Humoraalisen ja solujen immuunivasteen havaitseminen anti-SARS-CoV-2 BNT162b2 -rokotteelle imettäviltä naisilta ja naiiveilta ja aiemmin tartunnan saaneilta henkilöiltä

Tässä tutkimuksessa tutkittiin humoraalisia ja soluvasteita anti-SARS-CoV-2 BNT162b2 mRNA-rokotteelle imettävillä naisilla sekä naiiveilla ja seropositiivisilla henkilöillä ensimmäisten kuuden kuukauden aikana rokotuksen jälkeen. Kuusikymmentäyksi vapaaehtoista, jotka oli rokotettu kahdella BNT162b2-mRNA-rokoteannoksella, otettiin mukaan tutkimukseen. Itse kehitettyä ELISA-testiä käytettiin SARS-CoV-2 RBD-spesifisten vasta-aineiden kvantifiointiin. Solun pintamarkkerin ilmentyminen ja solunsisäinen IFN-analyysi suoritettiin virtaussytometrialla. IFN-, IL-6- ja TNF-pitoisuudet määritettiin ELISA:lla. Merkittävä nousu anti-RBD IgG -vasta-ainetasoissa havaittiin 14 päivää ensimmäisen rokoteannoksen jälkeen (p< 0.0001) in serum and milk. The expression of CD28 on CD4+ T cells was significantly higher compared to baseline (p< 0.05). There was a significant increase (p≤ 0.05) in the B cell lymphocyte subset after revaccination and an increased percentage of CD80+ B cells. The expression of IFN-γ in peripheral blood lymphocytes, CD3+ T cells, and serum was significantly increased (p< 0.05). No significant difference in immune response was observed between breastfeeding women and other study participants. The anti-SARS CoV-2 BNT162b2 mRNA vaccine induced measurable and durable immune response in breastfeeding women and naïve and previously infected individuals. 

cistanche-edut miehille - vahvistavat immuunijärjestelmää

Napsauta tästä nähdäksesi Cistanche Enhance Immunity -tuotteet

【Kysy lisää】 Sähköposti:cindy.xue@wecistanche.com / Whats App: 0086 18599088692 / Wechat: 18599088692

1. Esittely 

Maailmanlaajuinen SARS-CoV-2-viruksen leviäminen ensimmäisen erikoistapauksen rekisteröinnin jälkeen 31.12.2019 Wuhanissa Kiinassa johti maailmanlaajuiseen koronaviruspandemiaan-19 (COVID{{ 5}}), noin 648 miljoonaa tapausta ja 6,6 miljoonaa kuolemantapausta 18.12.2022 asti IL-1, niin kutsuttu "sytokiinimyrsky", joka voi johtaa akuuttiin hengitysvaikeusoireyhtymään ja laajaan kudosvaurioon, joka johtaa usean elimen vajaatoimintaan2. Nopeiden parannusten diagnostiikassa, hoidossa ja rokotusten käyttöönoton odotettiin kuitenkin myötävaikuttavan tartunnan saaneiden henkilöiden määrän tasaiseen vähenemiseen, sairaalahoidon tarpeeseen ja viime kädessä kuolleisuuden vähenemiseen. Serbiassa ensimmäinen virallisesti rekisteröity tapaus todettiin 6. maaliskuuta 2020, ja rokotukset aloitettiin 24. joulukuuta 2020. Tällä hetkellä väestölle on saatavilla neljä rokotetta: Vero Cell-Inaktivoitu (Sinopharm), Vaxzevria (ChAdOx{{) 22}}S [rekombinantti], AstraZeneca), Sputnik V (Gam-COVID-Vac, Gamaleya) ja Comirnaty (BNT162b2, BioNTech–Pfizer). Spesifisten vasta-aineiden tuotannon lisäksi tehokas immuunivaste SARS-CoV-2:a vastaan ​​vaatii soluimmuniteetin aktivoitumisen. Soluimmuniteetin komponenttien, mukaan lukien auttaja-CD4+ ja sytotoksiset CD8+ T-solut, luonnolliset tappajasolut (NK) ja B-solut, ensimmäisten tuntien ja päivien aikana tälle virukselle altistumisen jälkeen vähentää sairauden oireita, ehkäistä taudin etenemistä, sairaalahoitoa ja kuolemaa. Aktivoidut T-auttajasolut (T) voivat epäsuorasti tappaa infektoituneita soluja ja tukea B-solujen toimintaa ja vasta-ainevastetta tuottamalla interferoni- (IFN-)3,4:ää. On osoitettu, että T1-fenotyyppi liittyy COVID-19-taudin5 vähäisempään vaikeusasteeseen, joten COVID-19-rokotteiden kehittämisstrategioissa tulisi ottaa huomioon myös mahdollisuus aktivoida T-soluja IFN:n tuotantoa varten. Soluimmuniteetin SARS-CoV-2:lle on raportoitu olevan havaittavissa jopa 6 kuukautta tartunnan jälkeen yli 90 %:lla henkilöistä6. Siten odotettiin, että rokottaminen synnyttäisi mitattavissa olevan soluimmuniteetin, joka edistäisi taistelua pandemiaa vastaan. Uudet tulokset ovat osoittaneet, että sen lisäksi, että anti-SARS-CoV{50}}-mRNA-rokotteet aktivoivat B-soluja itukeskuksissa7, niiden pitäisi tuottaa piikkiproteiinispesifisiä CD{52}}- ja CD8+-T-soluvasteita8. Vaikka vasta-ainetiitteri yleensä korreloi rokotteen tehon kanssa, B- ja T-solut ovat tärkeitä suojassa, kun ne altistetaan uudelleen virusantigeeneille. Näitä muisti-B- ja T-soluja odotetaan tuottavan SARS-CoV{57}}-mRNA-rokotteiden avulla, ja niillä pitäisi olla rooli viruksen replikaation hallinnassa ja viruksen leviämisen rajoittamisessa9. Vaikka vakavia haittatapahtumia ei ole raportoitu, spesifinen vaste SARS-CoV{61}}-rokotteelle raskaana olevilla ja imettävillä naisilla sekä imeväisillä, joiden äidit ovat saaneet rokotteen imetyksen aikana, ovat edelleen arvioitavina, ja se on edelleen kiistanalainen aihe10,11. Tämän tutkimuksen tarkoituksena oli ensimmäistä kertaa selvittää kuukausittaiset humoraaliset ja soluvasteet anti-SARS-CoV-2 BNT162b2 mRNA-rokotteelle imettävillä naisilla sekä naiiveilla ja seropositiivisilla henkilöillä ensimmäisten kuuden kuukauden aikana Serbiassa rokotuksen jälkeen. kahden vuoden itseraportoitu pitkän aikavälin turvallisuuden seuranta.

