Tutkimus kemiallisten profiilien ja aineenvaihdunnan Cistanchesta

Yhteystiedot: Audrey Hu Whatsapp/hp: 0086 13880143964 Sähköposti:audrey.hu@wecistanche.com

Zhe Li, Lkhaasuren Ryenchindorj, Bonan Liu, Ji Shi, Chao Zhang, Yue Hua, Pengpeng Liu, Guoshun Shan ja Tianzhu Jia

Abstrakti

Tausta: Kiinalainen materia medica -käsittely on perinteisessä kiinalaisessa lääketieteessä (TCM) erottuva ja ainutlaatuinen farmaseuttinen tekniikka, jota käytetään vähentämään sivuvaikutuksia ja lisäämään tai jopa muuttamaan raakayrttien terapeuttista tehoa. Optimoidun käsittelyprosessin aiheuttamat muutokset olennaisissa ainesosissa ovat ensisijaisesti vastuussa lääkekasvien tehon lisääntymisestä. Riisiviinissä höyrytetyn Cistancha deserticolan (C. deserticola) munuais-yang-virkistävä vaikutus oli voimakkaampi kuin raaka C. deserticola (CD). Menetelmät: Vertailuanalyysi suoritettiin käyttämällä UPLC-Q-TOF-MSE:tä UNIFI-informatiikkaalustan kanssa prosessoinnin vaikutuksen määrittämiseksi. In vitro -tutkimuksia suoritettiin ainesosien karakterisoimiseksi sekämetaboliititin vivo. Thekemiallinenkomponentit määritettiin CD:ssä ja sen jalostetuissa tuotteissa. Monimuuttujaiset tilastolliset analyysit suoritettiin niiden välisten vaihtelujen arvioimiseksi, kun taas OPLS-DA:ta käytettiin parittaiseen vertailuun. Tulokset: Tämän tutkimuksen tulokset paljastivat huomattavia vaihteluita fenyylietanoidiglykosideissa (PhG:t) ja iridoideissa käsittelyn jälkeen. CD:n ja sen jalostetun tuotteen uutteista havaittiin yhteensä 97 yhdistettä. PhG:t, joissa on 4'-O-kofeoyyliryhmä 8-O- -D-glukopyranosyyliosassa, kuten akteosidi, cistanosidi C, kampneosidi II, osmantusidi vähenivät käsittelyn jälkeen, kun taas PhG:t, joissa oli 6'-O- kofeoyyliryhmä 8-O- -D-glukopyranosyyliosassa, kuten isoasetosidi, isosistanosidi C, isokampneosidi I, isomartynosidi lisääntyivät erityisesti CD-NP-ryhmässä. Myös ekinakosidin ja cistanosidi B:n, joiden rakenteessa on 6'-O- -D-glukopyranosyyliosa, intensiteetti kasvoi. In vivo -tutkimus, 10 prototyyppikomponenttia ja 44metaboliitithavaittiin rotan plasmasta, ulosteista ja virtsasta. Saadut tulokset paljastivat, että käsittely johtaa huomattavaan vaihteluunkemiallinenCD:n ainesosat ja vaikuttivat yhdisteiden jakautumiseen in vivo, ja faasin II aineenvaihduntaprosessit ovat kunkin yhdisteen avainkaskadit, ja useimmatmetaboliititliittyvät ekinakosidiin tai akteosidiin. Johtopäätökset: Tämä on ensimmäinen maailmanlaajuinen raaka- ja prosessoitujen CD-levyjen vertailututkimus. Nämä havainnot lisäävät ymmärrystämme CD-käsittelyn vaikutuksista ja antavat tärkeitä tietoja tulevia tehokkuustutkimuksia varten.

Tutkimus kemiallisten profiilien ja aineenvaihduntatuotteiden cistanchesta

Johdanto

Kiinan materia medica (CMM) -käsittely on osoittautunut merkittäväksi soveltuvaksi perinteisen kiinalaisen lääketieteen (TCM) kliinisessä käytännössä, ja sitä on pidetty kannattavana hoitona useiden vuosisatojen ajan. Tämä on ainutlaatuinen lääketekniikka, joka on johdettu TCM:n teoriasta. Käsittelyn jälkeen ulkonäössä on merkittäviä eroja,kemiallinenKaikentyyppisten TCM:ien ainesosat, ominaisuudet ja lääketieteellinen merkitys on tunnistettu, mikä on johtanut oletukseen, että käsittely voisi parantaa tehoa tai vähentää TCM:n myrkyllisiä vaikutuksia.

Satojen vuosien ajan,Cistanche deserticola(kiinaksi Roucongrong, CD) käytetään yleisesti TCM:n kliinisessä käytännössä munuaisten toimintojen täydentämiseen. Se auttaa myös kosteuttamaan suolistoa, mikä johtaa rentouttavaan suolistoon [1].Cistancheäänitettiin ensin ShenNongBencaoJingissä. Sitä tavataan yleisesti kuivissa ja puolikuivissa elinympäristöissä Euraasiassa ja Pohjois-Afrikassa, mukaan lukien Iran, Kiina, Intia ja Mongolia [2]. CD:n prosessointi on suoritettu höyryttämällä riisi-viinin kanssa normaalipaineessa, mikä on Kiinan farmakopeassa dokumentoitu valmistusmenetelmä (kiinaksi Jiucongrong, jäljempänä "CD-NP"). Ja CD-höyrytys riisin ja viinin kanssa korkeassa paineessa on tehokkaampi valmistusmenetelmä (jäljempänä "CD-HP") [3, 4]. Useat tutkimukset ovat paljastaneet, että CD:n farmakologiset vaikutukset eroavat sen jalostettujen tuotteiden farmakologisista vaikutuksista [5]. CD voi vahvistaa munuais-yangia ja rentouttaa suolistoa, kun taas riisi-viinin höyrytyksen jälkeen munuais-yangin täydennysvaikutus vahvistuu. Aiemmassa tutkimuksessamme on havaittu, että CD-NP voi parantaa munuaisten tonisaatiota ja tukea yangia sekä lievittää suolen kostuttamisen ja ulostamisen vaikutusta [6,7,8]. Kliinisessä käytännössä jalostetut tuotteet ovat yleisimmin käytetty muoto.

Tähän mennessä useat tutkimukset ovat analysoineetkemiallinenCD:n komponentit, minkä jälkeen eristetään ja tunnistetaan yli 100 yhdistettä [9,10,11], kuten fenyylietanoidiglykosidit (PhG), iridoidit, lignaanit ja oligosakkaridit sen tärkeimpinä kemiallisina aineosina. On myös raportoitu, että PhG:illä on monia farmakologisia aktiivisuuksia, mukaan lukien immunomodulatoriset, hermostoa suojaavat, hepatoprotektiiviset, anti-inflammatoriset, antioksidanttiset jne. [12,13,14]. Iridoideilla on anti-inflammatorisia vaikutuksia [15, 16]. Aiemmat tutkimukset ovat myös paljastaneet, että jotkin kemialliset komponentit vaihtelivat käsittelyn aikana [17,18,19,20]. Näiden raporttien perusteella voidaan olettaa, että jälkikäsittelyssä vaihtelutkemiallinenkoostumus johtaa erilaisiin farmakologisiin vaikutuksiin, joita on tutkittava tarkemmin.

