Kasvitieteellisen ihonhoitoaineosan valitsemiseen tulee kuulua enemmän kuin houkuttelevan kasvitarinan löytäminen. Ihonhoitobrändille, sopimusvalmistajalle tai ainesosien jakelijalle hyödyllisempiä kysymyksiä ovat:

Mitä yhdisteitä uutteessa on?

Kuinka johdonmukaisesti valmistaja voi valvoa niiden pitoisuuksia?

Mitkä kokeet tukevat ehdotettua sovellusta?

Päteekö todisteet ostettavaa ainesosaa?

Mitä lisätestauksia tarvitaan ennen valmiin tuotteen lanseerausta?

Tässä artikkelissa tarkasteltu tekninen asiakirja keskittyyverbaskosidi, joka on johdettu Cistanchestaja sen ehdotetut sovellukset iho-lipidituotannossa, kosteuttamisessa ja esteisiin liittyvässä tutkimuksessa.

Siinä kuvataan sekä puhdistusprosessi että laboratoriokokeet, joissa puhdistettua verbaskosidia verrataan useisiin Cistanche-uutteisiin ja muihin ainesosiin.

 

 

16 % verbascoside cistanche -uutetta

Keskeinen kaupallinen oppitunti on suoraviivainen: yleistä Cistanche-uutetta ja erittäin puhdistettua Cistanche-peräistä yhdistettä ei pidä käsitellä keskenään vaihdettavissa olevina ainesosina.

Todistushuomautus:Alla olevat tutkimustulokset on raportoitu käännettäväksi toimitetussa kiinalaisessa patenttitekstissä. Toimitettu materiaali ei sisällä alkuperäisiä lukuja, täydellisiä numeerisia aineistoja, patenttijulkaisujen yksityiskohtia tai kliinisiä ihmistutkimuksia. Sen vuoksi sitä pitäisi lukea teknisenä tiedotteena, ei itsenäisenä vahvistuksena valmiin tuotteen tehokkuudesta tai viranomaishyväksynnästä.

 

1. Mikä on Verbascoside?

Verbascoside tunnetaan myös nimelläakteosidi. Nämä ovat saman kemiallisen aineen nimiä kahden eri aktiivisen aineosan sijaan. FDA:n ainerekisterissä luetellaan molemmat nimet samalla ainetunnisteella. (precision.fda.gov)

 

 

Toimitetussa kuvauksessa verbaskosidi kuvataan fenyylietanoidiglykosidiksi, joka on saatu Cistanche-lajien kuivatuista mehevistä varreista. Tärkeimmät nimetyt kasvitieteelliset lähteet ovat:

Cistanche deserticola

Cistanche tubulosa

Cistanche sinensis

Cistanche salsa

Asiakirjassa tutkitaan verbaskosidia mahdollisena kasviperäisenä aktiivisena aineena paikallisissa formulaatioissa, kiinnittäen erityistä huomiota lipidien aineenvaihduntaan, hyaluronihapon tuotantoon, tiiviissä risteyksessä oleviin proteiineihin ja solujen migraatioon.

Miksi nimi on tärkeä ainesosia ostettaessa

Kun vertaat toimittajatarjouksia, pyydä vahvistusta:

Kasvitieteellinen laji ja kasviosa.

Onko materiaali kokouute, standardoitu uute tai puhdistettu yhdiste.

Mitattu verbaskosidipitoisuus.

Käytetty analyysimenetelmä ja vertailustandardi.

Edustaako ilmoitettu prosenttiosuus massa- tai kromatografisen pinta-alan prosenttiosuutta.

Lainaus "Cistanche-uutteesta" ei yksinään anna tarpeeksi tietoa sen määrittämiseksi, vastaako se tietyssä kokeessa arvioitua materiaalia.

2. Miksi julkaisussa keskitytään ihosuojaan?

Asiakirja esittelee usean päätepisteen tutkimuskonseptin yksinkertaisen pinnan kosteuttamisväittämän sijaan.

Sen ehdotettu järjestys on:

Epidermaalisten solujen uusiutuminen → vahvemmat solujen väliset yhteydet → lipidituki → hyaluronihapon tuotanto → korjaukseen liittyvä toiminta

Tämän käsitteen tutkimiseksi tutkijat käyttivät HaCaT-soluja. HaCaT on immortalisoitu ihmisen keratinosyyttisolulinja, joka on perustettu laboratoriomalliksi epidermaalisen biologian ja keratinisoitumisen tutkimiseen. Se ei ole solutyyppi, joka on luonnollisesti nimeltään "HaCaT" ihmisen ihossa. (pmc.ncbi.nlm.nih.gov)

Ainesosien ostajille tällä erolla on merkitystä:Tulokset viljellyissä soluissa ovat tutkimuksen lähtökohta, eivät korvaa valmiin tuotteen testaamista ihmisen iholla.

Raportoidut pääpäätepisteet

Tutkimusalue	Mitat kuvattu mukana toimitetussa asiakirjassa	Käytännön tulkinta
Solujen vaste	CCK-8 määritys	seulonnan päätepiste; lisämenetelmät vahvistaisivat leviämisvaatimusta
Lipidiin liittyvä toiminta	Rasvahapposyntaasiaktiivisuus; ACC-, FASN- ja N-SMase-ilmaisu	Tukee lipidiaineenvaihdunnan lisätutkimuksia, mutta ei suoraan kvantifioi koko ihosuojalipidiprofiilia
Hyaluronihappo	HA-sisältö; HAS2, HAS3 ja CD44 ilmentyminen	Tukee HA:hon liittyvien reittien lisätutkimuksia
Solujen väliset yhteydet	Claudin-1- ja okkludiinitasot	Mittaa valittuja tiiviitä proteiineja täydellisen estetoiminnan sijaan
Korjauksiin liittyvä toiminta	Solujen naarmuuntumismääritys	In vitro aukon sulkemisen päätepiste, ei kliininen haavan paranemistutkimus
Kosteudenpidätys	Formulaatiomassan säilyminen lasilevyillä	Formulaatiotason laboratoriotesti, ei ihon nesteytystutkimus

Nämä tulkinnat ovat seurausta toimitetussa tekstissä kuvatuista kokeellisista menetelmistä.

 

3. Mikä tekee tästä tutkimuksesta hyödyllisen ihonhoitoyrityksille?

Selityksessä verrataan useita materiaaleja sen sijaan, että oletetaan, että jokainen Cistanche-peräinen ainesosa tuottaa saman vasteen.

Testattuja materiaaleja ovat mm.

Cistanche-polysakkaridiuute.

Useita fenyylietanoli-glykosidia sisältäviä uutteita.

Täydellinen fenyylietanoidiglykosidituute.

Ekinakosidi.

Puhdistettu verbaskosidi.

Toimitetun asiakirjan mukaan puhdistettu verbaskosidi osoitti aktiivisuutta useissa mitatuissa päätepisteissä. Jotkut sekauutteet osoittivat aktiivisuutta tietyissä määrityksissä, mutta eivät toisissa.

Ostaminen Takeaway

Osta kehitystavoitteesi mukainen spesifikaatio – ei pelkästään kasvin nimi.

Esimerkiksi:

Jos projektisi perustuu puhdistettuun verbaskosidi-kokeisiin, pyydä tietoja puhdistetusta materiaalista.

Jos formulaatiossasi käytetään standardoitua kokonaisuutetta, pyydä tälle uutteelle testausta.

Jos toimittaja viittaa tutkimukseen toisesta uuttoprosessista, kysy, onko testattu koostumus verrattavissa tarjottuun materiaaliin.

Todisteita yhdestä ainesosalaadusta ei pitäisi automaattisesti siirtää toiseen.

4. Miten Verbascoside valmistetaan ilmoituksessa?

Kuvatussa prosessissa on neljä päävaihetta:

Kasvitieteellinen valmistelu:Esikäsittele ja jauha kuivatut Cistanchen mehevät varret.

Poiminta:Käytä 50–80 % vesipitoista etanolia.

Rikastus:Erota fraktiot AB-8 makrohuokoisella adsorptiohartsilla.

Puhdistus:Käytä silikageelikromatografiaa, jota seuraa väkevöinti ja pakastekuivaus.

Ilmoitettu lopullinen puhtaus onvähintään 98%, vaikka toimitettu teksti ei sisällä analyyttistä validointia tai erätietoja, joita tarvitaan kyseisen spesifikaation itsenäiseen vahvistamiseen.

Kriittinen valmistuskysymys: Liuotinjäämät

Esitetyssä kromatografiavaiheessa käytetäänkloroformi ja metanoli.

Jos kyseessä on kaupallinen hankintaprojekti, pyydä valmistajalta varsinainen tuotannon liuotinluettelo, liuottimenpoistokontrollit ja eräkohtaiset liuottimen jäännöstulokset. ICH Q3C tarjoaa farmaseuttisen viitekehyksen jäännösliuottimien riskien arvioimiseen; sitä ei pitäisi esittää yleisenä kosmeettisena hyväksymisstandardina. (ema.europa.eu)

Älä oleta, että "kasviperäinen" tarkoittaa "valmistettu vain vedestä ja etanolista".

 

5. Mitä kosteudenpidätystesti todellisuudessa näyttää?

Toimitettu asiakirja kuvaa vertailun:

Seerumi, joka sisältää2 % verbascosidia.

Seerumi, joka sisältää2 % ekinakosidia.

Positiivista kontrolliseerumia, joka sisältää5 % glyseriiniä.

Näytteet sijoitettiin osoitteeseen25 astetta ja 50 % suhteellinen kosteusja niiden massa mitattiin ajan myötä.

Selvityksessä kerrotaan, että verbaskosidia sisältävä näyte säilytti enemmän massaa näissä olosuhteissa.

Se on mahdollisesti hyödyllinen formulaatioseulontahavainto. Kuvattu menetelmä ei kuitenkaan vahvista:

Erinomainen kosteutus ihmisen iholla.

Pienempi transepidermaalinen veden menetys.

Kliininen ylivoima glyseriiniin verrattuna.

Parempi suorituskyky jokaisessa koostumuksessa.

Että havaittu ero johtui vain nimetystä aktiivisesta, ilman täysin julkistettua vastaavaa ajoneuvovertailua.

Jos tuotemerkki suunnittelee vertailevaa väitettä, testaa valmiita formulaatioita asianmukaisesti suunnitellulla tutkimuksella.

 

6. Käytännön Cistanche-ainesosien hankinnan tarkistuslista

Käytä seuraavia kysymyksiä arvioidessasi Cistanche-uutteen toimittajaa tai puhdistetun verbaskosidin valmistajaa.