materiaali ja metodit

Tutkimuksen suunnittelu ja näytteenotto ja käsittely.

Yhteensä 61 vapaaehtoista (45 SARS-CoV-2 naiivia, 16 SARS-CoV-2 toipunut PCR-vahvistettujen raporttien mukaan) otettiin mukaan tutkimukseen ja niitä seurattiin tammikuun ja marraskuun 2. päivän välisenä aikana. {11}}21. Keskimääräinen aika luonnollisen tartunnan ja rokotuksen välillä oli aiemmin tartunnan saaneilla henkilöillä 3,18 ± 0,98 kuukautta ja vaihteluväli 2–5 kuukautta. Kaikki osallistujat olivat yli 18-vuotiaita, eikä heillä ollut merkkejä hengitystieinfektioista rokotushetkellä. Suurin osa osallistujista oli terveydenhuollon työntekijöitä Serbian onkologian ja radiologian instituutista (44; 72 %). Osallistujat rokotettiin kahdella annoksella BNT162b2-mRNA-rokotetta (3 viikon välein). Kaikki verinäytteet suoritettiin hyväksytyissä lääketieteellisissä keskuksissa tiukkojen protokollien ja tarkkailun mukaisesti. Neljä osallistujaa oli imettäviä äitejä, jotka tarjosivat vapaaehtoisesti veri- ja maitonäytteitä. Näytteet kerättiin 6-ajankohtina: piste 1 – esirokotus (perustaso), piste 2–14 päivää perusrokotuksen jälkeen, piste 3–1 kuukausi perusrokotuksen jälkeen, piste 4–2 kuukautta perusrokotuksen jälkeen, kohta 5–3 kuukautta perusrokotuksen jälkeen ja kohta 6–6 kuukautta perusrokotuksen jälkeen. Kutakin ajankohtaa kohden otettiin 10–20 ml perifeeristä verta sekä 1 ml maitoa neljältä osallistuvalta imettävältä naiselta. Seerumi saatiin perifeerisestä verestä sentrifugoimalla välittömästi verenoton jälkeen ja säilytettiin -20 asteessa. Perifeerisen veren mononukleaarisolut (PBMC) eristettiin heparinisoidusta verestä käyttämällä Lymphoprep (Nypacon, Oslo, Norja) tiheysgradienttia, sentrifugoitiin 500 g:ssä 40 minuuttia ja pestiin kolme kertaa RPMI 1640 -viljelyväliaineessa (CM) (Sigma, St. Louis). , MO) täydennettynä 10 % fetaalivasikan seerumilla (FCS) (Sigma, St. Louis, MO). Pesun jälkeen PBMC:tä käytettiin välittömästi immunofenotyyppianalyysiin. Tutkimuksen hyväksyi Serbian Onkologian ja Radiologian Instituutin eettinen komitea (nro 899–01 01.04.2021 alkaen), ja kaikki osallistujat allekirjoittivat tietoisen suostumuksen. Kokenut hoitohenkilökunta haastatteli kaikkia osallistujia. Rokotuksen jälkeisten haittavaikutusten pitkäaikainen itseraportoitu seuranta suoritettiin kahden vuoden ajan ensimmäisen rokoteannoksen jälkeen.

cistanche tubulosa - parantaa immuunijärjestelmää

SARS-CoV-2 RBD-spesifisten vasta-aineiden havaitseminen ja kvantifiointi.

SARS-CoV-2-piikkiproteiinin (NCBI: YP_009724390, AA319-541) RBD:n ilmentyminen suoritettiin HEK-293 T-solulinjassa aiemmin julkaistun menettelyn mukaisesti12 . Rekombinanttiproteiini puhdistettiin homogeeniseksi ja saatu saanto oli 5{{20}}0 mg per litra soluviljelmää. Lyhyesti sanottuna yhdistelmä-RBD-proteiinia käytettiin rasvapohjaisten 96-kuoppalevyjen päällystämiseen (Thermo Scientific NUNC-MaxiSorp, USA) lopullisessa pitoisuudessa 10 ug/ml (50 µl/kuoppa) päällystyspuskurissa (15 mM) Na2C03/35 mM NaHC03, pH 9,5) 4 asteessa yön yli. Levyt pestiin TBS:llä, joka sisälsi 0,05 % Tween 20:tä (TBST), ja blokattiin 1 % BSA:lla TBST:ssä 2 tunnin ajan 37 °C:ssa. Laimennettuja seerumeita inkuboitiin 37 asteessa 1 tunti TBST:ssä, joka sisälsi 0,1 % BSA:ta, ja sitten levyt pestiin TBST:llä. Kokonaisspesifistä IgG-määritystä varten vuohen anti-ihmis-IgG-AP-konjugoitu vasta-aine (Novus Biologicals, USA) laimennettiin 1/1000 estoliuokseen ja lisättiin kuoppiin. 1 tunnin inkuboinnin jälkeen 37 asteessa levyt pestiin 5 kertaa TBST:llä ja kehitettiin 4-nitrofenyylifosfaatilla 1 tunnin ajan 37 asteessa. Absorbanssi mitattiin 450 nm:ssä (A450).

