Gam-COVID-rokotettujen potilaiden vasta-ainevasteiden dissektio viittaa RBD:n ulkopuolisten epitooppien osallistumiseen SARS-CoV-2-neutralisaatioon

Abstrakti: Miljoonia ihmisiä on rokotettu Gam-COVID-Vacilla, mutta indusoitujen vasta-aineiden hienoja spesifisiä ominaisuuksia ei ole tutkittu täysin. Plasma 12 naivilta ja 10 koronavirustauti 2019 (COVID-19) toipilaan koehenkilöltä otettiin ennen ja jälkeen kahden Gam-COVID-Vac-rokotteen. Plasmanäytteiden (n=44) ​​vasta-ainereaktiivisuutta tutkittiin paneelilla, jossa oli laskostettuja ja laskostumattomia, vakavan akuutin hengitystieoireyhtymän koronavirus 2:n (SARS-CoV-2) proteiineja ja 46 peptidiä, jotka kattavat piikin. proteiinilla (S) ja immunoglobuliini G:n (IgG) alaluokan entsyymi-immunosorbenttimäärityksellä (ELISA). Gam-COVID-Vac-indusoitujen vasta-aineiden kykyä estää reseptoria sitovan domeenin (RBD) sitoutuminen sen reseptorin angiotensiinia konvertoivaan entsyymiin 2 (ACE2) tutkittiin molekulaarisessa vuorovaikutusmäärityksessä (MIA). Vasta-aineiden viruksia neutraloivaa kykyä tutkittiin pseudotyyppisellä viruksen neutralointitestillä (pVNT) Wuhan-Hu-1:lle ja Omicronille. Havaitsimme, että Gam-COVID-Vac-rokotus aiheutti merkittävän IgG1:n, mutta ei muiden IgG-alaluokkien lisääntymisen laskostunutta S:tä, piikkiproteiinin alayksikköä 1 (S1), piikkiproteiinin alayksikköä 2 (S2) ja RBD:tä vastaan ​​verrattavissa olevalla tavalla naiivissa ja toipilaan. aiheita. Viruksen neutralointi korreloi voimakkaasti rokotuksen aiheuttamien vasta-aineiden kanssa, jotka olivat spesifisiä laskostuneelle RBD:lle ja uudelle peptidille (eli peptidille 12). Peptidi 12 sijaitsi lähellä RBD:tä S1:n N-terminaalisessa osassa ja voi mahdollisesti olla mukana piikkiproteiinin fuusiota edeltävän konformaation siirtymisessä sen jälkeiseen konformaatioon. Yhteenvetona voidaan todeta, että Gam-COVID-Vac-rokotus indusoi S-spesifisiä IgG1-vasta-aineita naiiveilla ja toipilaan toipuvilla henkilöillä vertailukelpoisella tavalla. RBD:lle spesifisten vasta-aineiden lisäksi RBD:n N-päätä lähellä olevaa peptidiä vastaan ​​indusoidut vasta-aineet liittyivät myös viruksen neutralointiin.

Avainsanat: SARS-CoV-2; COVID-19; Gam-COVID-Vac; epitooppi; vasta-aine; viruksen neutralointi; molekyylivuorovaikutusmääritys; Omicron

cistanche-lisäaine hyödyttää - lisää vastustuskykyä

Napsauta tästä nähdäksesi Cistanche Enhance Immunity -tuotteet

【Kysy lisää】 Sähköposti:cindy.xue@wecistanche.com / Whats App: 0086 18599088692 / Wechat: 18599088692

