Oligochaeta-kasermadon Lumbricus Terrestris (Linnaeus, 1758) koelomosyytit puolustuskehityksen avaimena: morfologinen tutkimus

Abstrakti

Metazoanilla on useita sisäisiä puolustusmekanismeja selviytyäkseen. Sisäinen puolustusjärjestelmä kehittyi organismien rinnalla. Annelidae-eläimillä on kiertäviä coelomosyyttejä, jotka suorittavat selkärankaisten fagosyyttisiin immuunisoluihin verrattavia toimintoja. Useat tutkimukset ovat osoittaneet, että nämä solut osallistuvat fagosytoosiin, opsonointiin ja patogeenien tunnistusprosesseihin. Kuten selkärankaisten makrofagit, nämä kiertävät solut, jotka läpäisevät elimiä celomicontelosta, vangitsevat tai kapseloivat patogeenejä, reaktiivisia happilajeja (ROS) ja typpioksidia (NO). Lisäksi ne tuottavat erilaisia ​​bioaktiivisia proteiineja, jotka osallistuvat immuunivasteeseen ja suorittavat myrkkyjä poistavia toimintoja lysosomaalisen järjestelmänsä kautta.

Coelomosyytit voivat myös osallistua litisiin reaktioihin kohdesoluja vastaan ​​ja antimikrobisten peptidien vapautumiseen. Tutkimuksemme identifioi immunohistokemiallisesti Lumbricus terrestris -bakteerin coelomosyytit, jotka ovat hajallaan epidermaalissa ja alla olevassa sidekerroksessa, sekä pitkittäis- että sileälihaskerroksessa, jotka ovat immunoreaktiivisia TLR2:lle, CD14:lle ja -Tubuliinille ensimmäistä kertaa. TLR2 ja CD14 eivät ole täysin kolokalisoituneet toistensa kanssa, mikä viittaa siihen, että nämä coelomosyytit voivat kuulua kahteen erilliseen perheeseen. Näiden immuunimolekyylien ilmentyminen Annelidaen coelomosyyteissä vahvistaa niiden ratkaisevan roolin näiden Oligochaeta-protostomien sisäisessä puolustusjärjestelmässä, mikä viittaa näiden reseptorien fylogeneettiseen säilymiseen. Nämä tiedot voisivat antaa lisätietoa Annelidan sisäisen puolustusjärjestelmän ja selkärankaisten immuunijärjestelmän monimutkaisten mekanismien ymmärtämisestä.

Coelomosyytit ovat läheistä sukua immuniteetille. Coelomosyytit ovat immuunijärjestelmään liittyviä soluja. Ne voivat erittää erilaisia ​​immuunitekijöitä, kuten sytokiinejä, interleukiineja, antigeenejä ja vasta-aineita, säätelemään ja parantamaan kehon immuunikykyä.

Coelomosyytit suorittavat erilaisia ​​immuunitoimintoja, mukaan lukien säätelevät solujen immuunivasteita antigeeniä esittelevinä soluina, tappavat suoraan patogeenejä ja epänormaaleja soluja sekä osallistuvat tulehduksen ja immuunivasteiden säätelyyn. Lisäksi jotkut tutkimukset ovat osoittaneet, että selomosyytit voivat myös parantaa immuniteettia mahdollisia taudinaiheuttajia vastaan ​​keräämällä immuunimuistisoluja, mikä parantaa kehon vastustuskykyä.

Tästä syystä terveen toiminnan ja coelomosyyttien määrän ylläpitäminen on elintärkeää kehon vastustuskyvylle. Samanaikaisesti säätelemällä ja tehostamalla coelomosyyttien immuunitoimintaa voidaan myös parantaa elimistön vastustuskykyä, jotta eri sairauksia voidaan paremmin ehkäistä ja hoitaa. Tästä voimme nähdä immuniteetin merkityksen. Cistanche voi parantaa immuniteettia. Cistanche sisältää runsaasti erilaisia ​​antioksidantteja, kuten C-vitamiinia, C-vitamiinia, karotenoideja jne. Nämä ainesosat voivat poistaa vapaita radikaaleja, vähentää oksidatiivista stressiä ja parantaa vastustuskykyä. järjestelmän vastus.

Napsauta cistanche tubulosa -etuja

Avainsanat

Annelid, Coelomocytes, Kastemato, Evoluutio, Immuniteetti.