Virtaussytometrinen analyysi.

Perifeerisen veren mononukleaaristen solujen (PBMC) solupinnan immunofenotyyppi tunnistettiin käyttämällä seuraavia suoraan leimattujen monoklonaalisten vasta-aineiden (mAb:t) yhdistelmiä: CD3FITC/CD28PE/CD4PerCP, CD80PE/CD19PerCP, CD80PE/CD14PerCP (Becton Dickinson, USA, San Jose). Näytteet valmistettiin aiemmin kuvatulla tavalla13 käyttämällä 1 × 105 juuri eristettyä PBMC:tä 100 µl:ssa RPMI 1640:tä, jota oli täydennetty 10 % vasikan sikiön seerumilla (FCS, Sigma), inkuboitiin 30 minuuttia 4 asteessa 20 µl:lla sopivaa mAb-yhdistelmää, pestiin kahdesti jääkylmä fosfaattipuskuroitu suolaliuos (PBS) ja kiinnitetty 1 % paraformaldehydillä ennen FACS-analyysejä. Pintamarkkerin ilmentyminen kvantifioitiin FACSCalibur-virtaussytometrillä (Becton-Dickinson, San Jose, USA). Yhteensä 10,000–50,000 portitettua tapahtumaa, jotka on vahvistettu ääreisveren lymfosyyteiksi (PBL) ja monosyyteiksi niiden fyysisten ominaisuuksien, eteenpäinsirontaominaisuuksien (FSC) ja sivusirontaominaisuuksien (SSC) mukaan. ), kerättiin näytettä kohti ja analysoitiin CellQUEST-ohjelmistolla. Solujen alajoukot ilmaistiin prosentteina ääreisverestä.

Solunsisäinen IFN-analyysi.

IFN 1× solunsisäistä värjäystä varten 106 PBMC:tä inkuboitiin Phorbol-12-myristaatti13--asetaatin (PMA) (50 ng/ml) plus ionomysiinin (500 ng/ml) kanssa 4 tunnin ajan 37 asteessa ja Brefeldin A:lla (10 ug/ml) viimeisen 3 tunnin ajan, kuten aiemmin on kuvattu14. Solut värjättiin ensin pinta-antigeenin suhteen CD3 PerCP-vasta-aineella, kiinnitettiin ja permeabilisoinnin jälkeen BD FACS:n permeabilisoivalla liuoksella 2 (BD Biosciences) värjättiin anti-IFN-PE:lle (Becton Dickinson). Solunsisäinen IFN ilmaistaan ​​prosenttiosuutena PBL:issä sekä CD3 T-lymfosyyteissä.

ELISA.

IFN-, IL-6- ja TNF-pitoisuudet tutkittujen osallistujien seerumeissa määritettiin kaupallisilla päällystämättömillä ELISA-sarjoilla valmistajan ohjeiden (Invitrogen) mukaisesti. Sytokiinien pitoisuudet määritettiin kohdissa 1 (ennen rokotusta), kohdassa 3 (1 kuukausi perusimmunisaation jälkeen) ja kohdassa 4 (2 kuukautta perusimmunisaation jälkeen). Lyhyesti, ELISA-levyt päällystettiin sopivilla sieppausvasta-aineilla päällystyspuskurissa ja inkuboitiin yön yli 4 °C:ssa. Ensin levyt pestiin ja blokattiin ELISA/ELISAASPOT Diluentilla. 1 tunnin inkubaation jälkeen levyt pestiin ja seeruminäytteet ja standardit lisättiin kuoppiin. Inkuboinnin, pesun ja aspiraation jälkeen, valmistajan ohjeiden mukaisesti, detektiovasta-aineliuos lisättiin kuhunkin kuoppaan. Tämän jälkeen levyt pestiin ja imettiin; avidiini-HRP-liuos lisättiin kuoppiin ja inkuboitiin 30 minuuttia. Seuraavaksi levyt pestiin ja (3,3',5,5'-tetrametyylibentsidiini) TMB-liuosta lisättiin kuhunkin kuoppaan. Levyjä inkuboitiin 15 minuuttia huoneenlämpötilassa ja entsymaattinen reaktio lopetettiin lisäämällä pysäytysliuosta. Absorbanssi mitattiin aallonpituudella 450/520 nm käyttämällä Multiskan EX Termo Labsystems -levynlukijaa15. Tilastollinen analyysi. Tulokset /on esitetty yksittäisinä arvoina keskiarvon standardivirheellä (SEM). Arvojen välisiä eroja verrattiin käyttämällä paritonta t-testiä ja Wilcoxonin etumerkkitestiä ja tuloksia pidettiin tilastollisesti merkitsevinä, jos p<0.05. The analysis was performed using GraphPad Prism 9.0 (GraphPad, La Jolla, CA, USA).

