Kahdeksan kemiallisen komponentin sisältöerojen vertailu kahden tyyppisen Cistanche Deserticola -tuotteen raaka- ja viinikäsitellyissä tuotteissa UPLC:n perusteella Ⅱ
Jun 16, 2025
2. Menetelmät ja tulokset
2.1 Kromatografiset olosuhteet
UPLC-analyysi suoritettiin käyttämällä aWaters ACQUITY UPLC™ BEH C18 -kolonni (100 mm × 2,1 mm, hiukkaskoko 1,7 μm). Liikkuva vaihe koostuimetanoli (A)ja0,1 % muurahaishapon vesiliuos (B)seuraavalla gradienttielutiolla:
0–4 min: 10 % → 26 % A
4–18 min: 26 % → 40 % A
18–20 min: 40 % → 50 % A
Virtausnopeus:0,3 ml/min
Ruiskutusmäärä:3 μl
Kolonnin lämpötila:35 °C
Tunnistuksen aallonpituus:330 nm
2.2 Ratkaisujen valmistelu
2.2.1 Sekavertailuliuos
Punnitse seuraavat standardiyhdisteet tarkasti:cistanosidi F, ekinakosidi, cistanosidi A, verbascoside, tubulosidi A, isoverbaskosidi, 2'-asetyyliverbaskosidi, jatubulosidi B. Liuota 50-prosenttiseen metanoliin vertailuseoksen valmistamiseksi, jossa on seuraavat pitoisuudet (µg·mL-¹):
Cistanosidi F: 32,7
Ekinakosidi: 102,4
Cistanosidi A: 50,2
Verbascoside: 80,6
Tubulosidi A: 25.6
Isoverbascoside: 86.3
2'-asetyyliverbaskosidi: 77,3
Tubulosidi B: 60,8
2.2.2 Näyteratkaisu
Raakoja Cistanche-viipaleitavalmistettiin pehmentämällä yrtti, viipaloimalla ja kuivaamalla.
Viinihöyrytetty Cistanchevalmistettiin liottamalla raakaviipaleet 30-prosenttisessa riisiviinissä, höyryttämällä seosta 12 tuntia, jäähdyttämällä ja kuivaamalla uudelleen.
suunnilleen0.2 gkuivattua jauhetta (joka kuljetettiin 65 meshin seulan läpi) punnittiin 50 ml:n ruskeaan mittapulloon, uutettiin 25 ml:lla 50-prosenttista metanolia, sonikoitiin 40 minuuttia (250 W, 35 kHz) ja palautettiin painoon. Liuos suodatettiin a0,22 μm kalvoja suodosta käytettiin analyysiin.
Huomautus: H. Desert Cistanche; G. Tubulosa Cistanche; RH. Cistanche deserticola raaka-viipaleet; RG. Cistanche tubulosa raaka-viipaleet; WH. Cistanche deserticola haudutettu viinin kanssa; WG. Cistanche tubulosa haudutettu viinin kanssa; Kuvat 4-7 ovat samat.
Kuva 1 Kuvia Cistanche deserticola- ja Cistanche tubulosa -lääkeaineista, raakaviipaleista ja viinin kanssa haudutettuna
kuuluisa kiistanche-viini, jota myydään Kiinassa
Wecistanchen tukipalvelu - Ota yhteyttä saadaksesi näytteen tai tukkukaupan tiedot
Sähköposti:wallence.suen@wecistanche.com
Whatsapp/Puhelin:+86 15292862950
2.3 Kahdeksan tärkeimmän yhdisteen kvantitatiivinen analyysi raaka- ja viinikäsitellyssä Cistanchessa
2.3.1 Järjestelmän soveltuvuus
Kuvatuissa kromatografisissa olosuhteissa teoreettinen levynumeroekinakosidi exceeded 6000 with good resolution (>1.5). Sekastandardin, raaka-aavikon Cistanchen ja viinikäsiteltyjen näytteiden kromatogrammit on esitetty kuvassa 2.
Huippujen tunnistus:
Cistanoside F
Ekinakosidi
Cistanoside A
Verbascoside
Tubulosidi A
Isoverbascoside
2'-asetyyliverbaskosidi
Tubulosidi B
cistanche deserticola
cistanche tubulosa
2.3.2 Lineaarisuus ja tunnistusrajat
Standardikalibrointikäyrät määritettiin käyttämällä vertailuseoksen sarjalaimennoksia pitoisuuksilla 0,1 - 5,0 ml. Kalibrointikäyrät luotiin piirtämälläpitoisuus (X)vastaanhuippualue (Y). Havaintorajat (LOD, S/N=3) ja kvantifiointirajat (LOQ, S/N=10) määritettiin ja vahvistettiin hyvä lineaarisuus testatuilla alueilla.
