Fenyylietanoliglykosidien ero taulukossa Cistanches Herbassa 2 isännässä Fenyylietanoliglykosidien ero taulukossa Cistanches Herbassa 2 isännässä perustuen UPLC-QQQ-MS- ja PLS-DA-analyysiin UPLC-QQQ-MS- ja PLS-analyysissä-

Cistanche deserticolaon Orobanchaceae-heimoon kuuluva monivuotinen holoparasiittikasvi. Se on kuivattu, mehevä varsi, joka on peitetty suomumaisilla lehdilläCistanche deserticola YC Ma[1-2]. Tätä kasvia esiintyy pääasiassa Sisä-Mongoliassa, Xinjiangissa ja Gansussa, missä se loistaaHaloxylon ammodendron (CA Mey.) Bunge, Chenopodiaceaen kserofyyttinen aavikkokasvi [3-4]. Pääasialliset aktiiviset komponentitCistanche deserticolasisältävät fenyylietanoidiglykosidit, iridoidit ja polysakkaridit [5-7], joilla on ominaisuuksia, kuten lisääntymistoimintojen suojaaminen, hapettumisenesto ja maksan suojaus [8-10]. Yli 2 000 vuoden käytöllä Kiinassa se on ensimmäisellä sijalla perinteisen kiinalaisen lääketieteen resepteissä, joiden tarkoituksena on vahvistaa elinvoimaa, ja toiseksi ikääntymistä estävissä formulaatioissa [11]. Kuitenkin, koska liikakorjuu ja ympäristön tuhoutuminen, luonnonvaratCistanche deserticolaovat sukupuuton partaalla, mikä johtaa sen luokitteluun kansallisesti suojelluksi kasveiksi (luokka II) ja sisällyttämiseenKansainvälinen luettelo luonnonvaraisten kasvien suojelusta[12]. Lääkemarkkinoiden kysynnän ja tarjonnan epätasapainon korjaamiseksi keinotekoisesta viljelystä on tullut välttämätöntä lääkemarkkinoiden kestävän kehityksen kannalta.Cistanche deserticolateollisuus.

 

 

 

Cistanche deserticola -uute myytävänä

Ota yhteyttä nyt

 

 

 

Viimeaikaiset tutkimukset ovat raportoineet onnistuneen rokotuksenCistanche deserticolapäälläAtriplex canescens[13], Chenopodiaceae-heimon ikivihreä pensas. Yleisesti kutsutaan "biologiseksi suolanpoistajaksi",Atriplex canescenson korkealaatuinen puulaji suola-alkalimaan parantamiseen [14]. ViljelyCistanche deserticolapäälläAtriplex canescenstarjoaa merkittäviä etuja, kuten korkean tuoton ja erinomaisen laadun. Tämän seurauksena laadun arvioiminenAtriplex canescens-Cistanche deserticolaon tullut tutkimuksen hotspot [15-16]. Aikaisempi tutkimus on keskittynyt pääasiassa kuivattujen lääkeominaisuuksiinCistanche deserticola, kun taas aktiivisten komponenttien tutkimukset sen tuoreessa muodossa ovat niukkoja. Etenkin sen jälkeen, kunCistanche deserticolaElintarvike- ja lääkeaineena kokeiden hallintajärjestelmässä (Notice No. 9 of the National Health Commission, 2023), sen kehittäminen ja käyttö kaksikäyttöisenä lääkeyrttinä ovat saaneet merkittävää huomiota perinteisen kiinalaisen lääketieteen alalla [17]. TuoreCistanche deserticolaon suosittu sen erinomaisen maun ja käyttömukavuuden vuoksi, mikä tekee siitä erittäin lupaavan kehityksen kannalta. Tuoreilla lääkeaineilla tarkoitetaan käsittelemättömiä tuoreita kasvi-, eläin- tai sieniaineita, joilla on terapeuttisia tai terveyttä edistäviä ominaisuuksia. 2000 yleisesti käytetystä kiinalaisesta lääkeyrtistä 486 on tuoreita lajikkeita [18].