Kysymys ostosta	Asiakirjat pyydettäessä
Mikä on kasvitieteellinen lähde?	Lajitunniste, kasvinosien ilmoitus ja jäljitettävyystiedot
Mitä tarkalleen toimitetaan?	Täysi koostumus, mukaan lukien kantaja-aineet, valmistuksen apuaineet ja tarvittaessa apuaineet
Kuinka paljon verbaskosidia on läsnä?	Eräkohtainen analyysi- ja määritysmenetelmätodistus
Miten henkilöllisyys varmistetaan?	Kromatografinen tunnistus ja vertailustandarditiedot
Mitä liuottimia käytetään?	Todelliset valmistusliuottimen ilmoitus ja jäännösliuottimien testitulokset
Kuinka johdonmukaista tuotanto on?	Edustavia tuloksia useista eristä
Soveltuuko materiaali aiottuun käyttöön?	Käyttötarkoituksen mukaiset asiakirjat ja asianmukainen turvallisuusasiakirja
Toimiiko se valitussa kaavassa?	Liukoisuus, yhteensopivuus, stabiilisuus ja pakkaus-kehitystiedot
Mikä tukee ehdotettuja väitteitä?	Tutkimusraportit samasta ainesosalaadusta ja mieluiten valmiista formulaatiosta

 

Älä käytä "luonnollista" turvallisuuspäätelmänä

Toimitettu patenttiteksti antaa suotuisan turvallisuuslausunnon ainesosan kasvitieteellisen alkuperän perusteella. Tämä lausunto edellyttää pätevyyttä kaupalliseen julkaisuun.

FDA selittää, että ainesosan lähde ei määritä sen turvallisuutta: kasviperäiset materiaalit voivat myös sisältää myrkyllisiä tai allergiaa aiheuttavia aineita. Turvallisuus on arvioitava tarkoitetuissa käyttöolosuhteissa. (fda.gov)

Tästä syystä pyydä turvallisuutta koskevia perusteluja sen sijaan, että luottaisit "luonnolliseen", "kasviperäiseen" tai "korkeaan puhtauteen" erillisinä takeina.

 

7. Miten brändin tulisi keskustella tutkimuksesta?

Pidä kolme kerrosta erillään:

Mitä paljastus väittää.

Mitä raportoiduissa kokeissa mitattiin.

Mitä valmiin tuotteen on osoitettu tekevän.

Esimerkiksi "HaCaT-soluissa tutkittu lipideihin liittyvän aktiivisuuden varalta" eroaa olennaisesti "kliinisesti todistetusti korjaavan ihoesteen".

Samoin viittauksia ihottuman hoitoon, atooppisen ihotulehduksen hoitoon tai haavojen parantamiseen ei pidä kopioida suoraan tavallisiin kosmeettisten valmisteiden väitteisiin. Yhdysvalloissa väitteet hoitaa sairauksia tai vaikuttaa kehon rakenteeseen tai toimintaan voivat saada tuotteen säännellyn lääkkeeksi. (fda.gov)

Tutkimusartikkeli tai patenttiviittaus ei sinänsä ole lupa terapeuttisen markkinointiväitteen esittämiseen.

8. Suositeltu kehityspolku

Yritykselle, joka harkitsee Cistanche-peräistä verbaskosidia, hyödyllinen kehitysjakso on:

Määrittele aiottu tuoteluokka ja kohdemarkkinat.

Valitse ainesosan laatu ja analyyttinen eritelmä.

Tarkista koostumus, epäpuhtaudet, liuotinjäämät ja turvallisuusasiakirjat.

Kehitä prototyyppi ja arvioi ainesosien yhteensopivuus.

Arvioi koostumuksen ja pakkauksen stabiilius.

Suorita asianmukaiset mikrobiologiset ja turvallisuusarvioinnit.

Testaa valmis tuote aiottujen suorituskykyvaatimusten perusteella.

Tarkista lopullinen verkkosivusto, etiketti ja mainoskieli ennen julkaisua.

Esityksen pitoisuusalue0.01%–5.0%-Tulisi käsitellä julkistettuna vaihteluvälinä, ei yleisesti validoituna formulointisuosituksena.

 

Bottom Line ainesosien ostajille

Toimitettu tutkimus tekee Cistanche-peräisestä verbaskosidista ehdokkaan ihonhoidon jatkokehitykseen, erityisesti projekteihin, joissa tutkitaan kosteutta ja esteisiin liittyviä laboratoriopäätepisteitä.

 

Cistanche akteosidin sisältöluettelo

 

Napsauta vieraillaksesi Acteoside cistanche -uuteluettelon eri sisällössä

 

 

 

Sen hyödyllisin opetus ei ole vain se, että "Cistanche on hyvä iholle". Se on sitäuuttomenetelmä, vaikuttavan aineen sisältö, ainesosien identiteetti ja todisteiden laatu vaikuttavat kaikki siihen, soveltuuko kasvitieteellinen ainesosa tiettyyn kaupalliseen projektiin.

Kun otat yhteyttä Cistanche-valmistajaan, aloita tarkalla pyynnöstä:

"Ole hyvä ja toimita kasvitieteellinen identiteetti, verbascoside-spesifikaatio, analyysimenetelmä, edustavat analyysitodistukset, jäännösliuottimien tulokset, turvallisuusasiakirjat ja formulaatio-ohjeet projektiimme ehdotetun ainesosan laadulle."

Tämä pyyntö luo paljon vahvemman perustan tuotekehitykselle kuin yleinen tiedustelu yrttiuutejauheesta.

 

(54) Keksinnön nimi

Menetelmä verbaskosidin valmistamiseksi ja menetelmä sen soveltamiseksi ihon lipidien tuotannon edistämiseen

(57) Tiivistelmä

Menetelmä verbaskosidin valmistamiseksi ja menetelmä sen käyttämiseksi ihon lipidituotannon edistämiseksi Keksintö koskee menetelmää verbaskosidin valmistamiseksi ja menetelmää sen käyttämiseksi ihon lipidituotannon edistämiseksi, joka kuuluu ihonhoito- ja topikaalisten tuotteiden tekniseen alaan.

Menetelmä sisältää seuraavat vaiheet:

Orobanchaceae-kasvien kuivattujen mehevien varsien valintaCistanche deserticola, Cistanche tubulosa, Cistanche sinensis, taiCistanche salsa; varsien jauhaminen esikäsittelyn jälkeen; uutetaan ne palautusjäähdyttäen 50–80-prosenttisella etanolin vesiliuoksella kahdesta neljään kertaan yhdestä kolmeen tuntia kulloinkin; yhdistämällä uutteet; ja konsentroimalla ne alennetussa paineessa, kunnes etanolin hajua ei enää ole jäljellä, jolloin saadaan konsentroitu liuos.

Konsentroitu liuos johdetaan AB-8 makrohuokoisen adsorptiohartsikolonnin läpi; eluoimalla peräkkäin deionisoidulla vedellä ja 30-50-prosenttisella vesipitoisella etanoliliuoksella epäpuhtauksien poistamiseksi; sitten eluoidaan kohdeaineosat 60–90-prosenttisella etanolin vesiliuoksella; kerätään eluaatti ja konsentroidaan se alennetussa paineessa; puhdistamalla se silikageelipylväskromatografialla käyttäen kloroformi-metanolia tilavuussuhteessa 5:1 - 2:1 eluenttina; kohdefraktioiden kerääminen; ja konsentroimalla ne alennetussa paineessa, mitä seuraa pakastekuivaus puhdistetun verbaskosidin saamiseksi.

Keksinnölle esitetyt hyödylliset vaikutukset ovat, että verbaskosidi suojaa ihoa ja osoittaa parannettua ihonhoitoaktiivisuutta, kun se sisällytetään tuotteisiin.

 

Väitteet

Väite 1

1. Menetelmä verbaskosidin valmistamiseksi, tunnettu siitä, että se käsittää seuraavat vaiheet:

Orobanchaceae-kasvien kuivattujen mehevien varsien valintaCistanche deserticola, Cistanche tubulosa, Cistanche sinensis, taiCistanche salsa; jauhamalla ne esikäsittelyn jälkeen; uutetaan ne palautusjäähdyttäen 50–80-prosenttisella etanolin vesiliuoksella kahdesta neljään kertaan yhdestä kolmeen tuntia kulloinkin; yhdistämällä uutteet; ja konsentroimalla ne alennetussa paineessa, kunnes etanolin hajua ei enää ole jäljellä, jolloin saadaan konsentroitu liuos.

Konsentroitu liuos johdetaan AB-8 makrohuokoisen adsorptiohartsikolonnin läpi; eluoimalla peräkkäin deionisoidulla vedellä ja 30-50-prosenttisella vesipitoisella etanoliliuoksella epäpuhtauksien poistamiseksi; sitten eluoidaan kohdeaineosat 60–90-prosenttisella etanolin vesiliuoksella; kerätään eluaatti ja konsentroidaan se alennetussa paineessa; puhdistamalla se silikageelipylväskromatografialla käyttäen kloroformi-metanolia tilavuussuhteessa 5:1 - 2:1 eluenttina; kohdefraktioiden kerääminen; konsentroimalla ne alipaineessa; ja pakastekuivaamalla ne puhdistetun verbaskosidin saamiseksi, jonka puhtaus on vähintään 98 %.

 

Väite 2

2. Patenttivaatimuksen 1 mukainen menetelmä verbaskosidin valmistamiseksi, jossa materiaalin ja liuotin suhde palautusjäähdytysuuton aikana vaihtelee välillä 1:10 - 1:20 ja uuttolämpötila on 60 - 80 astetta.

 

Väite 3

2. Patenttivaatimuksen 1 mukainen menetelmä verbaskosidin valmistamiseksi, jossa makrohuokoisen adsorptiohartsikolonnin AB-8 halkaisijan ja korkeuden välinen suhde on 1:8 - 1:15 ja eluutiovirtausnopeus on 1 - 3 BV/h.

 

Väite 4

2. Patenttivaatimuksen 1 mukainen menetelmä verbaskosidin valmistamiseksi, jossa pakastekuivausolosuhteet käsittävät lämpötilan välillä -40 - -50 astetta, tyhjiöpaineen välillä 10 - 30 Pa ja kuivausajan välillä 12 - 24 tuntia.

 

Väite 5

5. Menetelmä verbaskosidin levittämiseksi edistämään ihon lipidien tuotantoa käyttämällä jonkin patenttivaatimuksista 1-4 mukaisesti valmistettua verbaskosidia, tunnettu siitä, että levitysmenetelmä käsittää:

Verbaskosidin lisääminen paikalliseen tuotepohjaan ennalta määrätyssä massaosuudessa ja tasainen sekoittaminen valmiin tuotteen valmistamiseksi; valmiin tuotteen levittäminen ihon pinnalle kerran tai kahdesti päivässä; annetaan verbaskosidin tunkeutua epidermaalisiin HaCaT-soluihin ja vaikuttaa niihin ACC:n, FASN:n ja N-SMaasin geeni- ja proteiiniekspression säätelemiseksi ja rasvahapposyntaasiaktiivisuuden lisäämiseksi; ja käytön jatkaminen yhdestä neljään viikkoa ihon lipidisynteesin tehostamiseksi.