Tässä tutkimuksessa suoritettiin herkkä ja tehokas menetelmä eli ultrakorkean erotuskyvyn nestekromatografia yhdistettynä TOF-MSE:hen (UPLC-Q-TOF-MSE) vertailevaa analyysiä varten, ja in vitro -tutkimuksia suoritettiin uutteiden kvalitatiiviseksi analysoimiseksi. CD:n, CD-NP:n ja CD-HP:n kemiallisten profiilien selvittämiseksi. Yleensä eksogeeninenkemikaalitaltistuminen kohde-elimissä oli tehokkaita komponentteja. Siksi rotille annettiin CD:tä ja sen prosessoituja tuotteita vastaavasti suun kautta, mitä seurasi niiden karakterisointi. Nykyinen tutkimus paljastaa ensimmäistä kertaa vertailevan tutkimuksen (sekä in vitro että in vivo) raaka- ja prosessoidusta CD:stä. Saadut tulokset laajentaisivat ymmärrystämme CD-käsittelyn vaikutuksista, mikä saattaa olla hyödyksi jatkotutkimuksissa.

kemiallisten profiilien ja metaboliittien vesisäiliö

Materiaalit ja menetelmät

Materiaalit

Ajugolin (180120) ja 2'-aktyyliasetosidin (M0601AS) standardiyhdisteet toimitti Chendu Pure Chem-Standard Co., Ltd (Chengdu, Kiina). Sistanosidi F (MUST-17022620), ekinakosidi (D1105AS), sistanosidi A (M0906AS) ja isoakteosidi (M0106AS) toimitti Must-yritys (Sichuan, Kiina); akteosidi (O0618AS), salidrosidi (J0526AS), katalpoli (S0728AS), geniposidi (A0407AS) ja geniposidihappo (MB6001-S) hankittiin Dalian Meilun Bio.Co., Ltd:ltä (Dalian, Kiina). 8-epideoksilogaanihappo (B31123) hankittiin Shanghai Yuanye Biological Technology Co., Ltd:ltä Kiinasta. Metanoli ja asetonitriili olivat MS-laatua ja hankittiin Merck KGaA:lta, Darmstadt, Saksa. HPLC-laatuisen metaanihapon (CH2O2) toimitti Merck KGaA (Darmstadt, Saksa). Nykyisessä tutkimuksessa käytetty vesi prosessoitiin Milli-Q-järjestelmän kautta (18,2 MΩ, Millipore, Ma, USA). Riisiviinin toimitti Brand Tower Shaoxing Wine Co., Ltd. (Zhejiang, Kiina).

Cistanch deserticola kerättiin Neimenggu wangyedistäcistancheCo. Ltd. Näytteet tunnisti professori Yanjun Zhai (farmasian koulu, Liaoning University of TCM). Näytteet toimitettiin Liaoningin perinteisen kiinalaisen lääketieteen yliopistoon.

Eläimet

Sprague–Dawley-urosrotat (SPF-luokka), joiden kokonaispaino oli 180–220 g, toimitti Liaoning Changsheng biotechnology Co. Ltd. (Liaoningin maakunnan Laboratory Animal Resource Center, lisenssinumero: SCXK-2015–0001). Nämä rotat pidettiin kasvatushuoneessa, jossa lämpötila ja kosteus pidettiin hyvin, eli 20–26 astetta, 50–70 prosenttia viikon ajan. Rotille ruokittiin tavallista laboratorioruokaa ja vettä ennen kokeita. Eläimet paastosivat yön yli, mutta vettä annettiin ad libitum ennen koetta. Rotat teloitettiin 10-prosenttisella kloraalihydraattipuudutteella. Liaoningin provinssin kiinalaisen lääketieteen sairaalan eläinetiikkakomitea hyväksyi kaikki kokeelliset protokollat ​​(2019.3.2019, 2019015).

CD-, CD-NP- ja CD-HP-uutteen valmistus

CD-NP, CD-HP käsiteltiin samasta Cistanch deserticola -erästä. CD-NP:n valmistamiseksi kuivat CD-palat (5 mm paksu, 100 g) kostutettiin riisiviinillä (30 ml) ja niitä höyrytettiin 100 asteessa 16 tuntia, minkä jälkeen kuivattiin 55 asteessa kuivausuunissa. Samalla kun CD-HP valmistettiin suodattamalla kuiviin CD-kappaleisiin (5 mm paksu, 100 g) riisiviiniä (30 ml), mitä seurasi höyryttäminen 1,25 ilmakehän paineessa 4 tuntia. ja kuivataan sitten kuivausuunissa 55 asteessa.

100 ml:n mittapullossa yksi gramma jauhetta seulottiin seulan nro 4 läpi, minkä jälkeen lisättiin 50 % metanolia (50 ml) ja peitettiin sitten tiiviisti ja sekoitettiin. Tämä seos punnittiin ja sen jälkeen puoli tuntia. maserointi. Maseroinnin jälkeen seosta ultraääni (teho 250 W, taajuus 35 kHz) 40 minuuttia, mitä seurasi jäähdytys ja punnitus uudelleen. Painohäviötä täydennettiin 50-prosenttisella metanolilla, sekoitettiin kunnolla ja annettiin seistä, minkä jälkeen supernatantti suodatettiin ja saatua suodosta käytettiin sitten testiliuoksena.

Aktiivisten komponenttien MSE-analyysi

Standardiaineiden valmistus: tubulosidi-A (3.02 mg), ekinakosidi (3.00 mg), 2'-asetyylilakteosidi (2,34 mg), akteosidi (2,45 mg), isoakteosidi (0,61) mg), cistanosidi-F (2,14 mg), salidrosidi (3,39 mg), geniposidi (2,84 mg), ajugol (1,58 mg), katalpoli (2,39 mg), geniposidihappo (2,56 mg) ja 8-epideoksilogaanihappo (2,34 mg) lisättiin 10 ml:n mittapulloon, lisättiin metanolin vakiotilavuus mittakaavassa, konfiguroituna vastaavaksi pitoisuuden vertailuliuokseksi. Jokainen 100 µl:sta konfiguroitiin sekoitettuun vertailuliuokseen.

MS-analyysiolosuhteet: Massa-arvo korjattiin ennen koetta ja käytettiin negatiivisen ionin moodia. Massa-alue oli 50–1200 Da, ja näyte ruiskutettiin virtausinjektiopumpun läpi. Kartion nopeus oli 100 l/h, liuottimen virtausnopeus asetettiin 800 l/h. Kapillaari- ja kartiojännitteet asetettiin vastaavasti arvoon 2500 ja 40 V. Ionilähteen lämpötila oli 100 astetta ja liuotuskaasun lämpötila 400 astetta ja signaalinottotaajuus oli 0,5 S−1.

kemiallisten profiilien ja metaboliittien vesisäiliö

CD-uutteen UPLC-Q-TOF-MSE-analyysi

Kromatografiset arvioinnit suoritettiin Waters ACQUITY I-CLASS UPLC -järjestelmässä (Waters Corporation, Milford, MA, USA). Sisältää ACQUITY UPLC® BEH C18 -kolonni (50 × 2,1 mm, 1,7 μm, Waters). Liikkuva faasi koostui vedestä, jossa oli 0,1 prosenttia muurahaishappoa (A) ja asetonitriili sisältää 0,1 prosenttia muurahaishappoa (B), eluointiolosuhteet olivat seuraavat: 97 - 85 prosenttia A (0–5 min), 85 prosentista 75 prosenttiin A (5–15 min), 75 prosentista 65 prosenttiin A (15–16 min), 65 prosentista 55 prosenttiin A (16–18 min) . Virtausnopeus oli 0,3 ml min-1, kun taas automaattisen näytteenottohuoneen ja kolonnin lämpötila oli 30 astetta ja 8 astetta erikseen. Injektiotilavuus oli 1,0 µl.