Ultra-suorituskykyinen nestekromatografia-triple kvadrupoli tandem-massaspektrometria (UPLC-QQQ-MS) -menetelmä on erittäin herkkä, joten se soveltuu pienipitoisuuksien ja monimutkaisten komponenttien havaitsemiseen [19]. Korkean vesipitoisuuden ongelman ratkaisemiseksiCistanche deserticola, jossa fenyylietanoidiglykosidit ovat alttiita entsymaattiselle hydrolyysille, mikä johtaa alentuneeseen pitoisuuteen, entsyymi-inaktivointikuivausmenetelmä säilyttää tehokkaasti fenyylietanoidiglykosidipitoisuuden [20]. Tässä tutkimuksessa käytetään UPLC-QQQ-MS:ää arvioimaan 8 fenyylietanoidiglykosidia, mukaan lukien ekinakosidi ja akteosidi, tärkeimpinä aktiivisina komponentteina tuoreissa aineissa.Cistanche deserticolakahdesta isäntäkasvista [21-22]. Tutkimuksessa tarkastellaan eroja tuoreen mehun ja jäännösainepitoisuuksien välilläCistanche deserticolakasvanut kahdella isännällä. Lisäksi jäännökselle tehtiin entsyymi-inaktivointikäsittely 80 asteessa 5 minuutin ajan, minkä jälkeen se kuivattiin, jotta voidaan edelleen verrata aktiivisten komponenttien retentiotaCistanche deserticola. Havainnot pyrkivät tarjoamaan tieteellistä näyttöä ja teknistä tukea tuoreen kaksikäyttöarvolleCistanche deserticolaja sen käsittelytekniikoiden optimointi.

1 Välineet ja materiaalit

1.1 Instrumentit

1290-6460 ultra-performance nestekromatografia-kolmin kvadrupoli tandem-massaspektrometri (Agilent Technologies, USA).

AL104 elektroninen analyyttinen vaaka (Mettler-Toledo, Sveitsi).

H-2050R sentrifugi (Changsha Xiangyi Centrifuge Instrument Co., Ltd.).

Ultraäänipuhdistin SB25-12DTD (Ningbo Xinzhi Biological Technology Co., Ltd.).

1.2 Materiaalit

TheAtriplex canescens-Cistanche deserticolajaHaloxylon ammodendron-Cistanche deserticolaNäytteet kerättiin maalis-, huhti- ja toukokuussa 2024Cistanche deserticolaviljelytukikohta Xiquan Townissa, Jingtain piirikunnassa, Gansun maakunnassa. Professori Sun Xuegang Gansun maatalousyliopistosta tunnisti näytteet lihaisiksi varreksi.Cistanche deserticola YC Masuomulehtien kanssa.

Viitestandardit:

Ekinakosidi (eränumero: 23031605; puhtaus: 99,74 %).

Akteosidi (eränumero: 21102103; puhtaus: 98,83 %).

Cistanosidi A (eränumero: 23041703; puhtaus: 98,30 %).

Isoakteosidi (eränumero: 23052508; puhtaus: 99,90 %).

2'-asetyylilakteosidi (eränumero: 210053102; puhtaus: 97,12 %).

Salidrosidi (eränumero: 22051208; puhtaus: 98,43 %).

Cistanosidi B (eränumero: 20120903; puhtaus: 98,57 %).

Tubulosidi A (eränumero: 21060302; puhtaus: 93,24 %).

Kaikki ostettiin Chengdu Pfeide Biotechnology Co., Ltd:ltä.

Reagenssit:

Metanoli (eränumero: O1140576, kromatografisesti puhdas).

Asetonitriili (eränumero: S3641440, kromatografisesti puhdas). Molemmat ostettiin Shanghai Anpu Experimental Technology Co., Ltd:ltä.

Muurahaishappo (eränumero: 20230710, kromatografisesti puhdas) ostettiin Tianjin Kermio Chemical Reagent Co., Ltd:ltä.

Puhdistettu vesi (Hangzhou Wahaha Group Co., Ltd.).