1. Esittely

Ensimmäisen vakavan akuutin hengitystieoireyhtymän koronavirus 2:n (SARS-CoV-2) infektiotapausten jälkeen vuoden 2019 lopussa Kiinan Wuhanissa uusi koronavirustauti (COVID-19) levisi nopeasti kaikkialle. maailmassa ja kasvoi maailmanlaajuiseksi pandemiaksi [1–4]. COVID-19-rokotteiden nopeaa kehitystä ja maailmanlaajuisten rokotusohjelmien käyttöönottoa sekä vähemmän patogeenisten SARS-CoV-2-muunnelmien ilmaantumista pidetään merkittävinä tekijöinä COVID{10}}kuolemien vähentämisessä. ja pandemian vakavuus [1,5]. Ensimmäiset rokotteet, jotka tulivat saataville, olivat geneettisiä rokotteita, jotka perustuivat SARS-CoV-2-pintaproteiinia S koodaavan geenin adenovirusvälitteiseen siirtoon [6–8]. SARS-CoV-2 S-proteiini koostuu S1-alayksiköstä, joka sisältää reseptoria sitovan domeenin (RBD), joka kiinnittyy reseptoriinsa ACE2:een ihmissoluissa, ja S2-alayksiköstä, joka varmistaa viruksen kiinnittymisen isäntäsolukalvoon solun proteolyyttisellä pilkkoutumisella. fuusiopeptidi (FP) virusinfektion aikana [9]. Tietyissä adenoviruspohjaisissa rokotteissa (esim. COVID-19 Vaccine Janssen) geeninsiirtoon käytettyä S-geeniä voidaan modifioida proteiinin stabiloimiseksi ja sen pilkkoutumiseen vaikuttamiseksi, mutta näin ei ole muiden kohdalla [10]. Ihmissolut, jotka ovat infektoituneet S:tä koodaavan geenin sisältävillä adenoviruksilla, tuottavat vaihtelevan määrän S-antigeeniä, joka vapautuu ja esittelee MHC-luokan II pääasiallisen histokompatibiliteettikompleksin (MHC) kautta T-soluille, mikä johtaa CD4+ T-solujen apuun. S-spesifisten vasta-aineiden tuotantoon. Myös MHC-luokka I esittelee transfektoitujen solujen ekspressoimaa S-proteiinia infektoituneen solun pinnalla ja laukaisee S-spesifisten sytotoksisten CD8+ T-solujen aktivoitumisen, jotka voivat tunnistaa S-antigeeniä tuottavat solut ja tuhota ne. Rokotuksen periaate, eli S:tä koodaavan geneettisen tiedon vieminen isäntäsoluihin ja sitä seuraava S-antigeenin tuotanto infektoituneiden solujen toimesta, on samanlainen kuin lähettiribonukleiinihapporokotteet (mRNA), vaikka geeninsiirtotekniikka eroaakin adenoviruksesta. -pohjaiset rokotteet. Siten "geneettiset rokotteet" jäljittelevät jossain määrin luonnollista SARS-CoV{36}}-infektiota. Viruksen neutralointiin osallistuvien rokotettujen henkilöiden vasta-aineiden tunnistamien epitooppien tunnistaminen on ratkaisevan tärkeää paitsi olemassa olevien rokotteiden vaikutusmekanismin ymmärtämisen kannalta myös kehittyneiden aktiivisten rokotusten ja passiivisten immunisaatiostrategioiden kehittämiseksi COVID-virusta vastaan-19 [11 ,12]. Suurin osa nykyisistä rokotteista keskittyy S-spesifisen vasta-ainevasteen saamiseen kiinnittäen erityistä huomiota RBD-spesifiseen vasta-ainevasteeseen, koska on havaittu, että RBD-spesifiset vasta-aineet korreloivat korkean neutraloivan aktiivisuuden kanssa SARS-CoV:ta vastaan-2 [ 13–15]. Jokaisen uuden huolenaiheisen muunnelman (VOC) hankkimien mutaatioiden määrä osoittaa kuitenkin, että on tärkeää tunnistaa epitoopit, jotka säilyvät VOC-yhdisteistä, joihin kohdistuu neutraloivia vasta-aineita, jotka sijaitsevat paitsi RBD:ssä myös RBD:n ulkopuolella [16]. Itse asiassa on olemassa tutkimuksia, jotka osoittavat neutraloivien epitooppien läsnäolon RBD:n ulkopuolella, jotka vasta-aineet tunnistavat immunisaation jälkeen [17–20]. Vuonna 2020 vektoripohjainen rokote Gam-COVID-Vac, jota kutsutaan myös nimellä Sputnik-V, tuli saataville kliiniseen käyttöön, ja se on tällä hetkellä hyväksytty käytettäväksi yli 70 maassa (https://sputnikvaccine.com/about-vaccine / (käytetty 17. tammikuuta 2023)). Our World In Data (OWID) -resurssin mukaan 79 miljoonaa ihmistä Venäjällä sai ainakin yhden rokotteen ja 72 miljoonaa on täysin rokotettu (https://ourworldindata.org/covid-vaccinations?country{62}} RUS (käytetty 22. maaliskuuta 2022)). Gam-COVID-Vac koostuu kahdesta rokotetyypistä, jotka perustuvat kahteen erilaiseen ihmisen adenovirusvektoriin (hAd26 ja hAd5), jotka kantavat Wuhan-Hu-1-kannan SARS-CoV{{ S-proteiinin natiivia muotoa. 73}}. Sputnik-V sisältää kaksi injektiota, joista toisessa on hAd26 ja toisessa hAd5 ja Sputnik light, joissa on vain hAd26. Kahta erilaista adenovirusvektoria käytetään ensimmäisessä ja toisessa immunisaatiossa vähentämään mahdollisuutta, että rokotetut kohteet tuottavat immuniteetin S-proteiiniimmuniteetille adenovirusta vastaan. Itse asiassa adenovirusspesifiset vasta-aineet rajoittaisivat tehosterokotusten tehokkuutta neutraloimalla adenovirusvektorivehikkelin. Siksi 21. päivänä rAd26-rokotteen ensimmäisen annoksen antamisen jälkeen toistuva antigeenin anto suoritetaan rAd5-vektorilla [8,21]. Harvat tutkimukset ovat tutkineet huomattavassa määrin S- ja RBD-spesifisiä vasta-ainevasteita ja viruksen neutralointiaktiivisuutta Gam-COVID-Vac-rokotettujen seerumeissa [10,22,23]. RBD-spesifisten IgG-vasta-aineiden lisääntymistä on raportoitu kolme kuukautta Gam-COVID-Vacin annon jälkeen, ja on osoitettu, että vasta-aineet ristireagoivat huolta aiheuttavien alfa-, beeta-, delta- ja omikronimuunnosten kanssa [24–26]. Gam-COVID-Vacia on myös verrattu useisiin muihin lisensoituihin SARS-CoV-rokotteisiin, jotka osoittivat korkeaa viruksen neutralointia ja korkeaa tehokkuutta Sputnik-V:n COVID-kuolleisuutta vastaan, vaikkakin se oli hieman huonompi. joihinkin mRNA-rokotteisiin liittyen viruksen neutralointiin havaittiin [24]. Lopuksi on osoitettu, että ihmisen immuunikatoviruspositiivisten (HIV+) antiretroviraalista hoitoa (ART-hoitoa saaneiden) potilaiden immunisointi Gam-COVID-Vacilla osoittaa epidemiologista tehoa SARS-CoV:n alkuperäistä villityyppiä ja Delta-varianttia vastaan. 113}} [27]. Toistaiseksi ei ole kuitenkaan tehty yksityiskohtaista analyysiä vasta-aineiden epitooppitunnistuksesta Gam-COVID-Vac-rokotetuilla henkilöillä, ja tietoja tarvitaan immunoglobuliini-isotyypin ja IgG-alaluokan vasteiden ymmärtämiseksi Gam-COVID-rokotetuilla henkilöillä. Tässä tutkimme kahta ryhmää koehenkilöitä, jotka oli rokotettu Gam-COVID-Vac-rokotteella, yhtä ryhmää, jolla oli aiemmin ollut SARS-CoV{122}}-infektio, ja toista ryhmää SARS-CoV-2 naivia henkilöitä. Suoritimme huolellisen analyysin indusoitujen vasta-aineiden epitooppispesifisyydestä käyttämällä mikrosiruja SARS-CoV{127}}peräisiä laskostettuja ja laskostumattomia proteiineja ja peptidejä, jotka kattavat täydellisen S-proteiinin, mukaan lukien RBD:n. Lisäksi IgG-alaluokan vasteet analysoitiin. Tutkimuksemme paljastaa, että Gam-COVID-Vac-rokotetut henkilöt keräävät RBD-spesifisiä vasta-aineita, jotka pystyvät estämään RBD-ACE2-vuorovaikutuksen. Mielenkiintoista on, että havaitsimme, että viruksen neutralointi liittyi myös vasta-aineisiin, jotka oli suunnattu RBD:n ulkopuolella olevaa peptidiä vastaan, mikä saattaa olla osallisena piikkiproteiinin fuusiota edeltävän konformaation siirtymisessä.

cistanche tubulosa - parantaa immuunijärjestelmää

2. Tulokset

2.1. Gam-COVID-rokotettujen henkilöiden joukossa ovat COVID{5}}-naiivit ja toipilaiset

Toipilaan koehenkilöt infektoivat Wuhan-Hu-1-kantaa sen esiintyvyyden ja sekvenssitietojen mukaan, jotka saatiin tartunnan aikaan Moskovan alueella. Naiveilla koehenkilöillä ei ollut COVID-19-oireita, ja heiltä puuttui SARS-CoV-2--spesifisiä vasta-aineita värväyshetkellä. Tutkimuskohteissa oli 15 naista ja 7 miestä, joiden mediaani-ikä oli 60 vuotta (eli 25–70 vuotta) (taulukko 1).

Taulukko 1. Koehenkilöiden demografiset, kliiniset ja serologiset ominaisuudet.

Jokaiselta koehenkilöltä otettiin plasmanäyte ajanhetkellä 0 (eli perusviiva) (kuva 1A), sitten jokainen kohde rokotettiin Sputnik-V:llä noin 21 päivän välein ensimmäisen ja toisen välillä. injektio (aikapisteet 1 ja 2). Ajankohtana 3 kerättiin toinen plasmanäyte rokotteen aiheuttamien vasta-ainevasteiden määrittämiseksi (kuvio 1A). Koehenkilöitä tarkkailtiin vielä 120 päivää. Päivänä 110 viimeisen rokotuksen jälkeen yhdellä koehenkilöllä (eli henkilöllä 22) oli COVID-19, kun taas muille ei ollut kehittynyt COVID-19-oireita (taulukko 1).

Kuva 1. Tutkimussuunnitelma ja SARS-CoV-2--spesifiset vasta-ainevasteet ennen Sputnik-V-rokotusta ja sen jälkeen. (A) Tutkimuksen suunnittelu. Plasmanäytteet otettiin COVID-19-naiiveilta (n=12) ja toipilailta (n=10) ajanhetkellä 0 (perustaso), sitten koehenkilöt saivat kaksi Sputnik-V:tä rokotukset ajankohtina 1 ja 2, ja plasmanäyte otettiin ajankohtana 3 (eli päivä 80–85 ensimmäisen rokotuksen jälkeen). (B) Nukleokapsidi-spesifiset IgG-vasta-ainetasot (y-akseli: ISU) naiiveilla ja toipilaisilla (x-akseli) lähtötasolla. Vaakaviiva osoittaa positiivisuuden rajan. (C) IgG-vasta-ainetasot (y-akselit: ISU), jotka ovat spesifisiä RBD:lle, S:lle, S1:lle ja S2:lle kohteissa ajanhetkellä 0 ja 3 (x-akselit). (D) Vasemmalta oikealle IgG1-, IgG2-, IgG3- ja IgG4-vasta-ainetasot (y-akselit: optisen tiheyden OD-arvot) S:hen (yläosa) ja RBD:hen (alaosa) ajankohtina 0 ja 3 ( x-akselit). Merkittävät erot ryhmien välillä Wilcoxon-testillä määritettynä on osoitettu: ** p < 0.01, *** p < 0,001, **** p < 0,0001, ns – ei merkitsevä.