Johdanto

Sisäiset puolustusmekanismit mahdollistavat isännän selviytymisen metazoanissa. Nämä mekanismit muuttuvat yhä monimutkaisemmiksi organismien kehittyessä. Toisin kuin selkärankaisten deuterostomeilla, protostomeilla ei ole adaptiivista immuniteettia, ja niiden puolustus perustuu synnynnäiseen immuniteettiin [56]. Ensimmäinen puolustuslinja selkärankaisten bakteereja ja mikro-organismeja vastaan ​​on synnynnäisten immuunisolujen ja -molekyylien nopea aktivointi. Viime aikoina selkärangattomista on tullut ehdokkaita luontaiseen immuniteettianalyysiin selkärankaisten adaptiivisen immuunivasteen strategioiden ja monimutkaisuuden paljastamiseksi. Selkärangattomat ovat kehittäneet erilaisia ​​aktiivisia immuunimekanismeja, mukaan lukien antimikrobisten peptidien tuotanto, koagulaatio, fagosytoosi ja kapselointireaktiot [20, 24]. Nämä mekanismit riippuvat "kuviontunnistusreseptoreista" (PRR), synnynnäisistä immuunimolekyyleistä, jotka voivat erottaa "itsensä" "ei-itsestään" kalvokomponenteista.

"Patogeeneihin liittyvien molekyylimallien" (PAMP) tunnistaminen säätelee olennaisten signaalireittien alkamista tulehdusvälittäjiä, antimikrobisia peptidejä ja fagosytoosin säätelijöitä koodaavien geenien aktivoitumiseen asti [32]. Oligochaetes annelidista (kastematoista) on tullut vertailevan immunologian malli, ja niitä käytetään iilimatojen tapaan maa- ja vesiympäristön biomonitorointiin (B.-T. [48, 52, 53, 72]. Kastemadoilla on synnynnäisiä, pitkälle kehittyneitä aineita). , ja tehokkaita puolustusmekanismeja vaarallisia ympäristön mikro-organismeja vastaan. Ensimmäinen mekaanis-biologinen puolustuslinja, joka erottaa annelidien kehon ulkoisesta ympäristöstä, on epidermiksestä ja lihaskerroksista koostuva ihokudos, jossa on kynsinauho, jossa on ohut kerros mukopolysakkarideja ja proteiineja, jotka toimivat antimikrobisena esteenä [20].

Lieroissa solu- ja humoraalinen immuunijärjestelmä toimivat yhdessä ensimmäistä kertaa metazoan evoluutiossa. Celoomontelossa olevan nesteen uskotaan olevan vastuussa humoraalisista immunologisista toiminnoista. Lierojen coelominen ontelo on täynnä nesteitä, jotka sisältävät vapaita ja vaeltavia coelomosyyttejä ja niiden pigmentoituja aggregaatteja, joita kutsutaan ruskeiksi kappaleiksi, jotka ovat syntyneet tunkeutuvien bakteerien ja hiukkasten jäämien kapseloitumisesta. Kastematojen coelominen neste suorittaa useita biologisia prosesseja, mukaan lukien hemolyyttiset, proteolyyttiset, sytotoksiset ja antibakteeriset prosessit [19, 24, 29]. Coelom on suoraan yhteydessä ulkoiseen ympäristöön selkähuokosten ja niihin liittyvien munuaistiehyiden kautta, jotka erittävät aineenvaihduntatuotteita. Nämä huokoset osallistuvat myös bakteerien ja loppuun kuluneiden coelomosyyttien eliminaatioon. Stressiolosuhteissa coelominen neste ja suspendoituneet solut voivat karkottua nopeasti kohonneen koolonin paineen vuoksi [24].

Lierojen coelomosyytit ovat olennainen osa solujen synnynnäistä immuniteettia. Nämä solut muistuttavat selkärankaisten leukosyyttejä sekä morfologialtaan että toiminnaltaan [33]. Coelomosyytit suorittavat monenlaisia ​​tehtäviä, mukaan lukien solujen sytotoksisuus, kapselointi ja fagosytoosi. Ne voidaan jakaa kahteen ensisijaiseen alapopulaatioon: melanosyytit ja amoebosyytit (hyaliini ja rakeiset) [33]. Hyaliini- ja rakeiset amebosyytit osallistuvat fagosytoosiin ja kapseloitumiseen ja ilmentävät erilaisia ​​PRR:itä [23, 60]. Nämä kiertävät solut, jotka kulkeutuvat kudoksiin selkärankaisten ontelosta, ovat hyvin samanlaisia ​​kuin selkärankaisten makrofagit, nielaisevat tai kapseloivat patogeenit, reaktiiviset happilajit (ROS) ja typpioksidi (NO) [39]. Eleosyytit tuottavat laajan valikoiman bioaktiivisia proteiineja, jotka osallistuvat humoraaliseen immuunivasteeseen ja myös puhdistavat kehon myrkkyjä lysosomaalisen järjestelmänsä kautta [24]. Celomosyytit voivat osallistua litisiin reaktioihin kohdesoluja vastaan ​​ja antimikrobisten peptidien vapautumiseen. Immuunimekanismien joukossa siirtokokeet ovat osoittaneet itsensä tunnistamisen olemassaoloon kastemadoissa [28].