2 Menetelmät ja tulokset

2.1 Menetelmät

2.1.1 Näytteen valmistelu

Kolme erääAtriplex canescens-Cistanche deserticola(eränumerot: 20240330-1, 20240420-1, 20240510-1) ja kolme erääHaloxylon ammodendron-Cistanche deserticola(eränumerot: 20240330-2, 20240420-2, 20240510-2), kerättiin yhteensä kuusi erää, viisi kasvia erää kohden. Kasvit pestiin puhtaaksi vedellä.

Käsittely:

Näytteet murskattiin ja mehutettiin, jolloin tuloksena oli mehua ja jäämiä kahdesta isännästä peräisin olevastaCistanche deserticola.

Jäännökset kuivattiin kahdessa olosuhteissa:

Ilman entsyymien inaktivointia.

Entsyymi-inaktivoinnilla (5 minuuttia 80 asteessa uunissa).

Kuivatut jäännökset säilytettiin lisäanalyysiä varten. Jokainen lääkeaineerä jaettiin neljään ryhmään taulukon 1 mukaisesti.

 

Välilehti. 1 Esimerkki ryhmittelytiedoista

ryhmä	Tyyppi	Atriplex canescens-Cistanche deserticola	Haloxylon ammodendron-Cistanche deserticola
①	Jäännös	C1	S1
②	Mehu	C2	S2
③	Entsyymi-inaktivoitu jäännös (5 min kuivaus, murskattu)	C3	S3
④	Entsyymeillä inaktivoitumaton jäännös (kuivattu ja murskattu)	C4	S4

 

2.1.2 Kromatografiset olosuhteet

Sarake: Agilent Zorbax Eclipse Plus C18 -kolonni (2,1 mm × 150 mm, 1,8 μm).

Virtausnopeus: 0,3 ml/min.

Ruiskutustilavuus: 1 μL.

Kolonnin lämpötila: 35 astetta.

Liikkuva vaihe: 0,1 % muurahaishappo vedessä (A) ja asetonitriilissä (B).

Analyysiaika: 12 minuuttia.

Eluointigradientti:

0–1,5 min: 10 % → 20 % B.

1,5–3 min: 20 % → 30 % B.

3–5 min: 30 % → 32 % B.

5–8 min: 32 % → 38 % B.

8–9,6 min: 38 % → 10 % B.

9,6–12 min: 10 % B.

Sekavertailustandardien ja testinäytteiden kromatogrammit on esitetty kuvassa 1.(Varmista, onko liikkuva faasi 0,01 % muurahaishappoa vedessä (A) ja asetonitriilissä (B).)

Kuva. 1 Vertailuaineiden (A) ja näytteen (B) kromatogrammit 1-salidrosidi; 2-ekinakosidi; 3-sistanosidiA; 4-tubulosidiA; 5-akteosidi; 6-isoakteosidi; 7-2'-asetyylilakteosidi; 8-tubulosidi B.

 

 

2.1.3 Massaspektrometriaolosuhteet

Ionilähteen tyyppi: Sähkösumutusionisaatio (ESI).

tila: Monien reaktioiden valvonta (MRM) negatiivisessa ionitilassa.

Ionilähteen lämpötila: 350 astetta.

Nebulisaattorin paine: 35 psi.

Törmäyskaasu: Typpi, asetettu keskitasolle.

Analysoitavien komponenttien massaspektrometriset parametrit on esitetty taulukossa 2.

---

2.1.4 Standardisekoituksen valmistaminen

Punnitse asianmukaiset määrät viitestandardeja tarkastiekinakosidi, akteosidi, cistanosidi A, isoakteosidi, 2'-asetyylilakteosidi, salidrosidi, cistanosidi B, jatubulosidi Aja aseta ne 10 ml:n ruskeisiin reagenssipulloihin. Lisää 50 % metanolia sekoitettu standardiliuos, jonka konsentraatio on 0,2 mg·mL⁻¹, valmistamiseksi ja säilytä se myöhempää käyttöä varten.