2.2. Gam-COVID-Vac-rokote saa aikaan laajoja IgG-vasteita S:lle, mukaan lukien S1, RBD ja S2

cistanche-lisäaine hyödyttää - lisää vastustuskykyä

Suoritimme yksityiskohtaisen analyysin vasta-ainevasteista, jotka kohdistuivat suureen joukkoon laskostettuja ja laskostumattomia SARS-CoV-2 -proteiineja ja peptidejä, jotka kattavat S-proteiinin plasmanäytteissä SARS-CoV-2-naiiveilta ja toipilaan koehenkilöiltä. Gam-COVID-Vacilla suoritetun täyden immunisaatiojakson jälkeen (kuvio 1A, B; taulukko 1). Kun verrattiin plasmanäytteitä ajankohdasta 0 ja ajankohdasta 3 rokotuksen jälkeen, havaittiin merkittävä IgG-vasteiden induktio laskostunutta mutta ei laskostunutta RBD:tä, S:tä, S1:tä ja S2:ta vastaan ​​(kuvio 1C). Kolme kuukautta rokotuksen jälkeen koehenkilöiden RBD-spesifisten IgG-vasta-aineiden määrä kasvoi 21-kertaiseksi (p < 0.{{20}}001) ja {{ 18}}-kertainen S-spesifisten IgG-vasta-aineiden lisääntyminen (eli aikapiste 0: mediaani 0,291, aikapiste 3: mediaani 5,778) (p < 0,0001), vastaavasti. S1:n IgG-vasta-aineet lisääntyivät 37-kertaisesti (p=0,0023) ja S2:n IgG-vasta-aineet lisääntyivät 28--kertaisesti (p=0,0094) (Kuva 1C ). Gam-COVID-Vac-rokotus aiheutti pääasiassa IgG-vasteita laskostuneisiin S-, S1- ja RBD-tasoihin verrattain naiiveilla ja toipilaan olevilla henkilöillä (kuvat 1C, S2 ja S3), mikä osoittaa, että sitä voidaan käyttää SARS-CoV-viruksen tehostamiseen{46}} spesifisiä vasta-ainevasteita myös toipilaan koehenkilöillä. RBD:tä, S1:tä ja S1:tä vastaan ​​suunnattujen IgG-vasta-aineiden lisääntymistä havaittiin naiiveilla ja toipilaan olevilla koehenkilöillä (kuva S2), eikä IgG-tasoissa RBD:n, S1:n ja S2:n välillä ollut merkittäviä eroja naiiveilla ja toipilaan toipuvilla koehenkilöillä ajankohtana 3. (Kuva S3).

2.3. Gam-COVID-Vac-rokote indusoi pääasiassa IgG1-alaluokan vasteen S- ja RBD:lle

On raportoitu, että allergeenispesifinen immunoterapia (AIT) indusoi pääasiassa allergeenispesifisiä IgG1- ja IgG4-vasteita, jotka eroavat toisistaan ​​paitsi efektoritoimintojensa osalta (IgG1 voi välittää vasta-aineista riippuvaa solusytotoksisuutta (ADCC) ja komplementin aktivaatiota, kun taas IgG4:llä ei ole näitä efektoritoiminnot), mutta myös niiden kinetiikasta (IgG1: nopea alkaminen ja varhainen lasku: IgG4: hitaasti alkava, mutta jatkuva taso) [28–30]. Siksi tutkimme IgG-alaluokan (eli IgG1-IgG4) vasteita S- ja RBD:lle Sputnik-V-rokotetuilla henkilöillä. Kuvio 1D osoittaa, että rokotus indusoi lähes yksinomaan IgG1-alaluokan vasteen S:lle ja RBD:lle. Merkittäviä S- ja RBD-spesifisten IgG1-tasojen nousuja (p=0.0002 ja p=0.0071, vastaavasti) havaittiin rokotuksen jälkeen. Sille ja RBD:lle spesifisiä IgG2-, IgG3- tai IgG4-alaluokkavasteita ei kuitenkaan voitu havaita (kuvio 1D).

2.4. Viruksia neutraloivien vasta-aineiden ja vasta-aineiden, jotka estävät RBD-ACE2-vuorovaikutusta, induktio Gam-COVID-Vac-rokotuksella

Virusta neutraloivien vasta-aineiden havaitsemiseen käytimme pVNT-testiä, jossa viruksen kaltaiset partikkelit pseudotyypitettiin alkuperäisen Wuhan-Hu-1 -kannan S-proteiinilla ja äskettäin kuvatulla VOC Omicronilla. Vasta-aineita, joilla oli neutraloivaa aktiivisuutta Wuhan Hu{4}} -kantaa vastaan, löydettiin kaikilta paitsi yhdeltä (eli henkilöltä 22) 22 koehenkilöstä (kuva 2A, taulukko 2), kun taas Omicronin neutraloivien vasta-aineiden tiitterit olivat merkittävästi alhaisemmat (kuva 2B) ja löytyi vain 17:ltä 20:stä (kuva 2A, taulukko 2). Koehenkilöille 6, 7, 10, 11, 15 ei havaittu relevanttia neutralointia (kuvio 2A, taulukko 2). Omicronin viruksen neutralointitiitterit olivat 25 kertaa alhaisemmat kuin WT:n (mediaani 141,9 ja 5,7 Wuhan-Hu-1:lle ja Omicronille, vastaavasti) (kuva 2B).

Kuva 2. Viruksia neutraloiva aktiivisuus plasmassa 3 kuukautta Sputnik-V-rokotuksen jälkeen ja yhteys IgG-vasta-ainevasteisiin RBD:lle ja S-peräisille peptideille. (A) Viruksen neutralointi (ID50) (y-akseli) Wuhan-hu-1 -kantaa (vihreä) ja Omicronia (oranssi) vastaan ​​saatiin plasmalla naiiveista (sininen) ja toipilaan (punainen) aiheet (x-akselit). (B) Viruksen neutraloinnin vertailu (y-akseli: ID50, joka on saatu testattujen koehenkilöiden plasmasta, pylväät edustavat mediaaneja kvartiilivälillä (IQR) Wuhan Hu-1 (vihreä) ja Omicron (oranssi) Vaakaviiva edustaa tuloksia, jotka on saatu terveen, ei-infektoituneen kontrollihenkilön plasmalla (terve kontrolli, HC). Merkittävät erot kantojen välillä määritettiin Mann-Whitney-testillä: **** p < 0. {{30}}001. (C) RBD:n ja peptidien lokalisaatio korreloi viruksen neutraloinnin kanssa S-kaaviossa (S1, S2). (D) Wuhan-Hu:n viruksen neutralointitiitterien väliset korrelaatiot{{19 }} (WT) tai Omicron (y-akselit) ja IgG-tasot, jotka ovat spesifisiä RBD:lle ja piikkiperäisille peptideille 12, 32 ja 46A (x-akselit: ISU). Siniset ja punaiset symbolit osoittavat vastaavasti naiiveja ja toipuvia. Tähdet osoittavat merkittäviä korrelaatioita ei-parametrisen Spearman-testin mukaan, * p < 0,05, ** p < 0,01, *** p < 0,001 **** p < 0,0001, ns=ei merkitsevä.

Taulukko 2. S:lle, S1:lle, S2:lle ja RBD:lle spesifisten IgG-tasojen vertailu mikrosirulla mitattuna RBD:n ACE2:een sitoutumisen estojen ja viruksen neutralointitiittereiden (Wuhan-Hu-1, Omicron) kanssa, jotka on määritetty plasmalle tutkittuja aiheita. Lämpökartoitus tehtiin kullekin parametrille erikseen Excelillä. Ylintä tasoa pidettiin tummanpunaisena ja alimmana valkoisena.

