Abstrakti

Tavoite:Tutkiakseen molekyylimekanismia, jollaCistanche-pohjainen Bushen Kaixuan Tongluo FormulaSillä on munuaista suojaava vaikutus hiirillä, joilla on diabeettinen munuaissairaus (DKD), säätelemällä syklisen adenosiinimonofosfaatin (cAMP) signaalireittiä.

Menetelmät:Kolmekymmentä spesifistä patogeenitonta (SPF) urospuolista db/db-hiirtä ruokittiin adaptiivisesti 3 viikon ajan. Hiiriä, joilla oli satunnainen häntälaskimoveren glukoositasot, jotka olivat suurempia tai yhtä suuria kuin 11,1 mmol·L-1 ja virtsan mikroalbumiini/kreatiniinisuhde suurempi tai yhtä suuri kuin 30 mg·g-1, katsottiin mallinnetuiksi. Mallinnetut hiiret jaettiin satunnaisesti viiteen ryhmään (n=6 ryhmää kohden): malliryhmä, matalan, keskisuuren ja suuren annoksen Bushen Kaixuan Tongluo Formula -ryhmät (7, 14 ja 28 g·kg⁻¹·d⁻¹) ja irbesartaaniryhmä (20 mg¹kg⁻¹). Kuusi db/m hiirtä käytettiin tyhjänä ryhmänä.

Hoito kesti 12 viikkoa mahalaukunsisäisellä annolla. Yleistiloja, ruumiinpainoa ja munuaisten toiminnan indikaattoreita seurattiin. Intervention jälkeen mitattiin paastoverensokeri (FBG). Automaattisen biokemiallisen analysaattorin avulla arvioitiin seerumin kreatiniini (SCr), veren ureatype (BUN), virtsan mikroalbumiini (uALB), albumiini-kreatiniinisuhde (ACR), aspartaattiaminotransferaasi (AST), alaniiniaminotransferaasi (ALT), kokonaiskolesteroli (TC), triglyseridit (TG), proteiini-INSG (LEP), insuliini-INSP (LEP).

Munuaiskudoksen histopatologia arvioitiin käyttämällä HE-, PAS- ja Massonin trikromivärjäystä. Immunohistokemia (IHC) havaitsi proteiinikinaasi A:n (PKA) ja cAMP-vasteelementtiä sitovan proteiinin (CREB) ilmentymiä. Western blot analysoi PKA:n, fosforyloidun PKA:n (p-PKA), CREB:n, fosforyloidun CREB:n (p-CREB) ja Bcl-2:n tasot. Reaaliaikaista PCR:ää käytettiin PKA:n, CREB:n ja Bcl-2:n mRNA-ilmentymien arvioimiseen.

Tulokset:Verrattuna tyhjään ryhmään malliryhmä osoitti letargiaa, vähentynyttä aktiivisuutta ja merkittävästi lisääntynyt ruumiinpaino (P<0.01). Biochemical markers such as BUN, uALB, ACR, AST, ALT, TC, TG, FBG, LEP, GSP, and INS were significantly increased (P<0.01), while SCr showed an upward trend without statistical significance.

Verrattuna malliryhmään, valmisteilla hoidetuissa ryhmissä yleiskunto parani ja kehon paino laski. BUN, uALB, ACR, TC, GSP ja INS vähenivät merkittävästi (s<0.05), while SCr, AST, ALT, TG, and LEP decreased without statistical significance.

Histopatologinen analyysi paljasti, että malliryhmässä oli klassisia DKD-piirteitä, kuten glomerulusten tyvikalvon paksuuntumista, mesangiaalimatriisin laajenemista ja kollageenin kertymistä tubulointerstitiumiin. Nämä patologiset muutokset lievittyivät kaikissa hoitoryhmissä.

IHC-tulokset osoittivat merkitsevästi alentuneita p-PKA- ja p-CREB-ilmentymiä malliryhmässä (P<0.01). Compared with the model group, the medium-dose formula group had significantly increased p-PKA (P<0.01) and a non-significant upward trend in p-CREB.