Verbaskosidi edistää HaCaT-solujen proliferaatiota, haavan paranemista, tiiviiden yhteyksien proteiinien ilmentymistä sekä lipidi- ja hyaluronihapon tuotantoa, mikä tarjoaa monikohdeisia estekorjaustoimintoja.

Sitä käytetään koko ihon esteen ylläpitoketjussa, joka sisältää ihosolujen uusiutumisen, tehostetut solujen väliset yhteydet, lipidimatriisin täydennyksen ja hyaluronihapon synteesin luonnollisena kosteustekijänä.

 

Väite 6

6. Patenttivaatimuksen 5 mukainen levitysmenetelmä, jossa verbaskosidin massaosuus paikallisessa tuotteessa on 0,01 % - 5,0 %.

 

Väite 7

6. Patenttivaatimuksen 5 mukainen levitysmenetelmä, jossa valmistetta käytetään 0,1-0,5 g per annostelu, jonka jälkeen hierotaan hellävaraisesti yhdestä kolmeen minuuttia imeytymisen edistämiseksi.

 

Väite 8

6. Patenttivaatimuksen 5 mukainen levitysmenetelmä, jossa paikallisesti käytettävä tuote on lääketieteellinen sidos, toimenpiteen jälkeinen korjaustuote, atooppisen ihottuman lisähoitotuote, erityisesti herkälle iholle tarkoitettu ihonhoitotuote tai intensiivisesti kosteuttava ja korjaava ihonhoitotuote.

 

Väite 9

6. Patenttivaatimuksen 5 mukainen levitysmenetelmä, jossa täyteaineita voidaan lisäksi lisätä verbaskosidin levittämisen aikana.

 

Väite 10

10. Patenttivaatimuksen 9 mukainen levitysmenetelmä, jossa täyteaine valitaan kosteuttavasta aineesta, emulgointiaineesta, säilöntäaineesta, hajusteesta tai rauhoittavasta aineesta, ja täyteainetta sisältävän koostumuksen annosmuoto valitaan kosteusemulsio, voide, geeli, seerumi tai arkkinaamioliuoksesta.

 

Menetelmä verbaskosidin valmistamiseksi ja menetelmä sen soveltamiseksi ihon lipidien tuotannon edistämiseen

 

Tekninen ala

[0001]Keksintö kuuluu ihonhoitotuotteiden ja paikallisten tuotteiden tekniseen alaan. Erityisesti se koskee menetelmää verbaskosidin valmistamiseksi ja menetelmää sen levittämiseksi ihon lipidituotannon edistämiseksi.

Tarkemmin sanottuna se koskee verbaskosidin valmistusmenetelmää, jonka tarkoituksena on saada aikaan vaikutuksia koko ihon esteen korjaussekvenssiin epidermaalisen solujen uusiutumisen → tehostetun solujen välisen tiiviin liitoksen → lipidimatriisin täydennyksen → hyaluronihapposynteesin → haavan paranemisen, käytettäväksi ihon suojaamisessa.

 

Tausta Art

[0002]Epidermaalinen solujen uusiutuminen, tehostetut solujen väliset tiiviit liitokset, lipidi-matriisin täydentäminen, hyaluronihapposynteesi ja haavan paraneminen ovat kumpikin välttämättömiä ihoesteen homeostaasin ylläpitämisessä.

Epidermaalisten solujen uusiutuminen on esterakentamisen perusta. Kiihdyttämällä tyvikeratinosyyttien proliferaatiota ja erilaistumista se varmistaa, että riittävä määrä soluja liikkuu ylöspäin hallitulla tavalla ja toimittaa riittävää solumateriaalia esteen muodostumista varten.

Solujen väliset liitosrakenteet, mukaan lukien tiukat liitokset ja desmosomit, ankkuroivat äskettäin muodostuneet solut yhteen muodostaen tiheän, jatkuvan fyysisen esteen, joka estää tehokkaasti ulkoisten ärsyttävien aineiden pääsyn sisään.

Solujen väliset tilat täyttävä lipidimatriisi muodostaa järjestäytyneen lamellirakenteen ja on pääasiallinen keino tiivistää väyliä, joiden kautta vettä häviää.

Orvaskessä ja dermiksessä syntetisoitu hyaluronihappo muodostaa tehokkaan vettä pidättävän verkoston, toimittaa kosteutta sarveiskerrokseen ja ylläpitää solujen homeostaasia. Se voi myös tarjota sopivan kostean ympäristön näille fysiologisille prosesseille ja lähettää solusignaaleja.

Haavan paraneminen riippuu suuresti näistä neljästä prosessista. Ensinnäkin hyaluronihappo tarjoaa väliaikaisen matriisin ja signaalitoiminnot. Sitten tarvitaan epidermisolujen uusiutumista haavan peittämiseksi. Äskettäin muodostuneiden solujen on palautettava tiukat liitokset ja täydennettävä lipidimatriisi estetoiminnan palauttamiseksi loppuun.

Nämä viisi prosessia käynnistyvät peräkkäin haavan paranemisen aikana. Niiden toisiinsa liittyvät, koordinoidut toimet - solujen uusiutumisesta ja rakenteellisesta vahvistamisesta matriisin täyttöön ja veden varastointiin - johtavat yhdessä täysin stabiloituun ihosuojaan.

Ne tarjoavat paitsi fyysisen voiman, jota tarvitaan vastustamaan ulkoisia ärsytyksiä, myös kosteudenpidätyskyvyn, joka tarvitaan estämään sisäinen vesihäviö, mikä mahdollistaa ihon pitkäaikaisen terveyden ylläpitämisen dynaamisen tasapainon tilassa.

Näin ollen moniulotteinen, systemaattinen rekonstruktio on perustavanlaatuisempaa kuin pelkkä pinnan kosteuden parantaminen. Se voi parantaa ihon vastustuskykyä ja kosteuden säilymistä niiden lähteellä, mikä tukee kestävämpää ja vakaampaa terveellistä tilaa.

[0003]Ihon oma lipidien ja hyaluronihapon tuotanto on olennaista ihon terveyden ylläpitämiselle, ympäristöärsytyksen vastustamiselle ja nuorekkaan kunnon säilyttämiselle.

Nämä aineet auttavat varmistamaan ihon normaalin fysiologisen toiminnan kosteudenpidätyksen ja mikro-organismeja ja epäpuhtauksia vastaan ​​suojautuneena.

Pelkästään ulkoiseen lisäravinteeseen verrattuna ihon oman lipidien ja hyaluronihapon tuotannon edistämistä kuvataan perustavanlaatuisemmaksi ja kestävämmäksi strategiaksi, joka vahvistaa suoraan ihon "itsekorjautumiskykyä" ja "resistenssiä".

Ihosairauksien, kuten atooppisen ihottuman ja ekseeman, osalta lipidi- ja hyaluronihapon tuotannon vahvistamisella kuvataan olevan keskeinen ennaltaehkäisevä ja terapeuttinen merkitys.

Lähde selittää, että näihin tiloihin liittyy usein geneettisiä vikoja, jotka heikentävät ihon "tiili ja laasti" -rakennetta, mikä mahdollistaa allergeenien ja ärsyttävien aineiden tunkeutumisen helpommin ja laukaisee jatkuvan immuuni-inflammatorisen syklin.

Siksi sellaisten aktiivisten ainesosien tunnistaminen, jotka aktivoivat tärkeitä lipidisynteesientsyymejä, kuten FASN ja ACC, tai indusoivat suoraan hyaluronihapon tuotantoa, voivat ylläpitää ja korjata solujen lipidi- ja hyaluronihapon tuotantoa ennakoivasti.

Selvityksen mukaan tämä strategia voi lievittää kuivuutta, kutinaa ja tulehdusjaksoja samalla, kun se vähentää ulkoisia laukaisimia niiden lähteellä, vähentää uusiutumisen tiheyttä ja vakavuutta ja auttaa siirtämään taudin hallintaa passiivisesta hoidosta aktiiviseen ennaltaehkäisyyn.

 

[0004]Verbaskosidi on fenyylietanoidiglykosidi ja yksi Orobanchaceae-kasvien tärkeimmistä ainesosista:

Cistanche deserticolaYC Ma;

Cistanche tubulosa(Schenk) Wight;

Cistanche sinensisBeck; ja

Cistanche salsa(CA Mey.) Beck.

 

Tutkimukset ovat osoittaneet, että verbaskosidi on voimakas antioksidantti ja sillä on farmakologisia vaikutuksia, mukaan lukien anti-inflammatoriset, hermostoa suojaavat, hepatoprotektiiviset ja ikääntymistä estävät vaikutukset.

Useista kasveista peräisin olevien ihoa suojaavien aineiden seulonnan aikana keksijät havaitsivat, että verbaskosidi ei ainoastaan ​​edistä HaCaT-solujen proliferaatiota ja tiukan liitoksen proteiinien ilmentymistä, vaan myös säätelee rasvahapposyntaasiaktiivisuutta, mikä tehostaa ihon lipidisynteesiä.

Se aktivoi myös hyaluronihapon tuotantoon osallistuvia reittejä ja edistää haavan paranemista.

Nämä toimet kattavat täydellisen ihoesteen ylläpito- ja korjaussekvenssin epidermaalisen solujen uusiutumisen → solujen välisten yhteyksien tehostamisen → lipidimatriisin täydentämisen → hyaluronihapon synteesin → haavan paranemisen.

Verbaskosidia voidaan siksi käyttää ihoa suojaavana ja kosteuttavana monikohdeaineena funktionaalisissa ihonhoito- ja paikallisissa tuotteissa.

Esimerkkejä ovat lääketieteelliset sidokset ja toimenpiteen jälkeiset korjaustuotteet; lisätuotteet atooppiseen ihottumaan tai ekseemaan; erityisesti herkälle iholle tai ruusufinnille tarkoitetut ihonhoitotuotteet; sekä intensiivisesti kosteuttavat ja korjaavat tuotteet päivittäiseen käyttöön.

 

Yhteenveto keksinnöstä

[0005]Keksintö tarjoaa menetelmän verbaskosidin valmistamiseksi ja menetelmän sen soveltamiseksi ihon lipidituotannon edistämiseksi.

Valmistusmenetelmä koskee verbaskosidia, joka on tarkoitettu tukemaan epidermaalisen solujen uusiutumisen täydellistä ihoesteen korjaussekvenssiä → tehostettuja solujen välisiä yhteyksiä → lipidimatriisin täydentämistä → hyaluronihapposynteesiä → haavojen paranemista.

Se käsittelee teknistä ongelmaa, joka liittyy uuden ydinaktiivisen ainesosan tarjoamiseen, jolla on useita kohdevaikutuksia ihonhoitoon tai paikallisiin tuotteisiin.

