Cistanche-polysakkaridit estävät eturauhassyöpäsolujen lisääntymistä ja indusoivat apoptoosia ROS-sukupolven ja antioksidanttigeenin suppression kautta
Jun 10, 2025
Abstrakti:
Tavoite:Selvittääkseen sen vaikutuksia ja taustalla olevia mekanismejaCistanche-polysakkariditproliferaatiosta ja apoptoosistaeturauhassyöpäsolut.
Menetelmät:
Ihmisen eturauhassyöpä DU145-soluja käsiteltiin pienillä, keskisuurilla ja korkeilla pitoisuuksillaCistanche-polysakkaridit(20, 40 ja 80 mg/ml, vastaavasti). Solujen lisääntyminen arvioitiin käyttämälläMTT-määritys, ja apoptoosin arvioitiinvirtaussytometria. Solunsisäinenreaktiiviset happilajit (ROS)tasot mitattiin virtaussytometrialla, kun taasglutationi (GSH)tasot määritettiin käyttämälläELISA. mRNA:n ja proteiinin ilmentymistasotglutamaatti-kysteiiniligaasin katalyyttinen alayksikkö (GCLC), glutamaatti-kysteiiniligaasin modifiointialayksikkö (GCLM), jatioredoksiinireduktaasi 1 (TXNRD1)analysoitiinRT-PCRjaWestern blot, vastaavasti.
Tulokset:
Puolet maksimaalisesta estävästä pitoisuudesta (IC50)Cistanche-polysakkariditDU145-soluilla oli 40,35 mg/ml, joten 40 mg/ml valittiin väliaineannokseksi seuraaviin kokeisiin. Pienet, keskisuuret ja suuret annokset määriteltiin vastaavasti 50 %:ksi, 100 %:ksi ja 200 %:ksi IC50:sta.
Kaikki hoitoryhmät osoittivat merkitsevästi lisääntynyttä apoptoosin määrää verrattuna kontrolliryhmään. Thesuuriannoksinen Cistanche-ryhmäosoitti suurinta solujen lisääntymisen estoa ja suurinta apoptoosin määrää, jota seurasivat keskisuurten ja pieniannosten ryhmät (P< 0,01). ROS-tasot nousivat merkittävästi ja GSH-tasot laskivat merkittävästiCistanche-käsitellyt ryhmätkontrollia vastaan. Erityisesti,suuren annoksen ryhmäheillä oli huomattavasti korkeammat ROS- ja alhaisemmat GSH-tasot kuin keski- ja pieniannoksisilla ryhmillä (P< 0,05); keskiannoksen ryhmässä oli samanlaisia eroja verrattuna pieniannoksiseen ryhmään (P< 0,05).
IlmaisutasotGCLC, GCLM, jaTXNRD1(sekä mRNA:n että proteiinin) säätely väheni merkittävästi kaikissa Cistanchella hoidetuissa ryhmissä verrattuna kontrolliin (P< 0,05). Thesuuren annoksen ryhmäosoitti merkittävin näiden antioksidantteihin liittyvien geenien ja proteiinien suppressio, jota seurasivat keski- ja pieniannoksiset ryhmät (P< 0,05).
Johtopäätös:
Cistanche-polysakkariditestävät antioksidanttitekijöiden ilmentymistäGCLC, GCLM, jaTXNRD1, mikä vähentääGSH-synteesi, edistäminenROS-kertymäja lopulta indusoiapoptoosi eturauhassyöpäsoluissa. Nämä havainnot viittaavat siihenCistanchevoi toimia aluonnollinen terapeuttinen aineeturauhassyövän kauttaoksidatiivisen stressin välittämät mekanismit.