Se tosiasia, että kaikilla paitsi yhdellä koehenkilöllä (eli henkilöllä 22) virusta neutraloivat vasta-aineet lisääntyivät rokotuksen jälkeen, osoittaa, että ne indusoituivat rokotuksella (taulukko 2). Kohde 21 osoitti jo korkean RBD-ACE2-vuorovaikutuksen eston MIA:ssa ja korkean viruksen neutralisoinnin lähtötasolla (taulukko 2). Erityisesti plasmanäytteillä Gam-COVID-Vac-rokotetuilta toipilaan potilailta, joilla oli kohtalainen sairaus (nro 1, 2, 17, 18, 21), virusneutralisaatiotiitterit olivat korkeammat kuin toipilaan koehenkilöillä, joilla oli lievä sairaus (nro 22) tai joilla ei ollut oireita. (#4, 5, 7, 9) (taulukot 1 ja 2). Keskeinen havainto oli kuitenkin, että RBD:n ACE2:een sitoutumisen estyminen ja viruksen neutralointi eivät aina olleet yhteydessä. Yli 25 %:n esto RBD Wuhan Hu-1:n sitoutumisessa ACE2:een tapahtui vain kuudella koehenkilöllä, jotka olivat myös osoittaneet estoa rokotuksesta johtuvassa viruksen neutralointitestissä (eli kohteet 1, 2, 3, 17, 18). ja 19) (taulukko 2). Mielenkiintoista on, että virusta neutraloivaa aktiivisuutta (50 % infektoiva annos (ID50) > 100) havaittiin kuudella koehenkilöllä, vaikka he eivät osoittaneet lainkaan tai heikosti estoivat RBD:n sitoutumista ACE2:een (taulukko 2: Koehenkilöt 6, 10, 12, 13, 16, 20) .

2.5. Viruksen neutralointi Gam-COVID-rokotteella rokotetuilla koehenkilöillä korreloi voimakkaasti IgG-vasteiden kanssa RBD:lle ja S-peräiselle peptidille 12

Kuten aiemmin mainittiin, useiden Gam-COVID-Vac-rokotettujen henkilöiden plasma (esim. kohteissa 6, 10, 12, 13, 16, 20; taulukko 2) osoitti virusta neutraloivaa aktiivisuutta, mutta se ei estänyt RBD-ACE2-vuorovaikutusta. Siksi analysoimme IgG-vasta-aineiden reaktiivisuutta S-proteiinin kattaville peptideille mikrosirupohjaisella siruanalyysillä [13] (kuva S4 ja kuva 2C) ja korreloimme peptidispesifisiä IgG-vasteita Wuhan-Hu:n virusneutralaatioon{19} } kanta ja Omicron (kuva 2D). IgG-vasteet kolmelle peptidille (eli peptideille 12, 32, 46A), kuten IgG-vasteet laskostuneelle RBD:lle, korreloivat merkittävästi Wuhan-Hu-1-kannan neutraloitumisen kanssa (kuvio 2C, D). Peptidi 12 erottui joukosta, koska Gam-COVID Vac tehosti merkittävästi vasta-ainevasteita laskostumattomalle peptidille 12 (kuva S1), mutta ei laskostumattomille peptideille 32 ja 46A naiiveilla koehenkilöillä (kuva 3A) ja korreloi myös merkittävästi Omicronin neutralisoinnin kanssa (kuva 2D). ). Toipilaan koehenkilöillä ei havaittu merkittävää tehostetta peptideillä 12, 32 tai 46A (kuvio 3A). Peptidin 12 sekvenssi on erittäin konservoitunut SARS-CoV-2 -kantojen joukossa (kuva 4) ja se sijaitsee S1:ssä lähellä RBD:n N-päätä ja merkitsee siten aluetta, joka voi olla merkityksellinen pre- S-proteiinin fuusion jälkeiseen konformaatioon (kuvio 3B).

Kuva 3. Mediaani IgG-vasta-ainetasot (y-akselit: ISU) S-peräisille peptideille (P12, P32, P46A) rokotetuilla naiiveilla ja toipilaan toipuvilla henkilöillä ajankohtina 0 ja 3 (x-akselit) (A) . Merkittävät erot ryhmien välillä Wilcoxon-testillä määritettynä on osoitettu: * p < 0.05, ns=ei merkitsevää. (F) (B) Kuva 3. Mediaanit IgG-vasta-ainetasot (y-akselit: ISU) S-peräisille peptideille (P12, P32, P46A) rokotetuilla naiiveilla ja toipilaan toipuvilla henkilöillä ajankohtina 0 ja 3 (x -akselit) (A). Merkittävät erot ryhmien välillä Wilcoxon-testillä määritettynä on osoitettu: * p < 0,05, ns=ei merkitsevää. (B) Peptidien 12, 32 ja 46A visualisointi PyMOL:lla generoidun SARS-CoV-2-piikkiproteiinitrimeerin pintaesityksessä (sivukuva, fuusiota edeltävä konformaatio). Peptidi 12 on korostettu S-trimeerimallissa punaisella, peptidi 32 sinisellä ja 46A oranssilla. Hiilihydraatit näkyvät vaaleanharmaina.

Kuva 4. SARS-CoV-2 S-proteiinin Wuhan-Hu-1 (ylhäällä) ja Omicron (alla) proteiinisekvenssin rinnastus. RBD on värjätty vaaleankeltaiseksi ja peptidit 12, 22, 25, 32, 33, 46A ja 47 on alleviivattu. Wuhanin S-proteiinisekvenssi vastaa WA1-isolaattia (GeneBank-talletusnumero: BCN86353.1), Omicronin S-proteiinisekvenssi Omicron on kladi GRA, linja B.1.1.529 BA.1 perustuu GISAID-tietokantaan ( https://www.gisaid.org/ (käytetty 15. maaliskuuta 2022)). Aminohapposubstituutiot on värikoodattu niiden hydropatia- ja varausominaisuuksien mukaan (vaaleanpunainen=hydrofobinen, vihreä=neutraali, vaaleansininen=emäksinen hydrofiilinen ja vaaleanpunainen=hapan hydrofiilinen).

