Cistanche Deserticola -uutteen vaikutukset peniksen erektiovasteeseen kastroiduilla rotilla

Abstrakti:Cistanche deserticola(CD) on pidetty lisääntymistoimintoja vahvistavana aineena tuhansia vuosia. CD-otteen vaikutuksetpenis erektiovastetta tutkittiin tässä tutkimuksessa. Kastraatioleikkauksen jälkeen rottia hoidettiin intragastrisesti CD-uutteella ({0}},45, 0,90 ja 1,8 g/kg) päivittäin neljän viikon ajan.Penis erektiovaste mitattiin ja seerumin hormonit määritettiin kokeen lopussa. Arvioitiin, ettäerektiohäiriömuuttui pidemmäksi jaerektioaikalyhyempi merkittävästi kastroiduilla rotilla verrattuna valeleikattuihin kontrolleihin. Kuitenkin CD-ote lyhensierektiolatenssija pidensi erektioaikaa kastraation negatiivisten vaikutusten minimoimiseksi. Annoksella 0,9 g/kg CD-uute sääteli seerumin luteinisoivan hormonin konsentraatiota normaalille tasolle kastroiduilla rotilla. Nämä havainnot osoittivat, että CD helpotti peniksen erektiovastetta ja moduloi seerumin hormonitasoa jossain määrin.

Avainsanat:Cistanche deserticola; erektioreaktio; kastraatio; hormoni

Lisätietoja Cistanche parantaa seksuaalista toimintaa

JOHDANTO

CistancheHoffmg. Et Link, yksi Orobanchaceae-heimon suvuista, on levinnyt pääasiassa pohjoisen pallonpuoliskon kuiville maille ja aavikoihin, kuten Sisä-Mongoliaan,Xinjiang, Ningxian autonomiset alueet Kiinassa ja Iranissa, Intiassa, Mongoliassa jne. Cistanches-lajit kuuluvat monivuotisiin loisyrtteihin, jotka kiinnittyvät yleensä hiekkaa sitovien kasvien, kuten Haloxylox ammodendronin, H. persicumin, Kalidium foliatum- ja Tamarix-kasvien, juuriin (Jiang). ja Tu 2009). Herba Cistanchea, Cistanche-lajin vartta, on pidetty erinomaisena tonic-aineena ja se on ansainnut "aavikoiden ginsengin" kunnian. Cistanche-lajeista Cistanche deserticola YC MA on ilmoitettu Cistanchen ensisijaiseksi lähdemateriaaliksi (Stefanova et al.2011). Viime vuosien liiallisen sadonkorjuun vuoksi luonnonvarat ovat kuitenkin riittämättömät C. deserticolan (CD) luonnonvarat, jotka on kerätty yhdeksi luokan II kasveista, jotka tarvitsevat suojelua Kiinassa, joten muut tämän suvun lajit, kuten C. salsa ja C. sinensis, käytetään myös korvikkeina joillakin alueilla. Alun perin ShenNong's Chinese Material Medicassa (vanha farmakologinen kokoelma) CD:n on ajateltu vahvistavan munuaisia ​​ja vahvistavan "Yangia" kliinisessä käytännössä perinteisen kiinalaisen lääketieteen teorian mukaisesti, jonka väitetään olevan tehokas lisääntymiselle, kehitykselle ja hedelmällisyydelle. Samaan aikaan CD:tä on myös keitetty lampaanlihan, perunan tai riisin kanssa tonisoivan ruoan tuottamiseksi ylikuormituksen aiheuttaman heikentymisen hoitoon satojen vuosien ajan, mikä viittaa siihen, että se on turvallista ottaa suun kautta (Xiong et al.2013). Näitä anekdoottisia käyttötarkoituksia esiintyy kuitenkin pääasiassa kiinalaisissa haitoissa, ja nykyaikaisten farmakologisten käsitteiden perusteella on käsitelty rajallista tieteellistä tietoa. Erektiohäiriö (ED) on tila, jolle on tunnusomaista joko peniksen riittämätön erektio tai erektio, joka ei kestä riittävän kauan aikuisilla miehillä (Cohan ja Korenman 2000). ). Vastauksena nykyaikaisiin, kehittyneisiin kemiallisiin aineisiin, kiinnostus kasveista on herännyt etsimään tehokkaita ja turvallisia lääkkeitä ED:n hoitoon (Adimoelja 2000). Aiempi tutkimus (Liuet al. 2009) osoitti, että CD electuary kiihdytti peniksen erektiota normaaleissa rotissa, mutta CD:n vaikutuksesta erektiohäiriöihin ei ollut tietoa. Eläimillä kirurgista kastraatiota kahdenvälisellä orkiektomialla on pidetty kastraation standardina. ED:n tutkimiseen (Tombal 2005). Siksi esillä oleva tutkimus suoritettiin CD:n mahdollisten vaikutusten arvioimiseksi ED:tä vastaan ​​tutkimalla erektiolatenssia ja -kestoa kastroiduilla rotilla.