Verbaskosidin kuvataan olevan se etu, että se toimii koko ihon esteen korjausketjun läpi, ja sen vaikutukset ovat parempia kuin olemassa olevilla yhden kohteena olevilla ihonhoitoaineilla, kuten aineilla, jotka edistävät vain hyaluronihapon synteesiä, edistävät vain solujen lisääntymistä tai kosteuttavat yksinään.

[0006]Edellä mainittujen tavoitteiden saavuttamiseksi keksinnössä käytetään seuraavaa teknistä ratkaisua.

[0007]Menetelmä verbaskosidin valmistamiseksi käsittää seuraavat vaiheet.

[0008]Valitse Orobanchaceae-kasvien kuivatut, mehevät varretCistanche deserticola, Cistanche tubulosa, Cistanche sinensis, taiCistanche salsa.

Valkaisun, kuivaamisen ja jauhamisen jälkeen materiaali uutetaan palautusjäähdyttäen 50–80-prosenttisella etanolin vesiliuoksella kahdesta neljään kertaan 1–3 tunnin ajan joka kerta.

Uutteet yhdistetään ja väkevöidään alennetussa paineessa, kunnes etanolin haju ei jää jäljelle, jolloin saadaan konsentroitu liuos.

[0009]Ohjaa konsentroitu liuos AB-8 makrohuokoisen adsorptiohartsikolonnin läpi.

Eluoi peräkkäin deionisoidulla vedellä ja 30-50-prosenttisella etanolin vesiliuoksella epäpuhtauksien poistamiseksi, minkä jälkeen 60-90-prosenttisella etanolin vesiliuoksella kohdeainesosien eluoimiseksi.

Kerää eluaatti ja konsentroi se alennetussa paineessa.

Puhdista konsentraatti silikageelipylväskromatografialla käyttämällä kloroformi-metanolia tilavuussuhteessa 5:1-2:1 eluenttina.

Tavoitefraktiot kerätään talteen, väkevöidään alennetussa paineessa ja pakastekuivataan, jotta saadaan puhdistettua verbaskosidia, jonka puhtaus on vähintään 98 %.

[0010]Valinnaisesti materiaali-liuotin-suhde palautusjäähdytysuuton aikana vaihtelee välillä 1:10 - 1:20, ilmaistuna g/ml:na, ja uuttolämpötila vaihtelee välillä 60 - 80 astetta.

Kääntäjän huomautus: Lähde kertoo lisäksi, että tämä suhde tarkoittaa "1 g raaka-ainetta lisätään 1 ml:aan liuotinta." Tämä väite on ristiriidassa määritellyn 1:10–1:20 alueen kanssa, joka vastaa 10–20 ml liuotinta grammaa kohden raaka-ainetta.

[0011]Makrohuokoisen adsorptiohartsikolonnin AB-8 halkaisijan ja korkeuden välinen suhde on valinnaisesti välillä 1:8-1:15, jossa suhde on kolonnin halkaisija d kolonnin korkeuteen h. Eluutiovirtausnopeus vaihtelee välillä 1 - 3 BV/h.

[0012]Valinnaisesti pakastekuivausolosuhteet käsittävät -40 - -50 asteen lämpötilan, 10 - 30 Pa:n tyhjiöpaineen ja 12 - 24 tunnin kuivausajan.

[0013]Menetelmä verbaskosidin levittämiseksi ihon lipidituotannon edistämiseksi tarjotaan seuraavasti.

[0014]Lisää verbaskosidia paikalliseen valmisteen pohjaan ennalta määrätyssä massaosuudessa ja sekoita tasaisesti valmiin tuotteen valmistamiseksi.

Levitä valmis tuote ihon pinnalle kerran tai kahdesti päivässä.

Tunkeutuessaan verbaskosidi vaikuttaa epidermaalisiin HaCaT-soluihin edistäen solujen lisääntymistä ja vahvistaen tiukkoja liitoksia.

Samalla se lisää ACC:n, FASN:n ja N-SMaasin geeni- ja proteiiniekspressiota, lisää rasvahapposyntaasin aktiivisuutta, lisää HAS2-, HAS3- ja CD44-säätelyä ja lisää hyaluronihappopitoisuutta.

Jatka käyttöä yhdestä neljään viikkoa saavuttaaksesi ihosuojan yleisen paranemisen.

[0015]Valinnaisesti verbaskosidin massaosuus paikallisessa tuotteessa vaihtelee välillä 0,01 % - 5,0 %.

[0016]Vaihtoehtoisesti käytä 0,1–0,5 g lopputuotetta käyttökertaa kohti ja hiero hellävaraisesti 1–3 minuuttia levityksen jälkeen imeytymisen edistämiseksi.

[0017]Paikallistuote on valinnaisesti lääkesidos, toimenpiteen jälkeinen korjaustuote, atooppisen ihottuman lisähoitotuote, erityisesti herkälle iholle tarkoitettu ihonhoitotuote tai intensiivisesti kosteuttava ja korjaava ihonhoitotuote.

[0018]Valinnaisesti apuaineita voidaan lisätä myös verbaskosidin levittämisen aikana.

[0019]Lisäksi täyteaine valitaan kosteuttavasta aineesta, emulgaattorista, säilöntäaineesta, tuoksusta tai rauhoittavasta aineesta.

Apuainetta sisältävän koostumuksen annosmuoto valitaan kosteusemulsion, emulsiovoiteen, geelin, seerumin tai arkkinaamioliuoksen joukosta.

 

Keksinnön hyödylliset vaikutukset

[0020]Keksinnön edulliset vaikutukset ovat seuraavat.

[0021]Keksintö osoittaa, että verbaskosidilla on ydintoimintoja ihon lipidien ja hyaluronihapon tuotannon edistämisessä.

Se voi myös edistää ihosolujen lisääntymistä, vahvistaa solujen välisiä tiiviitä liitoksia ja nopeuttaa haavojen paranemista muodostaen suljetun silmukan mekanismin "edistää solujen lisääntymistä → stabiloimassa solujen välisiä yhteyksiä → tehostaa lipidien ja hyaluronihapon tuotantoa → nopeuttaa korjausta ja paranemista."

Tekniikan tasoon verrattuna keksinnöllä kuvataan olevan seuraavat edut.

[0022]Verbascoside on luonnollinen kasviperäinen aktiivinen ainesosa, jolla on korkea turvallisuustaso ja selkeästi määritelty farmakologinen aktiivisuus, joka välttää kemiallisesti syntetisoitujen ainesosien mahdolliset ihoärsytysriskit.

Toimituksellinen pätevyys: Tämä on lähteen turvallisuusväite, ei pelkästään kasvitieteellisen alkuperän perusteella tehty johtopäätös.

[0023]Verbaskosidin valmistusteho ja saanto paranevat.

[0024]Verbaskosidi vaikuttaa laajaan valikoimaan kohteita sääteleen samanaikaisesti useita keskeisiä prosesseja, mukaan lukien solujen lisääntyminen, tiiviiden yhteyksien proteiinien ilmentyminen, lipidisynteesi, hyaluronihapon tuotanto ja haavan paraneminen.

Siten se parantaa ihoa suojaavaa toimintaa integroidulla tavalla, ja sen vaikutuksia kuvataan ylivoimaisiksi yksittäisten ainesosien vaikutuksilla.

[0025]Sen sovellukset ovat laajat, mukaan lukien lääketieteellinen korjaus, ihosairauksien lisähoito, herkän ihon hoito sekä päivittäinen kosteuttaminen ja korjaaminen eri väestöryhmien ihon terveystarpeiden täyttämiseksi.

 

Piirustusten lyhyt kuvaus

[0026]Keksinnön suoritusmuotojen tai tunnetun tekniikan teknisten ratkaisujen selventämiseksi selostetaan seuraavassa lyhyesti suoritusmuotojen tai tunnetun tekniikan kuvaamiseen tarvittavat piirustukset.

Alla kuvatut piirustukset edustavat vain tiettyjä keksinnön suoritusmuotoja. Alan ammattilainen voi saada niistä muita piirustuksia ilman luovaa vaivaa.

[0027]Kuvio 1 on kaavamainen vuokaavio keksinnön mukaisesta valmistusmenetelmästä.

[0028]Kuvio 2 esittää HaCaT-solujen elinkelpoisuustietoja.

[0029]Kuvio 3 esittää rasvahapposyntaasiaktiivisuustiedot.

[0030]Kuvassa 4 on esitetty hyaluronihappopitoisuustiedot.

[0031]Kuvio 5 esittää HaCaT-solujen elinkelpoisuusdataa keksinnölle.

[0032]Kuvio 6 esittää rasvahapposyntaasin aktiivisuustietoja keksinnölle.

[0033]Kuvio 7 esittää rasvahapposynteesiin liittyvien geenien ilmentymisen.

[0034]Kuvio 8 esittää rasvahapposynteesiin liittyvien proteiinien ilmentymisen.

[0035]Kuvio 9 esittää Western blot -tuloksia, jotka liittyvät rasvahapposynteesiin.

[0036]Kuvassa 10 on esitetty hyaluronihappopitoisuustiedot.

[0037]Kuvio 11 esittää hyaluronihapposynteesiin liittyvien geenien ilmentymistä.

[0038]Kuvio 12 esittää hyaluronihapposynteesiin liittyvien proteiinien ilmentymistä.

[0039]Kuvio 13 esittää hyaluronihappoon liittyviä Western blot -tuloksia.

[0040]Kuvio 14 esittää claudiini-1:n ilmentymistasoja.

[0041]Kuvio 15 esittää okludiinin ilmentymistasoja.

[0042]Kuva 16 esittää haavan sulkeutumisnopeudet.

[0043]Kuva 17 esittää kuvia solun naarmuuntumismäärityksestä.

[0044]Kuvassa 18 on arvio eri näytteiden kosteutustehosta.

 

Yksityiskohtainen kuvaus suoritusmuodoista

[0045]Sovelluksen suoritusmuodot kuvataan yksityiskohtaisesti alla viitaten oheisiin piirustuksiin.

Esimerkki 1: Puhdistetun verbaskosidin valmistus

[0046]Esimerkki 1.

[0047]Kuten kuvassa 1 esitetään, tämä esimerkki tarjoaa menetelmän verbaskosidin, lyhennettynä Ver, valmistamiseksi, joka sisältää seuraavat vaiheet.

[0048]Valitse kuivatut, mehevät varretCistanche deserticolataiCistanche tubulosa, molemmat kuuluvat Orobanchaceae-heimoon.

Viipaloi materiaali, vaahdota sitä kiehuvassa vedessä 10–25 minuuttia ja kuivaa uunissa 40–60 asteessa, jolloin verbaskosidipitoisuus nousee yli nelinkertaiseksi.

 

 

Huomautus:* vs. tyhjä kontrolliryhmä, P<0.05P < 0.05P<0.05.

