (DIKMA); Aivojen mikrodialyysin perfuusioneste on yhdiste natriumkloridi-injektio (Beijing Shuanghe Pharmaceutical Co., Ltd.); Kaikki käytetty vesi on uudelleen höyrytysvettä.

1.3 Laite

American BAS4100 rotan aivojen stereotaktiset laitteet; CMA/12-anturi ja anturin holkki; CMA/120 tajuissaan eläimen laite; CMA/402 mikropumppu; CMA/150 matalan lämpötilan näytteen automaattinen kerääjä. Esa 5600A infuusiopumppu; Esa 5600A infuusiopumppu; Esa 542 automaattinen näytteen injektiolaite; Esan CoulArray sähkökemiallinen ilmaisin; Lasimainen hiilityöelektrodi ja Ag/AgCl-vertailuelektrodi; C18-kolonni (DIKMA, ODS5 μm, 150 mm × 4,6 mm); CoulArraywin-kromatografiatyöasema (Esa-yhtiö); Vortex-sekoitin (QL-861-tyyppi); Pöytäkoneen happamuusmittari (HANNA-211); Pöytäkoneen nopea sentrifugi (tyyppi XYJ-2).

2.Menetelmä

Cistanche-lisä lähellä minua – Imtodistaa muisti

Napsauta tästä nähdäksesi Cistanche Improve Memory -tuotteet

【Ask for more】 Email: xue122522@foxmail.com /  Whats App:  0086 18599088692 /  Wechat:  18599088692

2.1 Eläinten ryhmittely ja hallinta

Kolmekymmentä rottaa jaettiin satunnaisesti viiteen ryhmään: ① Kontrolliryhmä: 1 ml · kg-1 · d-1 normaalia suolaliuosta; ② Malliryhmä: normaali suolaliuos 1ml · kg-1 · d-1; ③ Malli plus ligustratsiini (CXQ) 30 mg · kg-1 · d-1; ④ - ⑤ Malli plus ECH:n suuren ja pienen annoksen ryhmät (ECHB, ECHS): 30, 15 mg · kg-1 · d-1; Kaikki kunkin ryhmän eläimet injektoitiin intraperitoneaalisesti 7 päivän ajan.

2.2 Mallinnusmenetelmä ja mikrodialyysi

Jokainen rotta haudattiin kanyylillä kolmantena antopäivänä: rotat nukutettiin 10-prosenttisella kloraalihydraatilla (3,5 ml · kg-1), joka oli kiinnitetty BAS4100:aan. aivojen stereotaktinen laite, ja koetinkatetri istutettiin vasempaan striatumiin (koordinaatit AP: plus 0,2 mm; ML: - 3,0 mm; DV: - 3,5 mm) liittyen GeorgePaxinoksen "Stereotactic Map of Rat Brainiin" ". Viimeisen annon jälkeen rotat nukutettiin 1 tunti myöhemmin, ja rotille tehtiin fokaalinen aivoiskemiamalli (MCAO-malli) käyttämällä Yang Zanzhangin [12] parannettua Longa-ompelumenetelmää. Kontrolliryhmän kalansiima asetettiin vain 10 mm, ja muut vaiheet olivat samat kuin leikkausryhmässä. Mallintamisen jälkeen aseta mikrodialyysianturi tajuissaan ja vapaasti liikkuvaan tilaan ja käytä Ringerin liuosta μ:iin. Aivomikrodialysaatti kerättiin 4 asteessa ja putki dialysaattia kerättiin 20 minuutin kohdalla. Kun jokainen dialysaattiputki on kerätty, se on säilytettävä välittömästi - 20 asteen jääkaapissa ja siirrettävä - 70 asteen jääkaappiin dialyysin jälkeen. Koettimen talteenottonopeus mitattiin ennen käyttöä, jota käytettiin muuntamaan monoamiinin välittäjäaineiden pitoisuus dialysaatissa.

mitä cistanche tekee – parantaa muistia

2.3 HPLC-ECD-analyysi

Liikkuvan faasin konfiguraatio: liikkuva faasi sisältää 829 ml 0,15 mol · L-1 sitruunahappo-natriumsitraattipuskuria litrassa; 0,1 mol · L-1 dinatrium-EDTA 1 ml; Metanoli 15{11}}ml; Natrium-{{10}}alkyylisulfaatti 0,283 g. Aseta liikkuvan faasin virtausnopeudeksi 0,7 ml · min-1 ja kolonniuunin lämpötilaksi 28 astetta. Sähkökemiallisen ilmaisimen käyttöjännite on 200mV, 400 mV ja 600 mV, 2, 3 ja 4 kanavaa; Vahvistus on 2nA. Ruiskutustilavuus on 25 μl. Standardikäyrä piirretään 0,025, 0,05, 0,1, 0,2, 0,5 mg · L-1 gradienttisekoitetulla standardiliuoksella.