Massaspektrometrinen arviointi suoritettiin Waters XEVO G{{0}}XS QTOF MS:llä (Waters Corporation, Milford, MA, USA), joka sisälsi ESI-lähteen. Typpikaasun virtausnopeudeksi asetettiin 800 L·hrs−1 lämpötilalla 400 astetta, lähdelämpötilaksi 100 astetta ja kartiokaasuksi 50 L h−1. Kartion ja kapillaarin jännite säädettiin vastaavasti arvoon 40 ja 2000 V. Rampin törmäysenergiaa käytettiin välillä 20–30 V. Kaikkien näytteiden keskiöidyt tiedot saatiin 50–1200 Da, ja 5-pyyhkäisyaika oli 0,5 s 10 minuutin analyysiajalla. . LockSpray TM:ää käytettiin massan tarkkuuden validointiin. Lukkomassana käytettiin leusiinienkefaliinin [M–H]−-ionia (200 pg·μL−1 infuusiovirtausnopeus 10 μL min−1) m/z:ssä 554,2615. MassLynx V4.1 -ohjelmistoa (Waters Co., Milford, USA) käytettiin tarkan massan, prekursori-ionien koostumuksen ja fragmentti-ionien laskemiseen.

Tietojen analysointi Masslynx-alustalla

Lisäksi perustettiin talon sisäinen kirjasto, joka sisältää yhdisteen nimen, rakenteen ja molekyylikaavan (mooleina) kirjallisuuden perusteella. Kaikki yhdisteet merkittiin erityiseen malliin, joka tehtiin Excelissä. Lisäksi paikalliselle PC:lle tallennettiin mol-tiedostot (Chemdraw Ultra 8.0, Cambridge soft, USA) ja kaikkien yksittäisten yhdisterakenteiden Excel-tiedostot. Muodostunut Excel-taulukko, jossa oli tärkeitä tietoja, tuotiin suoraan UNIFI:n tieteelliseen kirjastoon.

UNIFI 1.8.2, Waters, Manchester, UK, käytettiin rakenteellisten ominaisuuksien, erityisesti tunnusomaisten fragmenttien ja MS-fragmentaation, arvioimiseen. 2D-huipun tunnistukselle asetettiin minimihuippualue 500. 3D-huippujen paljastamisen aikana valittiin yli 300 laskun matala energiahuippuintensiteetti ja yli 80 laskun kohonnut energiahuippuintensiteetti. Massavirheen havaittiin olevan jopa ± 10 ppm tunnetuille yhdisteille, ja retentioajan toleranssiksi asetettiin ± 0,1 min. Valitsimme negatiiviset additiotuotteet, jotka sisältävät -H:n ja HCOOH:n. MS:ltä saatujen raakatietojen käsittely suoritettiin virtaviivaistetun UNIFI-ohjelmiston avulla paikantamiseksi nopeastikemiallinenkomponentit, jotka täyttivät standardit itse rakennetun tietokannan ja sisäisen perinteisen lääketieteen kirjaston avulla.

Seuraavaksi tarkistakemiallinenKunkin kohdeyhdisteen rakenteen perusteella isomeerit erotettiin niille ominaisten MS-fragmentaatiokuvioiden perusteella, jotka paljastettiin raportoiduissa tutkimuksissa, ja vertaamalla vertailustandardien retentioaikoja.

Monimuuttujatilastolliseen analyysiin perustuva aineenvaihduntaanalyysi

Ennen raakatietojen käsittelyä asetettiin parametrit, kuten massa välillä 150 - 1200 Da, retentioajan alue (0 - 20 min), kynnysintensiteetti ( 2000 counts), massatoleranssi eli 5 mDa, kun taas massa ja retentioaikaikkuna olivat 0,20 min ja 0,05 Da, vastaavasti. Seuraavassa tietokannan luettelossa ionien tunniste oli RT-m/z-parit suhteessa niiden eluointiaikaan. Samoja arvoja RT:lle ja m/z:lle eri näyteerissä pidettiin samana yhdisteenä.

Monimuuttujatilastollinen analyysi suoritettiin arvioimaan tehokkaita biomarkkereita, jotka vaikuttivat merkittävästi vaihteluihin eri ryhmien välillä. Analyysin aikana käytettiin pääkomponenttianalyysiä (PCA) osoittamaan suurimmat erot ja hahmontunnistus yleiskuvan ja luokituksen saamiseksi. OPLS-DA on mallinnustyökalu, joka visualisoi OPLS-DA:n ennakoivan komponentin latauksen mallin arvioinnin avuksi. Eri komponenttien arvioinnissa käytettiin muuttuvaa merkitystä projektiolle (VIP).metaboliititwith VIP values >1.0 ja P-arvo< 0.05 were="" regarded="" as="" effective="" markers.="" furthermore,="" a="" permutation="" test="" was="" conducted="" for="" providing="" reference="" distributions="" for="" the="" r2/q2="" values="" that="" could="" show="" the="" statistical="">

kemiallisten profiilien ja metaboliittien vesisäiliö

Eläinkokeet

Rotat luokiteltiin satunnaisesti neljään ryhmään (n = 6 kullekin ryhmälle), minkä jälkeen annettiin erilaisia ​​uutteita suun kautta: (1) Tyhjä kontrolliryhmä: rotille annettiin normaalia suolaliuosta (2 ml/100 g); (2) CD-ryhmä: rotille annettiin CD-uutetta (2 ml/100 g); (3) CD-NP-ryhmä: rotille annettiin CD-NP-uutetta (2 ml/100 g); (4) CD-HP-ryhmä: rotille annettiin CD-HP-uutetta (2 ml/100 g). Kaikkien ryhmien lisäluokittelu suoritettiin kolmeen alaryhmään plasman, virtsan ja ulosteiden osalta. Kaksi tuntia myöhemmin kullekin rotalle annettiin suun kautta sama ja sama määrä uutteita.

Annon jälkeen verinäytteet otettiin 1.0 h, 20 h ja 4.0 h heparinisoiduissa 1,5 ml:n polyeteeniputkissa (orbitaalisuonista) ja sen jälkeen kaikkien näytteiden sentrifugointi (4500 rpm) 15 minuutin ajan.

Virtsa- ja ulostenäytteitä varten rottia pidettiin aineenvaihduntahäkeissä, minkä jälkeen virtsa- ja ulostenäytteitä kerättiin 24 tunnin ajan antamisen jälkeen. Virtsanäytteiden sentrifugointi suoritettiin nopeudella 4500 rpm 15 minuutin ajan, samalla kun ulostenäytteet kuivattiin varjossa, jauhettiin jauheeksi, sitten otettiin 0,2 g ja lisättiin 0,5 ml:aan suolaliuosta. liuoksella, ultraäänellä 5 minuuttia ja sentrifugoitiin 12,000 rpm 15 minuuttia. Kaikki bionäytteet pidettiin -80 asteessa analyysiin asti.