 

Jauhamisen jälkeen materiaali uutetaan palautusjäähdyttäen 50–80-prosenttisella etanolin vesiliuoksella kahdesta neljään kertaan 1–3 tunnin ajan joka kerta.

Uutteet yhdistetään ja väkevöidään alennetussa paineessa, kunnes etanolin haju ei jää jäljelle, jolloin saadaan konsentroitu liuos.

 

[0049]Ohjaa konsentroitu liuos AB-8 makrohuokoisen adsorptiohartsikolonnin läpi.

Eluoi peräkkäin deionisoidulla vedellä ja 30-50-prosenttisella etanolin vesiliuoksella epäpuhtauksien poistamiseksi, minkä jälkeen 60-90-prosenttisella etanolin vesiliuoksella kohdeainesosien eluoimiseksi.

Kerää eluaatti ja konsentroi se alennetussa paineessa.

Puhdista se silikageelipylväskromatografialla käyttämällä eluenttina kloroformi-metanolia tilavuussuhteessa 5:1-2:1.

Tavoitefraktiot kerätään talteen, väkevöidään alennetussa paineessa ja pakastekuivataan, jotta saadaan puhdistettua verbaskosidia, jonka puhtaus on vähintään 98 %.

[0050]Tarkemmin sanottuna materiaalin ja liuotin suhde palautusjäähdytysuuton aikana vaihtelee välillä 1:10 - 1:20 ja uuttolämpötila on 60 - 80 astetta.

[0051]Makrohuokoisen adsorptiohartsikolonnin AB-8 halkaisijan ja korkeuden välinen suhde on 1:8-1:15 ja eluution virtausnopeus 1-3 BV/h.

[0052]Pakastekuivausolosuhteet käsittävät lämpötilan -40 - -50 astetta, tyhjiöpaineen 10 - 30 Pa ja kuivausajan 12 - 24 tuntia.

 

Taulukko 2. Yhteenveto eri näytteiden bioaktiivisuudesta

Indeksi	Tyhjä ohjaus	Positiivinen ohjaus	CTE	Ech	Ver
Solujen elinkelpoisuus (%)	100 ± 8.347	/	122.052 ± 8.051*	117.868 ± 7.941*	128.894 ± 9.528*
FAS-aktiivisuus (U/mg prot)	2.712 ± 0.419	18.488 ± 4.56*	2.069 ± 0.27	9.799 ± 1.356*	10.4 ± 0.697*
HA-pitoisuus (ng/ml)	10.908 ± 0.968	19.925 ± 4.306*	21.644 ± 2.037*	13.517 ± 1.653*	18.486 ± 1.341*
Claudin-1:n ilmentyminen (pg/ml)	414.58 ± 25.05	/	505.556 ± 20.518*	478.937 ± 12.419*	554.057 ± 22.106*
Okludiinin ilmentyminen (pg/ml)	3.287 ± 0.683	/	4.285 ± 0.575	4.666 ± 0.582*	7.258 ± 0.774*
24 tunnin haavan paranemisnopeus (%)	30.581 ± 1.308	70.075 ± 1.781*	40.762 ± 9.68	37.102 ± 7.038	45.173 ± 5.508*
48 tunnin haavan paranemisnopeus (%)	55.458 ± 6.674	87.545 ± 3.155*	76.47 ± 2.684*	67.883 ± 5.678*	76.704 ± 4.8*

Huomautus:* vs. tyhjä kontrolliryhmä, P<0.05P < 0.05P<0.05.

 

Esimerkki 2: Cistanche-polysakkaridiuutteen valmistus

[0053]Esimerkki 2.

[0054]Uuta Cistanchea kahdesti kuumennetussa palautusjäähdyttäen 20-kertaisella ja 15-kertaisella vesimäärällä kolmen tunnin ja kahden tunnin ajan.

Suodata, yhdistä suodokset ja konsentroi 80-90 asteessa.

Lisää 215 ml 95 % etanolia 80 %:n lopullisen etanolin pitoisuuden saavuttamiseksi ja jätä yön yli 4 asteeseen.

Kerää sakka joko suodattamalla, säilyttämällä suodatinkakku tai sentrifugoimalla 4 000 rpm 10 minuutin ajan.

Pese sakka kolme kertaa absoluuttisella etanolilla ja kuivaa se 50 asteessa, jolloin saadaan Cistanche-polysakkaridiuute, merkintä POL.

 

Esimerkki 3: Fenyylietanoidiglykosidiuutteen valmistus

[0055]Esimerkki 3.

[0056]Uuta Cistanchea kahdesti kuumennetussa palautusjäähdyttäen 20-kertaisella ja 15-kertaisella vesimäärällä kolmen tunnin ja kahden tunnin ajan.

Suodata, yhdistä suodokset ja konsentroi 80-90 asteessa.

Lisää 215 ml 95 % etanolia 80 %:n lopullisen etanolin pitoisuuden saavuttamiseksi ja jätä yön yli 4 asteeseen.

Kerää suodos suodattamalla tai supernatantti sentrifugoimalla nopeudella 4 000 rpm 10 minuuttia.

Konsentroi ja kuivaa Cistanche-fenyylietanoliglykosidiuutteen saamiseksi, jota kutsutaan nimellä POLS.

Testaus osoitti ekinakosidipitoisuuden olevan 21,8 % ja verbaskosidipitoisuuden 1,2 %.

 

Esimerkki 4: Uutteen RE1 valmistus

[0057]Esimerkki 4.

[0058]LiotaCistanche deserticolakuusinkertaisessa määrässä 52 % etanolia huoneenlämpötilassa 10 päivän ajan.

Suodata ja säilytä kasvijäämät.

Kuivaamisen jälkeen uutetaan jäännös kerran palautusjäähdyttäen kuudenkertaisella määrällä 95-prosenttista etanolia kahden tunnin ajan.

Suodata, yhdistä suodokset, väkevöi 60 asteessa ja kuivaa, jolloin saadaan Cistanchen fenyylietanoidiglykosidien ja niiden johdannaisten uute, nimeltään RE1.

Uute sisältää aineosia, mukaan lukien ekinakosidi, verbaskosidi, isoverbaskosidi ja 2'-asetyyliverbaskosidi.

 

Esimerkki 5: Uutteen RE2 valmistaminen

[0059]Esimerkki 5.

[0060]OteCistanche tubulosakahdesti 75 % etanolilla yhden tunnin ajan joka kerta.

Suodata ja säilytä jäännös.

Kuivaamisen jälkeen uutetaan jäännös kerran palautusjäähdyttäen kuudenkertaisella määrällä 95-prosenttista etanolia kahden tunnin ajan.

Suodata, yhdistä suodokset, väkevöi 60 asteessa ja kuivaa, jolloin saadaan Cistanche-fenyylietanoliglykosidien ja niiden johdannaisten uute, nimeltään RE2.

Uute sisältää aineosia, mukaan lukien ekinakosidi, verbaskosidi, isoverbaskosidi ja 2'-asetyyliverbaskosidi.

 

Esimerkki 6: Kokonaisfenyylietanoidiglykosidiuutteen valmistus

[0061]Esimerkki 6.

[0062]Viipaloi Cistanche ja uuta kahdesti 75-prosenttisella etanoliliuoksella 1,5 tunnin ajan joka kerta.

Yhdistä uutteet, konsentroi ja kuivaa, jolloin saadaan Cistanche-fenyylietanoidiglykosidiuute, jota kutsutaan nimellä CTE.

Testaus osoitti, että ekinakosidipitoisuus oli 22,6 % ja verbaskosidipitoisuus 4,5 %.

 

Esimerkki 7: Levitysmenetelmä

[0063]Esimerkki 7.

[0064]Perustuen esimerkkiin 1, tämä esimerkki tarjoaa sovellusmenetelmän, jolla verbaskosidi vaikuttaa täydelliseen ihoesteen korjaussekvenssiin epidermaalisen solujen uusiutumisen → tehostuneet solujen väliset yhteydet → lipidimatriisin täydennys → hyaluronihapposynteesi → haavan paraneminen.

Erityinen levitysmenetelmä on seuraava.

[0065]Lisää verbaskosidia paikalliseen valmisteen pohjaan ennalta määrätyssä massaosuudessa ja sekoita tasaisesti valmiin tuotteen valmistamiseksi.

Levitä valmis tuote ihon pinnalle kerran tai kahdesti päivässä.

Tunkeutuessaan verbaskosidi vaikuttaa epidermaalisiin HaCaT-soluihin edistäen solujen lisääntymistä ja vahvistaen tiukkoja liitoksia.

Samalla se lisää ACC:n, FASN:n ja N-SMaasin geeni- ja proteiiniekspressiota, lisää rasvahapposyntaasin aktiivisuutta, lisää HAS2-, HAS3- ja CD44-säätelyä ja lisää hyaluronihappopitoisuutta.

Jatka käyttöä yhdestä neljään viikkoa saavuttaaksesi ihosuojan yleisen paranemisen.

[0066]Tarkemmin sanottuna verbaskosidin massaosuus paikallisessa tuotteessa vaihtelee välillä 0,01 % - 5,0 %.

[0067]Käytä 0,1–0,5 g lopputuotetta käyttökertaa kohti ja hiero hellävaraisesti 1–3 minuuttia levityksen jälkeen imeytymisen edistämiseksi.

[0068]Paikallinen tuote on lääkesidos, toimenpiteen jälkeinen korjaustuote, atooppisen ihottuman lisähoitotuote, erityisesti herkälle iholle tarkoitettu ihonhoitotuote tai intensiivisesti kosteuttava ja korjaava ihonhoitotuote.

[0069]Apuaineita voidaan myös lisätä verbaskosidin käytön aikana.

Lisäksi täyteaine valitaan kosteuttavasta aineesta, emulgaattorista, säilöntäaineesta, tuoksusta tai rauhoittavasta aineesta.

Apuainetta sisältävän koostumuksen annosmuoto valitaan kosteusemulsion, emulsiovoiteen, geelin, seerumin tai arkkinaamioliuoksen joukosta.

 

Esimerkki 8: Koemateriaalit ja -laitteet

[0070]Esimerkki 8.

[0071]Esimerkkien 1 ja 7 perusteella keksinnössä käytetyt koemateriaalit ovat seuraavat.

[0072]Koesolut olivat immortalisoituja ihmisen epidermaalisia HaCaT-soluja, jotka ostettiin Shanghai Yaji Biotechnologylta.

Soluja viljeltiin korkean glukoosin DMEM:ssä, jota oli täydennetty 10 % naudan sikiön seerumilla ja 1 % penisilliini-streptomysiinillä 37 asteessa ilmakehässä, joka sisälsi 5 % hiilidioksidia kyllästetyssä kosteudessa.

[0073]Kokeellinen materiaali oli:

Echinacoside, lyhennetty Ech, National Institutes for Food and Drug Control, Kiina.