cistanche tubulosa - parantaa immuunijärjestelmää

Tulokset

3.1 Tutkimukseen osallistujat ja seerumin/maidon käsittely.

Tutkimukseen osallistuneiden ominaisuudet on esitetty taulukossa 1. 61 vapaaehtoisesta, jotka saivat anti-SARS-CoV-2 BNT162b2 mRNA-rokotteen, kerättiin yhteensä 344 seeruminäytettä 6 ajankohtana alkaen rokotusta edeltävästä lähtötasosta. 6 kuukautta ensimmäisen rokotuspisteen jälkeen. Suurin osa tutkimukseen osallistuneista (97 %) ilmoitti paikallisista rokotuksesta aiheutuneista haittavaikutuksista, jotka olivat lieviä käsi-/hartiakipuja ja väsymystä, jotka kestivät 1–2 päivää. Vain kolme osallistujaa sai toisen rokoteannoksen viiveellä, kaksi johtui perusrokotuksen haittavaikutuksista (ihottuma, allergia) ja yksi, koska ensimmäisen annoksen jälkeen havaittiin raskaus. Mitään infektiota ei raportoitu kahden rokoteannoksen välillä. Kuuden kuukauden seurannan jälkeen vain 3 (5 %) osallistujista sai SARS-CoV-tartunnan-2, eikä mitään vakavaa sairaalahoitoa vaativaa sairausmuotoa havaittu. Seitsemän osallistujaa tuli raskaaksi rokotuksen jälkeen, yksi 2 viikkoa ensimmäisen annoksen jälkeen, yksi 4 kuukautta ensimmäisen annoksen jälkeen ja 5 yli 12 kuukautta ensimmäisen annoksen jälkeen. Pitkäaikainen itseraportoitu seuranta ei paljastanut rokotuksiin liittyviä haittavaikutuksia kahteen vuoteen ensimmäisen annoksen jälkeen imettävillä naisilla tai muilla tutkimukseen osallistuneilla.

SARS-CoV-2 RBD-spesifisten vasta-aineiden kvantifiointi tutkimukseen osallistuneiden seerumissa ja maidossa.

Analysoitaessa seerumin rokotuksen jälkeisten anti-RBD IgG-vasta-aineiden tasoja, anti-RBD IgG -tasoissa havaittiin merkittävä nousu jopa 14 päivää ensimmäisen rokoteannoksen jälkeen koko analysoidussa ryhmässä verrattuna IgG-tasoihin ennen rokotusta (17,47±51,49 AU). /ml vs. 7828,28±24,157,29 AU/ml, p<0.0001) (Fig. 1a). Te serum levels of anti-RBD IgG continued to rise to 2 months post-vaccination, when a decrease was detected, which lasted up to 6 months, steadily. The levels of anti-RBD IgG antibodies were compared at each time point between naïve and previously infected individuals (Fig. 1b-c), and it was determined that the difference was statistically significant at baseline (point 1), as previously infected individuals had a higher level of antibodies before vaccination (7.23±0.77 AU/mL vs. 54.47±101.40 AU/mL, p<0.01). The difference was statistically significant also in points 2 (3979.48±3277.27 AU/mL vs. 22,581.99±49,570.63 AU/mL, p<0.05), 5 (2369.16±1934.31 AU/ mL vs. 6366.83±6875.85 AU/mL, p<0.01), and 6 (461.96±375.41 AU/mL vs. 766.04±317.35 AU/mL, p<0.05). The decline in antibody levels had the same dynamics in both groups but remained at higher levels in previously infected individuals for up to 6 months. No other analyzed parameters were correlated with a significantly different level of antibodies in serum (age, gender, smoking status). When comparing levels of anti-RBD IgG antibodies in other participants and breastfeeding women (Fig. 1d-e), no significant differences in serum antibody levels were observed in any of the comparisons. Anti-RBD IgG antibodies were also detected in the milk of 4 breastfeeding women (Fig. 1f). In lower levels, they presented with the same dynamics of rising and decline as detected in the serum. Comparing the levels of anti-RBD IgG antibodies in milk at each time point to baseline, (Fig. 1f), it was determined that the difference was statistically significant at points 2 (6.57±0.77 AU/mL vs. 152.13±35.83 AU/ mL, p<0.01) and 6 (6.57±0.77 AU/mL vs. 117.31±25.64 AU/mL, p<0.01).

Taulukko 1. Tutkimukseen osallistuneiden ominaisuudet.

Kuva 1. Seerumin anti-RBD IgG-vasta-ainetasot (a) koko analysoidussa ryhmässä, (b naiivit, c) aiemmin tartunnan saaneet yksilöt, (d) koko ryhmä ilman imettäviä naisia, (e) imettävät naiset ja (f) imettävien naisten maitoa. Tulokset esitetään yksittäisinä arvoina kolmen riippumattoman toiston keskiarvon standardivirheellä (SEM). Arvojen välisiä eroja verrattiin käyttämällä paritonta t-testiä ja tuloksia pidettiin tilastollisesti merkitsevänä, jos p<0.05. * p<0.05; **p<0.01; *** p<0.0001.

Virtaussytometriset ja solunsisäiset IFN-analyysit.

Fow sytometrisella analyysillä saadut tiedot osoittivat, että CD28:n ilmentyminen CD4+ T-soluissa perifeerisessä veressä 2 kuukautta toisen rokoteannoksen jälkeen oli merkittävästi korkeampi verrattuna arvoihin ennen rokotusta (42,84±5,37 % vs. 37,75). ±5,96 %, s<0.05, Wilcoxon signed-rank test) (Fig. 2a). Tere was a signifcant increase (p≤0.05, Wilcoxon signed rank test) in the prevalence of B cell lymphocyte subset (CD19+) from 6.87±1.17% to 8.73±1.54%, two months afer revaccination, as well as an increased percentage of CD80+ B cells from 1.72±0.28% to 1.99±0.28% (Fig. 2b). Furthermore, fve weeks afer revaccination, a signifcant (p≤0.05, Wilcoxon signed rank test) increase in the percentage of CD14+CD80+ cells from 1.15±0.38% to 5.87±0.95% was detected in the monocyte gate (Fig. 2c). Te expression of IFN-γ in PBLs, as well as in CD3+ T cells was signifcantly (p < 0.05, Wilcoxon signed rank test) increased at 1 week afer the second vaccine dose (1.84 ± 0.13% in PBL and 1.32 ± 0.10% in CD3+ T cells) compared to pre-vaccination baseline values (0.88 ± 0.13% in PBL and 0.72 ± 0.12% in CD3+ T cells) (Fig. 3a). Furthermore, serum levels of IFN-γ were signifcantly increased in all participants from the initial value of 16.69±0.29 pg/mL to 17.72±0.41 pg/mL (p<0.05, Wilcoxon signed rank test) (Fig. 3b), as well as in naive from 16.55±1.77 pg/mL to 17.26±2.53 pg/mL and in a group and previously infected individuals, from 15.93±2.01 pg/mL to 19.90±4.32 pg/mL at 1 week afer revaccination (Fig. 3c). Tere was no signifcant (p>0.05, Wilcoxon signed rank test) ero seerumin IL-6 ja TNF- 1 tasoissa viikolla ja viisi viikkoa toisen rokoteannoksen jälkeen verrattuna rokotusta edeltäviin arvoihin ryhmässä sekä naiiveilla tai aiemmin tartunnan saaneilla yksilöillä (lisäkuvat 1a–d).