Biologisten näytteiden valmistus

Plasma-, virtsa- ja ulostenäytteiden lisääminen suoritettiin 3 tilavuudella metanolia, mitä seurasi vorteksointi 3 minuutin ajan. Seuraavaksi seosten sentrifugointia (12, 000 rpm) suoritettiin 10 minuutin ajan, minkä jälkeen supernatantti siirrettiin EP-putkeen ja kuivattiin sitten typellä 37 asteessa. Lisäksi lisättiin 200 µl HCN-H2O (50 prosenttia) liuosta. Sitten pyörteellä sekoitettiin (1 min), minkä jälkeen sentrifugoitiin (12, 000 rpm) 5 min. Käsiteltyjen näytteiden supernatantti (5 µl) injektoitiin UPLC-Q-TOF-MSE-järjestelmään.

Nestekromatografiset ja massaspektrometriset olosuhteet

Analyysi vartenmetaboliititsuoritettiin myös Waters UPLC -laitteella ESI-liitännän kautta. Erotus suoritettiin käyttämällä Acquity UPLC HSS T3 -kolonnia (100 mm × 2,1 mm, 1,8 µm), liikkuva faasi oli 0,1 prosenttia muurahaishappoa (A): Asetonitriili (B), gradienttieluointiolosuhteet olivat 0–3 minuuttia (99,8 prosenttia → 98 prosenttia A), 3–5 minuuttia (98 prosenttia → 95 prosenttia A), 5–8 minuuttia (95 prosenttia → 90 prosenttia A), 8 –12 minuuttia (90 prosenttia → 85 prosenttia A), 12–17 minuuttia (85 prosenttia → 70 prosenttia A), 17–22 minuuttia (70 prosenttia → 60 prosenttia A), 22–23 minuuttia (60 prosenttia → 58 prosenttia A) , 23–25 min (58 prosenttia A), 25–32 min (58 prosenttia → 45 prosenttia A) ja 32–37 min (45 prosenttia → 35 prosenttia A), 0,4 ml min-1 oli virtausnopeus. Kolonnin ja näytehuoneen lämpötila asetettiin vastaavasti 40 asteeseen ja 8 asteeseen. Käytettiin edellä mainittuja massaspektrometriaolosuhteita.

Strategia metaboliittien systemaattiselle analyysille bionäytteissä

Tietojen käsittelyyn käytettiin UNIFI (1.8.2) -ohjelmistoa. Binary Compare -toimintoa käytettiin tehokkaiden metaboliittien tunnistamiseen. Arvioituja metaboliitteja ei ollut vastaavassa kontrollinäytteessä tai niitä on alhaisilla ioni-intensiteeteillä. Suhteellisen intensiteetin kynnysarvoksi asetettiin 3 tai 5 jametaboliititjotka täyttivät alleviivatut kriteerit, voidaan arvioida. Yleistä ja ennustettavaametaboliititEIC määritti ne. Kaksifaasisten metaboliittien etsimiseen käytettiin NLF-funktiota. Esimerkiksi UNIFI-ohjelmistossa parametrit voidaan asettaa arvoon 176.0321 mahdollisten glukuronihappokonjugaattien etsimiseksi. Jälkikäsittelyssä menetelmässä voidaan asettaa tai tunnistaa neutraali häviö. MassFragmentia käytettiin havaitun määrittämiseen tai karakterisointiinmetaboliitit' rakenteiden, UNIFI:n spektritulkintatoiminto on päätoiminto, jota käytetään emokomponenttien sekundaarisen fragmentoitumisen analysointiin. Tätä toimintoa voidaan käyttää pirstoutumispolun nopeaan tarkistamiseen, onko se järkevää.

kemiallisten profiilien ja metaboliittien vesisäiliö

Tulokset

Fenyylietanoidiglykosidien ja iridoidien massafragmentointisääntö

Fenyylietanoliglykosidit ovat tärkeimmätkemiallinenCD:n ainesosat. Otettiin isoakteosidin, cistanosidi F:n, tubulosidi A:n, ekinakosidin, akteosidin ja 2'-aktyylilakteosidin standardiliuokset, minkä jälkeen saatiin aikaan eri tasoiset törmäysenergiat (taulukko 1), ja sitten saatiin vastaavat MS2-kartat (kuva 1). .

Kuva 1 Fenyylietanoidiglykosidien massaspektrogrammi ja pilkkoutumisreitti. A isoakteosidi; B-kistanosidiF; C tubulosidiA; D ekinakteosidi; E akteosidi; F 2'-aktyylilakteosidi

Taulukko 1 Standardiaineiden törmäysenergia

Massaspektrometrinen analyysi paljasti, että fenyylietanoidiglykosideilla on samanlaiset massaspektrin fragmentaatiokuviot. Negatiivisen ionin muodon pilkkoutumisreittejä ovat pääasiassa: (1) Esterisidoksen katkeaminen: neutraalin kofeoyyliryhmän (C9H3O6, 162.03) ja neutraalin asetyyliryhmän (C2H2O) häviäminen. , 42.{10}}); (2) Glykosidinen pilkkoutuminen: neutraalien ramnoositähteiden (C6H10O4, 146,05) ja neutraalin glukoosijäännöksen (C6H10O5, 162,05) häviäminen. Korkearesoluutioisesta massaspektrometriasta voitiin erottaa kofeoyyli (162,03) ja glukoosijäännös (162,05).

Iridoidien ajugol-, katalpoli-, geniposidihapon, geniposidin ja 8-epideoksilogaanihapon standardiliuokset otettiin, minkä jälkeen saatiin erilaisia ​​törmäysenergioita, ja saatiin vastaavat MS2-kartat (kuva 2).

Kuva 2 Iridoidiglykosidien massaspektrogrammi ja pilkkoutumisreitti. A-ajugoli, B-katalpoli, C-geniposidiinihappo, D-geniposidi, E-8-epideoksilogaanihappo

Iridoidiglykosideilla on samanlaiset massaspektrin fragmentaatiokuviot, katkaisureittejä negatiivisen ionin tilassa ovat pääasiassa (1) Glykosidinen pilkkominen: neutraalin glukoosijäännöksen menetys (C6H10O5, 162,05); (2) Neutraalin CO2:n (43,99) ja H2O:n (18,01) menetys.

Yhdisteiden tunnistaminen CD-, CD-NP- ja CD-HP-uutteista

UPLC-QTOF-MS E-analyysi

Kromatografisten olosuhteiden optimointi suoritettiin. Seuraavaksi yhdisteetCistancheHerba arvioitiin sekä negatiivisessa että positiivisessa ionimoodissa sekä korkeilla että pienillä CE-arvoilla. Saadut tulokset paljastivat, että näiden yhdisteiden negatiivisen muodon yhteensopivuus oli suurempi verrattuna positiiviseen muotoon. Kuvio 3 esitti MS-perushuippu-ioni (BPI) -kromatogrammin, joka oli merkitty numeroituilla huipuilla. Kunkin havaitun ionin intensiteetti UPLC-Q-TOF-MSE-analyysissä normalisoitiin suhteessa koko ionimäärään datamatriisin muodostamiseksi, joka matriisi käsitti m/z-arvon, normalisoidun piikin alueen ja retentioajan.

Kuva 3 Näytteiden perushuippuintensiteetti (BPI). 1.CD, 2. CD-NP, 3. CD-HP

CD-levyltä ja sen prosessoitujen tuotteiden komponenttien arviointi UNIFI-alustalla

Yhteensä 97 yhdistettä tunnistettiin -SEM (n = 6) -moodilla CD:stä ja sen jalostetusta tuotteesta (taulukko 2), mukaan lukien fenyylietanoidiglykosidit (PhG:t), iridoidit, lignaanit ja oligosakkaridit. 95, 91 ja 94 komponentit havaittiin CD:ssä, CD-NP:ssä ja CD-HP:ssä vastaavasti. Niistä 64 oli fenyylietanoideja, 13 iridoideja ja 20 muuntyyppistä yhdistettä. Siinä oli yhtäläisyyttäkemiallinenCD:n ja sen jalostetun tuotteen koostumuksesta kuitenkin havaittiin, että komponenttien määrä poikkesi CD:n ja sen jalostetun tuotteen välillä.