Sikiön naudan seerumi, FBS, EXCELLiltä.

Korkean glukoosin DMEM Gibcolta.

0,25 % trypsiini-EDTA Gibcolta.

Fosfaattipuskuroitu suolaliuosjauhe Beijing Zhongshan Golden Bridge Biotechnologylta.

CCK-8 TransGen Biotechin solujen lisääntymis-/sytotoksisuusmäärityspakkaus.

Human Occludin, OCLN, ELISA Kit Wuhan CUSABIOlta.

Ihmisen Claudin-1, CLDN1, ELISA Kit Wuhan CUSABIOlta.

Rasvahapposyntaasi, FAS, Solarbio Activity Assay Kit.

Ihmisen hyaluronihappo ELISA Kit Wuhan CUSABIOlta.

Rekombinantti ihmisen EGF-proteiini, kantajaton, R&D Systemsiltä.

DEPC Amrescolta.

M5 HiClear DL2000 DNA Marker Mei5 Biotechnologylta.

Ambionin TRIzol-reagenssi.

5X All-In-One RT MasterMix abm:ltä.

EvaGreen Express 2X qPCR MasterMix–Low ROX abm:ltä.

Easy II Protein Quantitative Kit, BCA, TransGen Biotech.

RIPA-lyysipuskuri Bosterilta.

Proteaasin estäjä Bosterilta.

Goat Anti-Rabbit IgG H&L, HRP, Abcam.

Goat Anti-Mouse IgG H&L, HRP, Abcam.

Esivärjätty proteiinimerkki Solarbolta.

-Merkaptoetanoli Amrescolta.

PVDF-siirtokalvo, 0,45 μm, Milliporelta.

Sangon Biotechin glysiini.

Sangon Biotechin glyseroli.

SuperSignal West Pico PLUS Thermo Fisheriltä.

Beeta-aktiinin kuormitusta säätelevä vasta-aine, monoklonaalinen hiiri, Sino Biological.

ACC1-vasta-aine Affinitysta.

FASN-vasta-aine Affinityltä.

Affinityn SMPD2-vasta-aine.

Hyaluronan Synthase 2 -vasta-aine, HAS2, valmistaja Affinity.

Affinityn HAS3-vasta-aine.

Affinityn CD44-vasta-aine.

[0074]Kokeellinen laitteisto sisälsi:

SmartCell HF-90 hiilidioksidisoluviljelyhautomo, Shanghai Lishen Scientific Equipment Co., Ltd. [上海力康仪器有限公司].

HF1200LC biologinen turvakaappi samalta valmistajalta.

DK-80 hidasnopeuksinen pöytäsentrifugi, Shanghai Feige Instrument Co., Ltd.

Heraeus Multifuge X1R nopea jäähdytetty sentrifugi, Thermo Fisher Scientific.

xMark mikrolevyspektrofotometri, Bio-Rad.

GL-88B pyörresekoitin, Haimen Qilin-Bell Instrument Manufacturing Co., Ltd.

Malli 2500 geelikuvausjärjestelmä, Shanghai Tianneng.

MyCycler Thermal Cycler PCR-laite, Bio-Rad.

7500 Fast Real-Time PCR-laite, ABI.

Chemiscope 3000 kemiluminesenssikuvausjärjestelmä, Shanghai Qinxiang Scientific Instrument Co., Ltd.

Mini-PROTEAN Tetra-järjestelmän proteiininsiirtolaite, Bio-Rad.

DYCZ-24DN elektroforeesilaite, Beijing Liuyi.

Kääntäjän huomautus: Edellä olevat valmistajan ja laitteen kuvaukset noudattavat toimitettua lähdettä; luettelon tietoja ei varmennettu itsenäisesti.

 

 

 

Esimerkki 9: Koemenetelmät

[0075]Esimerkki 9.

[0076]Keksinnössä käytetyt kokeelliset menetelmät olivat esimerkkien 1-8 perusteella seuraavat.

CCK-8 Solujen lisääntymismääritys

[0077]Valmista HaCaT-soluista yksisoluinen suspensio täydellisessä viljelyväliaineessa tiheydellä 5 x 1045 x 10^45 x 104 solua/ml.

Istuta solut 96-kuoppaiselle levylle 100 µl per kuoppa.

Kun solujen on annettu kiinnittyä 24 tuntia 37 asteessa 5 % hiilidioksidin alla, viljelyväliaine hävitetään ja eri testiaineet annetaan. Sisällytä tyhjä vertailuryhmä, jossa on n=5n=5n=5.

Hävitä väliaine 48 tunnin käsittelyn jälkeen ja lisää 100 µl juuri valmistettua 10 % CCK-8 liuosta kuhunkin kuoppaan.

Jatka inkubointia soluviljelyinkubaattorissa yhden tunnin ajan ja mittaa sitten optinen tiheys aallonpituudella 450 nm käyttämällä mikrolevylukijaa.

Rasvahapposyntaasiaktiivisuusmääritys

[0078]Valmista HaCaT-soluista yksisoluinen suspensio täydellisessä viljelyväliaineessa tiheydellä 5 x 1045 x 10^45 x 104 solua/ml ja kylvä solut viljelypulloihin.

Kun solujen on annettu kiinnittyä 24 tuntia 37 asteessa 5 % hiilidioksidin alla, viljelyväliaine hävitetään ja eri testiaineet annetaan.

Sisällytä tyhjä kontrolliryhmä ja positiivinen kontrolliryhmä, joita hoidettiin rekombinantilla ihmisen epidermaalisella kasvutekijällä, rhEGF:llä, pitoisuudella 20 ng/ml, n=3n=3n=3.

Kerää solut 48 tunnin käsittelyn jälkeen ja mittaa rasvahapposyntaasiaktiivisuus määrityssarjan ohjeiden mukaisesti.

Hyaluronihappopitoisuuden määritys

[0079]Valmista HaCaT-soluista yksisoluinen suspensio täydellisessä viljelyväliaineessa tiheydellä 5 x 1045 x 10^45 x 104 solua/ml ja kylvä solut viljelypulloihin.

Kun solujen on annettu kiinnittyä 24 tuntia 37 asteessa 5 % hiilidioksidin alla, viljelyväliaine hävitetään ja eri testiaineet annetaan.

Sisällytä tyhjä kontrolliryhmä ja positiivinen kontrolliryhmä, joita on käsitelty rhEGF:llä pitoisuudella 20 ng/ml, n=3n=3n=3.

Kerää 48 tunnin käsittelyn jälkeen soluviljelmän supernatantit ja mittaa hyaluronihappopitoisuus määrityssarjan ohjeiden mukaisesti.

Kvantitatiivinen käänteistranskriptio-PCR

[0080]Valmista HaCaT-solujen yksisoluinen suspensio täydellisessä viljelyväliaineessa tiheydellä 5 x 1045 x 10^45 x 104 solua/ml ja kylvä solut kuusikuoppaisille levyille.

Kun solujen on annettu kiinnittyä 24 tuntia 37 asteessa 5 % hiilidioksidin alla, viljelyväliaine hävitetään ja eri testiaineet annetaan.

Sisällytä tyhjä kontrolliryhmä ja positiivinen kontrolliryhmä, joita on käsitelty rhEGF:llä pitoisuudella 20 ng/ml, n=3n=3n=3.

Hävitä 48 tunnin käsittelyn jälkeen supernatantti ja lisää 1 ml TRIzolia jokaiseen kuoppaan solujen irrottamiseksi ja hajottamiseksi varmistaen, että reagenssi peittää solukerroksen.

Ravista viljelyastiaa toistuvasti, kunnes solut vapautuvat, ja siirrä materiaali 1,5 ml:n mikrosentrifugiputkeen.

Erota kokonais-RNA ja käytä qRT-PCR:ää määrittääksesi ACC:n, FASN:n, N-SMaasin, HAS2:n, HAS3:n ja CD44:n ilmentymisen.

Western Blotting

[0081]Valmista HaCaT-soluista yksisoluinen suspensio täydellisessä viljelyväliaineessa tiheydellä 5 x 1045 x 10^45 x 104 solua/ml ja kylvä solut viljelypulloihin.

Kun solujen on annettu kiinnittyä 24 tuntia 37 asteessa 5 % hiilidioksidin alla, viljelyväliaine hävitetään ja eri testiaineet annetaan.

Sisällytä tyhjä kontrolliryhmä ja positiivinen kontrolliryhmä, joita on käsitelty rhEGF:llä pitoisuudella 20 ng/ml, n=3n=3n=3.

Kerää solut 48 tunnin käsittelyn jälkeen.

Pura kokonaisproteiini ja käytä Western blottausta ACC:n, FASN:n, N-SMaasin, HAS2:n, HAS3:n ja CD44:n ilmentymisen määrittämiseen.

Tight-Junction-proteiinin ilmentymisen arviointi

[0082]Valmista HaCaT-soluista yksisoluinen suspensio täydellisessä viljelyväliaineessa tiheydellä 5 x 1045 x 10^45 x 104 solua/ml ja kylvä solut viljelypulloihin.

Kun solujen on annettu kiinnittyä 24 tuntia 37 asteessa 5 % hiilidioksidin alla, viljelyväliaine hävitetään ja eri testiaineet annetaan.

Sisällytä tyhjä vertailuryhmä, jossa on n=3n ​​= 3n=3.

Kerää 48 tunnin käsittelyn jälkeen solulysaatit ja mittaa okludiini ja claudiini-1 ELISA-testillä pakkauksen ohjeiden mukaisesti.

Cell Scratch Assay

[0083]Valmista HaCaT-soluista yksisoluinen suspensio täydellisessä elatusaineessa, jonka tiheys on 5 x 1055 x 10^55 x 105 solua/ml.

Kylvä 500 µl per kuoppa 24-kuoppaiselle levylle.

Solujen kiinnittymisen jälkeen anna käsittelyt jakamalla solut nollakontrolliryhmään, positiiviseen kontrolliryhmään, jota on käsitelty naudan sikiön seerumilla, ja testiaineryhmiin.

Käsittele 48 tuntia.

Hoidon jälkeen luo varovasti suora naarmu pipetin kärjellä.

Korvaa elatusaine seerumittomalla elatusaineella kaikissa ryhmissä paitsi positiivisessa kontrolliryhmässä.

Valokuvaa naarmuuntuneet alueet 0, 24 ja 48 tunnin kohdalla.

Laske naarmualue ja arvioi solujen migraatiokapasiteetti ImageJ:n avulla.

 

Esimerkki 10: Kosteudenpidätysarviointi

[0084]Esimerkki 10.

[0085]In vitro gravimetristä menetelmää käytettiin arvioimaan Ver-, Ech- tai glyseriiniä sisältävien seerumien kosteutustehoa.

Punnitse tietyt määrät esikäsiteltyä näytettä 1, joka sisältää 2 % Ver; Näyte 2, joka sisältää 2 % Ech; ja positiivinen kontrolli, joka sisälsi 5 % glyseriiniä.