Keskustelu

SARS-CoV-2 hengitystieinfektioepidemialla oli syvä kielteinen vaikutus jokapäiväisen elämän moniin osa-alueisiin, mukaan lukien yhteiskunnallisiin, koulutuksellisiin ja terveyteen liittyviin ongelmiin, jotka eivät suoraan liity itse COVID-19-tautiin16–18 . Maailmanlaajuinen rokotuslähestymistapa oli tarpeen taudin torjuntaan tähtäävien etäisyyksien täydentämiseksi, ja monissa tutkimuksissa tutkittiin eri rokotetyyppien tehokkuutta ja vaikuttavuutta maailmanlaajuisesti vuonna 2021. Serbiassa on tällä hetkellä saatavilla vain väliraportteja humoraalisesta immuniteetista 2 ja 3 kuukautta rokotuksen jälkeen19. ,20 ja ovat tässä tutkimuksessa raportoitujen tietojen mukaisia. Analysoidussa kohortissamme, joka oli enintään 6 kuukautta rokotuksen jälkeen, 100 % serokonversioprosentti havaittiin ensimmäisen rokoteannoksen jälkeen. Vain 5 % osallistujista joutui saamaan toisen rokoteannoksen viiveellä. Kahden rokoteannoksen välillä ei raportoitu SARS-CoV{15}}-infektiota. Kuuteen seurantakuukauteen asti vain 5 % osallistujista sai tartunnan ilman sairaalahoitoa. Anti-RBD SARS-CoV-2 IgG-vasta-aineiden tiitterit olivat merkittävästi korkeammat lähtötasoon verrattuna jopa ensimmäisen rokoteannoksen jälkeen, mikä myötävaikuttaa siihen käsitykseen, että BNT162b2-mRNA-rokotteen käyttö on tehokas tapa saada aikaan nopeita humoraalisia vasteita alkuperäistä rokotetta vastaan. viruskannat. Seerumin IgG-tasojen nousu jatkui 2 kuukautta rokotuksen jälkeen, kun havaittiin tasaista laskua analysoituun 6 kuukauden ajanjaksoon asti. Aiemmin tartunnan saaneilla yksilöillä havaittiin olevan korkeammat IgG-tiitterit verrattuna naiiveihin 6 kuukauden ikään asti, mikä oli ainoa tekijä, joka vaikutti erilaisiin vasta-ainetasoihin. Anti-RBD IgG-vasta-aineita havaittiin myös imettävien naisten maidosta meidän ja joissakin aiemmissa tutkimuksissa21, ja tiitteridynamiikka oli sama kuin seerumissa. Samanlaisia ​​raportteja on julkaistu IgA-vasta-aineista luonnollisen infektion jälkeen22. Koska imettävien naisten rokotuksen riskeistä ja hyödyistä on tällä hetkellä saatavilla vain vähän tietoa, nämä tulokset ovat lupaavia ottaen huomioon rintamaidolla ruokittujen imeväisten mahdollinen passiivinen immunisaatio jopa 6 kuukauden kuluttua äitien rokottamisesta. Seerumin vasta-ainetasoissa ei havaittu merkittäviä eroja naimattomien tai aiemmin tartunnan saaneiden henkilöiden ja imettävien naisten välillä, mikä vahvistaa havaintoja, joiden mukaan imetys ei vaikuta vasteeseen anti-SARS-CoV{33}}-rokotteisiin. Nykyisten suositusten mukaan rokotusta tulee harkita kaikille vähintään 6 kuukauden ikäisille henkilöille, mukaan lukien raskaana olevat tai raskaaksi tulemista yrittävät tai tulevaisuudessa imettävät henkilöt, riippumatta heidän aiemmasta COVID{35}}-infektiosta23. Tutkimuksemme lisää todisteiden taakkaa24, joka viittaa siihen, että anti-SARS-CoV{40}}-rokotteen saaneille imettäville naisille tai heidän imetettäville vauvoilleen ei ollut välitöntä haittaa. Lisäksi seitsemän tutkimuksen osallistujaa tuli raskaaksi rokotuksen jälkeen, yksi 2 viikkoa ensimmäisen annoksen jälkeen, yksi 4 kuukautta ensimmäisen annoksen jälkeen ja 5 yli 12 kuukautta ensimmäisen annoksen jälkeen. Äskettäin tehdyt tutkimukseen osallistuneiden pitkäaikaiset seurantahaastattelut vahvistivat, ettei myöskään odottamattomia haittoja ollut imettäville naisille tai heidän imetettäville vauvoilleen tai kenellekään muulle osallistujalle kahden vuoden kuluttua anti-SARS-CoV{49}} -rokotteen saamisesta.

Kuva 2. (a) CD3+CD28+ ja CD4+CD28+ T-lymfosyyttien prosenttiosuus, (b) CD19+ ja CD{{6 }}CD80+ B-lymfosyytit, (c) CD14+CD80+-monosyytit ääreisveressä. Tulokset esitetään yksittäisinä arvoina, joissa on keskiarvo±keskiarvon standardivirhe (SEM). Arvojen välisiä eroja verrattiin Wilcoxonin signed-rank-testillä ja tuloksia pidettiin tilastollisesti merkitsevänä, jos p<0.05. * p<0.05.