2.3.3 Tarkkuus
Sekavertailuliuoksen kuusi rinnakkaista injektiota osoittisuhteelliset standardipoikkeamat (RSD)huippualueista alkaen0,48 % - 2,14 %, mikä osoittaa laitteen erinomaisen tarkkuuden.
2.3.4 Vakaus
Esimerkkiratkaisutraaka Cistanche-jauhe (eränumero. 160901)analysoitiin 0, 2, 4, 8, 12 ja 24 tunnin kohdalla. Kaikkien 8 yhdisteen huippualueiden RSD-arvot vaihtelivat0,71 % - 1,93 %, vahvistaaliuoksen stabiilisuus 24 tunnin kuluessa.
Taulukko 1. Esimerkkitiedot Cistanche-materiaaleista
| Lähdelajit | Esimerkki ID | Alkuperä | Eränumero |
|---|---|---|---|
| Cistanche deserticola | H1 | Sisä-Mongolia | 160901 |
| H2 | Xinjiang | 1712301 | |
| H3 | Xinjiang | 1712305 | |
| H4 | Xinjiang | 1712306 | |
| H5 | Xinjiang | 1712307 | |
| H6 | Sisä-Mongolia | 1712308 | |
| H7 | Xinjiang | 180710 | |
| H8 | Xinjiang | 180710 | |
| H9 | Xinjiang | 180710 | |
| H10 | Xinjiang | 180711 | |
| Cistanche tubulosa | G1 | Xinjiang | 151201 |
| G2 | Xinjiang | 170301 | |
| G3 | Xinjiang | 1709001 | |
| G4 | Xinjiang | 170601 | |
| G5 | Xinjiang | 1712302 | |
| G6 | Xinjiang | 1712303 | |
| G7 | Xinjiang | 1712304 | |
| G8 | Xinjiang | 180710 | |
| G9 | Xinjiang | 180710 | |
| G10 | Xinjiang | 180712 |
| Ekinakosidi |
| Cistanoside A |
| Verbascoside |
2.3.5 Toistettavuus
Kuusi itsenäisesti valmistettua toistoa samasta Cistanche-erästä osoitti hyvää toistettavuutta. Keskimääräinen pitoisuus (mg·g⁻¹) ja RSD:t olivat seuraavat:
| Yhdiste | Keskim. Sisältö (mg/g) | RSD (%) |
|---|---|---|
| Cistanoside F | 0.24 | 1.24% |
| Ekinakosidi | 4.49 | 0.25% |
| Cistanoside A | 0.56 | 1.93% |
| Verbascoside | 2.52 | 1.40% |
| Tubulosidi A | 0.59 | 1.15% |
| Isoverbascoside | 1.49 | 0.71% |
| 2'-asetyyliverbaskosidi | 1.23 | 1.94% |
| Tubulosidi B | 0.86 | 1.02% |
2.3.6 Palautustesti
Palautumista testattiin piikilläkuusi kopiota Cistanche-jauhetta (0,1 g)tunnetuilla 8 vertailuyhdisteen pitoisuuksilla. Keskimääräiset palautukset vaihtelivat95,56 % - 102,71 %, jossa RSD-levyt välillä1,44 % ja 2,97 %, osoittaaerinomainen erotus- ja kvantifiointivarmuus.
Huomautus: A. Sekaviite; B. Raaka Cistanche deserticola; C. Haudutettu Cistanche deserticola viinissä; 1. sistanksidi F; 2. ekinakosidi; 3. sistanksidi A; 4. Verbaskosidi; 5. tubulosidi A; 6. isoverbaskosidi; 7. 2΄-asetyyliverbaskosidi; 8. Tubulosidi B.