Taulukko 2 CD:stä ja sen jalostetuista tuotteista saatujen yhdisteiden arviointi UPLC-Q-TOF-MSE:llä

Variaatioita sisäänkemiallinenjalostettujen tuotteiden komponentit

Simca-P 13.0 -ohjelmistoa käytettiin monimuuttujamatriisin analysointiin. Ennen PCA:ta kaikki muuttujat olivat keskiarvokeskeisiä ja pareto-skaalattuja, minkä jälkeen tunnistettiin mahdolliset erottelevat muuttujat. PCA-pisteytyskaaviossa jokainen piste osoitti yksittäisen näytteen. Näytteet, jotka osoittivat samankaltaisuuttakemiallinenkomponentit olivat hajallaan vierekkäin, kun taas ne, jotka osoittivat vaihtelua komponenteissaan, jaettiin. Kuten PCA:sta nähdään (kuvio 4), CD-HP:n ryhmä erotettiin CD- ja CD-NP-ryhmistä.

Kuva 4 CD:n ja sen eri käsiteltyjen tuotteiden PCA

To distinguish CD from CD-HP and CD-NP, OPLS-DA, permutation test, S-plot, and VIP value were developed. (Figs. 5, 6, 7) The obtained results revealed that many components were key characteristic components of each product. The screening condition was the VIP >1 ja P< 0.05. from="" the="" date="" of="" the="" s-plot,="" the="" characteristic="" components="" were="" evaluated,="" which="" were="" commonly="" existing="" in="" the="" three="">

Kuva 5 OPLS-DA/permutaatiotesti/S-kuvaaja/lämpökartta, joka osoittaa mahdollisten biomarkkerien intensiteetit CD-NP:n ja CD-HP:n välillä, yhdisteet 9, 10, 14, 32, 59, 60, 68, 70, 74, 75, 80, 81, 82 ja 84 ovat CD-NP:n differentiaalikomponentteja, kun taas yhdisteet 11, 15, 16, 45, 48, 66 ja 72 ovat CD-HP:n differentiaalikomponentteja.

Kuva 6 OPLS-DA /permutaatiotesti / S-plot / lämpökartat, jotka osoittavat tehokkaiden biomarkkerien intensiteetit CD:n ja CD-NP:n välillä. Yhdisteet 13, 15, 16, 37, 49, 63, 66, 72, 74, 75 ja 85 ovat CD:n differentiaalikomponentteja, kun taas yhdisteet 10, 11, 32, 59, 60, 68, 70, 71, 80, 81 ja 82 ovat CD-NP:n differentiaalikomponentteja.

Kuva 7 OPLS-DA/permutaatiotesti/S-plot/lämpökartat, jotka paljastavat CD- ja CD-HP-yhdisteiden 9, 14, 16, 59, 63, 66, 72, 74, 75, 80, 82 välisten tehokkaiden biomarkkerien intensiteetit , 84, 85 ja 94 ovat CD:n differentiaalikomponentteja ja 11, 15, 45, 49, 50, 60 ja 71 ovat CD-HP:n differentiaalikomponentteja.

Kuvasta 8 havaitsimme akteosidin (54), cistanosidi C:n (74), kampneosidi II:n (43), osmantusidin (75) ja 2'-aktyylilakteosidin (80) intensiteetin, joissa on 4'-O-kofeoyyliryhmä. 8-O- -D-glukopyranosyyliosa (katso kuva 9) väheni sen jälkeen, kun se oli käsitelty riisiviinillä, kun taas isoasetosidin (60), isosistanosidin (71), isokampneosidi I:n (69) intensiteetti isomartynosidi (86), jossa on 6'-O-kofeoyyliryhmä (katso kuva 9), lisääntyi, erityisesti CD-NP-ryhmässä. Vaikka tubulosidi B (72), jossa on 6'-O-kofeoyyliryhmä, sama kuin isoakteosidi, intensiteetti laski sen 2'-aktyyliryhmän vuoksi. Ekinakosidin (38) ja 6'-O- -D-glukopyranosyyliryhmäryhmiä sisältävän cistanosidi B:n intensiteetti kasvoi, mutta tubulosidi A:n (55) intensiteetti laski myös sen 2'-aktyyliryhmän vuoksi.

Kuva 8 Pääasiassa PhG:iden intensiteetti CD:ssä ja sen jalostetuissa tuotteissa

Kuva 9KemiallinenPääosin PhG:n rakenteet CD:ssä ja sen jalostetuissa tuotteissa.

Tutkimusryhmämme tutki myös akteosidin ja isoakteosidin lämpöstabiilisuutta ja havaitsi, että akteosidi oli epästabiili vedessä, metanolissa ja keltaisessa riisiviiniliuoksessa, ja se voi muuttua isoakteosidiksi osittain kuumennettaessa. Isoakteosidin lämpöstabiilisuus oli kuitenkin parempi, varsinkin keltaisessa riisiviiniliuoksessa. Kuva 10 osoitti PhG:iden mahdolliset muutokset CD:ssä käsittelyn aikana:

Kuva 10 PhG:iden mahdollinen reaktio käsittelyn aikana

Metaboliittien tunnistaminen rotilla

Tarkka molekyylipaino ja alkuainekoostumus korkearesoluutioisista massaspektrometriatiedoistametaboliititja protomolekyyliyhdisteitä analysoitiin ja verrattiin. Koska samantyyppiset yhdisteet TCM:ssä osoittivat samankaltaisuutta metabolisissa modifikaatioissa, fytokemiallisten aineosien korrelaatiot in vitro voivat ulottua niiden metaboliitteihin in vivo. Samaan aikaan tavanomaisten biotransformaatioreittien perusteella pääteltiin kohtuullinen molekyylipainon muutos. Lopuksi,metaboliitittunnistettiin analysoimalla metaboliittien ja protoyhdisteiden fragmentaatioreitin MSE-massaspektrit massaspektrissä [21, 22]. Nollanäytteeseen verrattuna sen komponentit tunnistettiin in vivo kromatogrammi-massaspektrin antamien tietojen, metabolisen reaktion mahdollisuuden, yhdisteen rakenteen ominaisuuksien ja sen massaspektrin fragmentaatiosäännön perusteella. Katso taulukko 3.

Taulukko 3 TunnistettuMetaboliititvesipitoisen uutteen plasmassa, virtsassa ja ulosteissa CD:ssä ja sen jalostetuissa tuotteissa

Fenyylietanoliglykosideihin liittyvien metaboliittien tunnistaminen

Käsittelyyn käytettiin UNIFI-alustaa. Kuva 11 esitti virtsan, ulosteiden ja plasman TIC-kromatografia CD:lle ja sen jalostetuille tuotteille. Nollanäytteisiin verrattuna rotissa tunnistettiin yhteensä 54 metaboliittia, mukaan lukien 10 prototyyppikomponenttia ja 44metaboliitit, jossa 24, 49 ja 6 oli vastaavasti ulosteessa, virtsassa ja plasmassa.