3. Keskustelu

Vektoripohjainen rokote Gam-COVID-Vac, jota kutsutaan myös nimellä Sputnik-V, oli yksi ensimmäisistä SARS-CoV{5}}-rokotteista, jotka tulivat saataville kliiniseen käyttöön. Saatavilla on kuitenkin suhteellisen vähän tietoa vasta-ainevasteiden tarkkuudesta COVID-rokotteilla-19. Tässä tutkimuksessa suoritimme yksityiskohtaisen analyysin vasta-ainevasteista mikrosiruisia laskostettuja ja laskostumattomia SARS-CoV-2-proteiineja ja S-proteiinin kattavia peptidejä vastaan ​​plasmanäytteissä, jotka olivat peräisin SARS CoV-2-naiiveilta ja toipilaan olevilta potilailta sen jälkeen. täydellinen rokotuskurssi Gam COVID-Vacilla. Gam-COVID-Vac indusoi pääasiassa IgG1:tä, mutta ei muita IgG-alaluokkavasteita laskostuneisiin S-, S1-, S2- ja RBD-vastaaviin tapauksiin naiiveilla ja toipilaisilla henkilöillä, mikä osoittaa, että sitä voidaan käyttää SARS-CoV-viruksen tehostamiseen-2- spesifisiä vasta-ainevasteita myös toipilaan koehenkilöillä. Kuten muutkin geneettiset rokotteet, Gam-COVID-Vac-indusoitu vasta-ainevaste kuului pääasiassa IgG1-alaluokkaan, jolla on lyhyempi puoliintumisaika verrattuna IgG4-alaluokan vasteeseen, joka on kestävämpi. Esimerkiksi spesifiset IgG4-alaluokan vasteet liittyvät pitkäaikaiseen suojaukseen allergeenispesifisen immunoterapian aikana, kun taas spesifiset IgG1-vasteet muodostuvat nopeasti, mutta häviävät muutaman kuukauden kuluttua [28–30]. Tämän vuoksi tarvitaan toistuvia Gam-COVID-Vac- ja muiden geneettisten rokotteiden tehosterokotteita, jotta neutraloivat vasta-ainevasteet pysyvät korkealla tasolla. Gam-COVID-Vac-rokotus indusoi vasta-ainevasteen, joka jäljittelee suurelta osin SARS-CoV-tartunnan jälkeen havaittua vasta-ainevastetta-2 [13]. Lisäksi vasta-ainevasteet luonnollisen infektion jälkeen kuuluvat pääasiassa IgG1-alaluokkaan ja kohdistuvat laskostunutta S:tä, S1:tä, S2:ta ja RBD:tä vastaan ​​[13]. Tutkimuksemme uusi ja mielenkiintoinen havainto oli, että useiden Gam-COVID-Vac-rokotettujen henkilöiden plasma (esim. kohteissa 6, 10, 12, 13, 16, 20; taulukko 2) osoitti virusta neutraloivaa aktiivisuutta, mutta ei estänyt RBD-ACE2-vuorovaikutus. Siksi analysoimme IgG-vasta-aineiden reaktiivisuutta täydellisen S-proteiinin kattaviin peptideihin mikrosirupohjaisella siruanalyysillä [13] (kuvat 2D ja S4) ja korreloimme peptidispesifisiä IgG-vasteita Wuhan-Hu:n virusneutralaatioon{62} } kanta ja Omicron BA.1 (kuvio 2D). IgG-vasteet kolmelle peptidille (eli peptideille 12, 32, 46A), kuten IgG-vasteet RBD:lle, korreloivat merkittävästi Wuhan-Hu{69}}-kannan neutraloinnin kanssa (kuvio 2C, D). Peptidi 12 oli kuitenkin ainutlaatuinen, koska vasta-ainevasteet vain peptidille 12, mutta ei peptideille 32 ja 46A, vahvistuivat merkittävästi rokotuksella (kuvio 3A) ja korreloivat myös merkittävästi Omicronin neutraloinnin kanssa (kuvio 2D). Rokotteen aiheuttaman IgG-vasteiden tehostamisen suuruusluokkaa peptidille 12 oli vaatimaton, mutta merkittävä naiiveilla koehenkilöillä ja melko verrattavissa S- ja S1-vasta-aineiden tehostukseen. IgG-vasta-aineet eristettyä laskostumatonta peptidiä vastaan ​​(kuvio S1) voivat kuitenkin edustaa vain osaa peptidiä 12 vastaan ​​suunnatuista vasta-aineista laskostuneessa proteiinissa. Lisäksi vasta-aineiden tasojen lisäksi myös aviditeetti ovat tärkeitä. Peptidien 12 sekvenssi on erittäin konservoitunut Wuhan-Hu{84}}-kannan ja BA.1 Omicron VOC:n joukossa (kuvio 4) ja se on peräisin alueelta, joka voi olla merkityksellinen pre-fuusiota jälkeiseen siirtymiseen. S-proteiinin konformaatio (kuvio 3B). Lisäksi Omicronin uusien mutanttivarianttien (BA.1, BA.2, BA.4/5, BA.2.12.1, BA.2.75, BQ.1) vertailu osoittaa, että peptidi 12 (284–313 aa. ) pysyy muuttumattomana aminohapposekvenssin suhteen, toisin kuin esimerkiksi peptidi 32 (https://covariants.org/shared-mutations, (saatu 28. marraskuuta 2022)). Erityisesti on kuvattu monoklonaalisia vasta-aineita, joilla on virusta neutraloiva kyky ja jotka kohdistuvat N-terminaalisen domeenin (NTD) alueelle, jonka osa peptidi 12 on [31], ja on raportoitu, että myös muut rokotteet voivat indusoida tätä aluetta vastaan ​​suunnatun vasta-ainevasteen. [18–20,32], mikä osoittaa, että peptidin 12 määrittelemä alue voi olla tärkeä neutraloivien vasta-aineiden indusoinnissa. Tästä syystä voidaan olettaa, että Gam-COVID-Vac-rokotteen indusoimat vasta-aineet voivat neutraloida SARS-CoV-2 kahdella mekanismilla, joista toinen yksinkertaisesti inhiboi RBD-ACE2-vuorovaikutusta ja toinen kohdistamalla alueelle, joka sisältää peptidin 12 S- proteiini, joka voi olla osallisena rakennemuutoksiin (eli esifuusion siirtymiseen S:n fuusiokonformaatioon). Tutkimuksillamme on rajoituksia. Käytimme esimerkiksi pseudotyyppisiin lentiviruksiin perustuvaa neutralointimääritystä, mutta nämä määritykset ovat laajalti käytettyjä ja luotettavia [33]. Tutkimuksemme rajoituksena on myös se, että mikrosirussamme olevat peptidit olivat laskostumattomia ja ovat siten saattaneet tunnistaa vain osan neutraloivista vasta-aineista, jotka tunnistivat laskostumattomat peptidit, kun taas vielä suurempi osa vasta-aineista on saattanut sitoutua konformaatioepitoopeihin tunnistetuissa aineissa. alueella. Lisäksi tutkimuksemme rajoituksena on, että analysoimme vain pienen määrän koehenkilöitä. Tutkimuksemme osoittaa kuitenkin selvästi, että vasta-aineet, joilla on erilainen epitooppispesifisyys, voivat edistää Gam COVID-Vac -rokotteen suojaavaa vaikutusta. Lisäksi tutkimus osoittaa vasteen mahdollisesti konservoituneelle peptidille, jota voidaan käyttää laajasti neutraloivien vasta-aineiden luomiseen.

cistanche-lisän edut - kuinka vahvistaa immuunijärjestelmää

4. Materiaalit ja menetelmät

4.1. Tutkimusväestö ja etiikkalausunto

Terveet koehenkilöt, joilla oli (n {{0}}) tai ei (n=12) aiempaa SARS-CoV-2-tartuntaa, otettiin mukaan tutkimukseen joulukuussa 2020 National Research Center Institute of the National Research Centerissä. Venäjän liittovaltion lääketieteellisen biologian viraston immunologia (eettinen numero: #12-1, 29. joulukuuta 2020). Kaikki osallistujat antoivat kirjallisen suostumuksen. Aiempi SARS-CoV-2-infektio vahvistettiin joko aikaisemmalla positiivisella PCR-testillä ja COVID{10}}-oireilla tai SARS-CoV-2-spesifisten vasta-aineiden esiintymisellä nukleokapsidiantigeenille ja/tai RBD- ja/tai S-antigeeni kuvatulla tavalla [13]. Kaikki koehenkilöt immunisoitiin lihakseen kahdella annoksella Sputnik-V:tä (Gam-COVID-Vac, Biocard, Moskova, Venäjä) kolmen viikon välein. Verinäytteet otettiin päivää ennen ensimmäistä rokotusta (TO, kuvio 1A) ja 80-85 päivää ensimmäisen rokotuksen jälkeen (T3, kuvio 1A).