Uusien huolenaiheiden varianttien ilmaantuminen sekä raportit SARS CoV{1}} -vasta-ainetasojen nopeasta laskusta luonnollisen infektion ja rokotuksen jälkeen25 ovat lisänneet epävarmuutta soluimmuniteetin komponenttien roolista. Muutamat tutkimukset, joissa tutkitaan rokotettujen henkilöiden immunologista vastetta Serbiassa, ovat raportoineet vain humoraalista immuniteettia19,20. Tässä tutkimuksessa havaittiin kostimulatoristen CD28-reseptorien lisääntynyt ekspressio CD4+ T-soluissa ja CD80 B-soluissa 2 kuukautta toisen rokoteannoksen antamisen jälkeen. Lisäksi CD80:n ilmentyminen monosyyteissä lisääntyi 1-kuukausi täydellisen rokotuksen jälkeen.

T-solujen lisääntyminen ja erilaistuminen efektori- tai muistisoluiksi vaativat antigeenin esittelyä, yhteisstimulaatiota ja sytokiinejä. T-solujen parhaiten suojatut apustimulaattorit ovat molekyyliparit B7-1 (CD80) ja B7-2 (CD86). Ne ilmentyvät tyypillisesti antigeeniä esittelevissä soluissa (APC), kuten dendriittisoluissa, B-soluissa, makrofageissa, monosyyteissä ja T-soluissa. Niiden ilmentyminen monosyyteissä on myös tärkeää lymfosyyttien ja adaptiivisen immuniteetin aktivoimiseksi26. Kaksi pääreseptoria, jotka ovat läsnä T-lymfosyyttien pinnalla, jotka sitovat CD80:tä ja CD:tä86, ovat CD28 ja sytotoksinen T-lymfosyyttiin liittyvä proteiini 4 (CTLA-4). CD28:aan sitoutuminen aktivoi lymfosyyttejä ja siten tehostaa immuunivastetta27. Tässä tutkimuksessa saadut tulokset osoittavat, että CD4+ T-solut aktivoituvat S-antigeenistä peräisin olevien epitooppien vaikutuksesta, joita esiintyy aktivoiduissa B-soluissa ja monosyyteissä 2 kuukautta toisen rokoteannoksen jälkeen. Erilaiset tiedot viittasivat siihen, että CD4-T-solut aktivoituivat pääasiassa mRNA-rokotteen jälkeen28,29, kun taas joissakin tutkimuksissa sekä CD4- että CD8-T-solujen on raportoitu olevan yhtä paljon esillä ja aktivoituneita30. Tan et ai. havaitsi äskettäin, että 3 kuukautta rokotuksen jälkeen Spike-spesifisten T-solujen keskimääräinen määrä oli sama kuin mitä on havaittu toipilaisilla potilailla samana ajankohtana SARS-CoV{30}}-infektion jälkeen31. Lisäksi adaptiivisen immuniteetin komponentit (sekä aiemmin infektoiduissa että rokotetuissa) näyttävät olevan riippumattomasti säädeltyjä6, 32, 33 ja antiviraalisen vasta-aineen tuotannon ja T-solutiheyden välillä ei ole korrelaatiota. Lisäksi nykyiset mRNA-rokotteet saavat aikaan immuunivasteita, jotka rajoittuvat Spike-proteiiniin. Kuitenkin myös muille rakenteellisille ja ei-rakenteellisille proteiineille spesifisten T-solujen mahdollinen suojaava rooli on arvioitava34. Ajatus siitä, että polyantigeeniset rokotteet voisivat hallita paremmin virusvariantteja kuin monoantigeeniset, kuten Spike-proteiinipohjaiset rokotteet, voi olla perusteltua35,36.

Kuva 3. (a) IFN-:n ilmentyminen kaikissa perifeerisen veren lymfosyyteissä ja CD3+ T:ssä. Seerumin IFN-taso (b) koko analysoidussa ryhmässä, (c) naiiveissa ja aiemmin infektoituneissa yksilöissä. Tulokset esitetään yksittäisinä arvoina keskiarvon standardivirheellä (SEM). Arvojen välisiä eroja verrattiin Wilcoxonin signed-rank-testillä ja tuloksia pidettiin tilastollisesti merkitsevänä, jos p<0.05. * p<0.05.

Tässä tutkimuksessa havaittiin kohonneita IFN-tasoja kaikissa lymfosyyteissä ja CD3+ T-soluissa 7 päivää täydellisen rokotuksen jälkeen. Lisäksi havaittiin kohonnut IFN-taso kaikkien rokotettujen henkilöiden seerumissa, sekä SARS-CoV-2-aiheisilla että aiemmin infektoituneilla henkilöillä 7 päivää täyden rokotuksen jälkeen. Siten mRNA-pohjaiset rokotteen indusoimat Spike-spesifiset T-solut, jotka tuottavat runsaasti IFN-. IFN- on keskeinen sytokiini, jolla on antiviraalisia ominaisuuksia, ja sen on osoitettu estävän SARS-CoV:n-28 replikaatiota. Tässä tutkimuksessa osoitettu BNT162b2-rokotteen nopea IFN-:n saaminen osoittaa suotuisan T-soluimmuunivasteen SARS-CoV-2-virusta vastaan. SARS-CoV-2:n laukaisema immunologinen reaktio sisältää myös lukuisten tulehdusta edistävien sytokiinien, ensisijaisesti IL-6 ja TNF-tuotannon, ja muutokset niiden tasoissa voivat liittyä sairauden ennusteeseen. Vakavia ja kuolemaan johtaneita COVID-tapauksia{23}} raportoitiin henkilöillä, joilla oli kohonnut sytokiinitaso37. Tässä tutkimuksessa ei kuitenkaan havaittu merkittävää eroa seerumin IL-6- ja TNF-tasoissa 7 päivää ja enintään 1 kuukausi täydellisen rokotuksen jälkeen, mikä saattaa johtua kohortin erityisominaisuuksista ja näytteenoton ajoituksesta.