Annelid coelomosyytit muodostavat nopeasti immuunimekanismit bakteereja, loisia ja hiivoja vastaan ​​solureaktioiden kautta [59]. Tätä nopeaa vastetta välittävät liukoiset antibakteeriset molekyylit, kuten lysotsyymi, lyseniini ja lubrisiini [22, 42, 68]. Erittäin konservoituneita immunologisia molekyylejä, kuten solun pinta-indikaattoreita, löydettiin coelomosyyteistä käyttämällä sytometriaa analyysiin. Erityisesti coelomosyytit reagoivat nisäkässpesifisten vasta-aineiden kanssa osoittaen pinnallista positiivisuutta vasta-aineille anti-CD11a, CD45RA, CD45RO, CDw49b, CD54, b2-M ja Ty-1 [30, 34].

Tutkimuksemme tavoitteena on arvioida immunohistokemiallisesti TLR2:n, CD14:n ja -Tubuliinin esiintyminen ensimmäistä kertaa Lumbricus terrestris (Linnaeus, 1758), leveän, monisegmenttisen, lieriömäisen, Lumbricidae-heimoon (Annelida, Oligochaeta) kuuluvan lieromadon coelomosyyteissä. , hermafrodiitti, 8-10 cm pitkä [55]. Selkärangattomien sisäisen puolustusjärjestelmän tuntemuksen parantaminen voi auttaa ymmärtämään selkärankaisten kehittyneempää immuniteettia ja siten immuunivasteen kehittymistä [63].

Materiaalit ja menetelmät

Näytteet ja kudosten valmistelu

Lombricus terrestris -näytteet tulevat histotheca-laboratoriostamme. Aiemmin ne otettiin saastumattomalta avoimelta pellolta ja sopeutettiin kaksi viikkoa tuoreeseen maaperään, kuten Licata et al. [51], ja sitten ne valmistettiin käyttämällä valomikroskopian standardimenetelmiä. Näytteet upotettiin immuunijärjestelmään (paraformaldehydi 4 prosenttia) (05-W01030705, BioOptica Milano SpA, Milano, Italia) kahdeksi tunniksi. Sitten niitä käsiteltiin dehydratoivalla etanoliasteella (30 - 100 % etanolia) ja valmistettiin sitten sisällytettäväksi parafiiniin ksyleeniä käyttäen.

Kun mukana oli kaksi ohutta 3–5 μm:n leikkaa, jotka oli leikattu pyörivällä mikrotomilla, asetettiin jokaiselle levylle.

Histologia

Objektilasien käsittelyyn käytettiin morfologisia ja histokemiallisia värjäyksiä [4, 6]. Sitten viipaleet rehydratoitiin käyttämällä progressiivisia alkoholiliuoksia (100 - 30 % etanolia) tislattuun veteen sen jälkeen, kun ne oli deparafiini poistettu ksyleenissä [17], G. [75], minkä jälkeen ne värjättiin Mallory trikromilla ja AB/PAS:lla [3]. . Värjäyksen jälkeen objektilasit kiinnitettiin käyttämällä Eukittia (BioOptica Milano SpA, Milano, Italia, Eurooppa). Tiedot tässä tutkimuksessa käytetyistä kannoista on sisällytetty taulukkoon 1.

Immunofluoresenssi

Parafnisoidut leikkeet käsiteltiin 5-prosenttisella natriumboorihydridiliuoksella autofluoresenssin poistamiseksi, sitten käytettiin 2,5-prosenttista naudan seerumialbumiiniliuosta (BSA) ja sitten viipaleita inkuboitiin yön yli primääristen vasta-aineiden kanssa TLR2-, CD14- ja -tubuliinia vastaan ​​[40 ]. Sen jälkeen suoritettiin sekundaaristen vasta-aineiden inkubaatio. Valkaisun välttämiseksi viipaleet kiinnitettiin käyttämällä Fluoromount™ Aqueous Mounting Mediumia (Sigma-Aldrich, Taufkirchen, Saksa, Eurooppa). Kokeet suoritettiin ilman primaarisia vasta-aineita negatiivisena kontrollina (tietoja ei esitetty). Sen varmistamiseksi, että primaariset vasta-aineet olivat immunopositiivisia, rotan ihokudoksia käytettiin positiivisena kontrollina (tietoja ei esitetty) [5, 47, 74].