2.4 Tilastollinen käsittely

Kokeelliset tiedot ilmaistaan ​​x-kentässä ± s, ja toistetut mittaustiedot analysoidaan SPSS13.{1}} tilastoohjelmistolla.

Kuva 1-6 kuvaa muutoksia NE-, DA-, DOPAC-, HIAA-, HVA- ja 5-HT-tasoissa rotan striatumin solunulkoisessa nesteessä. Kuvasta voidaan nähdä, että aivoiskemian jälkeen striatumin solunulkoisen nesteen monoamiinin välittäjäaineilla on aineenvaihduntahäiriö ja kunkin välittäjäaineen pitoisuus on lisääntynyt. Tietyllä alueella kasvu on selvempää iskemia-ajan pidentyessä. 90 minuutin iskemian kohdalla DA:n ja NE:n pitoisuus striatumin solunulkoisessa nesteessä oli yli kolme kertaa kontrolliryhmän taso. NE-, DA-, DOPAC-, HIAA-, HVA- ja 5-HT-tasot verrokkiryhmässä laskivat korkeasta matalaksi, mikä saattaa liittyä vasemman aivojen tilapäiseen iskemiaan vasemman yhteisen kaulavaltimon ligaation jälkeen. ja anturin asettamisesta aiheutuneet vahingot. Muutoskäyrästä ECH ja CXQ voivat vähentää DA:n, DOPAC:n, HIAA:n, HVA:n ja 5-HT:n huippupitoisuutta aivoiskemian jälkeen, ja CXQ ja suuren annoksen ECH ovat ilmeisempiä. Kunkin välittäjäaineen aikakäyrän siirtyminen alaspäin osoittaa, että ECH voi estää välittäjäaineiden ja niiden metaboliittien lisääntymistä aivoiskemiasta kärsivien rottien aivoissa.

                                                                           Kuva 2 Ekinosidin vaikutus DA:n solunulkoiseen tasoon rottien striatumissa

Kuva 3 VaikutusEchinosideDOPAC:n solunulkoisella tasolla rottien striatumissa Fig 4 VaikutusEchinosideHIV-viruksen solunulkoinen taso rottien striatumissa

Kuva 5 VaikutusEchinosideHVA:n solunulkoisella tasolla rottien striatumissa Kuva 6 VaikutusEchinosiderottien 5-HT instriatumin solunulkoisella tasolla

4.Keskustelu

Superman herbs cistanche - Improsinulla on muisti

【Ask for more】 Email: xue122522@foxmail.com /  Whats App:  0086 18599088692 /  Wechat:  18599088692

Aivoiskemian aiheuttaman aivovaurion mekanismi on monimutkainen. Aivoiskemian tapauksessa aivojen monoamiinin välittäjäaineet ovat häiriintyneitä ja NE-, DA- ja 5-HT-pitoisuudet vähenevät merkittävästi. Mitä vakavampi aivoiskemia on, sitä pienempi NE-, DA- ja 5-HT-pitoisuus aivokudoksessa on [13]. Aivojensisäinen mikrodialyysimenetelmä osoitti, että monoamiinin välittäjäaineiden pitoisuus solunulkoisessa nesteessä lisääntyi aivoiskemian aikana, kesti koko iskeemisen jakson ja lisääntyi edelleen iskeemisen ajan pidentyessä. Kokeen tulokset olivat yhdenmukaisia ​​raportin kanssa [14].Echinosideon tehokas komponentti fenyylietanoidiglykosideja, jotka on eristetty ja puhdistettu Cistanche deserticolasta, erikoiskasvista Xinjiangissa. Sillä on monia hermostoa suojaavia vaikutuksia, kuten ikääntymistä estävä, oppimista ja muistia parantava sekä neuronaalista apoptoosia estävä vaikutus.. Tässä tutkimuksessa kotimaista edistynyttä aivojen mikrodialyysiä yhdistettynä HPLC-ECD-tunnistustekniikkaan käytettiin alustavasti tutkimaanEchinosidemonoamiinin välittäjäaineista ja niiden aineenvaihduntatuotteista aivoiskemiaa sairastavien koerottien striatumin ekstrasellulaarisessa nesteessä. Tulokset osoittivat, että ECH voi vähentää aivoiskemian aiheuttamaa monoamiinin välittäjäaineiden lisääntymistä striatumin ekstrasellulaarisessa nesteessä ja parantaa aivoiskemian vaurioita paremmin.