MATERIAALIT JA MENETELMÄT

 Chemicals and materials Echinacoside (purity >98%) and acteoside (purity >98 prosenttia ostettiin National Institutes for Food and Drug Controlilta (Peking, Kiina). HPLC-laatuinen metanoli ostettiin Sigma-Aldrichilta (St. Louis, MO, USA). Puhdistettua vettä tuotettiin käyttämällä MilliporeMilli-Q Integral 3 -järjestelmää ja Q-POD Milli-Q -järjestelmää (Bedford, MA, USA). C. deserticolan varret ostettiin Shenzhen GURU Biology Co., Ltd:ltä (GuangDong, Kiina) ja jauhettiin hienoksi jauheeksi 60 meshin siivilän läpi. HPLC-analyysi ja kasvimateriaalin valmistus CD-jauheen ekinakosidi- ja akteosidipitoisuudet määritettiin aiemmalla menetelmällämme. (Zhao ym. 2011). Sitten jokaista 100 g kuivattua jauhetta keitettiin 1,5 litrassa vettä 1,5 tuntia. Huoneenlämpötilaan jäähdyttäen, sekoitettua lipeää sentrifugoitiin nopeudella 2000 rpm 10 minuuttia (Eppendorf 5810R, Saksa) ja sakka uutettiin uudelleen kahdesti samoissa olosuhteissa. Yhdistetyt supernatantit väkevöitiin tyhjöpyöröhaihduttimella (Heidolph laborota 4001-efektiivinen, Saksa) 60 asteessa ja sitten lyofilisoitiin ja saatiin noin 42 prosenttia kuivattua uutejauhetta. Seuraavaa eläinkoetta suoritettaessa kuivattu uute liuotettiin puhdistamattomaan veteen huoneenlämpötilassa.

Koeeläimet

Aikuiset urospuoliset Sprague-Dawley-rotat (200-220 g) saatiin Medicine Experimental Animalilta

Guangdongin provinssin keskustassa (Guangzhou, PR Kiina), ylläpidetään lämpötilasäädellyissä kvartaalissa 12-h valo/pimeyssyklit huoneenlämpötilassa (22-24 astetta) ja vakiokosteus (40-70 prosenttia) SPF:ssä (erityinen patogeenivapaa) laboratorio ja ruokittu ad libitum. Koemenettelyt olivat Kansallisen terveysinstituutin laboratorioeläinten hoidon ja käytön oppaan mukaisia. Koemenettely

Viikkoa ennen antoa viisikymmentä urospuolista SD-rottaa nukutettiin natriumpentobarbitaalilla intraperitoneaalisesti (40 mg/kg) (Jung et al. 1999) ja jaettiin satunnaisesti viiteen ryhmään: paitsi valeleikkausryhmän rotat (Sham), loput kastroitiin kahdenvälisesti kivespussin avulla (Anders 2003, Schlatt et al. 2002). Sillä välin CD-käsitellyille ryhmille annettiin mahalaukunsisäisesti 0,45 g/kg (pieni annos CD-uutetta, LCD plus Cas), 0,9 g/kg (mediaaniannos CD-uutetta, MCD plus Cas) ja 1,8 g/kg (suuri annos CD-uutetta) ote, HCD plus Cas) CD-uute, vastaavasti, kun taas vale- ja kastroituneille ryhmille annettiin vain vastaava määrä vettä. Kehon paino mitattiin toimenpiteen alussa ja sen jälkeen joka viikko. Kaikille rotille tehtiin laparotomia välittömästi kuoleman jälkeen seuraavien elinten poistamiseksi ja posteriorisen punnituksen vuoksi: esinahkarauhaset, siemenrakkula, eturauhanen ja nostolihas.