Kuva 11 TIC:n kromatografi. Virtsanäyte BC-ryhmässä; B Virtsanäyte CD-ryhmässä; C Virtsanäyte CD-NP-ryhmässä; D Virtsanäyte CD-HP-ryhmässä; E Ulostenäyte BC-ryhmässä; F Ulostenäyte CD-ryhmässä; G Ulostenäyte CD-NP-ryhmässä; H Ulostenäyte CD-HP-ryhmässä; I Plasmanäyte BC-ryhmässä; J Plasmanäyte CD-ryhmässä; K Plasmanäyte CD-NP-ryhmässä; M Plasmanäyte CD-HP-ryhmässä

Tarkkaan massan, fragmentaatiokaskadin ja biotransformaation ennustettavissa olevien neutraalien häviöiden perusteella yhteensä 35 fenyylietanoidiglykosidia liittyymetaboliititarvioitiin alustavasti. Fenyylietanoidiglykosidien sukulaismetaboliiteilla on samanlaiset massaspektrin fragmentaatiokuviot, kuten tyypillinen dekofeoyylifragmentti m/z 461,1605, minkä jälkeen ne hydrolysoituvat edelleen glykosidi- ja esterisidoksilla in vivo ja metaboloituvat hydroksityrosoliksi (HT) (m/). z 153,0504, C8H1003, 4,73 min) ja kahvihappo (CA) (m/z 179,0389, C9H7O4, 0,77 min), katso kuva 12A.

M11 osoitti [M–H]− m/z:ssä 153,0504 kaavalla eli C8H10O3 ja tunnistettiin HT:ksi. M16 esitti [M–H]− m/z:ssä 329,0851, joka oli 176 Da korkeampi kuin HT:n, mikä paljastaa, että se saattaa olla HT:n glukuronidoitunut metaboliitti. M26:n [M–H]− oli m/z:ssä 343,1037, 14 Da korkeampi kuin HT-glukuronidin. Siksi M26 tunnistettiin HT-metyloituneeksi glukuronidiksi. M17 tunnistettiin HT-sulfaatiksi perustuen sen [M–H]−-arvoon m/z 233,0112, 80 Da HT:n yläpuolelle, joka voitiin edelleen metyloida, minkä jälkeen tuotettiin M22, jonka m/z oli 247,0278, mikä osoittaa, että se oli HT-metyloitu sulfatoitumetaboliitti. M7 (m/z 167,0335) ja M5 (m/z 167,0762) katsottiin hapettumistuotteiksi ja metyloituneeksi HT:ksi, vastaavasti (kuvio 12B).

M1 osoitti [M–H]− m/z:ssä 179,0389, selvitetty molekyylikaava oli C9H7O4 ja tunnistettiin kahvihapoksi (CA). M25 paljasti [M–H]− m/z:ssä 355,0704, jotka olivat 176 Da kohonneet kuin CA:n, osoittaa, että se saattaa olla glukuronidoitumetaboliittiCA. M27:n m/z oli 258,994, mikä oli 80 Da korkeampi kuin CA:lla, joten selvitimme sen CA-sulfaatiksi ja se saattoi tuottaa M35:tä (m/z 273,0064). Koska M4 antaa [M–H]−:n m/z:ssä 193,0524, 14 Da korkeampi kuin CA, se tunnistettiin CA-metyloituneeksi metaboliitiksi. M39 oli CA-dehydroksylaatiometaboliitti, m/z 163,04, ja se voitaisiin sulfatoida M32:ksi (m/z 242,9951).

M33 (m/z 181.0491, C9H10O4, 9,06 min) oli CA:n pelkistystuote eli 3,4-dihydroksibentseenipropionihappo, joka voitiin metyloida M19:ksi (m/z 195,0623, C10H12O4, 0,93 min). M33 voitaisiin dehydroksoida M43:ksi, eli 3-HPP:ksi (m/z 165,0558, C9H10O3, 11,29 min) ja M31:ksi (m/z 341,0942, C15H17O9, 8,90 min) ja M29:ksi (m/z, 0,6,1025 8,52 min) olivat glukuronidoituja ja sulfatoituja tuotteita (kuvio 12C).

Fenyylietanoidiglykosideihin liittyvillemetaboliitit, tärkeimmät aineenvaihduntasarjat olivat faasin II metaboliset reaktiot, eli glukuronidaatio, metylaatio ja sulfaatio. Fenyylietanoidien ehdotetut metaboliset kaskadit on kuvattu kuvassa 13.

Kuva 12 Joidenkin massaspektrimetaboliititCD-levyillä

Kuva 13 Mahdollinen fenyylietanoidien aineenvaihduntareitti

Iridoideihin liittyvien metaboliittien tunnistaminen

Analysoimalla alkuainekoostumustametaboliitit, MSE-fragmentoituminen ja siihen liittyvä kirjallisuus, yhteensä 19 iridoidiin liittyvää metaboliittia arvioitiin alustavasti. Iridoidiglykosidit hydrolysoitiin glykosidisidoksilla, jolloin muodostui niitä vastaavia aglykoneja. M/z 185,117 oli M8:lle, 162 Da pienempi kuin ajugolilla, joka saatiin glukoosijäämän häviämisen vuoksi.

M40 (m/z 199,0641, Rt 10,91 min) oli katalpolin deglykosyloitunut tuote. M45 m/z 169,0487, Rt 12,15 min) oli alle 30 Da katalpolin deglykosyloidunmetaboliitti, ja sen tunnistettiin poistavan CH2O-metaboliitin molekyylin. M34 (m/z 151,0352, Rt 9,08 min) oli edelleen H2O-häviömetaboliitti.

M44 (m/z 211,0665, Rt 11,31 min) oli geniposidin deglykosyloitunut metaboliitti ja M37 (m/z 197,0833, Rt 15,03 min) oli 8-epideoksylogaanihapon deglykosylaatio. Iridoidien aineenvaihduntareaktiot voidaan paljastaa deglykosylaation faasin I metaboliana (kuvio 12D).

Plasman, virtsan ja ulosteiden metabolisen profiloinnin vertailu CD:n ja sen jalostettujen tuotteiden välillä

Verrattiin 2 prototyyppiä plasmassa, 7 virtsassa ja 3 ulosteessa. CD:ssä oli 7 prototyyppiä, CD-NP:ssä 7 prototyyppiä ja CD-HP:ssä 8 prototyyppiä. M21 havaittiin vain CD-NP:n ulosteryhmässä, ja M38 ja M51 havaittiin vain CD-HP:n virtsaryhmissä. Verrattuna metaboliitteihin, identtinenmetaboliititplasmassa, virtsassa ja ulosteessa olivat 4, 42 ja 21. CD-ryhmässä imeytyi 34 metaboliittia, CD-NP-ryhmässä 39 ja CD-HP-ryhmässä 40 metaboliittia. M5, M7, M40 ja M52 havaittiin vain CD-NP-ryhmissä, kun taas M24, M41 ja M48 havaittiin juuri CD-HP-ryhmissä.