viite:

［1］ Pellati F,Benvenuti S,Magro L,et al. Echinacea spp［J］． fenoliyhdisteiden ja radikaalien sieppausaktiivisuuden analyysi JPharm Biomed Anal, 2004, 35(2): 289.

［2］ Kuang R, Sun YG, Deng TL, Zheng XX. Ekinakosidin suojaava vaikutus ja mekanismit H2O{2}}vaurioituneisiin PC12-soluihin［J］． Chin Pharmacol Bull, 2009, 25(4): 515–8.

［3］ Zhao X, Pu XP, Geng XC. Ekinakosidin vaikutukset proteiinien ilmentymiseen substanti anigrasta ja striatalikudoksesta Parkinsonin taudin hiiren MPTP-mallissa käyttämällä dimensioelektroforeesianalyysiä［J］． Chin Pharmacol Bull, 2008, 24 ( 1 ): 28 - 32

［4］ Koo KA, Sung SH, Park JH ym. Callicarpa dichotoma［J］． aiheuttamien fenyylietanoidiglykosidien hermosuojaa suojaavat toimet in vitro Planta Med, 2005, 25(4): 356.

［5］ Li Y, Song YY, Zhong HQ. Ekinakosidin vaikutus immuunitoimintaan ja mitokondrioiden DNA:n suhteelliseen pitoisuuteen ikääntyvien hiirten ［J］． Chin Pharmacol Bull, 2010, 26(6): 810–3

［6］ GLNE, Lei L, Tu PF, et al. Tutkimus echinacosidin molekyylimekanismista ikääntymistä vastaan［J］． Acta Biophysica Sitica, 2004, 20 (3): 184.

［7］ Gao C, Wang CS, Wu GZ ym. Cistanche-glykosidien vaikutus oppimiseen ja muistin heikkenemiseen vaskulaarisessa dementiassa rotalla［J］． Chin Tradit Herb Drugs, 2005, 36( 12): 1852.

［8］ Tian F, Zhang K, Kang AJ ym. Ekinakosidin vaikutus ja mekanismi SAM-P /8:n oppimis- ja muistikykyyn［J］． Lab orat Anim Sci Manag, 2006, 2( 23): 510.

［9］ Chen H, Jing FC, Li CL ym. Ekinakosidi estää aivojuovion solunulkoisten monoamiinin välittäjäaineiden tasoja alenemasta 6-hydroksididopamiinileesiorotissa［J］． J Ethnopharmacol, 2007, 114(3): 285.

［10］ Amara SG. Neurotransmitterikuljettajien viimeaikainen kehitys［J］． Annu Rev Neurosci, 1993, 16(1): 73-93.

［11］ Wu GX, Su RB, Li J. Dopamiinin kuljettajan rooli psykostimulanttiriippuvuudessa［J］． Chin Pharmacol Bull, 2010, 26 ( 2 ): 141–3.

［12］ Yang ZZ, Chen H. Parannus ja kokemus ompelumenetelmistä fokaalisen aivoiskemian rotan mallissa［J］． Lishlzhen Med Mat Med Res, 2008, 19(9): 2189–90.

［13］ Tanaka K, Wada N, Ogawa N. Krooninen aivojen hypoperfuusio aiheuttaa ohimeneviä palautuvia monoaminergisiä muutoksia rotan aivoissa ［J］． Neurochem Res, 2000, 25(2): 313.

［14］ Li H． Puerarinin vaikutus monoamiinin välittäjäaineisiin rottien stria tumissa［J］． J Zhejiang Univ Sci Technol, 2005, 17(1): 13–7.