2.3.7 Aktiivisten yhdisteiden kvantifiointi raaka-aineessa vs. viinikäsitellyssä Cistanchessa
Jokainen näyte testattiin kahtena kappaleena. 8 kohdeyhdistettä kvantifioitiin vuonna10 erää Cistanche deserticolaa(raaka- ja viinikäsitelty) ja10 erää Cistanche tubulosaa. Tulokset on koottu taulukkoon 3, joka tarjoaa näkemyksiä seuraavista:
Lajikohtaiset erot koostumuksessa
Muutokset fytokemiallisessa pitoisuudessa viinin käsittelyn jälkeen
Analyyttinen sormenjälki Cistanchen laadunvalvontaan
Taulukko 2. Kalibrointikäyrät, korrelaatiokertoimet (r), lineaariset alueet, LOD ja LOQ kahdeksalle yhdisteelle
| Yhdiste | Kalibrointiyhtälö | r | Lineaarinen alue (µg·mL⁻¹) | LOD (µg·mL⁻¹) | LOQ (µg·mL⁻¹) |
|---|---|---|---|---|---|
| Cistanoside F | K=4.89 × 10⁹X + 3.31 × 10³ | 0.9999 | 0,327–32,700 | 0.0521 | 0.1300 |
| Ekinakosidi | K=3.88 × 10⁹X + 1.71 × 10⁴ | 0.9999 | 1.024–102.400 | 0.0422 | 0.1339 |
| Cistanoside A | K=5.08 × 10⁹X + 3.45 × 10³ | 0.9999 | 0,502–50,600 | 0.1006 | 0.4035 |
| Verbascoside | K=3.88 × 10⁹X + 3.43 × 10³ | 0.9999 | 0,806–80,600 | 0.0732 | 0.1871 |
| Tubulosidi A | K=4.42 × 10⁹X + 1.07 × 10³ | 0.9999 | 0,256–25,600 | 0.0865 | 0.2876 |
| Isoverbascoside | K=4.81 × 10⁹X + 5.29 × 10³ | 0.9999 | 0,863–86.300 | 0.0242 | 0.0734 |
| 2'-asetyyliverbaskosidi | K=5.30 × 10⁹X + 2.99 × 10³ | 0.9999 | 0,773–77,300 | 0.0317 | 0.1024 |
| Tubulosidi B | K=5.17 × 10⁹X + 3.39 × 10³ | 0.9999 | 0,608–60,800 | 0.1794 | 0.3876 |
2.4 Cistanche-lajien kemiallisen koostumuksen vertaileva analyysi
Tutkimaanfytokemialliset erotvälilläCistanche deserticolajaCistanche tubulosa, kahdeksan avaimen pitoisuudetfenyylietanoidiglykosiditalkaen10 erää raaka- ja viinikäsiteltyjä näytteitäjokaisesta lajista visualisoitiin käyttäenlaatikkotaulut (kuva 3). Tilastollinen analyysi paljasti, että paitsi2'-asetyyliverbaskosidijatubulosidi B, useimmat muut yhdisteet osoittivatmerkittävät erot (P < 0,05)kahden lajin välillä sekä raaka- että jalostetussa muodossa.
Erityisesti:
sisäänraaka Cistanche, sisällöncistanosidi F, ekinakosidi, isoverbaskosidi, tubulosidi A ja verbaskosidiolimerkittävästi alhaisempisisäänC. deserticolaverrattunaC. tubulosa(P < 0,05).
Theviinikäsitellyt näytteetheijastelee samanlaisia trendejä.
Erityisesticistanosidi Alöydettiin klokorkeammat tasot sisäänC. deserticolaja olihavaitsematonsisäänC. tubulosa, mikä viittaa siihen, että se voi toimia apotentiaalinen merkkiyhdistelajien eriyttämistä varten.
Cistanche-lajien PLS-DA-kemometrinen analyysi
A Osittainen pienimmän neliösumman erotteluanalyysi (PLS-DA)suoritettiin käyttämällä kahdeksan yhdisteen pitoisuustietoja. Tuloksena olevapistekaaviot (kuva 4A)osoitti, että molemmista lajeista saadut raaka- ja käsitellyt näytteet tekivät niinei ryhmitetä selvästi erottuviin ryhmiin.
Kuitenkin,satunnaiset permutaatiotestit (kuva 4B)paljasti, että malli oliei yliasennettu, kuten todelliset arvotR²Y ja Q²olivat korkeammat kuin permutoiduilla malleilla. Suhteellisenalhaiset Q²-arvotehdottaarajoitettu ennustettavuus, todennäköisesti johtuuryhmän sisäinen vaihtelujapäällekkäiset yhdistealueetraaka- ja prosessoitujen muotojen välillä.