4.2. SARS-CoV-2-spesifisten vasta-ainevasteiden havaitseminen

Naiivien ja toipilaan COVID{{0}} koehenkilöiden immunoglobuliinivaste arvioitiin plasmanäytteistä ennen ja jälkeen immunisoinnin Sputnik-V:llä (kuva 1A). Spesifinen IgG laajalle SARS-CoV-2-proteiinien ja 46 S-proteiinin kattavalle peptidille (25–30 meeriä) mitattiin 1:50 laimennetuissa plasmanäytteissä microarray-chip-tekniikalla, kuten aiemmin. kuvattu [13]. Kaikkien mikrosirulla olevien synteettisten peptidien aminohapposekvenssit, aminohappojen lukumäärä ja molekyylipaino on esitetty taulukossa 3. Peptidien 12 ja 32 sekä Escherichia colissa (E. coli) ekspressoidun RBD:n osalta (laskostamaton) ja Human Embryonic Kidney 293 (HEK293) -soluissa (laskostettuna) tarjotaan sirkulaaridikroismi (CD) -spektrit (kuvio S1). Peptidit 12 ja 32 eivät paljastaneet mitään spesifistä sekundaarirakennetta, joka määritettiin ympyrädikroismilla (CD), kuten kuviossa S1 esitetään. Tarkemmin sanottuna lasilevyt, jotka sisälsivät mikrosiruja, joita ympäröi epoksikehys (Paul Marienfeld GmbH & Co. KG, Lauda-Königshofen, Saksa), aktivoitiin amiinireaktiivisella kompleksisella orgaanisella polymeerillä, MCP-2 (Lucidant Polymers, Sunnyvale, CA). , USA) proteiinien ja peptidien sitoutumisen helpottamiseksi. SARS-CoV-2-antigeenit/peptidit havaittiin käyttämällä pitoisuutta 0,5–1 mg/ml in (75 mM Na2HPO4, pH=8.4) kolmena rinnakkaisena SciFlexArrayer S12:lla (Scienion AG, Berliini, Saksa) [13]. Proteiinien ilmentyminen ja puhdistus sekä peptidisynteesi kuvataan julkaisussa [13]. IgG-vasta-aineiden reaktiivisuus mikrosiruisiin antigeeneihin mitattiin pesemällä ensin mikrosiruja 5 minuutin ajan fosfaattipuskuroidulla suolaliuoksella, jossa oli 0,5 % Tween 20 (PBST) ja kuivaamalla ne sentrifugoimalla käyttämällä Sigma 2–7 -sentrifugia ja MTP:tä-11113 roottori (molemmat Sigma Laborzentrifugen GmbH, Osterode am Harz, Saksa). Sitten lisättiin 35 µl:n eriä 1:50 laimennettuja plasmanäytteitä (näytteen laimennusaine, Thermofisher, Waltham, MA, USA) ja inkuboitiin 2 tuntia 22 °C:ssa. Toisen pesuvaiheen jälkeen lisättiin 30 µl sekundaarisia vasta-aineita (DyLight 550 (Pierce, Rockford, IL, USA) leimattu anti-ihmisen IgG (Jackson ImmunoResearch Laboratories, West Grove, PA, USA)) ja inkuboitiin 30 minuuttia 22 °C:ssa. C RT. Sitten sirut pestiin, kuivattiin ja skannattiin sen jälkeen käyttämällä konfokaalista laserskanneria (Tecan, Männedorf, Sveitsi). Kuva-analyysi suoritettiin MAPIX-mikroarray-kuvanhankinta- ja -analyysiohjelmistolla (Innopsys, Carbonne, Ranska) ja mitattujen fluoresenssiyksiköiden muuntaminen ISAC-standardoiduiksi yksiköiksi (ISU) suoritettiin kuvatulla tavalla [13]. Spesifiset vasta-ainetasot ilmaistaan ​​ISAC-standardoiduissa yksiköissä (ISU). S- ja RBD-spesifiset IgG1–4-vasta-ainevasteet mitattiin plasmanäytteistä (1:50 laimennettuna) kahtena rinnakkaisena ELISA-menetelmällä, kuten aiemmin on kuvattu [13] vaihtelulla<5% for their average values.

Taulukko 3. Synteettiset SARS-CoV-2-piikkiproteiinista johdetut peptidit §.

4.3. Far UV Circular Dichroism (CD) spektrit

Peptideille P12 ja P32 sekä E. coli- ja HEK293-soluissa ekspressoitu RBD CD-analyysi suoritettiin käyttämällä Jasco J-180 -spektropolarimetriä (Japan Spectroscopic Co., Tokio, Japani), joka on kuvattu aiemmin [34]. Peptidien ja proteiinien CD-spektrit (kuva S1) mitattiin pitoisuudella 0,1 mg/ml 10 mM NaH2PO4:ssa (pH 8,0), jota käytettiin antigeenien havaitsemiseen.

4.4. Pseudo-virus-pohjainen viruksen neutralointimääritys (PVT)

Viruksen neutralointiaktiivisuus plasmanäytteissä määritettiin pseudoviruspohjaisella virusneutralointimäärityksellä, kuten aiemmin on kuvattu [35]. SARS-CoV-2-piikkiviruksen kaltaisten partikkelien (VLP:iden) tuottamiseksi HEK293T-solut kotransfektoitiin kolmen plasmidin kanssa: lentiviruspakkausplasmidi pCMV∆8.2R (Addgene, Teddington, UK), pUCHR-GFP ja pCAGGS-S∆19-plasmidi, joka koodaa villityypin SARS-CoV-2-piikkiproteiinia (identtinen viite-Wuhan-Hu-1- ja WA1-isolaattien kanssa) tai pCAGGS-S∆19-Om-plasmidi koodaa SARS-CoV-2 Omicron-piikkiproteiinia (ystävällinen lahja Andrei Gortšakovilta, Immunogenetiikan laboratorio, Molekyyli- ja solubiologian instituutti, Venäjän tiedeakatemian Siperian haara, Novosibirsk, Venäjä). Ennen käyttöä pVNT:ssä VLP:t titrattiin rajoittavalla laimennuksella ja inkuboitiin 4 päivää hACE{26}}transfektoitujen HEK293T-solujen kanssa. Testissä käytettäväksi valittiin annos viruspartikkeleita, jotka antoivat 50% vihreää fluoresoivaa proteiinia (GFP) positiivisia soluja. pVNT:lle kaikki plasmanäytteet lämpöinaktivoitiin 30 minuutin ajan 56 ◦C:ssa ennen käyttöä. Neljäntenä päivänä infektion jälkeiset solut suspendoitiin uudelleen ja GFP-positiivisten solujen prosenttiosuus mitattiin virtaussytometrialla. ID50-arvot laskettiin käyttämällä sigmoidikäyrää (GraphPad Prism 9.2.0 ohjelmisto, Sigmoidal, 4PL), joka rekonstruoitiin neutralisaatioprosentilla eri osoitetuilla plasmakonsentraatioilla.

4.5. Molecular Interaction Assay (MIA)

COVID{{0}} toipuvien tai naiiveja koehenkilöiden plasmanäytteiden kyvyn havaita (taulukko 1) ennen ja jälkeen Sputnik-V-immunisoinnin estää 50 ng/ml:n sitoutumista RBD-hu-1 ACE2-reseptorille suoritettiin molekyylivuorovaikutusmääritys (MIA) kuvatulla tavalla [13,36–39]. Tällä määrityksellä voidaan mitata leimatun RBD:n estoa ELISA-levyyn sitoutuneelle ACE2:lle vasta-aineilla tai muulla yhdisteellä oleva RBD-ACE2-vuorovaikutuksen esto [38]. Lyhyesti sanottuna rekombinantti ACE-2 (GenScript, Piscataway, NJ, USA) päällystettiin (2 µg/ml) yön yli 96-kuoppaisille NUNC Maxisorb -levyille (Thermofisher). Sen jälkeen suoritettiin kolme pesusykliä pesupuskurilla ja sitten levyt blokattiin 3 tunnin ajan huoneenlämpötilassa estopuskurilla. Seeruminäytteet laimennettiin 1:2 PBS:ään, 0,05 % Tween 20:een, 1 % BSA:han ja esi-inkuboitiin 2 tuntia 50 ng His-merkityn rekombinantti-RBD:n (GenScript) kanssa. Sitten esi-inkuboidut seeruminäytteet lisättiin ACE:tä-2 sisältäville levyille 3 tunnin ajaksi, ja levyt pestiin ja inkuboitiin yön yli 1:1000 laimennetun hiiren monoklonaalisen anti-His tag -vasta-aineen kanssa (Dianova, Hampuri, Saksa) . Kolmen pesuvaiheen jälkeen lisättiin 1:1000 laimennettua HRP-kytkettyä anti-hiiri-IgG1-vasta-ainetta (GE Healthcare, Chicago, IL, USA) 2 tunnin ajaksi ja havaitseminen suoritettiin ABTS:llä. Keskimääräiset optisen tiheyden (OD) arvot, jotka vastaavat sitoutunutta RBD:tä, mitattiin aallonpituudella 405 nm ja 492 nm (vertailu) TECAN Infinite F5 ELISA -lukijalla, jossa oli integroitu ohjelmisto i-control 2.0 (Tecan Group Ltd., Männedorf, Sveitsi). Puskurin kontrolli (peittokuva ilman RBD:tä) vähennettiin kustakin tuloksesta. Määritykset suoritettiin kaksoiskappaleina ja tulokset esitetään keskiarvoina vaihtelulla<5%.

cistanche-lisän edut - kuinka vahvistaa immuunijärjestelmää

4.6. Peptidien visualisointi piikkiproteiinirakenteessa

SARS-CoV-2-piikkiproteiinin pintaesitys luotiin PyMOLissa (PyMOL Molecular Graphics System, versio 2.5.0a0, Schrödinger, LLC, New York, NY, USA). ATE:n kohdassa 6XR8.