Leikkeet analysoitiin Zeiss LSM DUO konfokaalilaserpyyhkäisymikroskoopilla META-moduulilla (Carl Zeiss MicroImaging GmbH, Jena, Saksa, Eurooppa) eri aallonpituuksilla helium-neon (543 nm) ja argon (458 nm) lasereilla [7] . Kuvien parantamiseen käytettiin Zen 2011:tä (LSM 700 Zeiss -ohjelmisto, Oberkochen, Saksa, Eurooppa). Käyttämällä Adobe Photoshop CC versiota 2019 (Adobe Systems, San Jose, CA, USA) digitaaliset kuvat yhdistettiin yhdistelmäkuvioksi. Fluoresenssin intensiteettikäyrät arvioitiin sitten käyttämällä Zen 2011 "Display profile" -ominaisuutta [58]. Yksityiskohdat vasta-aineista on yhteenveto taulukossa 2.

Kvantitatiivinen analyysi

Tiedot kerättiin kvantitatiivista analyysiä varten tutkimalla kymmenen leikettä ja kaksikymmentä kenttää näytettä kohti. Solujen positiivisuus ja lukumäärä arvioitiin ImageJ-ohjelmistolla 1.53e. TLR2:lle, CD14:lle ja -Tubuliinille positiivisten coelomosyyttien määrä laskettiin käyttämällä SigmaPlot-versiota 14.0 (Systat Software, San Jose, CA, USA). Normaalisti jakautuneet tiedot analysoitiin käyttämällä yksisuuntaista ANOVAa ja Studentin t-testiä. Immunoreaktiivisten coelomosyyttien lukumäärän keskiarvot ja standardipoikkeamat (SD) ilmoitetaan: ** p Pienempi tai yhtä suuri kuin 0.01, * p Pienempi tai yhtä suuri kuin 0,05.

Tulokset

Kastematolla Lumbricus terrestrisillä on yksikerroksinen epiteeli ja peittävä kuitumainen kynsinauho, jotka muodostavat orvaskeden. Side- ja lihaskudokset, jotka muodostavat suurimman osan kehon seinämästä, sijaitsevat orvaskeden alla. Orvaskeden epiteeli pitää kollageenisen kynsinauhan erillään muusta organismista ja on vastuussa tämän kynsinauhojen kollageenin tuotannosta. Kynsinauho, orvaskesi, pitkittäislihas ja ympyrälihas näkyvät kaikki kastematojen ruumiinseinämän poikkileikkauksen histologisessa tarkastuksessa. Epidermis on morfologisesti hyvin määritelty; se on joko yksi epiteelikerros tai pseudostratifioitu; se koostuu tuki-, tyvi-, rauhas- ja aistisoluista (kuva 1). Immunofluoresenssianalyysi konfokaalimikroskoopilla havainnolla osoittaa positiivisia coelomosyyttejä TLR2:lle (kuvat 2, 3), CD14:lle (kuvio 2) ja -tubuliinille (kuva 3), jotka ovat hajallaan epidermaalissa ja alla olevassa sidekerroksessa, molemmat pitkittäis- ja sileälihaskerroksessa. TLR2 ja CD14 eivät ole täysin kolokalisoituneita toistensa kanssa, mikä viittaa siihen, että nämä coelomosyytit voivat kuulua kahteen erilliseen perheeseen (kuvio 2). Lisäksi limakalvon rauhassolut olivat tubuliinipositiivisia orvaskedessä (kuvio 3). Analysoimalla konfokaalimikroskoopin "näyttöprofiili" -toimintoa vahvistimme kolokalisaation fluoresenssihuiput testattujen vasta-aineiden välillä.

Kvantitatiivinen analyysi paljasti samanlaisen määrän positiivisia coelomosyyttejä yksittäisille testatuille vasta-aineille, kuten taulukossa 3 esitetään.

Keskustelu

Isännän vasteet tunkeutuvia patogeenejä vastaan ​​ovat fysiologisia mekanismeja, jotka kuuluvat kaikille eläville organismeille. Ensimmäisten eukaryoottisolujen ilmestymisen jälkeen on kehittynyt useita puolustusprosesseja, jotka takaavat solun eheyden, homeostaasin ja isännän eloonjäämisen [25]. Selkärangattomat ovat kehittäneet joukon puolustusreaktioita, jotka tunnistavat ja poistavat tehokkaasti vieraat materiaalit, mikrobit tai loiset. Vaikka chordaateilla on adaptiivinen immuniteetti, kastematoina olevat lofotrokosoat turvautuvat ensisijaisesti synnynnäisiin immuunisoluihin, kuten fagosyytteihin (amoebosyytit, coelomosyytit), jotka sisältävät fylogeneettisesti konservoituneita PRR:itä välittämään immuunivastetta [41]. Scavenger-reseptorit, TLR:t ja Nod-like reseptorit (NLR) ovat selkärangattomien merkittäviä edustajia. Reseptoriligandin sitoutumisen jälkeen signaalitransduktio käynnistää monimutkaisen solureaktioiden sarjan, mikä johtaa yhden tai useamman immuunivasteeseen osallistuvan efektorimolekyylin tuotantoon [61]. Coelomic sytolyyttinen proteiini (CCF), lipopolysakkaridia sitova proteiini (EaLBI/BPI) ja Toll-kaltainen EaTLR-reseptori ovat kolme PRR-tyyppiä, jotka on tähän mennessä tunnistettu kastematoista [65, 66]. CCF on tunnistettu ja karakterisoitu Eisenia foetidan (Savigny, 1826) coelomic-nesteen ja coelomosyyttien immuunimolekyyliksi. CCF, joka sitoutuu mikrobiantigeeneihin, voi laukaista prophenoloksidaasikaskadin, tärkeän selkärangattomien immuunimekanismin, jolla on myös opsonoivaa ominaisuuksia ja siten fagosytoosia edistetään [18, 35].