Lisää PLS-DA-mallinnusta ja VIP-analyysiä
Kummankin lajin raaka- ja viinikäsitellyille näytteille rakennettiin erilliset PLS-DA-mallit tutkittavaksilajikohtaiset kemialliset erot. Seuraavia havaittiin:
Pistekaaviot (kuvat 5A ja 5C)näyttierillinen klusteroituminenvälilläC. deserticolajaC. tubulosasekä raaka- että jalostetussa muodossa.
Mallin validointi (kuvat 5B ja 5D)vahvisti hyvän ennustevoiman ilman yliasennusta.
Muuttuvan tärkeysprojisointi (VIP) -kaaviot (kuvat 6A ja 6B)tunnistettu tärkeimmät yhdisteet, jotka edistävät lajien syrjintää:
vartenraakanäytteet: Cistanoside A, cistanosidi F, ekinakosidi, javerbascosideolivat informatiivisimpia.
vartenviinikäsitellyt näytteet: Cistanoside Ajatubulosidi Bnäytteli hallitsevia rooleja.
2.5 Viininkäsittelyn vaikutus Cistanchen fytokemiaan
Koska yhdistepitoisuudet vaihtelevat huomattavasti erien välillä,parilliset vertailuttehtiin raaka- ja viinikäsiteltyjen näytteiden välilläsama erä. Tulokset, visualisoitu käyttäenviulun juonet (kuva 7), paljasti seuraavaa:
sisäänC. deserticola, tasot2'-asetyyliverbaskosidi, cistanosidi A, cistanosidi F, ekinakosidi, tubulosidi A ja verbaskosidi vähentynyt merkittävästijälkikäsittely (P < 0,05), kun taastubulosidi B lisääntynyt.
sisäänC. tubulosa, tasot2'-asetyyliverbaskosidi, ekinakosidi ja verbaskosidimyösvähentynyt, kunisoverbaskosidi ja tubulosidi B lisääntynytmerkittävästi (P < 0,05).
Nämä havainnot viittaavat siihen, että viinin prosessointi voi johtaahydrolyysi, isomerointi, taikemiallinen muunnosaktiivisista ainesosista.
3. Keskustelu
mukaanKiinan farmakopean vuoden 2020 painos, Cistanche deserticolasaa sisältää vähintään0.3%yhdistetystä sisällöstäekinakosidi ja verbaskosidi, kun taasCistanche tubulosasaa sisältää vähintään1.5%näistä kahdesta yhdisteestä. Tässä tutkimuksessa kaikki raaka- ja prosessoidut näytteet yhtä erää (180710) lukuun ottamatta täyttivät nämä standardit.
Huolimattaerästä toiseen vaihtelevuuskunkin lajin sisällä (jotkut yhdisteet erosivat jopa 10-kertaisesti, kuten tubulosidi A ja isoverbaskosidi) havaittiin johdonmukaisesti tilastollisesti merkittäviä eroja yhdistepitoisuudessa näiden kahden lajin välillä. Tämä vahvistaa senlajin alkuperä on tärkeä tekijävaikuttaa fytokemialliseen koostumukseen.
Lisäksi,cistanosidi Aolihavaittu vain sisäänC. deserticolaja poissa sisäänC. tubulosa, mikä tekee siitä aarvokas merkkiaine lajien tunnistamiseen, erityisesti farmakognostisissa tai laadunvalvonta-asetuksissa.
🔬 Viininkäsittelyn vaikutus kemialliseen koostumukseen
Viininkäsittelyn jälkeen molemmat lajit osoittivat johdonmukaista suuntausta:
Alentuneet tasot/:
Cistanosidi F, ekinakosidi, sistanosidi A, verbaskosidi, tubulosidi A ja 2'-asetyyliverbaskosidi
Lisääntyneet tasot/:
Tubulosidi B ja isoverbaskosidi
Nämä suuntaukset voivat johtuakemiallinen hydrolyysi, huononeminen, tairakenteellista uudelleenjärjestelyähöyrytysprosessin aikana. Mielenkiintoista kyllä,muutosten suuruus ja suunta vaihtelivat erien välillä, johtuu todennäköisesti eroista:
Yhdisteen alkupitoisuudet
Yrttien morfologia (koko, paksuus)
Herkkyys käsittelyolosuhteille
Tämä korostaa sen tärkeyttäkäsittelyparametrien standardointija johtamineneräkohtaiset laadunarvioinnityrttivalmisteen aikana.