---

2.1.5 Testiliuosten valmistelu

Punnitse tarkasti 0,2 g tuorettaAtriplex canescens-Cistanche deserticolajäännös (C1), tuoreHaloxylon ammodendron-Cistanche deserticolajäännös (S1), kuivattiinAtriplex canescens-Cistanche deserticolajäännökset (C3, C4) ja kuivattiinHaloxylon ammodendron-Cistanche deserticolajäännökset (S3, S4). Aseta näytteet 10 ml:n kullanruskeisiin mittapulloihin, lisää 50 % metanolia, lisää tilavuuteen ja kirjaa massa. Liota 0,5 tuntia, ultraääni 40 minuuttia (250 W, 35 kHz), jäähdytä huoneenlämpötilaan ja kirjaa massa uudelleen. Käytä 50 % metanolia kompensoimaan painonpudotusta, sekoita hyvin, sentrifugoi ja anna liuoksen laskeutua. Suodata supernatantti 0,22 μm:n mikrohuokoisen kalvon läpi saadaksesi suodoksen.

TuoreelleAtriplex canescens-Cistanche deserticolamehu (C2) ja tuoreHaloxylon ammodendron-Cistanche deserticolamehu (S2), ota 10 ml kutakin, punnita tarkasti, sekoita hyvin, sentrifugoi ja anna liuoksen laskeutua. Suodata supernatantti 0,22 μm:n mikrohuokoisen kalvon läpi saadaksesi suodoksen.

---

2.1.6 Lineaarisuustutkimus

Sopivat määrät kohdassa 2.1.4 valmistettua sekoitettua standardiliuosta laimennettiin pitoisuusgradientin luomiseksi51,2, 128,0, 320,0, 800,0, 4 000,0 ja 20 000,0 ug·L⁻¹. Näytteet injektoitiin peräkkäin pienistä suuriin pitoisuuksiin kohdissa 2.1.2 ja 2.1.3 kuvattujen olosuhteiden mukaisesti. Lineaarinen regressio suoritettiin käyttämällä injektiopitoisuutta X-akselina ja piikin pinta-alaa Y-akselina. Kahdeksan komponentin lineaariset suhteet on esitetty taulukossa 3.

 

Tab. 3 Lineaarinen suhdetutkimustulokset 8 komponentista taulukossa Cistanches Herba

 

Komponentti	Regressioyhtälö	r	Lineaarinen alue (ug·L⁻¹)
Ekinakosidi	Y = 16.410 × X − 0.804	0.9996	51.2–20,000.0
Acteoside	Y = 102.794 × X − 55.793	0.9998	51.2–20,000.0
Isoakteosidi	Y = 31.007 × X − 45.169	0.9999	51.2–20,000.0
2'-asetyylilakteosidi	Y = 110.235 × X − 8.953	0.9992	51.2–20,000.0
Salidrosidi	Y = 19.678 × X − 0.557	0.9993	51.2–20,000.0
Tubulosidi A	Y = 26.785 × X − 13.630	0.9997	51.2–20,000.0
Tubulosidi B	Y = 71.810 × X − 0.993	0.9998	51.2–20,000.0
Cistanoside A	Y = 0.578 × X + 1.531	0.9994	51.2–20,000.0

 

2.1.7 Tarkkuustesti

Sekastandardiliuos, joka oli valmistettu kohdan 2.1.4 olosuhteissa, laimennettiin 50-prosenttisella metanolilla ja injektoitiin kuusi kertaa peräkkäin kohtien 2.1.2 ja 2.1.3 olosuhteissa. Huippualueiden suhteelliset standardipoikkeamat (RSD:t).ekinakosidi, akteosidi, isoakteosidi, 2'-asetyylilakteosidi, salidrosidi, cistanosidi B, tubulosidi A, jacistanosidi Aolivat 0,95 %, 1,47 %, 0,56 %, 1,05 %, 0,93 %, 1,08 %, 1,19 % ja 0,91 %, mikä osoittaa hyvää tarkkuutta.