TLR:t ovat evoluutionaalisesti konservoituneita kalvontunnistusreseptoreita [9, 15], jotka tunnistavat vieraita antigeenejä käyttämällä PAMP:ia [2] ja myötävaikuttavat immuunivasteen modulaatioon [8, 9, 11, 36]. Bodó et ai. [24] osoitti TLR:n läsnäolon annelid-oligochaetan Eisenia andrei coelomosyyteissä (Bouché, 1972) [24]. Skanta et ai. (2013) eristi kastemato TLR:n (EaTLR) E. andreista. Tämän reseptorin suuri lajinsisäinen monimuotoisuus osoittaa useiden TLR-geenien läsnäolon E. andrein genomissa. Fylogeneettisen tutkimuksen [66] mukaan annelidisen monisoluisen Capitella teletan TLR:llä (Blake, Grassle ja Eckelbarger, 2009), EaTLR:llä ja nilviäisten ja piikkinahkaisten TLR:illä on paljon yhtäläisyyksiä. Prochazkova et ai. korostettu EaTLR ja usean kysteiiniklusterin (MCC) EaTLR, jotka ilmentyvät lierojen koko kehon kudoksissa. Ensimmäistä on erityisen runsaasti ruoansulatusjärjestelmässä, kun taas toinen voi vaikuttaa alkionkehitykseen ja vasteeseen loisia vastaan ​​[61]. Lisäksi sen läsnäolo coelomosyyteissä voi yli-ilmentyä bakteerien kertymisen vuoksi [66]. Lumbricus terrestriksen coelomosyytit pystyivät tunnistamaan monosyytit in vitro ei-itsenä, mikä vahvisti niiden kyvyn immuunitunnistukseen [62]. Transkriptomiikkatutkimukset vahvistavat 18 TLR:n läsnäolon monisukuisessa annelid Arenicola marinassa (Linnaeus, 1758) [67].

Olemme aiemmin osoittaneet TLR2:n esiintymisen useissa selkärankaisissa [4, 11, 12, 16, 46, 54] ja urochordateissa [14, 45].

Näiden tietojen jälkeen tutkimuksemme karakterisoi immunohistokemiallisesti TLR2:ta Lumbricus terrestris -bakteerin selosyyteissä ensimmäistä kertaa. Kolokalisoimme TLR2/CD14:n ja TLR2/-Tubuliinin, mikä vahvisti kaksi solutyyppiä coelomosyyttejä, kuten Engelmann raportoi [33]. Kaikki coelomosyytit eivät olleet kolokalisoituneita testattujen vasta-aineiden suhteen, mikä viittaa näiden solujen todennäköiseen toiminnalliseen ja rakenteelliseen monipuolistumiseen. Vaikka ei ole kokeellista näyttöä, TLR2/CD14-kolokalisoituneiden coelomosyyttien läsnäolo voi viitata siihen, että nämä solut voivat olla fagosytoosiin osallistuvia amebosyyttejä, kun taas vain TLR:ää ilmentävät selomosyytit voivat olla melanosyyttisoluja, jotka osallistuvat immuunivasteeseen, mutta eivät suorita fagosyyttisiä toimintoja [1, 37 , 38], SJ [49, 50], s., [57, 71]. Huolimatta Bodó et al. mikä viittaa TLR:n puuttumiseen E. andrei melanosyyteissä qPCR:n avulla [23], TLR2-positiivisia melanosyyttejä havaitaan L. terrestrisissä, mikä viittaa eroon kastematolajien välillä, kuten jo oletettiin ydingenomiperustalla [64].