Nämä tiedot edustavat ensimmäisiä julkaistuja raportteja kestävästä immuniteetista ottaen huomioon sekä humoraalinen että solukomponentti, joka keskittyy imettäviin naisiin. Tämä saattaa olla erityisen hyödyllistä tämän ja muiden herkkien väestöryhmien tulevissa meta-analyyseissä, koska Balkanin alueen tiedot slaavilaisväestöstä puuttuvat yleensä suuremmista monikansallisista ponnisteluista.

cistanche tubulosa - parantaa immuunijärjestelmää

Johtopäätökset

Anti-SARS-CoV-2 BNT162b2 mRNA-rokote aiheutti mitattavissa olevia ja kestäviä humoraalisia ja soluvasteita imettävillä naisilla ja sekä naiiveilla että aiemmin tartunnan saaneilla henkilöillä ensimmäisten kuuden kuukauden aikana Serbiassa rokotuksen jälkeen. Vakavia haittavaikutuksia rokottamiseen ei raportoitu, ja vain 5 % osallistujista sai SARS-CoV-tartunnan-2 kuuden ensimmäisen kuukauden aikana rokotuksen jälkeen ilman sairaalahoitoa. Mitään odottamattomia haittoja imettäville naisille tai heidän imetettäville vauvoilleen ei raportoitu kahden vuoden kuluttua anti-SARS-CoV{10}}-rokotteen saamisesta. Seuraavissa alan tutkimuksissa tulisi keskittyä rokotteiden tutkimus- ja kehitysstrategioihin, jotka voivat pitää COVID{11}} ja mahdolliset vastaavat pandemiat hallinnassa nopeammin ja pitkäkestoisemmin. On myös panostettava ponnisteluihin tietoon perustuvien suuntaviivojen tarjoamiseksi, väärän tiedon käsittelemiseksi asianmukaisesti erityisesti herkkien osaryhmien, kuten imettävien naisten, ympärillä, rokotteiden saatavuuden helpottaminen silloin, kun tarve on suuri, ja yleisen luottamuksen vahvistaminen tieteeseen.

cistanche hyötyy - vahvistaa immuunijärjestelmää

Viitteet

1. WHO, WHO:n Maailman terveysjärjestön koronavirus (COVID-19) -hallintapaneeli. https://covid19.who.int/ (2022).

2. Hojyo, S. et ai. Kuinka COVID-19 aiheuttaa sytokiinimyrskyn ja korkean kuolleisuuden. Infamm. Regen. 40, (2020).

3. van Eeden, C., Khan, L., Osman, MS & Tervaert, JWC Luonnollinen tappajasolujen toimintahäiriö ja sen rooli COVIDissa-19. Int. J. Mol. Sci. 21, 6351 (2020).

4. Sette, A. & Crotty, S. Mukautuva immuniteetti SARS-CoV-2 ja COVID-19 vastaan. Cell 184, 861–880 (2021).

5. Chen, G. et ai. Vaikean ja keskivaikean koronavirustaudin kliiniset ja immunologiset piirteet 2019. J. Clin. Sijoittaa. 130, 2620–2629 (2020).

6. Dan, JM et ai. Immunologinen muisti SARS-CoV-2:lle arvioitu enintään 8 kuukauden ajan tartunnan jälkeen. Science 80, 371 (2021).

7. Turner, JS et ai. SARS-CoV-2-mRNA-rokotteet indusoivat pysyviä ihmisen itukeskuksen vasteita. Nat. 596, 109–113 (2021).

8. Painter, MM et ai. Antigeenispesifisten CD4+ T-solujen nopea induktio liittyy koordinoituun humoraaliseen ja sellulaariseen immuniteettiin SARS-CoV-2 mRNA-rokotusta vastaan. Immunity 54, 2133-2142.e3 (2021).

9. Goel, RR et ai. mRNA-rokotus indusoi kestävän immuunimuistin SARS-CoV-2:lle ja kehittyy jatkuvasti huolta aiheuttaviksi varianteiksi. bioRxiv Prepr. Serv. Biol. https://doi.org/10.1101/2021.08.23.457229, (2021)

10. Muyldermans, J., De Weerdt, L., De Brabandere, L., Maertens, K. & Tommelein, E. Covid{1}}-rokotteen vaikutukset imettäviin naisiin: systemaattinen katsaus kirjallisuuteen. Edessä. Immunol. 13, 1498 (2022).

11. Golan, Y. et ai. Covid-19 mRNA-rokotus imetyksen aikana: haittatapahtumien ja rokotteisiin liittyvien vasta-aineiden arviointi äiti-vauva-dyadeissa. Edessä. Immunol. 12, 777103 (2021).

12. Arbeitman, CR et ai. Pichia pastoriksessa ja nisäkässoluissa tuotetun SARS-CoV-2-piikkireseptorin sitoutumisdomeenin rakenteellinen ja toiminnallinen vertailu. Sci. Rep. 10, 21779 (2020).

13. Konjevic, G. et ai. Melanoomapotilaiden NK-solujen toiminnallisen kapasiteetin arviointi in vitro -mallissa NK-solukontaktista K562- ja femx-kasvainsolulinjojen kanssa. J. Membr. Biol. 250, 507–516 (2017).

14. Konjević, G. et ai. Vähentynyt CD161:tä aktivoiva ja lisääntynyt CD158a:ta estävän reseptorin ilmentyminen NK-soluissa on heikentynyt NK-solujen sytotoksisuus potilailla, joilla on multippeli myelooma. J. Clin. Pathol. https://doi.org/10.1136/jclinpath-2016-203614 (2016).