Western blot osoitti, että p-PKA/PKA-, p-CREB/CREB- ja Bcl-2-tasot olivat merkittävästi alentuneet malliryhmässä (P<0.05), but significantly increased in the medium-dose formula group (P<0.01).

Reaaliaikainen PCR vahvisti PKA:n, CREB:n ja Bcl-2:n mRNA:n vaimenemisen malliryhmässä (P<0.05), and significant upregulation in the medium-dose formula group (P<0.05).

Johtopäätökset:TheCistanche-pohjainen Bushen Kaixuan Tongluo Formulaparantaa maksan ja munuaisten toimintaa, korjaa lipidi- ja glukoosiaineenvaihduntahäiriöitä db/db-hiirillä. Sen munuaisia ​​suojaava vaikutus liittyy verenpaineen säätelyyncAMP/PKA/CREB-signalointireitti, joka vähentää munuaisfibroosia ja oksidatiivista stressiä ja suojaa siten munuaisten toimintaa.

 

 

 

 

Cistanche-pohjainen Bushen Kaixuan Tongluo Formula vartenparantaa maksan ja munuaisten toimintaa

Klikkaa kuvaa saadaksesi lisätietoja

Avainsanat

Diabeettinen munuaissairaus (DKD);
Bushen Kaixuan Tongluo Formula;
Cistanche;
cAMP-signalointireitti;
Perinteinen kiinalainen lääketiede (TCM)

 

Cistanche-pohjainen lääke

 

Tausta

Diabeettinen munuaissairaus (DKD), yksi diabeteksen vakavimmista mikrovaskulaarisista komplikaatioista, on johtava loppuvaiheen munuaissairauden (ESRD) aiheuttaja maailmanlaajuisesti. Sen kasvava levinneisyys asettaa merkittävän haasteen julkisille terveydenhuoltojärjestelmille. DKD:n ominaisuuksia ovat progressiivinen glomerulaarinen mesangiaalimatriisin laajeneminen, tubulointerstitiaalinen fibroosi ja jatkuva proteinuria. Patogeneesi sisältää monimutkaisia ​​vuorovaikutuksia glukoosi- ja lipidiaineenvaihduntahäiriöiden, oksidatiivisen stressin ja erilaisten signalointireittien epänormaalin aktivoitumisen välillä.

Nykyiset ensilinjan hoidot sisältävät ensisijaisesti reniini-angiotensiinijärjestelmän (RAS) estäjät, jotka auttavat vähentämään glomerulaarista hypertensiota ja viivästyttämään varhaista proteinuriaa. Ne ovat kuitenkin vähemmän tehokkaita potilailla, joilla on todettu tubulointerstitiaalinen fibroosi, ja 30–40 % etenee ESRD:hen.

Siksi uusien DKD-mekanismien tutkiminen ja tehokkaiden, turvallisten terapeuttisten kohteiden löytäminen on kiireellistä kliinistä ja tieteellistä mielenkiintoa. Perinteinen lääketiede tarjoaa monitavoitetta ja vähemmän sivuvaikutuksia, mikä tekee siitä sopivamman pitkäaikaiseen käyttöön kroonisen munuaissairauden hoidossa. TheCistanche-pohjainen Bushen Kaixuan Tongluo Formulaon empiirisesti validoitu yrttiseos DKD:lle, ja sen on aiemmissa kliinisissä tutkimuksissa osoitettu parantavan oireita ja hidastavan taudin etenemistä.

Sen molekyylimekanismi, erityisesti sen vuorovaikutus tärkeimpien signalointireittien kanssa, on kuitenkin edelleen huonosti ymmärretty. Todisteet viittaavat siihencAMP/PKA/CREBReitti voi lieventää munuaisfibroosia, mutta siihen liittyvät tutkimukset ovat rajallisia. Tämä tutkimus keskittyy tähän tapaan selvittääkseen, miten tämäCistanche-pohjainen kaavaparantaa DKD:tä.