Vaikuttavien yhdisteiden imeytymisessä ja metaboliassa havaittiin vaihtelua erilaisissa CD:n jalostetuissa tuotteissa. Kuvasta 14 havaitsimme, että HT-sulfaattikonjugaatio (M17) oli suurin virtsassa, jota seurasi 3-HPP-sulfaattikonjugaatio (M29), metyloitu HT-sulfaattikonjugaatio (M22), dehydroksyloitu CA-sulfaatti konjugaatio (M32) ja 3,4-dihydroksibentseenipropionihapposulfaattikonjugaatio (M19). Aineenvaihduntatuotteiden pitoisuus prosessoidussa ryhmässä oli korkeampi kuin CD-ryhmässä, erityisesti M22, M29, M27, M16, M19, M1, M2. Niiden esiasteyhdisteillä, kuten hydroksityrosolilla, on kasvaimia estäviä, tulehdusta ehkäiseviä, antibakteerisia, viruksia ja sieniä torjuvia ominaisuuksia [23]. Kofeiinihapolla on anti-inflammatorisia, syöpää ja viruksia estäviä vaikutuksia [24]. Se oli yhdenmukainen CD:n ja sen jalostettujen tuotteiden kliinisen käytön kanssa.

Keskustelu

CD on TCM, ja sen tärkeimmät bioaktiiviset komponentit, mukaan lukien PhG:t, iridoidit ja polysakkaridit, on dokumentoitu useissa tutkimuksissa. TCM:n kliinisessä käytännössä CD:n jalostettuja tuotteita on käytetty laajalti raaka-aineisiin verrattuna. Thekemiallinenkoostumus muuttuu käsittelyn aikana, mikä voi johtaa muutoksiin lääkevaikutuksissa (kuva 14).

Kuva 14 Päävirran intensiteettimetaboliititvirtsassa

PhG:t ovat fenoliyhdisteiden tyyppi, jolle on tunnusomaista -glukopyranosidirakenne, jossa on aglykonina hydroksifenyylietyyliosa. Nämä yhdisteet käsittävät usein kofeiinihappoa ja ramnoosia, jotka on kiinnittynyt glukoosijäännökseen esteri- tai glykosidisidosten kautta, vastaavasti. Tässä tutkimuksessa suoritettiin CD:n, CD-NP:n ja CD-HP:n kvalitatiiviset analyysit ja tunnistettiin yhteensä 97 yhdistettä, mukaan lukien fenyylietanoidiglykosidit (PhG:t), iridoidit jne.. Saadut tulokset osoittivat vaihtelutkemiallinenkoostumus ennen ja jälkeen käsittelyn. PhG:iden, joissa on 4'-O-kofeoyyliryhmä 8-O- -D-glukopyranosyyliosassa, kuten akteosidi, cistanosidi C, kampneosidi II, osmantusidi, intensiteetti laski käsittelyn jälkeen, kun taas PhG:t, joissa oli 6 '-O-kofeoyyliryhmä 8-O- -D-glukopyranosyyliosassa, kuten isoasetosidi, isosistanosidi, isokampneosidi I, isomartynosidi lisääntyivät erityisesti CD-NP-ryhmässä. Myös ekinakosidin ja cistanosidi B:n, joiden rakenteessa on 6'-O- -D-glukopyranosyyliosa, intensiteetti kasvoi. PhG:t, joissa on 2'-aktyyliryhmä, vähenivät usein prosessin aikana tapahtuneen hydrososireaktion vuoksi, kuten tubulosidi B, 2-asetyylilakteosidi.

Tutkimusmetaboliititimeytynyt in vivo suoritettiin CD:n ja sen prosessoitujen tuotteiden oraalisen antamisen jälkeen. Vaiheen II aineenvaihduntaprosessit olivat keskeisiä kaskadeja, ja suurin osa metaboliiteista oli sulfaattia, glukuronidia ja metyloituja konjugaatteja. Fenyylietanoliglykosideilla on alhainen oraalinen imeytyminen ja hyötykäyttö. Niitä on vaikea imeytyä vereen, ja ne toimivat progenitoreina toimiessaan aineenvaihdunnan aktivoinnin jälkeen in vivo. Fenyylietanoliglykoniksi muodostuvat fenyylietanoidit, kuten hydroksityrosiini (HT) ja kofeiinihappo (CA) ja sen johdannainen 3-hydroksifenyylipropionihappo (3-HPP), nämä metaboliitit voivat imeytyä helpommin plasmaan ja niillä on parempi lääkeaine. vaikutus.

Suurin osametaboliitithavaittiin pienempinä pitoisuuksina tai niitä ei havaittu rotan plasmassa, mutta korkeampi pitoisuus havaittiin virtsassa, mikä viittaa siihen, että metaboliitit poistuisivat helposti virtsan mukana. Kuten taulukosta 3 on kuvattu, samat yhdisteet määritettiin eri ryhmissä, kun taas huomattavia vaihteluita havaittiin pitoisuuksissa.metaboliititmikä saattaa liittyä CD:n ja sen jalostettujen tuotteiden epätasa-arvoiseen tehokkuuteen. HT-sulfaattikonjugaatio (M17) on voimakkain virtsassa, jota seuraa 3-HPP-sulfaattikonjugaatio (M29), metyloitu HT-sulfaattikonjugaatio (M22), dehydroksyloitu CA-sulfaattikonjugaatio (M32) ja 3,{{ 7}}dihydroksibentseenipropionihapposulfaattikonjugaatio (M19). Aineenvaihduntatuotteiden pitoisuus prosessoidussa ryhmässä oli korkeampi kuin CD-ryhmässä, erityisesti M22, M29, M27, M16, M19, M1, M2.

Yleensä komponentit, joilla on suuri altistuminen kohde-elimissä, voivat olla tehokkaita. Fenyylietanoideja ja niiden johdannaisia ​​on arvioitu ja määritetty riittävä määrä in vitro. Akteosidi on tunnusomaisia ​​yhdisteitä, joiden pitoisuus pieneni riisi-viinikäsittelyn jälkeen ja vastaavasti isoakteosidin, isosistanosidi C:n, isokampneosidi I:n pitoisuus nousi. PhG-yhdisteiden, kuten CA- ja HT-johdannaisten, hajoamistuotteet voidaan arvioida bionäytteissä, ja riisi-viinin prosessointi voi tehostaa riisin imeytymistä.metaboliititin vivo.

Johtopäätös

Tässä tutkimuksessa CD:n ja sen jalostetun tuotteen uutteista havaittiin 97 yhdistettä. Muutaman glykosidien hajoaminen tapahtui korotetussa lämpötilassa ja sen seurauksena syntetisoitiin joitain uusia isomeerejä ja komplekseja. In vivo -tutkimus, prototyyppikomponentit (10) jametaboliitit(44) määritettiin tai arvioitiin alustavasti rotan plasmasta, ulosteista ja virtsasta. Vaiheen II aineenvaihduntaprosessit olivat tärkeimmät kaskadit, useimmatmetaboliitityhdistettiin ekinakosidiin tai akteosidiin, kuten HT, CA ja niiden johdannaiset 3-hydroksifenyylipropionihappo 3-HPP. Nämä metaboliitit voivat imeytyä helpommin plasmaan ja niillä on parempi lääkevaikutus. Saadut tulokset osoittivat, ettäkemiallinenCD:n koostumus oli erilainen ja vaikutti yhdisteen jakautumiseen in vitro ja in vivo.

Tietojen ja materiaalien saatavuus

Tämän tutkimuksen aikana käytetyt ja/tai analysoidut aineistot ovat saatavilla vastaavalta tekijältä kohtuullisesta pyynnöstä.