Eguielor et al. [31] iilimatossa Glossiphonia complanata (Linnaeus, 1758) tunnisti morfologisesti ja histokemiallisesti kolme pääsolutyyppiä (makrofagien kaltaiset solut, NK:n kaltaiset solut, granulosyytit tyyppi I ja II) käyttämällä erilaisia ​​anti-ihmisen markkereita hiiressä, jotka ovat spesifisiä makrofageille CD14 ja CD61 [44] ja NK-solut CD56 ja CD57 [43]. Tämä ristireaktiivisuus nisäkkään CD-antigeenejä vastaan ​​tuotetuille vasta-aineille on yhtäpitävä kirjallisuustietojen kanssa annelidien ja selkärankaisten välisistä fylogeneettisistä korrelaatioista [21, 30] ja voisi olla esimerkki näiden immuunimolekyylien evolutiivisesta säilymisestä.

Hiiren anti-ihmisen anti-CD24-, anti-tuumorinekroositekijä- (TNF)-, anti-CD45RA- ja anti-CD45RO-vasta-aineita on paikannettu kastemadon Eisenia foetida [30, 34] coelomosyyttipinnoille, mikä viittaa siihen, että nämä molekyylit ovat erittäin konservoitunut filogeneesin aikana. Nämä tutkimukset ovat yhdenmukaisia ​​aiempien tutkimusten kanssa, jotka osoittavat, että selomosyyttien pinta-antigeenit ovat ristiinreaktiivisia nisäkäs Temiste petricolassa (Amor, 1964) tuotettujen CD14-, CD11b- ja CD11c-vasta-aineiden kanssa. ]. Näiden tietojen perusteella tuloksemme osoittivat fagosyyttisolut immunoreaktiivisia CD14:lle Lumbricus terrestrisissä.

Lisäksi osoitimme coelomosyyttien immunopositiivisuuden -Tubuliinille, joka on kolokalisoitu TLR2:lla, mikä osoittaa yhteyden solun tukirangan, mikrotubulusten ja TLR2:n välittämän synnynnäisen immuunivasteen välillä. TLR2:n ja -tubuliinin kolokalisaatio vahvistaa tubuliinin osallistumisen TLR:ien kuljetukseen kalvon pinnalla. Heli Uronen-Hanssonin et al. [70] osoitti laajaa TLR2:n ja TLR4:n tubulovesikulaarista ilmentymistä sisäisissä ja ulkoisissa monosyyteissä sekä dendriittisoluissa. Koska nämä reseptorit ovat kolokalisoituja -Tubuliinin kanssa ja kytketty suoraan Golgi-kompleksiin, mikrotubulukset voivat toimia kanavana TLR-vesikkelien siirtoon [70]. Tubuliinia on myös orvaskessä auttaen säilyttämään sen eheyden [27] ja vaikuttamaan haavan paranemiseen [73], mikä auttaa synnynnäistä immuunijärjestelmää, kuten on raportoitu myös Nematoda Caenorhabditis elegansia koskevissa tutkimuksissa (Maupass, 1900) [27, 69].

Kolokalisaatio, joka on vahvistettu konfokaalimikroskoopin "näyttöprofiili"-toiminnolla, vahvistaa saatuja tuloksia korostaen fluoresenssin huippua, joka vastaa vasta-aineiden sitoutumista vastaaviin antigeeneihin.

Yhteenvetona voidaan todeta, että tutkimuksemme tunnistaa konfokaalimikroskopialla coelomosyytit, jotka ovat immunoreaktiivisia TLR2:lle, CD14:lle ja -Tubuliinille, ensimmäistä kertaa Oligochaeta annelid Lumbricus terrestrisissä. Nämä tiedot eivät ainoastaan ​​vahvista näiden molekyylien tärkeää evolutionaarista säilymistä, vaan myös syventäämme tietoamme selkärangattomien, erityisesti annelidien, sisäisestä puolustusjärjestelmästä ja voivat tarjota hyödyllisiä viitteitä tulevia tutkimuksia varten, mikä parantaa monimutkaisten luontaisten immuunimekanismien tutkimusta. ylemmät selkärankaiset.

Toimielinten arviointilautakunnan lausunto

Tämän tutkimuksen eettisestä tarkastelusta ja hyväksynnästä luovuttiin, koska näytteisiin ei sovellettu kokeellisia menetelmiä.

Tekijöiden panokset

Conceptualization, Alessio Alesci; muodollinen analyysi, Alessio Alesci ja Angelo Fumia; tutkimus, Alessio Alesci, Gioele Capillo, Angelo Fumia, Marco Albano, Emmanuele Messina, Nunziacarla Spanò, Simona Pergolizzi ja Eugenia Rita Lauriano; tietojen kuratointi, Alessio Alesci, Gioele Capillo, Angelo Fumia, Marco Albano, Emmanuele Messina, Nunziacarla Spanò, Simona Pergolizzi ja Eugenia Rita Lauriano; kirjoittaminen – alkuperäisen luonnoksen valmistelu, Alessio Alesci; kirjoittaminen – arvostelu ja editointi, Alessio Alesci, Gioele Capillo, Nunziacarla Spanò, Simona Pergolizzi ja Eugenia Rita Lauriano; visualisointi, Alessio Alesci ja Angelo Fumia; ohjaus, Eugenia Rita Lautiano. Kaikki kirjoittajat ovat lukeneet käsikirjoituksen julkaistun version ja hyväksyneet sen.