Peniksen erektiovasteen mittaus

Jokaisen ryhmän rottien erektiokyky arvioitiin aiempien menetelmien mukaisesti (Ji et al. 2009, Luo et al. 2006). Lyhyesti sanottuna ruostumattomasta teräksestä valmistettu bipolaarinen elektrodi (BL420F Data Acquisition & Analysis System, TmeTechnology Co., Ltd, Chengdu, PR Kiina) asetettiin varovasti penikseen, kunnes se pystytettiin sähköstimulaation pulssilla (5 V) 0,2 s. Aika stimulaatiosta erektioon kirjattiin peniksen erektiolatenssina. Kun peniksen erektioreaktio havaittiin, elektrode voitiin vetää pois peniksestä, ja peniksen erektioon pidetty aika kirjattiin erektioaikana.

Verinäytteet ja seerumin hormonianalyysit

Rotat nukutettiin natriumpentobarbitalilla intraperitoneaalisesti (40 mg/kg) (Jung et ai. 1999).

Verinäytteet otettiin ja hyytyttiin 4 asteessa 4 tunnin ajan, josta seerumi kerättiin sentrifugoimalla 4000 rpm 5 minuutin ajan 4 asteessa (Eppendorf 5810 R, Saksa) ja säilytettiin välittömästi -20 asteen pakastimessa asti. lisäanalyysi. LH- ja FSH-kokonaistasot mitattiin käyttämällä kaupallisia radioimmunomäärityspakkauksia (RIA) (Beijing North Institute of Biological Technology, Peking, Kiina) valmistajan ohjeiden mukaisesti (Matsumoto etal. 1986). Kilpailevan radioaktiivisen immuunitekniikan perusteella määrityksessä käytettiin I125-leimattua LH:ta (tai FSH:ta). Lyhyesti sanottuna 100 µl I125-leimattua LH-ainetta (tai FSH) lisättiin 100 µl:n seeruminäytteeseen ja inkuboitiin 100 µl puhdistettua kanin vasta-ainetta 4 asteessa (tai 37 asteessa) yön yli. Sitten antigeeni-vasta-ainekompleksiin lisättiin aasin anti-kani-immuunierotusaine ja sentrifugoitiin (3500 rpm, 15 min) vapaan ja vasta-aineisiin sitoutuneen 125I-LH:n (tai FSH:n) erottamiseksi. Myöhemmin sakan radioaktiivisuus mitattiin radioimmuunimäärityslaskimella (DMF-96, Zhongcheng Electric Technology Development Co., Ltd., Hefei, Kiina). LH- ja FSH-analyysin herkkyysrajat olivat molemmat 1,0 mIU/ml.

TILASTOLLINEN ANALYYSI

Tietojen analysointi suoritettiin käyttämällä SPSS-versiota 16.{1}}ohjelmistoa.

Arvot ilmaistiin keskiarvona ± standardipoikkeama (SD). Parametriset tiedot analysoitiin käyttämällä yksisuuntaista varianssianalyysiä (ANOVA), jota seurasivat post hoc LSD-testit. Ei-parametriset tiedot analysoitiin Kruskal-Wallis-testillä. Eroja pidettiin tilastollisesti merkittävinä, jos poikkeaman todennäköisyys oli pienempi kuin 0,05.

TULOKSET

CD-jauheen ekinakosidi- ja asetonidipitoisuuksien kvantitatiivinen määritys

Ekinakosidin ja asetonidin pitoisuus CD-jauheessa oli 1,27±0.01 prosenttia ja 0,52±0,003 prosenttia, mikä vastasi Kiinan farmakopean vaatimuksia. CD-jauheen HPLC-kromatogrammi on esitetty kuvassa. 1.

(4,6 mm × 250 mm, 5 µm, Waters, Milford, MA, USA); liikkuva faasi: 0,5 % (tilavuus/tilavuus) etikkahapon vesiliuos (A) ja metanoli ( B) ainesosa (0 min, A: B=25:75; 10-30 min, A: B=40: 60; 30 min, A: B=0: 100); virtausnopeus: 1 ml/min; detektiivisen aallonpituus: 330 nm; lämpötila: 30.