Lyhenteet

PhG:t: Fenyylietanoliglykosidit

CD:Cistanche deserticola

CMM: Kiinalainen Materia Medica

TCM: Perinteinen kiinalainen lääketiede

CD-NP:Cistanche deserticolaKäsitelty höyryttämällä riisiviinin kanssa normaalipaineessa

CD-HP:Cistanche deserticolaKäsitelty höyryttämällä riisiviinin kanssa korkeassa paineessa

UPLC-Q-TOF-MSE: Erittäin korkean suorituskyvyn nestekromatografia yhdistettynä TOF-MSE:hen

PCA: Pääkomponenttianalyysi

VIP: Vaihtuva merkitys projektiolle

CA: Kahvihappo

HA: Hydroksityrosoli

Tutkimus kemiallisten profiilien ja aineenvaihduntatuotteiden cistanchesta

Viitteet

1. Kiinan farmakopeakomissio. Pharmacopeia of The People's Republic of China, voi. I. Peking: Kiina Medical Science Press; 2020. s. 140.

2. Li Z, Lin H, Gu L, Gao J, Tzeng CM. HerbaCistanche(Rou Cong-Rong): yksi perinteisen kiinalaisen lääketieteen parhaista farmaseuttisista lahjoista. Front Pharmacol. 2016; 7:41.

3. Liu BN, Shi J, Zhang C, Li Z, Hua Y, Liu PP, Jia TZ. Freshille erilaisten kuivauskäsittelymenetelmien vaikutuksetCistanche deserticolasen komponenttien sisällöstä. J Chin Med Mater. 2020;10:2414–8.

4. Liu BN, Shi J, Jia TZ, Lv TT, Li Z. Korkeapaineisen höyrytysprosessin optimointi Cistanches Herballe. Chin Trad Patent Med. 2019;11:2576–80.

5. Fan YN, Huang YQ, Jia TZ, Wang J, La-Sika, Shi J. Effects ofCistanchesherba ennen ja jälkeen käsittelyn D-galaktoosin aiheuttamien ikääntyvien rottien ikääntymistä estävästä toiminnasta ja immuunitoiminnasta. Chin Arch Trad Chin Med, 2017; 11:2882–2885.

6. Gao YJ, Jiang Y, Dai F, Han ZL, Liu HY, Bao Z, Zhang TM, Tu PF. Tutkimus laksatiivisista aineosista Cistanche deserticolassa YC Ma. Modern Chin Med. 2015;17(4):307–10.

7. Liu BN, Shi J, Li Z, Zhang C, Liu P, Yao W, Jia T. Tutkimus neuroendokriinis-immuunitoiminnastaCistanche deserticolaja sen riisiviinin höyrytystuotteet glukokortikoidi-indusoidussa rottamallissa. Evid Based Complement Alternative Med. 2020;22:5321976.

8. Guo Y, Wang L, Li Q, Zhao C, He P, Ma X. Munuaisten virkistävän toiminnan tehostaminen hiirimallissa Cistanches herballa, joka kuivattiin nopeasti keskikorkeassa lämpötilassa. J Med Food. 2019;22(12):1246–53.

9. Wang T, Zhang X, Xie W.Cistanche deserticolaYC Ma, "Desert ginseng": arvostelu. Am J Chin Med. 2012;40(6):1123–41.

10. Fu Z, Fan X, Wang X, Gao X. Cistanches Herba: Yleiskatsaus sen kemialliseen, farmakologiseen ja farmakokinetiikkaan. J Etnopharmacol. 2018; 219:233–47.

11. Lei H, Wang X, Zhang Y, Cheng T, Mi R, Xu X, Zu X, Zhang W. HerbaCistanche(Rou Cong Rong): katsaus sen fytokemiaan ja farmakologiaan. Chem Pharm Bull. 2020;68(8):694–712.

12. Geng X, Tian X, Tu P, Pu X. Ekinakosidin neuroprotektiiviset vaikutukset Parkinsonin taudin hiiren MPTP-mallissa. Eur J Pharmacol. 2007; 564:66–74.

13. Deng M, Zhao JY, Ju XD, Tu PF, Jiang Y, Li ZB. Tubulosidi B:n suojaava vaikutus TNF-alfan aiheuttamaan apoptoosiin hermosoluissa. Acta Pharmacol Sin. 2004;25(10):1276–84.

14. Nan ZD, Zhao MB, Zeng KW, Tian SH, Wang WN, Jiang Y, Tu PF. Anti-inflammatoriset iridoidit varrestaCistanche deserticolaviljelty Tarimin autiomaassa. Chin J Nat Med. 2016;14(1):61–5.

15. Nan ZD, Zeng KW, Shi SP, Zhao MB, Jiang Y, Tu PF. Tarimin autiomaassa viljellyn Cistanche deserticolan varresta peräisin olevat fenyylietanoidiglykosidit, joilla on anti-inflammatorisia vaikutuksia. Fitoterapia. 2013;89:167–74.

16. Morikawa T, Pan Y, Ninomiya K, Imura K, Yuan D, Yoshikawa M, Hayakawa T, Muraoka O. Iridoidit ja asykliset monoterpeeniglykosidit, kankanosidit L, M, N, O ja P alkaenCistanchetubulosa. Chem Pharm Bull. 2010;58(10):1403–7.

17. Li SL, Song JZ, Qiao CF, et ai. Uusi strategia potentiaalin nopeaan tutkimiseenkemiallinenmarkkereita raaka- ja prosessoitujen Radix Rehmanniaen erottelulle UHPLC-TOF-MS:llä monimuuttujatilastoanalyysillä. J Pharm Biomed Anal. 2010;51(4):812–23.

18. Peng F, Chen J, Wang X, Xu CQ, Liu TN, Xu R. Muutokset fenyylietanoidiglykosidien tasoissa, antioksidanttiaktiivisuudessa ja muissa laatuominaisuuksissaCistanche deserticolaviipaleet höyrykäsittelyllä. Chem Pharm Bull. 2016;64:1024–30.

19. Ma ZG, Tan YX. Kuuden fenyylietanoliglykosidin sisältö muuttuu höyrytyksen aikana viinin kanssa Desertliving Cistanchessa. Chin Trad Patent Med. 2011;33(11):1951–4.

20. Peng F, Xu R, Wang X, Xu C, Liu T, Chen J. Höyrytysprosessin vaikutus sadonkorjuun jälkeiseen laatuuncistanche deserticolalääkinnälliseen käyttöön aurinkokuivauksen aikana. Biol Pharm Bull. 2016;39(12):2066–70.

21. Cui Q, Pan Y, Zhang W, Zhang Y, Ren S, Wang D, Wang Z, Liu X, Xiao W.Metaboliititravinnon akteosidin ominaisuudet: profiilit, eristäminen, tunnistaminen ja hepatoprotektiiviset ominaisuudet. J Agric Food Chem. 2018;66(11):2660–8.

22. Cui Q, Pan Y, Bai X, Zhang W, Chen L, Liu X. Järjestelmällinen karakterisointimetaboliititekinakosidista ja akteosidistaCistanchetubulosa rotan plasmassa, sapessa, virtsassa ja ulosteessa UPLC-ESI-Q-TOF-MS:n perusteella. Biomed Chromatogr. 2016;30(9):1406–15.

23. Bertelli M, Kiani AK, Paolacci S, Manara E, Kurti D, Dhuli K, Bushati V, Miertus J, Pangallo D, Baglivo M, Beccari T, Michelini S. Hydroksityrosoli: luonnollinen yhdiste, jolla on lupaavia farmakologisia vaikutuksia. J Biotechnol. 2020; 309:29–33.

24. Touaibia M, Jean-François J, Doiron J. Caffeic Acid, monipuolinen farmakofori: yleiskatsaus. Mini Rev Med Chem. 2011;11(8):695–713.