15. Stanojković, TP et ai. Sytokiinien ilmentymisen ja kiertävien immuunisolujen alaryhmien arviointi eturauhassyöpäpotilaiden akuutin säteilytoksisuuden mahdollisina parametreina. Sci. Rep. 10, 19002 (2020).

16. Cavic, M. et ai. Tutkimme SARS-CoV-2-pandemian todellisia vaikutuksia syöpäpotilaiden ja korkean riskin yksilöiden molekyylidiagnostiikkaan. Asiantuntija Rev. Mol. Diagn. 21, 101–107 (2021).

17. Hassan, I., Mukaigawara, M., King, L., Fernandes, G. & Sridhar, D. Hindsight on 2020? Maailmanlaajuisen terveydenhuollon oppitunteja pandemiavuonna. Nat. Med. 27, 396–400 (2021).

18. Cavic, M., Grahovac, J., Zec, R., Stefanovic, M. & Aleksic, E. Yleiskatsaus SARS-CoV-2-pandemian ensimmäiseen vuoteen Serbiassa ja Pirotin piirikunnassa. Pirot. Zb. 46, 1–23 (2021).

19. Lijeskić, O. et ai. Prospektiivinen kohorttitutkimus sars-cov-2-infektion ja neljän Serbiassa saatavilla olevan SARS-CoV-2-rokotteen vasta-aineiden kinetiikasta ja rokotteen tehokkuudesta: 3-kuukauden väliraportti. Rokotteet 9, (2021).

20. Petrović, V., Vuković, V., Patić, A., Marković, M. & Ristić, M. BNT162b2-, BBIBP-CorV- ja Gam-COVID-Vac-rokotteiden immunogeenisyys ja immuniteetti luonnollisen SARS-CoV-viruksen jälkeen{7 }} infektio - Vertaileva tutkimus Novi Sadista. Serbia. PLoS One 17, e0263468 (2022).

21. Yeo, KT et ai. Neutralisoiva aktiivisuus ja SARS-CoV-2-rokotteen mRNA:n pysyvyys seerumissa ja rintamaidossa BNT162b2-rokotuksen jälkeen imettävillä naisilla. Edessä. Immunol. 12, (2022).

22. Pace, RM et ai. Naisten maito, jolla on diagnosoitu COVID-19, ei sisällä SARS-CoV-2-RNA:ta, mutta siinä on jatkuvasti SARS-CoV-2--spesifisiä IgA-vasta-aineita. Edessä. Immunol. 12, 5566 (2021).

23. CDC, C. DC- ja P. COVID-19 -rokotteille raskauden tai imetyksen aikana. https://www.cdc.gov/coronavirus/2019-ncov/vacci nes/recommendations/pregnancy.html (2022).

24. Bethesda (MD), NI of CH ja HD Drugs and laktation tietokanta (LactMed). COVID-19-rokotteet. (2022).

25. Jo, DH et ai. Nopeasti laskevat SARS-CoV-2-vasta-ainetiitterit 4 kuukauden sisällä BNT162b2-rokotuksen jälkeen. Rokotteet 9, (2021).

26. Carreno, BM & Collins, M. Te B7-ligandien perhe ja sen reseptorit: uusia polkuja immuunivasteiden kostimulaatioon ja estoon. Annu. Rev. Immunol. 20, 29–53 (2002).

27. Esensten, JH, Helou, YA, Chopra, G., Weiss, A. & Bluestone, JA CD28-kostimulaatio: mekanismista terapiaan. Immunity 44, 973–988 (2016).

28. Geers, D. et ai. Huolestuttavat SARS-CoV-2-muunnelmat välttyvät osittain humoraalisista mutta eivät T-soluvasteista COVID-19-toipuvien luovuttajien ja rokotettujen osalta. Sci. Immunol. 6, (2021).

29. Tarke, A. et ai. SARS-CoV-2-muunnelmien vaikutus CD4 +- ja CD8 +-T-solujen kokonaisreaktiivisuuteen infektoituneilla tai rokotetuilla yksilöillä. Soluraportit. Med. 2, (2021).

30. Sahin, U. et ai. BNT162b2-rokote indusoi neutraloivia vasta-aineita ja polyspesifisiä T-soluja ihmisissä. Nat. 2021 5957868 595, 572–577 (2021).

31. Tan, AT et ai. SARS-CoV-2-piikki-T-solujen nopea mittaus rokotettujen ja luonnollisesti tartunnan saaneiden henkilöiden kokoverestä. J. Clin. Sijoittaa. 131, (2021).

32. Chia, WN et ai. SARS-CoV-2 neutraloivien vasta-ainevasteiden dynamiikka ja immuniteetin kesto: Pitkittäinen tutkimus. Te Lancet Microbe 2, e240–e249 (2021).

33. Reynolds, CJ et ai. Ristiriitaiset neutraloiva vasta-aine- ja T-soluvasteet oireettomassa ja lievässä SARS-CoV-2-infektiossa. Sci. Immunol. 5, (2020).

34. Lopandić, Z. et ai. SARS-CoV-2-rekombinantti-m-proteiinin IgM- ja IgG-immunoreaktiivisuus. Int. J. Mol. Sci. 22, (2021).

35. Altmann, DM, Boyton, RJ & Beale, R. Immunity to SARS-CoV-2 -variantit huolestuttavat. Science 371, 1103–1104 (2021).

36. Matchett, WE et ai. Huippureuna: Nukleokapsidirokote saa aikaan piikkiriippumattoman SARS-CoV-2-suojaimmuniteetin. J. Immunol. 207, 376–379 (2021).

37. Costela-Ruiz, VJ, Illescas-Montes, R., Puerta-Puerta, JM, Ruiz, C. & Melguizo-Rodríguez, L. SARS-CoV-2 -infektio: Sytokiinien rooli COVID-taudissa{{ 7}} sairaus. Cytokine Growth Factor Rev. 54, 62 (2020).