4.7. Tilastollinen analyysi

Tilastollinen analyysi suoritettiin käyttämällä GraphPad Prism -versiota (versio 9.2.0 GraphPad Software, La Jolla California). Wilcoxon-testiä (kuvat 1C, D ja 3A), Mann-Whitneyn testiä (kuvat 2B ja S3) ja Friedmanin testiä (kuva S2) käytettiin vertailuun kahden tai useamman ryhmän välillä. p < 0.05 katsottiin tilastollisesti merkitseväksi. Kahden ryhmän välinen korrelaatio määritettiin Spearman-arvotestillä (kuvio 2D). Normalisoitu epälineaarinen regressio suoritettiin GraphPad Prism -ohjelmistolla (Sigmoidal 4PL). Tiedot esitetään mediaaneina ± IQR. Tähdet osoittavat merkittäviä eroja ryhmien välillä, * p < 0.05, ** p < 0,01, *** p < 0,001, **** p < 0,0001, ns - ei merkitsevä.

5. Johtopäätökset

Yhteenvetona voidaan todeta, että tutkimuksemme on ensimmäinen, joka tutkii perusteellisesti Gam-COVID-Vacin indusoimien vasta-aineiden epitooppi- ja IgG-alaluokkaspesifisyyttä ja paljastaa erilaisia ​​mekanismeja Gam-COVID-Vac-indusoidun viruksen neutraloinnissa vasta-aineilla. Erityisesti saimme todisteita siitä, että vasta-aineet, jotka on suunnattu peptidille (eli peptidille 12), jotka sijaitsevat lähellä RBD:tä mutta sen ulkopuolella S1:n N-terminaalisessa osassa, liittyvät viruksen neutralointiin. Peptidispesifisten 12-vasta-aineiden mahdollinen virusta neutraloiva aktiivisuus saattaa johtua niiden kyvystä häiritä piikkiproteiinin fuusiota edeltävän konformaation siirtymistä sen jälkeiseen konformaatioon. Suosittelemme harkitsemaan peptidin 12 määrittelemän alueen sisällyttämistä immunogeeniseen muotoon rokotteisiin vasta-aineiden indusoimiseksi tätä epitooppialuetta vastaan ​​ja tällaisten rokotteiden indusoimien vasta-aineiden testaamiseksi viruksen neutraloimiseksi. Siinä tapauksessa, että rokotteiden virusneutralointia voidaan tehostaa, immunogeenisen peptidin 12 epitoopin sisällyttäminen voi parantaa COVID-19-rokotteiden tehoa. Lisäksi voidaan harkita vasta-aineiden kehittämistä peptidin 12-määriteltyä epitooppia vastaan ​​passiivista immunisaatiota varten. Koska peptidin 12-määritelty epitooppi on konservoitunut tällä hetkellä tunnetuissa SARS-CoV-2-varianteissa, peptidille suunnatut rokotteet ja vasta-aineet antavat ristisuojan SARS-CoV-2-variantteja vastaan. Tarjoamme näin uutta tietoa, josta voi olla apua uusien aktiivisten ja passiivisten COVID-rokotusstrategioiden kehittämisessä-19.

Viitteet

1. Rodriguez-Coira, J.; Sokolowska, M. SARS-CoV-2-ehdokasrokotteet – Koostumus, vaikutusmekanismit ja kliinisen kehityksen vaiheet. Allergia 2021, 76, 1922–1924. [CrossRef] [PubMed]

2. Sharma, A.; Ahmad, FI; Lal, SK COVID-19: Katsaus uuden koronavirustaudin evoluutioon, leviämiseen, havaitsemiseen, valvontaan ja ehkäisyyn. Virukset 2021, 13, 202. [CrossRef] [PubMed]

3. Arshad, B.; Iqbal, T.; Bhatti, KP Review-Insights off-label-hoitostrategioihin lievää ja vakavaa COVID-19-infektiota vastaan. Pak. J. Pharm. Sci. 2021, 34, 1469–1484. [CrossRef] [PubMed]

4. Zaman, W.; Saqib, S.; Ullah, F. COVID-19: Fylogeneettiset lähestymistavat voivat auttaa löytämään resursseja luonnolliseen hoitoon. Phytother. Res. 2020, 34, 2783–2785. [CrossRef]

5. Rubio-Casillas, A.; Redwan, EM; Uversky, VN SARS-CoV-2 Ajoittainen virulenssi luonnollisen valinnan seurauksena. COVID 2022, 2, 1089–1101. [CrossRef]

6. Logunov, DY; Dolzhikova, IV; Zubkova, OV rAd26- ja rAd5-vektoripohjaisen heterologisen prime-boost COVID{5}} -rokotteen turvallisuus ja immunogeenisyys kahdessa formulaatiossa: Kaksi avointa, ei-satunnaistettua vaiheen 1/2 tutkimusta Venäjältä. Lancet 2020, 396, 887–897, korjaus Lancetissa 2021, 397, 98. [CrossRef]

7. Folegatti, PM; Ewer, KJ; Aley, PK ChAdOx1 nCoV-19 -rokotteen turvallisuus ja immunogeenisyys SARS-CoV-2:a vastaan: Alustava raportti vaiheen 1/2, yksisokkoutetusta, satunnaistetusta kontrolloidusta tutkimuksesta. Lancet 2020, 396, 467–478, korjaus Lancetissa 2020, 396, 1884. [CrossRef]

8. Logunov, DY; Dolzhikova, IV; Shchebljakov, DV. rAd26- ja rAd5-vektoripohjaisen heterologisen prime-boost-COVID{5}}-rokotteen turvallisuus ja tehokkuus: Välianalyysi satunnaistetusta kontrolloidusta vaiheen 3 tutkimuksesta Venäjällä. Lancet 2021, 397, 671–681, korjaus Lancetissa 2021, 397, 670. [CrossRef]

9. Jackson, CB; Farzan, M.; Chen, B.; Choe, H. SARS-CoV-2 soluihin pääsyn mekanismit. Nat. Rev. Mol. Cell Biol. 2022, 23, 3–20. [CrossRef]

10. Heinz, FX; Stiasny, K. Nykyisten COVID{1}}-rokotteiden erityispiirteet: antigeenin esittelystä ja vaikutustavoista tunnetut ja tuntemattomat. NPJ Vaccines 2021, 6, 104. [CrossRef]

11. Lim, HX; Masomian, M.; Khalid, K.; Kumar, AU; MacAry, PA; Poh, CL B-soluepitooppien tunnistaminen SARS-CoV-2 -piikkiproteiinin neutraloivien vasta-aineiden aikaansaamiseksi bioinformatiikan ja monoklonaalisten vasta-aineiden kohdistamisen avulla. Int. J. Mol. Sci. 2022, 23, 4341. [CrossRef]

12. Moroy, G.; Tuffery, P. Peptideihin perustuvat strategiat SARS-CoV:a vastaan-2 Attack: An Silico päivitetty näkökulma. Edessä. Lääke. Discov. 2022, 2, 899477. [CrossRef]

13. Gattinger, P.; Niespodziana, K.; Stiasny, K. SARS-CoV-2:n neutralointi vaatii vasta-aineita konformaatioreseptoria sitovia domeeniepitooppeja vastaan. Allergia 2022, 77, 230–242. [CrossRef]

14. Niu, L.; Wittrock, KN; Clabaugh, GC Rakenteellinen maisema neutraloivista vasta-aineista SARS-CoV-2-reseptorisitoutumisaluetta vastaan. Edessä. Immunol. 2021, 12, 647934. [CrossRef]