 

2.1.8 Vakavuustesti

Yksi näyteCistanche deserticola(S4) valmistettiin kohdassa 2.1.5 kuvatuissa olosuhteissa. Testiliuos injektoitiin ja analysoitiin 0, 2, 4, 8, 12 ja 24 tunnin kohdalla kohdissa 2.1.2 ja 2.1.3 kuvatuissa olosuhteissa. Huippualueiden RSD:tekinakosidi, akteosidi, isoakteosidi, 2'-asetyylilakteosidi, salidrosidi, cistanosidi B, tubulosidi A, jacistanosidi Aolivat 1,46 %, 0,79 %, 0,95 %, 1,29 %, 1,22 %, 0,56 %, 0,49 % ja 1,18 %, mikä osoittaa, että näyteliuos oli stabiili 24 tunnin sisällä.

 

2.1.9 Toistettavuustesti

Yksi eräCistanche deserticola(S4) näyte (eränumero: 20240420-2) valmistettiin kuudessa rinnakkaisessa testiliuoksessa kohdassa 2.1.5 kuvatuissa olosuhteissa. Näytteet injektoitiin ja analysoitiin kohdissa 2.1.2 ja 2.1.3 kuvatuissa olosuhteissa. Sisällön RSD:tekinakosidi, akteosidi, isoakteosidi, 2'-asetyylilakteosidi, salidrosidi, cistanosidi B, tubulosidi A, jacistanosidi Aolivat 1,26 %, 0,98 %, 1,55 %, 1,06 %, 1,33 %, 0,99 %, 1,65 % ja 0,95 %, mikä osoittaa hyvää toistettavuutta.

 

2.1.10 Palautustesti

Yhdeksän näytettä samasta erästäCistanche deserticola(S4, eränumero: 20240420-2) valmistettiin 0,1 g:lla näytettä kohti. Näytteet jaettiin kolmeen ryhmään, kolme toistoa ryhmää kohden. Jokaiseen ryhmään lisättiin 80 %, 100 % ja 120 % vertailustandardipitoisuudesta.Cistanche deserticolanäyte. Testiliuokset valmistettiin 2.1.5 kohdassa kuvatulla menetelmällä ja analysoitiin kohdissa 2.1.2 ja 2.1.3 esitetyissä olosuhteissa. Kahdeksan fenyylietanoidiglykosidin saannot laskettiin, ja tulokset on esitetty taulukossa 4.

 

Tab. 4 Cistanches Herbassa 8 testatun komponentin palautusasteet

 

Komponentti	Esimerkkisisältö (mg)	piikki (mg)	Mitattu (mg)	Keskimääräinen palautus (%)	RSD (%)
Ekinakosidi	0.513 8	0.410 1	0.911 2	99.85	1.37
Ekinakosidi	0.513 8	0.513 8	1.015 2	99.88	0.95
Ekinakosidi	0.513 8	0.616 5	1.129 4	99.85	1.06
Acteoside	0.421 5	0.337 2	0.759 6	99.90	1.02
Acteoside	0.421 5	0.421 5	0.843 5	99.87	1.18
Acteoside	0.421 5	0.505 8	0.926 7	99.84	1.24
Isoakteosidi	0.327 1	0.261 7	0.588 6	99.85	0.86
Isoakteosidi	0.327 1	0.327 1	0.654 2	99.86	1.05
Isoakteosidi	0.327 1	0.392 5	0.719 1	99.84	1.13
2'-asetyylilakteosidi	0.110 2	0.088 2	0.198 3	99.87	1.15
2'-asetyylilakteosidi	0.110 2	0.110 2	0.220 1	99.86	1.09
2'-asetyylilakteosidi	0.110 2	0.132 2	0.242 4	99.85	1.21
Salidrosidi	0.081 6	0.065 3	0.146 7	99.84	1.18
Salidrosidi	0.081 6	0.081 6	0.163 1	99.85	1.02
Salidrosidi	0.081 6	0.097 9	0.179 7	99.84	1.17
Tubulosidi B	0.072 3	0.057 9	0.130 0	99.86	1.09
Tubulosidi B	0.072 3	0.072 3	0.144 1	99.86	1.05
Tubulosidi B	0.072 3	0.086 8	0.159 2	99.84	1.24
Tubulosidi A	0.043 8	0.035 0	0.078 5	99.86	1.16
Tubulosidi A	0.043 8	0.043 8	0.087 5	99.86	1.02
Tubulosidi A	0.043 8	0.052 5	0.096 2	99.84	1.15