Säilytä näytteet vakiolämpötilassa, vakiokosteudessa 25 asteen ja 50 % suhteellisessa kosteudessa.

Punnitse näytteet eri ajankohtina ja piirrä kosteudenpidätyskäyrät.

[0086]Kosteudenpidätysaste lasketaan seuraavasti:

Kosteudenpidätysaste (%)=M2−M0M1−M0×100%\\text{Kosteudenpidätysaste (\\%)}=\\frac{M_2-M_0}{M_1-M_0}\\times100\\% Kosteudensitomisaste (%)=M1​−M0​M2​−M0​​×100 %

[0087]Jossa:

[0088]M0M_0M0​ on tyhjän levyn massa grammoina.

[0089]M1M_1M1​ on lasilevyn massa näytteen lisäämisen jälkeen grammoina.

[0090]M2M_2M2​ on massa grammoina eksikkaattorissa usean tunnin säilytyksen jälkeen.

Kääntäjän huomautus: Kappale [0085] kuvaa varastoinnin säädellyn lämpötilan ja säädellyn kosteuden kammiossa, kun taas [0090] viittaa eksikkaattoriin. Molemmat kuvaukset on säilytetty lähteestä.

 

Kokeelliset tulokset

[0091]Tämän esimerkin kokeelliset tulokset ovat seuraavat.

Vaikutukset HaCaT-solujen lisääntymiseen

[0092]Kuten kuvassa 2 esitetään, eri Cistanche-uutteilla oli erilaisia ​​vaikutuksia HaCaT-solujen elinkelpoisuuteen.

Ver ja POL lisäsivät merkittävästi solujen elinkelpoisuutta, kun P<0.05P < 0.05P<0.05, and Ver produced the highest viability.

Vaikutukset rasvahapposyntaasiaktiivisuuteen

[0093]Kuten kuviossa 3 esitetään, sarveiskerroksen solujen väliset lipidit ovat ihon "tiili ja laasti" -rakenteen "laasti" ydinkomponentti.

Keramidit, kolesteroli ja vapaat rasvahapot muodostavat tiheän lamellaarisen kaksikerroksisen rakenteen tietyissä suhteissa.

Normaalin lipidisynteesin ylläpitäminen voi vahvistaa tätä rakennetta, estää veden häviämistä, vastustaa ulkoisia vaurioita, ylläpitää ihon mikrobiomin tasapainoa ja edistää itsensä korjaamista.

Se voi siten puuttua kuivuuteen, herkkyyteen ja heikentyneeseen ihon puolustuskykyyn niiden lähteellä.

[0094]Rasvahapposyntaasi kuvataan ydinnopeutta rajoittavaksi entsyymiksi ja keskussyöttömoottoriksi, joka säätelee ihon lipidisynteesiä.

Sen päätehtävä on katalysoida palmitiinihapon C16:0 synteesiä asetyyli-CoA:sta ja malonyyli-CoA:sta. Palmitiinihappoa kuvataan pääasialliseksi endogeeniseksi pitkäketjuiseksi tyydyttyneeksi rasvahapoksi ihossa.

Palmitiinihapolla on kaksi tehtävää.

Ensinnäkin perustavanlaatuisena rakenteellisena rakennuspalikkana sitä käytetään suoraan sarveiskerrosten lipidien synteesissä, mukaan lukien keramidit ja vapaat rasvahapot, jotka tarjoavat materiaalin perustan lamellikaksoiskerroksen muodostumiselle.

Toiseksi tärkeänä esiaste- ja signaalimolekyylinä sitä voidaan edelleen prosessoida alavirran elongaasien, kuten ELOVL1:n, avulla erittäin pitkäketjuisiksi rasvahapoiksi. Näitä erottuvia rasvahappoja tarvitaan esteen eheyteen.

Accordingly, fatty acid synthase activity directly determines the supply of raw materials available for the skin's own production of barrier lipids.

Sen toiminnan tehostaminen on ensimmäinen ja kriittinen vaihe epidermaalisen lipidisynteesin edistämisessä ja siten ihon fyysisen suojan korjaamisessa ja vahvistamisessa, mikä viime kädessä tukee kosteuden säilyttämistä ja puolustuskykyä.

[0095]Tiedot osoittivat, että positiivinen kontrolli rhEGF ja Ver lisäsivät merkittävästi rasvahapposyntaasiaktiivisuutta, kun P<0.05P < 0.05P<0.05.

POL, POLS, RE1 ja RE2 eivät lisänneet rasvahapposyntaasiaktiivisuutta.

Although RE2 increased fatty acid synthase activity, the difference was not statistically significant, with P>0.05P > 0.05P>0.05.

Kääntäjän huomautus: Lähde sisältää ensin RE2:n niiden materiaalien joukossa, jotka eivät lisänneet aktiivisuutta, sitten raportoi RE2:n merkityksettömän lisäyksen. Tämä epäjohdonmukaisuus säilyy.

 

Vaikutukset hyaluronihappopitoisuuteen

[0096]Kuten kuvasta 4 näkyy, hyaluronihappo on ihossa luonnostaan ​​esiintyvä polysakkaridi, jolla on vahva vettä sitova kyky ja jonka lähteessä kuvataan pääasiassa verinahassa ja marraskedessä.

Kasvava hyaluronihappopitoisuus voi säilyttää kosteuden syvemmällä tasolla, ylläpitää tervettä ihon rakennetta, tarjota antioksidanttisia ja anti-inflammatorisia vaikutuksia, edistää haavan paranemista ja paranemista sekä parantaa sarveiskerroksen toimintaa.

Näiden vaikutusten kuvataan tuottavan kosteutta, täyteläisyyttä ja kimmoisuutta sisältäpäin.

[0097]Tiedot osoittivat, että positiivinen kontrolli rhEGF, Ver ja RE2 lisäsivät merkittävästi hyaluronihappopitoisuutta P:n kanssa.<0.05P < 0.05P<0.05.

POL, POLS ja RE1 eivät lisänneet hyaluronihappopitoisuutta.

 

Uuteluokkien ja puhdistetun verbaskosidin vertailu

[0098]Cistanche sisältää pääasiassa fenyylietanoidiglykosideja ja polysakkarideja.

The activities of the polysaccharide extract, POL; phenylethanoid glycoside extracts, POLS, RE1, and RE2; and verbascoside, Ver, were therefore compared.

Kuvien 2–4 tulokset osoittavat, että eri menetelmillä valmistetuilla Cistanche-fenyylietanoidiglykosidiuutteilla ja yksittäisellä yhdisteellä oli erilaisia ​​vaikutuksia HaCaT-solujen lisääntymisen edistämisessä, rasvahapposyntaasiaktiivisuuden lisäämisessä ja hyaluronihappopitoisuuden lisäämisessä.

Vain Ver osoitti toimintaa kaikilla kolmella alueella, kuten yhteenveto taulukosta 1.

[0099]–[0101] Nämä kappalenumerot ja taulukon 1 sisältö eivät olleet mukana toimitetussa lähteessä. Puuttuvan materiaalin kääntäminen tai rekonstruointi ei ole mahdollista.

Taulukko 1. Yhteenveto eri näytteiden bioaktiivisuudesta

Indeksi	Tyhjä ohjaus	Positiivinen ohjaus	POL	POLS	RE1	RE2	Ver
Solujen elinkelpoisuus (%)	100 ± 7.008	/	119.008 ± 7.379*	105.312 ± 6.494	85.851 ± 8.381	95.234 ± 10.065	128.894 ± 9.528*
FAS-aktiivisuus (U/mg prot)	2.712 ± 0.419	18.488 ± 4.56*	3.786 ± 1.715	2.399 ± 0.717	2.145 ± 0.889	9.34 ± 10.756	10.63 ± 2.228*
HA-pitoisuus (ng/ml)	10.908 ± 0.968	19.925 ± 4.306*	6.881 ± 2.411	6.321 ± 1.021	6.53 ± 1.342	16 ± 2.531*	17.86 ± 3.27*

 

CTE:n, Echinacosiden ja Verbascosidin lisävertailu

[0102]Kuten kuvasta 5 näkyy, tärkeimmät fenyylietanoidiglykosidit Cistanchessa sisältävät ekinakosidin ja verbaskosidin.

22,6 % ekinakosidia ja 4,5 % verbaskosidia sisältävän Cistanchen kokonaisfenyylietanoidiglykosidiuutteen, CTE:n vaikutukset; ekinakosidi, Ech; ja verbaskosidia, Ver, HaCaT-solujen proliferaatiossa, verrattiin sen vuoksi edelleen.

[0103]Tiedot osoittivat, että CTE, Ech ja Ver kaikki edistävät HaCaT-solujen lisääntymistä.

CTE ja Ver tuottivat voimakkaimmat vaikutukset, mikä viittaa ihosolujen suojaaviin vaikutuksiin.

Muut vaikutukset rasvahapposyntaasiaktiivisuuteen

[0104]Kuten kuviossa 6 esitetään, vaikutukset rasvahapposyntaasiaktiivisuuteen olivat seuraavat.

[0105]Tiedot osoittivat, että positiivinen kontrolli rhEGF, Ech ja Ver lisäsivät merkittävästi rasvahapposyntaasiaktiivisuutta, kun P<0.05P < 0.05P<0.05.

CTE ei lisännyt rasvahapposyntaasiaktiivisuutta.

 

Rasvahapposynteesiin liittyvien geenien ja proteiinien ilmentyminen

[0106]Kuvissa 7–9 esitetään vaikutukset rasvahapposynteesiin liittyvien geenien ja proteiinien ilmentymiseen.

[0107]ACC ja FASN kuvataan nopeutta rajoittaviksi entsyymeiksi ja lipidianabolismin ydinmoottoriksi.

Yhdessä ne katalysoivat pitkäketjuisten rasvahappojen, mukaan lukien palmitiinihapon, muodostumista, jotka tarjoavat välttämättömiä raaka-aineita tärkeimpien estelipidien, kuten keramidien, synteesille.

N-SMase on lipidien hajoamisen ja stressisignaloinnin avainaloittaja, jolla on kaksirooli.

Se aktivoituu vamman aikana ja hydrolysoi sfingomyeliiniä signaalikeramidien muodostamiseksi, mikä laukaisee tulehduksen ja apoptoosin ja tukahduttaa normaalin lipidisynteesin.

Normaaleissa soluissa sillä on kuitenkin säätelevä rooli lipidiaineenvaihdunnassa.

[0108]Kuten kuvista 7–9 näkyy, qPCR- ja Western blot -tulokset osoittivat, että Ver, kuten rhEGF, lisäsi merkittävästi ACC:n, FASN:n ja N-SMase:n geeni- ja proteiiniekspressiota P:llä.<0.05P < 0.05P<0.05, and the effects were comparable.