15. Shan, S.; Mok, CK; Zhang, S. Tehokas ja suojaava ihmisen neutraloiva vasta-aine SARS-CoV-2-muunnelmia vastaan. Edessä. Immunol. 2021, 12, 766821. [CrossRef]

16. Bajpai, P.; Singh, V.; Chandele, A. SARS-CoV-vasta-aineiden laajamittaista neutralointia-2 Tarjoaa uusia näkemyksiä muunnelmien ja muiden ihmisen koronavirusten neutraloinnista. Edessä. Cell. Tartuttaa. Microbiol. 2022, 12, 928279. [CrossRef]

17. Vishwakarma, P.; Yadav, N.; Rizvi, ZA Vakava akuutti hengitystieoireyhtymä Koronavirus 2 -piikkiproteiiniin perustuvat uudet epitoopit indusoivat voimakkaita immuunivasteita in vivo ja estävät viruksen replikaatiota in vitro. Edessä. Immunol. 2021, 12, 613045. [CrossRef]

18. Garrett, ME; Galloway, JG; Wolf, C. SARS-CoV-2-vasta-ainevasteiden kattava karakterisointi Spike-proteiini löytää muita rokotteen aiheuttamia epitooppeja lievän infektion epitooppien lisäksi. eLife 2022, 11, e73490. [CrossRef]

19. Peng, M.; Dou, X.; Zhang, X. Immunosignatuureilla paljastetut suojaavat antigeeniset epitoopit kolmen inaktivoidun SARS-CoV-2-rokotteen annoksen jälkeen. Edessä. Immunol. 2022, 13, 938378. [CrossRef]

20. Polvere, I.; Parrella, A.; Zerillo, L. Humoraalinen immuunivasteen monimuotoisuus eri COVID{1}}-rokotteisiin: vaikutukset "Green Pass" -käytäntöön. Edessä. Immunol. 2022, 13, 833085. [CrossRef]

21. Tukhvatulin, AI; Dolzhikova, IV; Shchebljakov, DV Avoin, ei-satunnaistettu, vaiheen 1/2 tutkimus kerta-annosrokotteen "Sputnik Light" turvallisuudesta, siedettävyydestä ja immunogeenisuudesta koronavirusinfektion ehkäisyyn terveillä aikuisilla. Lancet Reg. Terveys Eur. 2021, 11, 100241. [CrossRef] [PubMed]

22. Gonzalez, S.; Olszevicki, S.; Salazar, M. Gam-COVID-Vacin (Sputnik V) ensimmäisen komponentin tehokkuus SARS-CoV-2-varmistettujen infektioiden, sairaalahoitojen ja kuolleisuuden vähentämisessä 60–79-vuotiailla potilailla: retrospektiivinen kohorttitutkimus Argentiinassa. EClinicalMedicine 2021, 40, 101126. [CrossRef] [PubMed]

23. Gushchin, VA; Dolzhikova, IV; Shchetinin, AM neutraloiva aktiivisuus Sputnik V-rokotettujen ihmisten seerumeita vastaan ​​huolestuttavan muunnelmia vastaan ​​(VOC: B.1.1.7, B.1.351, P.1, B.1.617.2, B.1.617.3) ja Moskovan endeeminen SARS -CoV-2 Vaihtoehdot. Rokotteet 2021, 9, 779. [CrossRef] [PubMed]

24. Voko, Z.; Kiss, Z.; Surjan, G. Viiden SARS-CoV-2-rokotteen valtakunnallinen tehokkuus Unkarissa – HUN-VE-tutkimus. Clin. Microbiol. Tartuttaa. 2022, 28, 398–404. [CrossRef] [PubMed]

25. Jeewandara, C.; Fernando, S.; Pushpakumara, PD Immuunivasteet Sputnik V:n (Gam-COVID-Vac) ensimmäisen annoksen jälkeen. Sci. Rep. 2022, 12, 1727. [CrossRef]

26. Ikegame, S.; Siddiquey, MNA; Hung, CT Sputnik V -rokoteseerumien neutraloiva aktiivisuus SARS-CoV-2-variantteja vastaan. Nat. Commun. 2021, 12, 4598. [CrossRef]

27. Gushchin, VA; Tsyganova, EV; Ogarkova, DA Sputnik V suojaa COVID-virukselta-19 ihmisillä, joilla on HIV-tartunta ja jotka saavat antiretroviraalista hoitoa. EClinicalMedicine 2022, 46, 101360. [CrossRef]

28. Shamji, MH; Valenta, R.; Jardetzky, T. Allergeenispesifisen IgE:n, IgG:n ja IgA:n rooli allergisissa sairauksissa. Allergia 2021, 76, 3627–3641. [CrossRef]

29. Eckl-Dorna, J.; Weber, M.; Stanek, V. Kahden vuoden hoito rekombinanttisella ruohon siitepölyallergiarokotteella BM32 indusoi jatkuvasti lisääntyvän allergeenispesifisen IgG4-vasteen. EBioMedicine 2019, 50, 421–432. [CrossRef]

30. Shamji, MH; Kappen, JH; Akdis, M. Biomarkkerit allergeeni-immunoterapian kliinisen tehokkuuden seurantaan allergisen rinokonjunktiviitin ja allergisen astman hoidossa: EAACI Position Paper. Allergia 2017, 72, 1156–1173. [CrossRef]

31. Tortorici, MA; Beltramello, M.; Lempp, FA Ultrapotentit ihmisen vasta-aineet suojaavat SARS-CoV-2-altistukselta useiden mekanismien kautta. Tiede 2020, 370, 950–957. [CrossRef]

32. Cia, G.; Pucci, F.; Rooman, M. Avoimiin tai suljettuihin SARS-CoV-2 Spike Protein Conformaatioihin kohdistuvien vasta-aineiden neutraloivan toiminnan analyysi. Int. J. Mol. Sci. 2022, 23, 2078. [CrossRef]

33. Meng, B.; Datir, R.; Choi, J. SARS-CoV-2-piikin N-terminaalinen domeeni moduloi TMPRSS2-riippuvaista viruksen sisäänpääsyä ja fusogeenisyyttä. Cell Rep. 2022, 40, 111220. [CrossRef]

34. Resch, Y.; Weghofer, M.; Seiberler, S. Der p 10:n molekulaarinen karakterisointi: Diagnostinen merkkiaine laajaan herkistymiseen talon pölypunkkiallergiassa. Clin. Exp. Allergy 2011, 41, 1468–1477. [CrossRef]

35. Byazrova, M.; Yusubalieva, G.; Spiridonova, A. Malli verenkierrossa SARS-CoV-2-spesifisen vasta-aineen erittämisestä ja muistin B-solujen muodostumisesta potilailla, joilla on akuutti COVID{5}}. Clin. Käännös Immunol. 2021, 10, e1245. [CrossRef]

36. Gattinger, P.; Borochova, K.; Dorofeeva, Y. Vasta-aineet toipilaan potilaiden seerumissa lievän COVID-19 jälkeen eivät aina estä sitoutumista virusreseptoriin. Allergia 2021, 76, 878–883. [CrossRef]

37. Gattinger, P.; Tulaeva, I.; Borochova, K. Omicron: SARS-CoV-2-variantti, joka on todellinen huolenaihe. Allergia 2022, 77, 1616–1620. [CrossRef]

38. Gattinger, P.; Ohradanova-Repic, A.; Valenta, R. SARS-CoV-2 neutraloivia vasta-aineita mittaavien määritysten tärkeys, sovellukset ja ominaisuudet. Int. J. Mol. Sci. 2023, 24, 5352. [CrossRef]

39. Gattinger, P.; Kratzer, B.; Tulaeva, I.; Niespodziana, K.; Ohradanova-Repic, A.; Gebetsberger, L.; Borochova, K.; Garner-Spitzer, E.; Trapin, D.; Hofer, G.; et ai. Rokote, joka perustuu laskostettuun reseptoria sitovaan domeeniin-PreS-fuusioproteiiniin, joka voi aiheuttaa steriloivan immuniteetin SARS-CoV-2-variantteja vastaan. Allergia 2022, 77, 2431–2445. [CrossRef]