Paljon polysakkarideja Cistanche-uute
Wecistanchen tukipalvelu - Ota yhteyttä saadaksesi tukkuhinnan
Sähköposti:wallence.suen@wecistanche.com
Whatsapp/Puhelin:+86 15292862950
Tausta ja menetelmät
Eturauhassyöpäosuus on noin7,1 % kaikista miesten pahanlaatuisista kasvaimista, ja esiintyvyyshuippu esiintyy 60 vuoden iän jälkeen. Kiinan väestön ikääntyessä edelleen tämän taudin ilmaantuvuuden odotetaan nousevan edelleen [1]. Tutkimukset viittaavat siihen, että eturauhassyövän korkea esiintyvyys iäkkäillä miehillä voi olla yhteydessäeturauhasen rappeuttavat muutokset, geneettinen taipumus, ruokailutottumukset, jaelämäntapatekijöitä [2].
Kirurginen resektioon edelleen eturauhassyövän hoidon tukipilari, jonka tavoitteena on poistaa suurin osa kasvainmassasta. Siihen liittyy kuitenkin merkittäviä komplikaatioita, kutenvirtsanpidätyskyvyttömyys, seksuaalinen toimintahäiriöja mikä kriittisin,kasvaimen uusiutuminen ja metastaasit, jotka ovat merkittäviä huonon ennusteen syitä [3].
Viime vuosina,Perinteinen kiinalainen lääketiede (TCM)on saanut yhä enemmän huomiota roolistaan syövän hoidossa. TCM voi auttaavahvistaa immuniteettia, estämään kemoterapian/sädehoidon sivuvaikutuksia, jatehostaa detoksifikaatiota. Jotkut lääkeyrtit ovat myös esilläsuoria kasvainten vastaisia ominaisuuksiamukaan lukien kasvaimen kasvun estäminen jaapoptoosin induktio syöpäsoluissa [4].
Näiden joukossaCistanche (Cistanche deserticola)on perinteinen tonic yrtti, joka tunnetaan siitäimmunomoduloiva, antioksidantti, jakasvainten vastaisia vaikutuksia. Sen tärkeimmät bioaktiiviset komponentit ovatpolysakkaridejajafenyylietanoidiglykosidit. Tämä tutkimus tutkii sen vaikutuksia ja taustalla olevaa mekanismiaCistanche-polysakkariditpäälläeturauhassyövän DU145-solujen proliferaatio ja apoptoosi.
1. Materiaalit ja menetelmät
1.1 Tärkeimmät materiaalit ja reagenssit
DU145 ihmisen eturauhassyöpäsolutsaatiin Tongpai Biotechiltä (Shanghai, Kiina).
Cistanche-polysakkaridit(eränumero: 0287181) ostettiin Weikeqi Bio Co., Ltd.:ltä (Sichuan, Kiina).
Sikiön naudan seerumi, penisilliini/streptomysiini, jaDMEMtarjosi Zeta Life (USA).
MTT-määritys, Anneksiini V/PI apoptoosipakkaukset, RIPA-lyysipuskuri, BCA-proteiinin kvantifiointisarjatsaatiin Elabscienceltä (Shanghai, Kiina).
Reaktiivisten happilajien (ROS) tunnistussarjajaGSH ELISA sarjatostettiin BioLabilta (Shanghai, Kiina).
Trizol-reagenssi, käänteinen transkriptiosarjat, jaPCR-sarjathankittiin NeuroSymistä (Hangzhou, Kiina).
Vasta-aineet vastaanGCLC, GCLM, TXNRD1, -aktiini, ja vastaavat sekundaariset vasta-aineet ostettiin UnivBiolta (Shanghai, Kiina).
1.2 Soluviljely- ja lisääntymismääritys
DU145-soluja viljeltiinDMEM täydennettynä 10 % FBS:llä ja 1 % penisilliini/streptomysiinilläCO₂-inkubaattorissa. vartenMTT-määritys, logaritmisen vaiheen DU145-solut ympättiin 96-kuoppaisille levyille ja käsiteltiinCistanche-polysakkaridiliuoksetpitoisuuksilla10, 20, 40 ja 80 mg/ml. Kontrolliryhmä sai vain DMEM-elatusainetta.