Kuva 2: Peniksen erektioviive ja kesto kastroiduilla. Tiedot ilmaistaan ​​keskiarvona ± SD (n=10). ##p<0.01 relative="" to="" sham-operated="" group,=""><0.01 relative="" to="" castrated="" group.="" abbreviation="" (below):="" sham,="" sham-operated="" group;="" cas,="" castration="" control="" group;="" lcd="" +cas="" (0.45g/kg),="" mcd="" +cas="" (0.9g/kg)="" and="" hcd="" +cas="" (1.8g/kg),="" three="" groups="" of="" cd="" extract="" treated="" in="" castrated="">

Kuva 3: CD-uutteen vaikutukset seerumin LH-konsentraatioihin kastroiduilla rotilla. Tiedot ilmaistaan ​​keskiarvona ± SD (n=10). #s<0.05 relative="" to="" sham-operated="" group,="" *=""><0.05 relative="" to="" castrated="" group.="" body="" weights="" and="" relative="" accessory="" organs="" weights="" shown="" in="" table="" 1,="" all="" rats="" were="" of="" similar="" initial="" body="" weights="" with="" an="" increase="" from="" day="" 1="" to="" day="" 28.="" however,="" mean="" values="" in="" castrated="" group="" increased="" from="" 216.8±9.2="" g="" to="" 251.4±12.7,="" 283.3±15.1,="" 306.8±15.4="" and="" 322.2±18.4="" g,="" gaining="" less="" weights="" compared="" to="" the="" sham="" operated="" counterparts=""><0.05). there="" were="" no="" statistical="" difference="" between="" sham="" group="" and="" cd="" treated="">

Lisäksi esinahkarauhasen, eturauhasen ja rakkulan ja levator ani -lihaksen inkastroitujen rottien keskimääräiset suhteelliset painot olivat merkittävästi alhaisemmat (p<0.05) than="" those="" of="" normal="" controls,="" respectively.="" compared="" with="" the="" rats="" castrated="" only,="" the="" relative="" values="" of="" these="" organs="" weight="" tended="" to="" be="" higher="" under="" the="" treatment="" of="" cd="" extract.="" erectile="" response="" assessment="" in="" contrast="" to="" sham="" group,="" castration="" made="" the="" rats="" spend="" more="" time="" gaining="" penis="" erection="" under="" electric="" stimulation=""><0.01). however,="" the="" erectile="" latency="" was="" shortened="" by="" cd="" extract,="" exhibiting="" a="" significant="" decrease="" by="" 52.7%="" in="" lcd="" +cas="" group=""><0.01), 73.5%="" in="" mcd="" +cas="" group=""><0.01) and="" 74.5%="" in="" hcd="" +cas="" group=""><0.01), respectively.="" furthermore,="" castration="" shortened="" the="" erectile="" duration="" with="" the="" mean="" value="" of="" 37.2±17.3="" s="" compared="" to="" sham="" operated="" group=""><0.01). however,="" the="" erectile="" duration="" in="" rats="" was="" significantly="" prolonged="" approximately="" by="" 2.6-fold="" in="" mcd="" +cas="" group=""><0.01) and="" 2.1-fold="" in="" hcd="" +cas="" group=""><0.01). it="" showed="" no="" strict="" dose-related="" correlation.="" (fig.="">

Seerumin hormonitasot

RIA-määrityksellä analysoituna LH:n keskimääräinen seerumikonsentraatio kastroiduilla rotilla oli 2,50±0,34 mIU/ml, mikä osoitti nousua valeleikkaukseen verrattuna (p<0.05). however,="" the="" value="" descended="" about="" 49.2%="" in="" mcd="" +cas="" group="" relative="" to="" that="" in="" castrated="" control=""><0.05) (fig.="" 3).="" shown="" in="" fig.="" 4,="" no="" statistical="" differences="" were="" observed="" among="" all="" groups="" on="" fsh="">

KESKUSTELU

Tuloksemme osoittivat, että kastraatio pidensi merkittävästi peniksen erektiolatenssia ja lyhensi erektioaikaa, mikä johti merkittävään apuelintensatrofiaan. CD-uute kuitenkin helpotti peniksen erektiovastetta ja moduloi seerumin LH-tasoa jossain määrin kastroiduilla rotilla. Androgeeni stimuloi ja ylläpitää spontaania erektiota pääasiassa solu-, molekyyli- ja fysiologisten mekanismien kautta, joihin liittyy paisuvan sileän lihaksen rentoutuminen (Traish et al. 2007). Talha et al.2007). Riittämättömät testosteronitasot johtavat sen rentoutumisen vähenemiseen (McClure 1988), mikä näin ollen johtaa impotenssiin miehillä (Bivalacqua et al. 2000).