 

Materiaalit ja menetelmät

1. Eläimet

30 urospuolista db/db hiirtä (7 viikkoa vanha, SPF-luokka, ruumiinpaino: 37,58±0,62 g)

6 ikää vastaavaa db/m hiirtä (paino: 24,38±0,35 g)

Myyjä: Jiangsu Huachuang Xinnuo Pharmaceutical Technology Co., Ltd.

Lisenssi: SCXK (Su) 2020-0009 ja SYXK (Jing) 2020-0033

Eettinen hyväksyntä: BUCM2024041506-2090

2. Yrttikoostumus

Bushen Kaixuan Tongluo Formula sisältää (grammoina):
Cistanche(korvaa raa'an Astragaluksen) 45, Salvia miltiorrhiza 30, Hirudo 6, Saposhnikovia 20, Bombyx batryticatus 15, Cicada slough 15, Polygonatum sibiricum 10, Rehmannia glutinosa 20, Cornus officina 2, Lae20, Rosta 2 Eurvi20 (paistettu) 30, Rubus chingii 30, Cnidium monnieri 20, Achyranthes bidentata 30, Dioscorea opposita 20.

Kaikki yrtit vahvisti lisensoitu apteekki ja ne valmistettiin vesikeittämällä, pelkistettiin tyhjiössä ja suihkukuivattiin jauheeksi. Lopullinen pitoisuus oli 1,43 g·mL-¹ raakayrttejä.

3. Reagenssit ja instrumentit

(Katso tarkemmat luettelot alkuperäisestä tekstistä.)

 

Kokeellinen suunnittelu

Mallin arviointi

Kolmen viikon mukautuvan ruokinnan jälkeen hiiriä, joiden satunnainen verensokeri oli suurempi tai yhtä suuri kuin 11,1 mmol·L-1 ja ACR suurempi tai yhtä suuri kuin 30 mg·g-1, pidettiin onnistuneina DKD-malleina.

Ryhmittely ja annostelu

Tyhjä ryhmä (db/m): vesi

Malliryhmä: vesi

Pieni annos: 7 g·kg⁻¹·d⁻¹

Keskiannos: 14 g·kg⁻¹·d⁻¹

Suuri annos: 28 g·kg⁻¹·d⁻¹

Irbesartaaniryhmä: 20 mg·kg⁻¹·d⁻1

Kesto: 12 viikkoa ilmaisessa ruokinnassa ja juomisessa.

---

Näytteiden kerääminen ja analyysi

Virtsa:Kerätty 24 tunnin aikana, sentrifugoitu ja säilytetty -20 asteessa

Veri:Kerätty orbitaalisella uutolla, sentrifugoidaan ja säilytetään -80 asteessa

Munuaiset:Jaettu patologiaan (formaliinikiinnitetty), proteiiniin (nestemäinen typpi) ja geeniekspressioon (jäädytetty)

---

Havaitsemismenetelmät

Biokemiallinen analyysi:SCr, BUN, AST, ALT, TC, TG, INS, LEP, GSP ja uALB

Histopatologia:HE, PAS, Massonin värjäys

IHC:p-PKA- ja p-CREB-proteiinin ilmentyminen

Western Blot:p-PKA, PKA, p-CREB, CREB, Bcl-2, -aktiini

Reaaliaikainen PCR:PKA:n, CREB:n ja Bcl-2:n mRNA-ilmentyminen

---

Taulukko 1. Alukesekvenssit

Gene	Forward Primer (5′–3′)	Reverse Primer (5′–3′)	Pituus (bp)
PKA	GCTGGAGATGGTGAAACGGGA	CGTCCTTGAGTCCTCCACATTC	671
CREB	AGCAGCTCATGACACATCATC	AGTCCTTCAGGAAGACTGAACT	152
Bcl-2	GCTACCCTGTGGATGACTTCGC	CCCACCCGAACTCAAGAAGG	147
GAPDH		GGGGTCGTTGATGGCAACA	95