24 tunnin hoidon jälkeen20 ui 5 mg/ml MTT:tälisättiin jokaiseen kuoppaan ja inkuboitiin 4 tuntia. Supernatantti poistettiin ja150 ui DMSO:talisättiin. 10 minuutin ravistelun jälkeen absorbanssi mitattiin klo490 nmkäyttämällä mikrolevylukijaa. TheIC50laskettiin, ja20, 40 ja 80 mg/mlvalittiinpienet, keskisuuret ja suuret annoksetmyöhempiä kokeita varten. Thesolujen lisääntymisen estonopeuslaskettiin seuraavasti:
Estoaste (%)=(OD_kontrolli - OD_käsitelty) / OD_kontrolli × 100
1.3 Apoptoosimääritys
Log-faasin DU145-soluja käsiteltiin erilaisilla pitoisuuksillaCistanche-polysakkariditryhmittelyjen mukaan. Kiinnityksen ja värjäyksen jälkeenAnneksiin V-FITCjaPIkäytettiin apoptoottisten solujen leimaamiseen.Virtaussytometriasuoritettiin fluoresenssisignaalien havaitsemiseksi, ja apoptoottisten solujen prosenttiosuus kirjattiin.
1.4 Solunsisäisten ROS- ja GSH-tasojen havaitseminen
ROS-tasot mitattiin käyttämällä aROS-fluoresenssianturija virtaussytometria. GSH-tasot kvantifioitiin käyttämälläELISA. Standardikäyrä valmistettiin käyttämällä tunnettuja GSH-standardien pitoisuuksia, ja absorbanssi mitattiin GSH-pitoisuuksien laskemiseksi näytteissä.
1,5 RT-PCR GCLC:n, GCLM:n, TXNRD1:n mRNA-ilmentymiseen
Kokonais-RNA uutettiin käyttämälläTrizolja cDNA syntetisoitiin. PCR suoritettiin käyttämällä erityisiä alukkeita:
GCLC:
Eteenpäin: 5'-GTCGGTGTCAAAATACGGAGTTCCA-3'
Käänteinen: 5'-CGTGACGAGGACTGCGTGCATGGAT-3'
GCLM:
Eteenpäin: 5'-CCGATGACGCCATAAACGTCCGTAGC-3'
Käänteinen: 5'-GGCTAAGCGTACGTAGTACGCAACGTA-3'
TXNRD1:
Eteenpäin: 5'-TGACAGTCCTACCGTACGTAGAATGCC-3'
Käänteinen: 5'-ATAATGCGTAGGGATGCGCTAGCAATGG-3'
-aktiini (sisäinen valvonta):
Eteenpäin: 5'-TTAGGCGCGATGCAGTCAGATAAGC-3'
Käänteinen: 5'-ATCGACGTACGTACGGACGCGATAG-3'
Vahvistusolosuhteet: 95 astetta 60 sekuntia, jota seuraa 30 sykliä 95 astetta 30 sekuntia, 60 astetta 30 sekuntia ja 72 astetta 60 sekuntia. PCR-tuotteet analysoitiingeelielektroforeesi, ja suhteellinen geeniekspressio normalisoitiin arvoon-aktiini.
1.6 Western blot -menetelmä proteiinien ilmentämistä varten
Kokonaisproteiini uutettiin käyttämälläRIPA puskuri, ja proteiinipitoisuus määritettiinBCA-määritys. Proteiinit erotettiin toisistaanSDS-SIVU, siirretty osoitteeseenPVDF-kalvot, estetty ja inkuboitu yön yli 4 asteessa primaaristen vasta-aineiden kanssaGCLC, GCLM, TXNRD1, ja-aktiini. kanssa inkuboinnin jälkeenHRP-konjugoidut sekundaariset vasta-aineet, bändit visualisoitiin käyttämälläkemiluminesenssija määrällisestiImageJ ohjelmisto.
1.7 Tilastollinen analyysi
Kaikki tiedot analysoitiin käyttämälläSPSS 25.0. Yksisuuntainen ANOVA jaLSD-t testitkäytettiin tilastollisen merkitsevyyden määrittämiseen.