Tulokset osoittavat, että Ver lisää ACC:tä ja FASN:ää säätelemään solulipidisynteesiä kalvon rakentamista, energian varastointia tai eritystä varten.

Samanaikaisesti N-SMaasin noususäätely voi aktivoida sfingolipidien metabolista kiertoa.

Tuotetut keramidit eivät ole vain stressisignaaleja. Normaaleissa fysiologisissa olosuhteissa ne ovat myös tärkeitä esiasteita muiden monimutkaisten sfingolipidien, kuten glykosfingolipidien, synteesissä tai dynaamisessa kalvon uudelleenmuodostuksessa.

Siten näiden kolmen geenin ja proteiinin koordinoitu ylössäätely parantaa solujen yleistä anabolista aktiivisuutta ja kalvon uusiutumiskykyä.

 

Muita vaikutuksia hyaluronihappopitoisuuteen

[0109]Kuten kuvasta 10 näkyy, tiedot osoittivat, että rhEGF, CTE, Ech ja Ver lisäsivät kaikki merkittävästi hyaluronihappopitoisuutta, kun P<0.05P < 0.05P<0.05.

Vaikutusjärjestys oli CTE, jota seurasi Ver, jota seurasi Ech.

 

Hyaluronihapon synteesiin liittyvien geenien ja proteiinien ilmentyminen

[0110]Kuten kuvista 11–13 näkyy, HAS2, HAS3 ja CD44 muodostavat "synteesi-tunnistus-vaste" -palautesilmukan hyaluronihapon aineenvaihdunnassa HaCaT-soluissa.

HAS2 ja HAS3 ovat katalyyttisen synteesientsyymien ydin.

HAS2 tuottaa pääasiassa korkeamolekyylipainoista hyaluronihappoa ja se liittyy ihon homeostaasin ylläpitämiseen ja tulehdusta ehkäiseviin vaikutuksiin.

HAS3 pyrkii tuottamaan alhaisemman molekyylipainon hyaluronihappoa ja osallistuu suoremmin prosesseihin, mukaan lukien solujen migraatio ja lisääntyminen.

CD44 on tärkein hyaluronihapon solupinnan reseptori.

Se ei ainoastaan ​​välitä solunsisäistä ja solunulkoista signaalinsiirtoa hyaluronihapon kanssa, vaan säätelee myös dynaamisesti hyaluronihappoa endosytoosin ja kierrätyksen kautta ja puolestaan ​​säätelee HAS2- ja HAS3-ilmentymistä ja -aktiivisuutta.

[0111]Kuten kuvista 11–13 näkyy, qPCR- ja Western blot -tulokset osoittivat, että Ver, kuten rhEGF, lisäsi merkittävästi HAS2:n, HAS3:n ja CD44:n geeni- ja proteiiniekspressiota P:n kanssa.<0.05P < 0.05P<0.05.

Verin säätelyvaikutukset HAS2-, HAS3- ja CD44-geenin ilmentymiseen olivat suuremmat kuin rhEGF:n.

Tulokset osoittavat, että Ver säätelee HAS2:ta, HAS3:a ja CD44:ää ohjatakseen koko hyaluronihapon "synteesi-kokoonpano-signaalin siirto" -prosessia, mikä edistää orvaskeden kosteutusta, korjausta ja estetoimintoa.

Vaikutukset Tight-Junction-proteiinin ilmentymiseen

[0112]Ihon lipidi- ja hyaluronihapon tuotannon ylläpitämisen kuvataan tarjoavan perustavanlaatuista, synergististä tukea ja stabiloimista HaCaT-solujen välisille tiiviille proteiineille.

Riittävät lipidit sallivat keratinosyyttien muodostaa täydellisiä, organisoituja solujen välisiä lipidikaksoiskerroksia.

Näitä rakenteita kuvataan paitsi esteen fysikaalisena runkona, myös vakaana, hydrofobisena rakenneympäristönä tiiviin liitoksen proteiinien kokoamista ja ankkuroimista varten.

Samalla hyaluronihapon ylläpitämä suotuisa nesteytystila auttaa varmistamaan keratinosyyttien normaalin aineenvaihdunnan ja signaalinsiirron.

Reseptorien, kuten CD44:n, kautta hyaluronihappo säätelee myös epäsuorasti tiukan liitoksen proteiinien ilmentymistä ja jakautumista.

Yhdessä lipidit ja hyaluronihappo tarjoavat fyysisen ja biokemiallisen perustan, jota tarvitaan tiiviiden liitoskohtien muodostumiseen ja ylläpitoon rakenteellisen vakauden ja mikroympäristön homeostaasin näkökulmista.

Ne vahvistavat siten fyysisiä solujen välisiä yhteyksiä ja yleistä esteen eheyttä.

[0113]Yllä olevat tulokset osoittivat, että Ver osoitti voimakkainta aktiivisuutta ihon lipidien ja hyaluronihapon tuotannon edistämisessä.

Lisätutkimus sen vaikutuksista solujen välisiin tiiviisiin liitoksiin osoitti, että CTE, Ech ja Ver edistävät kaikki merkittävästi tiukan liitoksen proteiinin claudiini-1 ekspressiota P:n kanssa<0.05P < 0.05P<0.05, as shown in Figure 14.

Kuten kuvassa 15 esitetään, vain Ech ja Ver edistävät merkittävästi okludiinin ilmentymistä.

Verin vaikutus oli huomattavasti suurempi kuin Echin, ja P<0.05P < 0.05P<0.05.

Tämä oli sopusoinnussa Verin vahvimman toiminnan kanssa ihon lipidien ja hyaluronihapon tuotannon edistämisessä.

 

Vaikutukset haavan paranemiseen

[0114]Kuten kuvista 16–17 näkyy, HAS3 osallistuu suoraan prosesseihin, kuten solujen migraatioon ja lisääntymiseen.

CD44 välittää tietoa hyaluronihaposta soluihin ja viime kädessä säätelee solujen migraatiota, proliferaatiota ja hydraatiota, ja sillä on keskeinen rooli haavan paranemisessa, ihon kosteuttamisessa ja esteen homeostaasissa.

Edelliset kokeet osoittivat, että verbaskosidi edisti merkittävästi HAS3- ja CD44-ilmentymistä.

Sen kykyä edistää haavan paranemista tutkittiin siksi lisää.

[0115]Kuten kuvista 16–17 näkyy, tulokset osoittivat, että CTE, Ech ja Ver edistävät haavan paranemista.

Kuitenkin vain Ver osoitti merkittävää edistävää vaikutusta 24 tunnin kohdalla.

Se osoitti voimakkainta haavan paranemista edistävää aktiivisuutta, mikä on yhdenmukainen sen merkittävän HAS3-geenin ja proteiinin ilmentymisen edistämisen kanssa.

Toimituksellinen pätevyys: Tätä tulosta varten toimitettu kokeellinen menetelmä on solujen naarmuuntumismääritys. "Haavan paraneminen" on lähteessä käytetty terminologia, eikä sitä tule tässä tulkita todistetuksi kliiniseksi tulokseksi.

 

Koostumusten kosteutta pidättävä suorituskyky

[0116]Kuten kuvassa 18 esitetään, näytteen kosteudenpidätyskyky arvioitiin kosteudenpidätyskäyrien trendeistä ihon kosteustehokkuuden arvioimiseksi.

Tiedot osoittivat, että näytteen 1 kosteudenpidätyskäyrä oli näytteen 2 ja positiivisen kontrollin käyrän yläpuolella.

Olosuhteissa, joissa oli 25 astetta ja 50 % suhteellinen kosteus, näytteellä 1 oli parempi kosteutuskyky kuin näytteellä 2 ja 5 % glyseriinikontrollilla, mikä osoitti voimakkainta kosteutusta.

Näyte 1 sisälsi Ver, ja näyte 2 sisälsi Ech.

Lähteen mukaan nämä tulokset osoittavat, että tuotteisiin sisällytettynä Ver on homogeenisempi ja kosteuttava paremmin kuin Ech, kuten taulukossa 2 esitetään.

[0117]Taulukko 2. Yhteenveto eri näytteiden toiminnasta.

Taulukon sisältö ei sisälly toimitettuun lähteeseen.

[0118]Huomautus: [merkittävyyssymbolia ei toistettu toimitetussa tekstissä.] Verrattuna tyhjään kontrolliryhmään, P<0.05P < 0.05P<0.05.

 

Yleistulkinta, joka on esitetty julkaisussa

[0119]Yllä olevat tulokset osoittavat, että verbaskosidilla on erinomainen kosteuttava aktiivisuus aktivoimalla tarkasti täydellisen, suljetun silmukan ihoesteen korjausmekanismin.

Ensin se vaikuttaa tyvikerrokseen ja nopeuttaa merkittävästi epidermaalisen solujen uusiutumista ja säännöllistä erilaistumista tarjoten riittävästi solujen rakennuspalikoita esteen rakentamiseen.

Sitten se edistää keratinosyyttien välisten tiukkojen liitoskohtien ja desmosomaalisten rakenteiden vahvistumista, vahvistaa solujen välistä fyysistä ankkuroitumista ja lisää estetiheyttä ja mekaanista lujuutta.

Samalla se aktivoi tehokkaasti lipidiaineenvaihdunnan avainentsyymejä ja täydentää solujen välistä lipidimatriisia täyttäen "laastin" tilat "tiilien" välillä estääkseen veden menetyksen.

Lopuksi, lisäämällä hyaluronihapposyntaasin ilmentymistä, se lisää samanaikaisesti hyaluronihappopitoisuutta ihossa ja orvaskessä, sitoen ja pidättäen huomattavia määriä vettä.

Tämä muodostaa täydellisen toiminnallisen silmukan, joka sisältää uusimisen lähteellä, rakenteellisen vahvistamisen, matriisin täydennyksen ja veden varastoinnin.

Se voi siten saavuttaa suljetun ketjun "edistää solujen lisääntymistä → vahvistaa fyysisiä solujen välisiä yhteyksiä → edistää lipidien ja hyaluronihapon tuotantoa → edistää haavojen paranemista".

Lähde päättelee, että se tuottaa parempia käyttövaikutuksia kuin Cistanchen ekinakosidi ja yleisesti käytetty kosteuttava glyseriini, ja sitä voidaan käyttää ihoa suojaavana aineena toiminnallisissa ihonhoitotuotteissa ja paikallisissa tuotteissa.

[0120]Edellä olevat kuvaukset ovat vain keksinnön erityisiä suoritusmuotoja.

Keksinnön suoja-ala ei rajoitu näihin suoritusmuotoihin.

Kaikki muutokset tai korvaukset, jotka alan ammattilainen voi helposti ajatella keksinnössä esitetyn teknisen suojapiirin puitteissa, kuuluvat keksinnön suojapiiriin.

Näin ollen keksinnön suoja-ala määräytyy patenttivaatimusten perusteella.