Rahoitus

Tämä tutkimus ei saanut ulkopuolista rahoitusta.

Tietojen ja materiaalien saatavuus

Tässä tutkimuksessa esitetyt tiedot ovat saatavilla artikkelissa.

julistukset

Eettinen hyväksyntä ja suostumus osallistumiseen

Ei sovellettavissa.

Kilpailevat kiinnostuksen kohteet

Kirjoittajat eivät ilmoittaneet eturistiriitaa.

Viitteet

1. Aderem A, Underhill DM. Fagosytoosin mekanismit makrofageissa. Annu Rev Immunol. 1999;17(1):593–623. https://doi.org/10.1146/annur ev.immunol.17.1.593.

2. Akira S, Uematsu S, Takeuchi O. Patogeenin tunnistaminen ja synnynnäinen immuniteetti. Cell. 2006;124(4):783–801. https://doi.org/10.1016/j.cell.2006.02.015.

3. Alesci A, Albano M, Savoca S, Mokhtar DM, Fumia A, Aragona M, Lo Cascio P, Hussein MM, Capillo G, Pergolizzi S, Spanò N, Lauriano ER. Immuunimolekyylien konfokaalinen tunnistaminen Zebrafshin ihokerhosoluissa (Danio rerio, Hamilton 1882) ja niiden mahdollinen rooli immuniteetissa. Biologia. 2022;11(11):1653. https://doi.org/10.3390/biology11111653.

4. Alesci A, Capillo G, Fumia A, Messina E, Albano M, Aragona M, Lo Cascio P, Spanò N, Pergolizzi S, Lauriano ER. Suoliston dendriittisolujen konfokaalinen karakterisointi myksiineistä teleosteihin. Biologia. 2022;11(7):1045.https://doi.org/10.3390/biology11071045.

5. Alesci A, Capillo G, Mokhtar DM, Fumia A, D'Angelo R, Lo Cascio P, Albano M, Guerrera MC, Sayed RKA, Spanò N, Pergolizzi S, Lauriano ER. Antimikrobisen peptidin Piscidin1 ilmentyminen Giant Mudskipper Periophthalmodon schlosserin (Pallas, 1770) kidusten syöttösoluissa. Int J Mol Sei. 2022;23(22):13707. https://doi.org/10.3390/ijms232213707.

6. Alesci A, Cicero N, Fumia A, Petrarca C, Mangifesta R, Nava V, Lo Cascio P, Gangemi S, Di Gioacchino M, Lauriano ER. Raskasmetallien histologinen ja kemiallinen analyysi munuaisissa ja Boops Boops -kiduksissa: Melanomakrofagikeskukset ja sauvasolut ympäristön biomarkkereina. Myrkylliset aineet. 2022;10(5):218. https://doi.org/10.3390/toxics10050218.

7. Alesci, A., Fumia, A., Miller, A., Calabrò, C., Santini, A., Cicero, N., & Lo Cascio, P. (2022). Spirulina edistää makrofagien aggregaatiota seeprakalan (Danio rerio) maksassa. Nat Prod Res, 1–7. https://doi.org/10.1080/14786419. 2022.2089883.

8. Alesci, A., Gitto, M., Kotańska, M., Lo Cascio, P., Miller, A., Nicosia, N., Fumia, A., & Pergolizzi, S. (2022). COVID-19-mRNA-rokotteiden immunogeenisyys, tehokkuus, turvallisuus ja psykologinen vaikutus. Human Immunol, S0198885922001586. https://doi.org/10.1016/j.humimm.2022.08.004.

9. Alesci, A., Lauriano, ER, Aragona, M., Capillo, G., & Pergolizzi, S. (2020). Selkärankaisten Langerhansin solujen merkitseminen kaloista nisäkkäisiin. Acta Histochemica, 122(7): 151622. https://doi.org/10.1016/j.acthis.2020.151622.

10. Alesci A, Lauriano ER, Fumia A, Irrera N, Mastrantonio E, Vaccaro M, Gangemi S, Santini A, Cicero N, Pergolizzi S. Immuunisolujen, masennuksen, stressin ja psoriaasin välinen suhde: Voisiko luonnontuotteiden käyttö Ole Avulias? Molekyylit. 2022;27(6):1953.