Erityisesti rotilla sitä ylläpitävät laajat systeemiset testosteronipitoisuudet ({{0}} prosenttia), jonka alapuolella erektiovaste heikkenee annoksesta riippuvalla tavalla (Armagan et al. 2006). Tässä tutkimuksessa verenkierron testosteronipitoisuus oli liian alhainen herkkyysrajan (0,02 ng/ml) saavuttamiseksi kaikissa kastroiduissa rotissa (tietoja ei näytetä tuloksissa). CDextract lyhensi kuitenkin merkittävästi peniksen erektioviivettä kolmella annoksella ja pidensi erektioaikaa 0,90 g/kg ja 1,8 g/kg. Se oli luultavasti seurausta joissakin aiemmissa tutkimuksissa (He et al. 1996a, He et al. 1996b) mainitusta CD:n androgeenimaisesta vaikutuksesta. Jotkut lisäelimet, kuten eturauhanen ja rakkularakkula, ovat androgeeniriippuvaisia, joten painonmuutokset voivat heijastaa endokriinisen tilan muutokset (Trisomboon et al. 2007, Jang ym. 2011).

Siinä oli testosteronin kynnystaso, jonka alapuolella näiden elinten aineenvaihdunta estyi (Trachtenberg1985). Tutkimuksessamme vahvistettiin, että kastraatio aiheutti lisäsukupuolielinten painon alenemisen testosteronin puutteesta johtuen. Testosteronia erittää ensisijaisesti kives Leydig-solu, ja sitä säätelevät hypofyysiset hormonit, kuten aluteinisoiva hormoni (LH) ja follikkelia stimuloiva hormoni (FSH). tärkeä rooli kastroitujen eläinten peniksen toiminnan ylläpitämisessä (Robert et al. 2004). Koska hypotalamus-aivolisäke-gonad (HPG) -akseli on suljetun silmukan takaisinkytkentämekanismi, matalat sukurauhasten hormonitasot voivat puolestaan ​​säädellä LH:n ja FSH:n eritystä (Morales et al. 2004). Tutkimuksemme on tutkinut, että seerumin LH-taso nousi merkittävästi kastroiduilla rotilla ja laski sitten normaalille tasolle CD-uutteen annoksella 0,90 g/kg, mikä oli yhtä mieltä aikaisemman päätelmän kanssa, että kohonnut LH-taso liittyi suurempaan erektiohäiriöiden riskiin (Kupelian et al. 2006).

Kiveksessä LH stimuloi testosteronin synteesiä ja vapautumista, jonka palauteohjaus on suhteellisen johdonmukaista, kun taas FSH vaikuttaa suoraan Sertoli-soluihin ravitsemaan niitä palautekontrollikompleksin avulla (Hellqvist et al. 2008). Nämä havainnot antoivat enemmän tukea olettamukselle, että CD ilmensi androgeenin kaltaista vaikutusta, joka saattoi olla pääasiallisesti vastuussa seerumin LH:n alenemisesta enemmän kuin FSH:a. Nykyisen havainnon mukaan kastraation vaikutus kehonpainon kehitykseen urosrotilla oli samanlainen kuin aikaisemman tutkimuksen havainnot (Christoffersen). et al. 2006), kun taas naarasrotilla saatujen tulosten vastaisesti (Pantaleão etal. 2010). CD-uute ei kyennyt merkittävästi parantamaan ruumiinpainoa, mikä johtui luultavasti hoidon riittämättömästä kestosta tai monimutkaisista vaikutuksista yleiseen terveydentilaan. Yhteenvetona voidaan todeta, että kastraatio pidensi peniksen erektiokykyä ja lyhensi sen kestoa merkittävästi, lisääntyi seerumin LH ja lisäsukupuolielimet surkastuvat. CD-uute helpotti peniksen erektiovastetta lyhentämällä erektiolatenssia ja pidentämällä erektioaikaa kastroiduilla rotilla. Nämä vaikutukset johtuivat todennäköisesti androgeenin kaltaisesta vaikutuksesta, jota tuki havainto, että CD-uute normalisoi nämä LH-pitoisuudet erityisesti annoksella 0,90 g/kg.

Lisätodisteita tarvitaan kuitenkin CD-uutteen vaikutuksen osoittamiseksi ED-athypothalamic- ja limbisiin tasoihin, ja tähän arvokkaaseen perinteiseen lääketieteeseen voitaisiin kiinnittää enemmän huomiota nykymaailmassa.