11. Alesci, A., Pergolizzi, S., Capillo, G., Lo Cascio, P. ja Lauriano, ER (2022). Vauvasolut kultakalan munuaisissa (Carassius auratus, Linnaeus 1758): Valo- ja konfokaalinen mikroskopiatutkimus. Acta Histochemica, 124(3):151876.

12. Alesci, A., Pergolizzi, S., Fumia, A., Calabrò, C., Lo Cascio, P. ja Lauriano, ER (2022). Syötösolut kultakalan (Carassius auratus) suolistossa: Immunohistokemiallinen karakterisointi. Acta Zoologica.

13. Alesci A, Pergolizzi S, Fumia A, Miller A, Cernigliaro C, Zaccone M, Salamone V, Mastrantonio E, Gangemi S, Pioggia G, Cicero N. Raskaana olevien naisten immuunijärjestelmä ja psykologinen tila COVID-viruksen aikana-19 .Pandemia: Voivatko mikroravinteet tukea raskautta? Ravinteet. 2022;14(12):2534. https://doi.org/10.3390/nu14122534. 14. Alesci, A., Pergolizzi, S., Lo Cascio, P., Capillo, G. ja Lauriano, ER (2022). Vasoaktiivisten suolen peptidien ja toll-like reseptorin 2 immunoreaktiivisten solujen lokalisointi urochordate Styela plicata -endotyylissä (Lesueur, 1823). Microsc Res Tech, https://doi.org/10.1002/jemt.24119.

15. Alesci A, Pergolizzi S, Lo Cascio P, Fumia A, Lauriano ER. Hermoston regeneraatio: Selkärankaisten vertaileva yleiskatsaus ja uusia näkökulmia hermostoa rappeutuviin sairauksiin. Acta Zoologica. 2021. https://doi.org/10. 1111/azo.12397.

16. Alesci A, Pergolizzi S, Savoca S, Fumia A, Mangano A, Albano M, Messina E, Aragona M, Lo Cascio P, Capillo G, Lauriano ER. Broadgilled Hagfsh Eptatretus Cirrhatuksen (Forster, 1801) suolen pikarisolujen havaitseminen: Konfokaalimikroskopian arviointi. Biologia. 2022;11(9):1366.https://doi.org/10.3390/biology11091366.

17. Alturkistani HA, Tashkandi FM, Mohammedsaleh ZM. Histologiset tahrat: kirjallisuuskatsaus ja tapaustutkimus. Global J Health Sci. 2015;8(3):72.https://doi.org/10.5539/gjhs.v8n3p72.

18. Beschin A, Bilej M, Brys L, Torreele E, Lucas R, Magez S, De Baetselier P. Convergent evolution of cytokines. Luonto. 1999;400(6745):627–8.https://doi.org/10.1038/23164.

19. Bilej M, De Baetselier P, Beschin A. Lierojen antimikrobinen puolustus. Folia Microbiol. 2000;45(4):283–300. https://doi.org/10.1007/BF028 17549.

20. Bilej M, Procházková P, Šilerová M, Josková R (2010) Earthworm Immunity. Julkaisussa: Söderhäll K, edotiro. Invertebrate Immunity, Voi. 708. Boston: Springer; s. 66–79). https://doi.org/10.1007/978-1-4419-8059-5_4.

21. Blanco GAC, Escalade AM, Alvarez E, Hajos S. LPS-indusoitu fagosytoosin stimulaatio sipunculan-madossa Themiste petricola: Ihmisen CD14-, CD11B- ja CD11C-ristireaktiivisten molekyylien mahdollinen osallistuminen. Dev Comp Immunol. 1997;21(4):349–62. https://doi.org/10.1016/ S0145-305X(97)00007-4.

22. Bodó K, Boros Á, Rumpler É, Molnár L, Böröcz K, Németh P, Engelmann P. Identification of novel lubricin homologs in Eisenia andrei earthworms. Dev Comp Immunol. 2019;90:41–6.

23. Bodó, K., Ernszt, D., Németh, P., & Engelmann, P. (2018). Selkeät immuunijärjestelmään ja puolustukseen liittyvät molekyylisormenjäljet ​​Eisenia andrei -kastematojen erotetuissa selomosyyttialaryhmissä. Invertebrate Survival J, 338–345.

24. Bodó K, Kellermayer Z, László Z, Boros Á, Kokhanyuk B, Németh P, Engelmann P. Vamman aiheuttama synnynnäinen immuunivaste kastemadon segmentin regeneraation aikana, Eisenia andrei. Int J Mol Sei. 2021;22(5):2363.

25. Buchmann, K. (2014). Synnynnäisen immuniteetin evoluutio: vihjeitä selkärangattomista kaloista nisäkkäisiin. Immunologian rajat.

For more information:1950477648nn@gmail.com